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Influence of PPV,PRV and PRRSV on Efficacy of the Lapinized Hog Cholera Vaccine and Pathogenicity of Classical swine fever virus
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作者 NING Yi-bao ZHAO Yun WANG Qin FAN Xue-zheng QIN Yu-ming ZHANG Guang-chuan XU Lu QIU Hui-shen WANG Zai-shi SONG Li SHEN Qing-chun ZHAO Qi-zu 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2012年第11期1892-1897,共6页
Classical swine fever caused by Classical swine fever virus (CSFV) is a serious problem for swine industries in developing countries, which successful control of the disease have been relying on vaccination. However... Classical swine fever caused by Classical swine fever virus (CSFV) is a serious problem for swine industries in developing countries, which successful control of the disease have been relying on vaccination. However, classical swine fever still occurs in some immunized swine herds for various reasons. In this study, we conducted animal experiments to examine the influence of single or mixed infection with Porcine parvo virus (PPV), Pseudorabies virus (PRV) and Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) on the protective immunity induced by the Lapinized hog cholera virus (HCLV) vaccine and the pathogenicity of CSFV. In experiment 1, pigs were first inoculated with PPV, PRV or PRRSV, then immunized with HCLV, and finally challenged with a highly virulent CSFV Shimen strain. All of the pigs immunized with HCLV survived after the challenge, while all of the pigs in the non-immunized control group died after the challenge. The pigs in the group immunized with HCLV did not show any clinical symptoms of classical swine fever and were negative with CSFV after the challenge. The pigs infected with the non-CSFV before HCLV immunization did not display any clinical symptoms after the challenge with CSFV Shiman strain, but 11 of the 12 pigs were positive with CSFV. In experiment 2, pre-infections with PPV, PRV, and PRRSV were followed by inoculation with a low-virulence CSFV strain (CSFV 39), and then the pigs were challenged with the CSFV Shimen strain. Infections by either PPV, PRV or PRRSV did not enhance the virulence of CSFV-39, but pigs infected by a mixture of the 3 viruses developed clinical symptoms after inoculation with CSFV-39. The mixed infection also increased mortality caused by the challenge with the CSFV Shimen strain. Together, these results showed PPV, PRV and PRRSV infections in pigs can reduce the efficacy of the HCLV vaccine and enhance the pathogenicity of CSFV, which may partly explain the immunization failure against CSFV in some swine herds. 展开更多
关键词 lapinized hog cholera virus VAccINATION PAThogENIcITY mixed infection INFLUENcE
