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Molecular Cloning and Nucleotide Sequence of the Attenuated Hog Cholera VirusLapinized Chinese Strain 被引量:1
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作者 Wang Jiafu Zhang Chuyu +3 位作者 Fu Liezhen Wang Ning Huang Qianhua Zhang Pengwei(College of Life Sciences, Wuhan University, Wuhan 430072, China) 《Wuhan University Journal of Natural Sciences》 CAS 1998年第4期499-503,共5页
The genomic sequence of the attenuated hog cholera virus Lapinized Chinese strain (HCLV) was determined from overlapping cDNA clones. The viral RNA of HCLV stain comprised 12 310 nucleotide (nt) including 374 nt and 2... The genomic sequence of the attenuated hog cholera virus Lapinized Chinese strain (HCLV) was determined from overlapping cDNA clones. The viral RNA of HCLV stain comprised 12 310 nucleotide (nt) including 374 nt and 239 nt at the 5′ and 3′-noncoding region, respectively. The complete genome sequence contained one large open reading frame which encoded an amino acid sequence of 3 898 residues with a calculated molecular weight of 437×103. Although there were mostly only small differences between the sequence of the HCLV strain and the published sequences of strains ALD, GPE?, Alfort and Brescia, there was one notable insertion of 12 nucleotides, TTTTCTTTTTTC in the 3′ non-coding region of HCLV strain. 展开更多
关键词 Key words hog cholera virus molecular cloning SEQUENCE
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Influence of PPV,PRV and PRRSV on Efficacy of the Lapinized Hog Cholera Vaccine and Pathogenicity of Classical swine fever virus
2
作者 NING Yi-bao ZHAO Yun WANG Qin FAN Xue-zheng QIN Yu-ming ZHANG Guang-chuan XU Lu QIU Hui-shen WANG Zai-shi SONG Li SHEN Qing-chun ZHAO Qi-zu 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2012年第11期1892-1897,共6页
Classical swine fever caused by Classical swine fever virus (CSFV) is a serious problem for swine industries in developing countries, which successful control of the disease have been relying on vaccination. However... Classical swine fever caused by Classical swine fever virus (CSFV) is a serious problem for swine industries in developing countries, which successful control of the disease have been relying on vaccination. However, classical swine fever still occurs in some immunized swine herds for various reasons. In this study, we conducted animal experiments to examine the influence of single