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荧光定量PCR作为猪瘟兔化弱毒疫苗效价检验替代方法的研究与应用 被引量:22
2
作者 陈锴 姚华伟 +8 位作者 王长江 徐璐 范学政 赵启祖 邹兴启 朱元源 赵燕 杨光友 王琴 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期162-169,共8页
【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)的荧光定量PCR方法(FQ-PCR),为猪瘟兔化弱毒疫苗的效力检验提供一替代方法。【方法】在猪瘟兔化弱毒疫苗基因组3′非编码区设计一对针对猪瘟兔化弱毒株的特异性引物和一条... 【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)的荧光定量PCR方法(FQ-PCR),为猪瘟兔化弱毒疫苗的效力检验提供一替代方法。【方法】在猪瘟兔化弱毒疫苗基因组3′非编码区设计一对针对猪瘟兔化弱毒株的特异性引物和一条MGB探针,并进行反应体系及反应条件优化,以及特异性、灵敏度、稳定性及符合性试验。将此方法用于部分批次疫苗厂疫苗半成品的定量检验,与兔热反应进行比较,寻求两方法的相关性。【结果】试验结果证实,CT值与模板之间呈现良好的相关性,相关系数为0.9998,扩增效率为101.14%;该方法仅扩增HCLV,不扩增HCLV以外的其它病原,显示良好的特异性;具有较高的灵敏度,能检测模板中4.35个cDNA拷贝量,比CSFV-RT-nPCR高1个数量级。将此方法应用于4个厂家17个批次的34份猪瘟兔化弱毒疫苗效力检验,两只兔子均无热反应(不合格)样品共11份,FQ-PCR CT值为21.15—27.30;两只兔子一只呈现定型热,一只无热反应的样品12份,CT值为17.47—23.70;两只兔子都呈现定型热或者一只呈现定型热一只呈现轻热反应(合格品)样品共11份,CT值为17.10—20.8。【结论】建立的HCLV-FQ-PCR方法能特异性的检测疫苗核酸含量,与家兔热反应测定结果存在良好的相关性,可以用于猪瘟疫苗半成品中HCLV定量检测。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒疫苗 效价检验 荧光定量PcR TaqMan-MGB
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异源猪瘟病毒C株E2基因保护性抗原编码区的序列分析与比较 被引量:13
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作者 李红卫 涂长春 +4 位作者 吕宗吉 孙明 金扩世 余兴龙 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期112-114,共3页
应用RT-PCR扩增了我国南京、成都、吉林3个兽医生物制品厂提供的猪瘟病毒兔化弱毒株(C株)的E2基因保护性抗原编码区,然后将其克隆到pGEM-T载体中,用Sanger′s双脱氧法对重组质粒中的插入片段进行了序列分析... 应用RT-PCR扩增了我国南京、成都、吉林3个兽医生物制品厂提供的猪瘟病毒兔化弱毒株(C株)的E2基因保护性抗原编码区,然后将其克隆到pGEM-T载体中,用Sanger′s双脱氧法对重组质粒中的插入片段进行了序列分析。将测得的这3个厂生产的C株的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与作者实验室测得的国内石门株和国外测得的C株相同区域进行同源性比较,发现不同来源的C株及石门株之间存在不同程度的差异,核苷酸同源性为93.6%~99.6%,氨基酸同源性为90.6%~98.9%。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 免化弱毒株 E2基因 序列分析
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荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系 被引量:10
4
作者 葛叶 张兴娟 +5 位作者 朱庆虎 韩秋影 王牟平 李伟杰 孙建宏 仇华吉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期699-703,共5页
为探讨荧光定量RT-PCR技术与传统兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系,本研究采用荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对5份猪瘟兔化弱毒细胞苗成品和6份半成品样品进行平行检测。结果表明,两种检测方法存在正相关性,最低... 为探讨荧光定量RT-PCR技术与传统兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系,本研究采用荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对5份猪瘟兔化弱毒细胞苗成品和6份半成品样品进行平行检测。结果表明,两种检测方法存在正相关性,最低105个病毒拷贝可以使家兔产生定型热反应,最低103个病毒拷贝可以使家兔产生轻热反应。荧光定量RT-PCR检测方法的检测过程仅需3.5 h,大大缩短了猪瘟疫苗的检测时间,该方法可以补充传统的兔体定型热反应用于猪瘟兔化弱毒疫苗半成品与成品的检验。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒疫苗 荧光定量RT-PcR 兔体定型热试验
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建立快速定量检测猪瘟兔化弱毒苗的荧光定量PCR技术 被引量:31
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作者 陈玉栋 张楚瑜 +4 位作者 邹俊煊 潘兹书 陈立新 李田 郭长林 《中国病毒学》 CSCD 2003年第2期124-128,共5页
在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5挿潜嗦肭杓埔欢砸锖鸵惶跤馓秸?利用荧光定量PCR原理,结合LightCycler检测系统,首次建立了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。结果表明,该方法的灵敏度为102拷贝数,线性范围为107-102,达6个数量级;标准样... 在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株的5挿潜嗦肭杓埔欢砸锖鸵惶跤馓秸?利用荧光定量PCR原理,结合LightCycler检测系统,首次建立了定量检测猪瘟兔化弱毒苗方法。结果表明,该方法的灵敏度为102拷贝数,线性范围为107-102,达6个数量级;标准样品的变异系数为2.3%-5.1%(n=10),疫苗样品组内实验变异系数为0.85%-2.8%(n=5)、组间实验为2.5%-7.3%(n=5),对同一样品分5次RNA提取和逆转录,其变异系数为5.0%;对9份疫苗样品进行了检测,与兔体定型热反应方法相比较,有很好的相关性;整个检测过程仅需4h。该法可望取代传统的兔体定型热反应用于疫苗生产过程中的效价测定及指导疫苗的配制,也为猪瘟病毒分子生物学研究提供了一种新的、简捷有效的工具。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒苗 快速定量检测 荧光定量PcR技术 猪瘟
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猪瘟兔化弱毒疫苗株TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:6
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作者 刘大伟 张小飞 +3 位作者 胡来根 李郁 尹秀凤 毛火云 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期446-450,共5页
为建立一种快速鉴定猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的方法,本研究根据GenBank中登录的HCLV株基因组序列,在Erns基因序列区内设计一对引物和一条TaqMan探针,建立了检测HCLV的荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)方法。该方法检测的灵敏度可达3.84拷贝/... 为建立一种快速鉴定猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的方法,本研究根据GenBank中登录的HCLV株基因组序列,在Erns基因序列区内设计一对引物和一条TaqMan探针,建立了检测HCLV的荧光定量RT-PCR(FQRT-PCR)方法。该方法检测的灵敏度可达3.84拷贝/μL;而对猪细小病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、牛病毒性腹泻病毒基因组扩增结果均为阴性。实验组批内变异系数为1.05%~1.84%,批间变异系数为3.70%~5.43%。通过对32批HCLV半成品抗原和9批成品疫苗,分别用经典的兔检法测定兔体感染量(RID)和新建立的FQRT-PCR方法进行检测比较,两者有较好的相关性。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异性强、稳定性好等优点,对HCLV生产配制及成品检验具有指导作用。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒疫苗 荧光定量RT—PcR 检测 初步应用
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快速检测猪瘟兔化弱毒疫苗株的TaqMan荧光定量RT-PCR方法的建立 被引量:3
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作者 高博 杨晓农 +3 位作者 于学辉 刘内生 向毅勇 曾光志 《西南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2009年第1期92-97,共6页
在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株(HCLV)的5′端非编码区设计一对引物和一条TaqMan探针,通过优化反应条件,成功建立了特异性检测HCLV的荧光定量RT-PCR方法.结果表明:该方法检测的最低拷贝数为45拷贝/μL,灵敏度比普通PCR方法高104倍,在较广的... 在猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株(HCLV)的5′端非编码区设计一对引物和一条TaqMan探针,通过优化反应条件,成功建立了特异性检测HCLV的荧光定量RT-PCR方法.结果表明:该方法检测的最低拷贝数为45拷贝/μL,灵敏度比普通PCR方法高104倍,在较广的范围内(4.5×101~4.5×106拷贝/μL)有良好的线性关系(r=0.994);分别以乙型脑炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、副猪嗜血杆菌、牛病毒性腹泻/黏膜病病毒作为模板进行TaqManRT-PCR扩增,未出现阳性信号;4个不同浓度标准品组内试验变异系数为1.90%~5.82%,组间试验变异系数为4.02%~5.69%;HCLV3个cDNA样本组内试验变异系数为3.72%~4.93%;组间试验变异系数为2.99%~4.02%.该方法具有很好的灵敏性、特异性及稳定性,能够快速准确定量检测HCLV,为HCLV疫苗的研制、猪瘟病毒分子生物学等方面研究提供了一种快捷有效的工具. 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒疫苗株(HcLV) 荧光定量RT-PcR TaqMan荧光探针 定量检测
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猪瘟病毒兔化弱毒株cDNA片段的克隆及序列分析 被引量:2