or mixed infection with Porcine parvo virus (PPV), Pseudorabies virus (PRV) and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) on the protective immunity induced by the Lapinized hog cholera virus (HCLV) vaccine and the pathogenicity of CSFV. In experiment 1, pigs were first inoculated with PPV, PRV or PRRSV, then immunized with HCLV, and finally challenged with a highly virulent CSFV Shimen strain. All of the pigs immunized with HCLV survived after the challenge, while all of the pigs in the non-immunized control group died after the challenge. The pigs in the group immunized with HCLV did not show any clinical symptoms of classical swine fever and were negative with CSFV after the challenge. The pigs infected with the non-CSFV before HCLV immunization did not display any clinical symptoms after the challenge with CSFV Shiman strain, but 11 of the 12 pigs were positive with CSFV. In experiment 2, pre-infections with PPV, PRV, and PRRSV were followed by inoculation with a low-virulence CSFV strain (CSFV 39), and then the pigs were challenged with the CSFV Shimen strain. Infections by either PPV, PRV or PRRSV did not enhance the virulence of CSFV-39, but pigs infected by a mixture of the 3 viruses developed clinical symptoms after inoculation with CSFV-39. The mixed infection also increased mortality caused by the challenge with the CSFV Shimen strain. Together, these results showed PPV, PRV and PRRSV infections in pigs can reduce the efficacy of the HCLV vaccine and enhance the pathogenicity of CSFV, which may partly explain the immunization failure against CSFV in some swine herds. 展开更多
关键词 Lapinized hog cholera virus VACCINATION PAThogENICITY mixed infection INFLUENCE
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Determination of Hog Cholera(HC) Antibody Level in Immune Piglets and Analysis of Immune Effect
3
作者 GAO Gui-sheng ZHANG Yan-ying +2 位作者 GAO Guang-ping SHI Qiu-mei ZHOU Shi-han 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2012年第5期209-211,共3页
[Objective] This paper aimed to provide scientific basis for establishing appropriate immune program. [Method] HC antibody level examinations were done for the 270 copies of serum collected from pig farm. [ Result] 10... [Objective] This paper aimed to provide scientific basis for establishing appropriate immune program. [Method] HC antibody level examinations were done for the 270 copies of serum collected from pig