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作者 李红卫 刘湘涛 +3 位作者 李小兵 韩雪清 涂长春 殷震 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期554-558,共5页
The 5′ nonencoding region, p23 and p14 encoding region and E1 gene of hog cholera virus (HCV) strain C were amplified from total RNA extracted from HCV strain C infected rabbit spleen by reverse transcription and nes... The 5′ nonencoding region, p23 and p14 encoding region and E1 gene of hog cholera virus (HCV) strain C were amplified from total RNA extracted from HCV strain C infected rabbit spleen by reverse transcription and nested or half\_nested PCR. The PCR products were cloned into pGEM\|T vector. Nucleotide sequencing was performed using an ABI PRISM sequencing device; based on the incorporation of fluoresect labelled dideoxynuclotide teminators. The obtained sequences on 5′ noncoding region and part of p23 and p14 encoding region were compared with HCV strains Shimen and C sequenced in Moormann’s lab. The result showed that the homology between HCV strains C sequenced in this report and in Moormann’s lab was 99.19%, and the homology between HCV strains Shimen, the standard virulent HCV strain in China, and C sequenced in this report was 94.69%. It was also discovered that the base C at 244 of the genome of HCV strains Shimen and C sequenced in this report was absent at the genome of C strain sequenced in Moormann’s lab et al. 展开更多
关键词 cDNA 克隆 序列分析 HcLV 猪瘟疫苗
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中药复方病毒克对兔HCLV模型组织病毒含量影晌的研究
9
作者 江平康 刘群 +4 位作者 周李 杨荣 康莲莲 王赛 毕琳 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第3期41-43,46,共4页
探讨抗病毒中药复方制剂的抗病毒作用机理,为提高临床疗效和扩大临床应用范围提供试验依据,本研究采用水萃取法制备抗病毒中药复方流浸膏制剂,以HCLV"C"株为模式病毒,GAPDH、ACTB为内参基因,以FQ-PCR作为检测方法,研究该中药... 探讨抗病毒中药复方制剂的抗病毒作用机理,为提高临床疗效和扩大临床应用范围提供试验依据,本研究采用水萃取法制备抗病毒中药复方流浸膏制剂,以HCLV"C"株为模式病毒,GAPDH、ACTB为内参基因,以FQ-PCR作为检测方法,研究该中药复方制剂在对兔感染HCLV后脾脏、肠系膜淋巴结病毒增殖的变化情况。研究结果表明,高、中、低3个中药剂量组在连续5次给药后的24 h,即攻毒后的72、96、120、144 h,脾脏和肠系膜淋巴结中的HCLV含量低于对照组,脾脏中144 h病毒含量尤为明显(P<0.05),肠系膜淋巴结中72 h病毒含量尤为明显(P<0.05),说明该中药复方制剂在大剂量连续使用的情况下能明显抑制猪瘟兔化弱毒"C"株在淋巴结和脾脏中的增殖作用,并预示着这种抑制作用可能存在量效关系和时效关系。 展开更多
关键词 中药复方 猪瘟兔化弱毒“c”株 组织器官 含量
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猪瘟病毒(HCV)石门株部分p23和p14基因的克隆、序列测定及与其他HCV株的比较
10
作者 李红卫 涂长春 +4 位作者 吕宗吉 孙明 金扩世 余兴龙 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第6期526-529,共4页
应用RT-PCR扩增猪瘟病毒(HCV)石门株部分p23和p14基因,然后采用平端克隆法将扩增的cD-NA克隆到pUC19的SmaⅠ位点,用双脱氧终止法对重组质粒中的插入片段进行序列分析。将所测定的序列与其他10株HC... 应用RT-PCR扩增猪瘟病毒(HCV)石门株部分p23和p14基因,然后采用平端克隆法将扩增的cD-NA克隆到pUC19的SmaⅠ位点,用双脱氧终止法对重组质粒中的插入片段进行序列分析。将所测定的序列与其他10株HCV相同基因区域用DNASIS计算机软件进行同源性比较和系统树分析,结果表明,大部分毒株为同一个型,该型共包括9个HCV株,以Brescia株为代表,石门(Shimen)株也属该型;而Alfort株和P97株与上述9个毒株差异较大,不属同一型。 展开更多
关键词 猪瘟 病毒石门株 基因 克隆 序列分析