farm. [ Result] 106 copies of serum were found giving pre-feeding immunization, and the proportion of pigs at 20, 30, 40, 50, and 60-day old after giving pre-feeding immunization without serum immunity were 0, 0, 14.2% and 0 respectively. The proportion of antibody titer ≥ 1 : 128 dropped from 42.6% at the age of 40 days to 28.4% at the age of 50 days and 12.5% at the age of 60 days. For the examined 164 copies of 25-day old piglets' serum titer, all maternal antibody was≥1 : 16, but the proportion of antibody titer i〉 1 : 128 dropped from 96% at the age of 20 days to 62.5% at the age of 25 days. [ Conclusion ] Diverse proportions of pigs with unqualified immunization and antibody level existed in swinery, this might be the main reason for hog cholera outbreak in pig farms 展开更多
关键词 hog cholera antibody monitoring IMMUNITY
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猪繁殖与呼吸综合征病毒感染抑制猪瘟疫苗的免疫应答 被引量:52
4
作者 李华 杨汉春 +3 位作者 黄芳芳 刘平黄 高云 陈艳红 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期219-222,共4页
对 2 0日龄 SPF猪和 2 0日龄猪繁殖与呼吸综合征 ( PRRS)血清阳性猪 ,人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒 ( PRRSV)北京分离株 ( BJ-4 )后 4 8h接种猪瘟疫苗 ,利用 ELISA方法检测仔猪针对 PRRSV和猪瘟疫苗的体液免疫 ,利用 MTS法检测仔猪... 对 2 0日龄 SPF猪和 2 0日龄猪繁殖与呼吸综合征 ( PRRS)血清阳性猪 ,人工感染猪繁殖与呼吸综合征病毒 ( PRRSV)北京分离株 ( BJ-4 )后 4 8h接种猪瘟疫苗 ,利用 ELISA方法检测仔猪针对 PRRSV和猪瘟疫苗的体液免疫 ,利用 MTS法检测仔猪外周血单核细胞对有丝分裂原 Con A的刺激反应。结果表明 ,不论是SPF仔猪还是带有 PRRSV抗体的仔猪 ,在鼻内接种 PRRSV后 4 8h接种猪瘟疫苗 ,其对猪瘟疫苗的抗体反应显著低于对照组 ,对有丝分裂原 Con A的刺激反应也下降。由此说明 。 展开更多
关键词 繁殖呼吸综合征病毒 猪瘟疫苗 免疫抑制 人工感染
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规模化猪场猪瘟、细小病毒、口蹄疫抗体水平监测和免疫效果分析 被引量:57
5
作者 何启盖 陈焕春 +3 位作者 吴斌 索绪峰 方六荣 汪超 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第1期5-9,共5页
应用正向间接血凝试验检测来自6 个省( 市) 的44 个规模化猪场共754 份血清中的猪瘟抗体水平,其中331 份猪瘟血清抗体低于或等于1 8,占44.16% ,低于临界保护线,421 份血清的抗体水平大于或等于116,占55.84% ,可视为免疫合格;母猪、... 应用正向间接血凝试验检测来自6 个省( 市) 的44 个规模化猪场共754 份血清中的猪瘟抗体水平,其中331 份猪瘟血清抗体低于或等于1 8,占44.16% ,低于临界保护线,421 份血清的抗体水平大于或等于116,占55.84% ,可视为免疫合格;母猪、育肥猪和仔猪的免疫合格率分别为66.7% 、37.96% 、22.02 % 。母猪、育肥猪、仔猪血清中猪瘟抗体为零的百分比和份数分别为7 .26 %(32/441)、15.32% (21/137) 、33.03% (36/109) ,免疫效果最差的是仔猪。用正向间接红细胞凝集试验检测310 份血清的口蹄疫抗体效价,其中78.39% 的血清抗体水平低于或等于164 ,仅有21.61% 的血清抗体大于或等于1 128,达到临界保护线。中猪、仔猪、母猪的抗体水平低于1 128 的比例分别为93.75% 、92.59 % 、62.42% 。用血凝抑制试验检测了来自5 个猪场的203 份细小病毒血清抗体。猪场阳性率为100% ,猪只阳性率为79.31% ,其中母猪、仔猪、中猪的抗体阳性率分别为90.65% 、73.33% 、60.78% 。 展开更多
关键词 猪瘟 细小病毒 口蹄疫 抗体监测 免疫 猪场
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以重组mE2蛋白为抗原建立检测猪瘟病毒抗体间接ELISA方法的研究 被引量:45
6
作者 余兴龙 涂长春 +5 位作者 李作生 马正海 李红卫 吴健敏 吕宗吉 殷震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第3期220-222,共3页
以在E.coli高效表达的猪瘟病毒E2基因主要抗原编码区(mE2)为抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗猪IgG为二抗,建立了检测猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为:12μg/孔纯化... 以在E.coli高效表达的猪瘟病毒E2基因主要抗原编码区(mE2)为抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔抗猪IgG为二抗,建立了检测猪瘟病毒抗体的间接ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为:12μg/孔纯化的E.coli表达的mE2重组蛋白包被酶标板,用10%的兔血清或马血清进行封闭,以正常E.coli裂解上清液稀释待检血清。试验表明应用重组mE2蛋白作为诊断HCV抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。 展开更多
关键词 mE2重组蛋白 猪瘟病毒 抗体 间接ELISA
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猪瘟病毒强弱毒株和野毒株E2全基因序列测定及比较分析 被引量:19
7
作者 王琴 李博 +2 位作者 王在时 丘惠深 郎洪武 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期320-328,共9页
为了比较猪瘟病毒 (HCV)野毒株、疫苗株及标准株之间E2基因抗原区域的差异 ,采用RT PCR扩增了HCV石门株、兔化弱毒疫苗株、野毒 0 3及 0 7株的囊膜糖蛋白E2 (gp55)全基因的cDNA片段 ,分别克隆于pGEM T载体中并对其进行了核苷酸序列测定... 为了比较猪瘟病毒 (HCV)野毒株、疫苗株及标准株之间E2基因抗原区域的差异 ,采用RT PCR扩增了HCV石门株、兔化弱毒疫苗株、野毒 0 3及 0 7株的囊膜糖蛋白E2 (gp55)全基因的cDNA片段 ,分别克隆于pGEM T载体中并对其进行了核苷酸序列测定及氨基酸序列的推导 ,同时进行了同源性比较及E2结构与功能的分析。所测 4株HCVE2基因的长度均为1 2 73bp,所编码的氨基酸序列均包括部分信号肽序列和完整的跨膜区序列 ,共由 381个氨基酸组成 ;4个毒株E2蛋白N末端的 683位至 690位信号肽序列 (WLLLVTGA)和C末端 1 0 30~1 0 63位跨膜区均为保守序列 ,而且具疏水性 ;N末端抗原功能区中 ,4个E2蛋白与其它所比较序列在位于第 753位至 759位氨基酸处 ,均有一段保守序列RYLASLH ,无一氨基酸发生变异 ,为亲水性 ,在整个E2蛋白抗原谱中抗原性峰值为最高 ,推测对抗原性产生起重要作用 ;4个E2蛋白的氨基酸序列中均含有 1 5个半胱氨酸 (Cys)残基 ,其数量及位置与国外五株HCV(Brescia ,C ,Alfort.ALD和GPE)完全一致。表明该 4株HCVE2抗原具有相同的构型 ,尤其是N末端的 6个Cys残基对E2蛋白结构的正确折叠及特异抗原决定簇的形成至关重要。同时对主要抗原区域氨基酸位点变异进行分析 ,发现疫苗株与野毒株之间抗原决定簇未发生明显变? 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 序列分析 强毒株 弱毒株 野毒株
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猪瘟病毒流行株与疫苗株E^(rns)基因的序列分析 被引量:14
8
作者 王琴 宁宜宝 +4 位作者 王在时 宋立 赵耘 陈振海 范学政 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期446-452,共7页
采用RT-PCR技术扩增了HCV 10个野毒株、4批不同厂家生产的兔化弱毒疫苗株和1个标准SM株Erns基因的cDNA片段并对其进行了序列测定。应用DNAstar序列分析软件对所测的15个HCV毒株与国内外6个参考毒株Alfort、Ald、Brescia、Gpe、C、CW株... 采用RT-PCR技术扩增了HCV 10个野毒株、4批不同厂家生产的兔化弱毒疫苗株和1个标准SM株Erns基因的cDNA片段并对其进行了序列测定。应用DNAstar序列分析软件对所测的15个HCV毒株与国内外6个参考毒株Alfort、Ald、Brescia、Gpe、C、CW株的相应片段进行了同源性比较分析。15株HCV Erns基因长度均为696 bp,其核苷酸及氨基酸的同源性分别为83.0%~100.0%和87.9%~100.0%。系统发生分析可将这些毒株分为Ⅰ和Ⅱ两大基因群及4个亚群,Erns基因与E2、NS5B基因在系统发生分析中具有较高的一致性。国内4批不同厂家生产的兔化弱毒疫苗相对稳定,仅1~2个氨基酸残基具有差异。通过对10个流行株与SM株Erns基因的比较分析,发现我国HCV具有复杂性、多样性和相对的遗传稳定性;所测15株HCV Erns基因具有RNase活性的2个区域SLHGIWPG(或E)(28~36位)和EWNKHGWC(75~82位)十分保守,但疫苗毒SLHGIWPE基序中的E替换为G,而基序中位于30和79位的H(组氨酸)为RNase的催化活性关键氨基酸残基,高度保守,15个HCV Erns基因和6株参考株没有一株发生变异。本研究为开展Erns基因的生物学活性、结构与功能等方面的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 流行株 疫苗株 E^rns基因 序列分析 猪瘟
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猪瘟抗体监测及免疫效果分析 被引量:28
9
作者 陈西钊 叶春艳 +2 位作者 蒋进 王传彬 王宏伟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期457-459,共3页
对 9个规模化养猪场 15 18份血清进行了猪瘟免疫抗体检测。 7日龄、2 0日龄和 4 0日龄仔猪无免疫保护力 (血凝抗体效价低于 1∶16 ,下同 )的比例分别为 0、4 .8%和 19.7% ;而抗体效价≥ 1∶12 8的比例分别为 87.8%、74 .6 %和 35 .2 %... 对 9个规模化养猪场 15 18份血清进行了猪瘟免疫抗体检测。 7日龄、2 0日龄和 4 0日龄仔猪无免疫保护力 (血凝抗体效价低于 1∶16 ,下同 )的比例分别为 0、4 .8%和 19.7% ;而抗体效价≥ 1∶12 8的比例分别为 87.8%、74 .6 %和 35 .2 %。乳前免疫后 2 0、30、4 0、5 0和 6 0日龄无免疫保护力仔猪的比例分别为 18.4 %、8.4 %、9.8%、10 .0 %和 15 .4 % ,而抗体效价≥ 1∶8的比例分别由 4 0日龄的 4 1.4 %降至 5 0日龄的 15 .0 %和 6 0日龄的 3.8%。所测 398份 2 5日龄仔猪母源抗体效价均≥1 16 ,但抗体效价≥ 1 12 8的比例由 2 0日龄的 92 .8%降至 2 5日龄的 6 2 .5 %。提示猪群中存在不同比例的免疫不合格和低抗体水平的猪 。 展开更多
关键词 猪瘟 抗体监测 免疫效果
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我国部分地区猪瘟病毒流行株的基因差异 被引量:23
10
作者 吕宗吉 李红卫 +4 位作者 涂长春 余兴龙 吴健敏 李月红 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期313-316,共4页
采用 RT-PCR方法 ,从我国 1 0个省、市、自治区收集的 2 3个猪瘟病毒 ( CSFV)流行毒株中 ,扩增了CSFV E2基因中主要抗原位点编码区。对各扩增片段进行了序列测定 ,通过计算机分析构建了系统发生树 ,并确定了它们间的遗传相关性。结果表... 采用 RT-PCR方法 ,从我国 1 0个省、市、自治区收集的 2 3个猪瘟病毒 ( CSFV)流行毒株中 ,扩增了CSFV E2基因中主要抗原位点编码区。对各扩增片段进行了序列测定 ,通过计算机分析构建了系统发生树 ,并确定了它们间的遗传相关性。结果表明 ,2 3个流行毒株中的 1 8株属基因 群 ,占 78.2 6%;另外 5个流行株与传统石门强毒、兔化弱毒株属基因 群 ,占 2 1 .74 %。两群间测序区的核酸同源性只有 78.90 %。此外 ,根据序列差异程度 ,将基因 群流行株分为 3个亚群 ,各基因群 CSFV在地域分布上未发现有明显的特征性。本研究初步揭示了我国较大范围内流行的 CSFV毒株与传统的石门强毒和疫苗用兔化弱毒在抗原基因上存在较大的差异 。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 RT-PCR 基因差异 疫苗株 流行株
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猪瘟不同顺序零天免疫的免疫效果比较 被引量:17
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作者 丘惠深 麦志均 +7 位作者 梁健尧 李伟军 李博 杨傲冰 陈裕瑞 王少英 杜伟贤 王在时 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期125-127,共3页
以猪瘟兔化弱毒细胞苗分别免疫 3组初生仔猪 ,每头 1.5头剂。第 1组 2 0头先免疫 ,1小时后吸初乳。第 2组 15头 ,吸初乳后 1小时免疫。第 3组 13头 ,吸初乳后半小时免疫。 75日龄 ,以猪瘟弱毒单抗酶联方法测定 3组动物的平均抗体(OD值 ... 以猪瘟兔化弱毒细胞苗分别免疫 3组初生仔猪 ,每头 1.5头剂。第 1组 2 0头先免疫 ,1小时后吸初乳。第 2组 15头 ,吸初乳后 1小时免疫。第 3组 13头 ,吸初乳后半小时免疫。 75日龄 ,以猪瘟弱毒单抗酶联方法测定 3组动物的平均抗体(OD值 )分别为 0 .2 5、0 .2 3及 0 .2 1。 80日龄 ,每组各随机抽出 4头猪 ,连同非免疫对照猪 6头以猪瘟石门系强毒攻击后 ,对照猪全死 ,第 1组 10 0 %保护 ,第 2组 75 %保护 ,第 3组 5 0 %保护。第 展开更多
关键词 猪瘟 零天免疫 免疫效果 仔猪
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荧光定量PCR作为猪瘟兔化弱毒疫苗效价检验替代方法的研究与应用 被引量:22
12
作者 陈锴 姚华伟 +8 位作者 王长江 徐璐 范学政 赵启祖 邹兴启 朱元源 赵燕 杨光友 王琴 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期162-169,共8页
【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)的荧光定量PCR方法(FQ-PCR),为猪瘟兔化弱毒疫苗的效力检验提供一替代方法。【方法】在猪瘟兔化弱毒疫苗基因组3′非编码区设计一对针对猪瘟兔化弱毒株的特异性引物和一条... 【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)的荧光定量PCR方法(FQ-PCR),为猪瘟兔化弱毒疫苗的效力检验提供一替代方法。【方法】在猪瘟兔化弱毒疫苗基因组3′非编码区设计一对针对猪瘟兔化弱毒株的特异性引物和一条MGB探针,并进行反应体系及反应条件优化,以及特异性、灵敏度、稳定性及符合性试验。将此方法用于部分批次疫苗厂疫苗半成品的定量检验,与兔热反应进行比较,寻求两方法的相关性。【结果】试验结果证实,CT值与模板之间呈现良好的相关性,相关系数为0.9998,扩增效率为101.14%;该方法仅扩增HCLV,不扩增HCLV以外的其它病原,显示良好的特异性;具有较高的灵敏度,能检测模板中4.35个cDNA拷贝量,比CSFV-RT-nPCR高1个数量级。将此方法应用于4个厂家17个批次的34份猪瘟兔化弱毒疫苗效力检验,两只兔子均无热反应(不合格)样品共11份,FQ-PCR CT值为21.15—27.30;两只兔子一只呈现定型热,一只无热反应的样品12份,CT值为17.47—23.70;两只兔子都呈现定型热或者一只呈现定型热一只呈现轻热反应(合格品)样品共11份,CT值为17.10—20.8。【结论】建立的HCLV-FQ-PCR方法能特异性的检测疫苗核酸含量,与家兔热反应测定结果存在良好的相关性,可以用于猪瘟疫苗半成品中HCLV定量检测。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒疫苗 效价检验 荧光定量PCR TaqMan-MGB
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RT-PCR技术检测猪瘟病毒的应用研究 被引量:34
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作者 罗廷荣 莫扬 +7 位作者 吴文德 黄玉华 黄伟坚 秦爱珍 刘芳 温荣辉 陆芹章 余克伦 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期307-309,312,共4页
本试验应用反转录_聚合酶链式反应 (RT_PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT_PCR对来自广西不同地区的 135份疑似猪瘟病料进行检测 ,84份诊断为阳性 ,阳性率 6 2 2 %。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共 2 76份 ,经RT_PC... 本试验应用反转录_聚合酶链式反应 (RT_PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT_PCR对来自广西不同地区的 135份疑似猪瘟病料进行检测 ,84份诊断为阳性 ,阳性率 6 2 2 %。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共 2 76份 ,经RT_PCR检测 ,37份为阳性 ,阳性率为 13 4 %。其中健康猪扁桃体带毒较高 ,2 4 6份扁桃体中有 35份阳性 ,占 14 2 %。采自柳州健康猪的 2 6份淋巴结材料全为阴性 ,只有邕宁县的 1份健猪淋巴结阳性。结果表明 ,RT_PCR技术可应用于猪瘟的临床诊断。 展开更多
关键词 猪瘟 反转录-聚合酶链式反应 诊断
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12株猪瘟病毒E2基因主要抗原区域的序列差异分析 被引量:23
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作者 王琴 王在时 +2 位作者 赵耘 李博 丘惠深 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期614-621,共8页
用RT PCR扩增了 1 2个不同时期分离的HCV毒株E2基因主要抗原区域的cDNA片段并对其进行了序列测定。应用DNAstar序列分析软件对所测的 1 2个HCV毒株与国内外已知的 6个毒株Alfort株、Ald株、Brescia株、Gpe株、C株、CW株及早期已测定的H... 用RT PCR扩增了 1 2个不同时期分离的HCV毒株E2基因主要抗原区域的cDNA片段并对其进行了序列测定。应用DNAstar序列分析软件对所测的 1 2个HCV毒株与国内外已知的 6个毒株Alfort株、Ald株、Brescia株、Gpe株、C株、CW株及早期已测定的HCLV株、HCVSM株和北京顺义株 (BJSY2 /96) 3个毒株的相应片段进行了同源性比较分析。E2基因主要区域长度均为 2 2 4bp ,包括从HCV 2 4 85到 2 70 8位的E2基因B、C区域。所测的疫苗株HCLV与国外测得的疫苗株C株核苷酸及氨基酸同源性分别为 99 1 %和 1 0 0 % ,表明目前应用的疫苗株是稳定的 ;用目前我国流行的部分野毒株对HCLV株免疫猪的攻击试验表明 ,HCLV对野毒株均具有很好的免疫力 ,这与序列分析结果相吻合。根据系统树分析 ,可将HCV分为两大群 ,5株 90年代的野毒株及 1株 80年代的野毒株 (其中北京 3株、河南 2株、广东 1株 )均与国内外C株、标准株属同一群 (即第一群 ) ,其核苷酸及氨基酸的同源性分别为85 7%~ 1 0 0 %和 83 8%~ 1 0 0 % ;与Alfort株同属第二群的有 6个野毒株 (广西北海、辽宁、河北黄骅、吉林、深圳光明、四川成都 ) ,其中 80年代与 90年代的野毒株各有三株 ,核苷酸及氨基酸的同源性分别为 84 3%~ 1 0 0 %和 85 1 %~ 1 0 0 % ;2 1株HCV的核苷酸? 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 序列分析
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用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验监测猪瘟抗体发现隐性猪瘟 被引量:16
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作者 周广森 王学玲 +1 位作者 苗志兰 孙丽娟 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期336-341,共6页
用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验监测猪瘟血清抗体。测得该场母猪40份血清样品中,猪瘟弱毒抗体效价OD值较高,有100%保护率,测得仔猪240份血清样品中,猪瘟弱毒抗体效价OD值适中,有87.6%的保护率。但是发现母猪... 用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验监测猪瘟血清抗体。测得该场母猪40份血清样品中,猪瘟弱毒抗体效价OD值较高,有100%保护率,测得仔猪240份血清样品中,猪瘟弱毒抗体效价OD值适中,有87.6%的保护率。但是发现母猪群中有10%隐性猪瘟感染,仔猪群中有3.7%隐性猪瘟感染,其强毒抗体效价OD大于0.5,体内带有猪瘟病毒,且不显临床症状。遇见免疫接种、转群、气候骤变等应激,则发生非典型猪瘟。 展开更多
关键词 猪瘟 抗体 纯化 隐性感染 酶联免疫吸附
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鉴别牛病毒性腹泻病毒和猪瘟病毒的复合PCR方法及其应用 被引量:23
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作者 周绪斌 王新平 +1 位作者 宣华 涂长春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期557-560,共4页
以牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)特异引物 P1/ P3扩增 BVDV标准毒株及以猪瘟病毒 (HCV)特异引物 P2 / P3扩增HCV阳性病料 ,分别扩增出 32 6 bp和 2 5 2 bp的特异片段 ;以 P1、P2、P3扩增 BVDV和 HCV人工混合感染样品 ,扩增出大小为 32 6 bp和... 以牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)特异引物 P1/ P3扩增 BVDV标准毒株及以猪瘟病毒 (HCV)特异引物 P2 / P3扩增HCV阳性病料 ,分别扩增出 32 6 bp和 2 5 2 bp的特异片段 ;以 P1、P2、P3扩增 BVDV和 HCV人工混合感染样品 ,扩增出大小为 32 6 bp和 2 5 2 bp的 2条片段 ,建立了特异的一步检测 BVDV和 HCV的复合 PCR方法。以建立的复合 PCR方法检测 BVDV分离株 ,都扩增出 1条 32 6 bp的特异片段 ;从吉林等地送检的病料和猪瘟兔化弱毒疫苗中扩增出一2 5 2 bp的特异片段 ,从长岭地区的疑似猪瘟病猪的血清病料中 ,同时扩增出 32 6 bp和 2 5 2 bp的核酸片段 ,表明长岭某猪场流行的“猪瘟”为 BVDV和 HCV混合感染。本研究为进行 HCV和 BVDV的鉴别诊断与流行病学调查提供了有效的方法。 展开更多
关键词 鉴别 复合PCR方法 应用 牛病毒性腹泻病毒 猪瘟病毒
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急、慢性猪瘟病毒分离株和疫苗株E2基因的序列分析 被引量:10
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作者 刘伯华 刘湘涛 +3 位作者 韩雪清 赵启祖 李明晖 谢庆阁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期568-575,共8页
利用反转录 (RT)及套式PCR(N -PCR)扩增并测定了 6株具有不同表症近期甘肃省猪瘟流行野毒及C -株细胞疫苗毒的主要免疫原E2基因的核苷酸序列。序列分析比较结果表明 ,6株流行野毒与C -株疫苗毒的核苷酸同源性为 82 %~ 84 % ,流行野毒... 利用反转录 (RT)及套式PCR(N -PCR)扩增并测定了 6株具有不同表症近期甘肃省猪瘟流行野毒及C -株细胞疫苗毒的主要免疫原E2基因的核苷酸序列。序列分析比较结果表明 ,6株流行野毒与C -株疫苗毒的核苷酸同源性为 82 %~ 84 % ,流行野毒之间的核苷酸同源性在 89%~99%之间 ,并且明显可分为二个组群 ,病毒株所属组群与其临床症状有一定的相关性。流行野毒与C -株毒在中和抗原决定簇上有部分氨基酸存在性质差异 ,可能影响C -株毒对流行野毒的中和滴度。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 序列分析 分离株 疫苗株
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RT-PCR技术诊断猪瘟的应用研究 被引量:26
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作者 罗廷荣 莫扬 +7 位作者 吴文德 黄玉华 黄伟坚 秦爱珍 刘芳 温荣辉 陆芹章 余克伦 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期219-222,共4页
应用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT_PCR对来自广西不同地区的 135份疑似猪瘟病料进行检测 ,84份诊断为阳性 ,阳性率 6 2 .2 %。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共 2 76份 ,经RT_PCR检测 ,3... 应用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT_PCR对来自广西不同地区的 135份疑似猪瘟病料进行检测 ,84份诊断为阳性 ,阳性率 6 2 .2 %。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共 2 76份 ,经RT_PCR检测 ,37份为阳性 ,阳性率为 13.4 %。其中健康猪扁桃体带毒较高 ,2 4 6份扁桃体中有 35份阳性 ,占 14 .2%。采自柳州健康猪的 2 6份淋巴结材料全为阴性 ,只有邕宁县的 1份健猪淋巴结阳性。结果表明 。 展开更多
关键词 猪瘟 反转录-聚合酶链式反应 诊断
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猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆及在原核细胞中的表达 被引量:7
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作者 李红卫 涂长春 +5 位作者 余兴龙 金扩世 吕宗吉 李茂祥 章金钢 殷震 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期146-152,共7页
应用RTPCR分两段扩增猪瘟病毒(HCV)石门株E2基因,然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一BglⅡ位点,将它们连接成为完整的E2基因,并克隆到pUC19质粒中,获得重组质粒pHCE2。另设计一对引物,... 应用RTPCR分两段扩增猪瘟病毒(HCV)石门株E2基因,然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一BglⅡ位点,将它们连接成为完整的E2基因,并克隆到pUC19质粒中,获得重组质粒pHCE2。另设计一对引物,以pHCE2为模板扩增出不含信号肽的E2基因,然后将其克隆到表达载体质粒pBV220和pET28a(+)中,获得重组质粒pBVE2和pETE2,用酶切、PCR和序列分析鉴定E2基因插入位置、方向和读码框架的正确性。经Westernblot和直接ELISA检测表明重组质粒pBVE2和pETE2转化、诱导的受体菌均能表达E2抗原。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 E2基因 克隆 表达 原核细胞 猪瘟 诊断
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猪瘟兔化弱毒E2蛋白A/D区的高效表达和蛋白纯化及其应用 被引量:13
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作者 苏小运 缪德年 +2 位作者 许立华 陈德胜 陈溥言 《中国病毒学》 CAS CSCD 2003年第2期164-168,共5页
本试验对表达猪瘟E2囊膜糖蛋白的原核表达载体pET-E2的表达条件进行了优化,在此基础上,对表达的蛋白质进行了纯化。在6 mol/L盐酸胍存在的条件下,将包涵体溶解在Tris-HCI中,并直接用于His Band亲和层析。收集过柱产物并透析,在2%SDS条件... 本试验对表达猪瘟E2囊膜糖蛋白的原核表达载体pET-E2的表达条件进行了优化,在此基础上,对表达的蛋白质进行了纯化。在6 mol/L盐酸胍存在的条件下,将包涵体溶解在Tris-HCI中,并直接用于His Band亲和层析。收集过柱产物并透析,在2%SDS条件下,对所得的重组蛋白质进行了定量。重组蛋白质被用来包被96孔ELISA板并应用于免疫猪瘟抗体水平的测定。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒 E2蛋白A/D区 原核表达 E2糖蛋白 EIISA 血清抗体
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