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猪瘟兔化弱毒疫苗中病毒含量实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:5
11
作者 范斌 许文花 +4 位作者 韩建强 马志亮 胡骑 信爱国 张以芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第12期56-61,共6页
为建立敏感、特异的评价猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗中病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法,参照中国猪瘟石门株兔化弱毒全长序列,在猪瘟兔化弱毒活疫苗基因组5′非编码区设计1对标准品引物、1对特异性引物和1条探针,建立检测猪瘟兔化弱毒活... 为建立敏感、特异的评价猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗中病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法,参照中国猪瘟石门株兔化弱毒全长序列,在猪瘟兔化弱毒活疫苗基因组5′非编码区设计1对标准品引物、1对特异性引物和1条探针,建立检测猪瘟兔化弱毒活疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法检测的敏感度达1.20×105拷贝/mL;对猪繁殖与呼吸综合征、猪乙型脑炎、仔猪副伤寒和猪伪狂犬病4种活疫苗基因组扩增结果均为阴性;重复性试验结果显示,批内变异系数为0.29%~0.39%,批间变异系数为0.32%~0.61%。应用此方法对6个不同厂家生产的7种猪瘟兔化弱毒活疫苗中病毒含量进行了检测,发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量存在较大差异。结果表明,建立的猪瘟兔化弱毒疫苗实时荧光定量RT-PCR方法能特异地检测疫苗病毒含量,可用于初步评价猪瘟兔化弱毒疫苗抗原含量。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒 实时荧光定量RT-PcR 病毒含量
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猪瘟兔化弱毒E2蛋白A/D区的高效表达和蛋白纯化及其应用 被引量:13
12
作者 苏小运 缪德年 +2 位作者 许立华 陈德胜 陈溥言 《中国病毒学》 CAS CSCD 2003年第2期164-168,共5页
本试验对表达猪瘟E2囊膜糖蛋白的原核表达载体pET-E2的表达条件进行了优化,在此基础上,对表达的蛋白质进行了纯化。在6 mol/L盐酸胍存在的条件下,将包涵体溶解在Tris-HCI中,并直接用于His Band亲和层析。收集过柱产物并透析,在2%SDS条件... 本试验对表达猪瘟E2囊膜糖蛋白的原核表达载体pET-E2的表达条件进行了优化,在此基础上,对表达的蛋白质进行了纯化。在6 mol/L盐酸胍存在的条件下,将包涵体溶解在Tris-HCI中,并直接用于His Band亲和层析。收集过柱产物并透析,在2%SDS条件下,对所得的重组蛋白质进行了定量。重组蛋白质被用来包被96孔ELISA板并应用于免疫猪瘟抗体水平的测定。 展开更多
关键词 猪瘟兔化弱毒 E2蛋白A/D区 原核表达 E2糖蛋白 EIISA 血清抗体
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RT-LAMP可视化检测猪瘟病毒及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗 被引量:10
13
作者 邓显文 谢芝勋 +9 位作者 谢志勤 刘加波 庞耀珊 谢丽基 范晴 罗思思 黄莉 黄娇玲 曾婷婷 黄秀琴 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期338-343,共6页
【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列... 【目的】建立可视化检测猪瘟病毒(CSFV)及特异性鉴别猪瘟兔化弱毒疫苗株(HCLV)的逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP),为临床检测CSFV野毒株及特异性鉴别HCLV毒株提供技术支持。【方法】根据Gen Bank中CSFV非结构蛋白NS5B基因的保守序列,设计两套针对CSFV和HCLV的特异性引物,并优化RT-LAMP反应条件,同时用LA-320C浊度仪实时监测其浊度变化。【结果】优化的RT-LAMP仅需在63℃水浴锅中反应50 min即可完成检测,且能通过肉眼观察反应液的颜色变化直接判定结果;所有CSFV样本的检测结果均为阳性(翠绿色),其他非CSFV样本的检测结果均为阴性(桔红色),且能特异性鉴别HCLV毒株,与实时浊度监测结果一致。该方法对CSFV和HCLV的最小检测限分别是100和101 copies,敏感度分别是常规RT-PCR的100倍和10倍。【结论】建立的RT-LAMP特异性强、灵敏度高、方法简便,尤其适合基层进行CSFV感染的快速检测及特异性鉴别HCLV,对有效防控CSF具有重要意义。 展开更多
关键词 猪瘟病毒(cSFV) 猪瘟兔化弱毒疫苗株(HcLV) RT-LAMP 浊度 特异性 敏感度
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中国猪瘟兔化弱毒兔脾毒NS2-3基因的序列分析 被引量:7
14
作者 王家富 张楚瑜 +2 位作者 傅烈振 黄茜华 张芄伟 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期150-154,共5页
根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了覆盖有 NS2 - 3全基因的 4对引物 ,应用RT -PCR技术从接种了猪瘟兔化弱毒 (hogcholeraviruslapinizedChinesestrain ,HCLV)的兔脾组织中 ,成功地扩增了 NS 2 - 3基因 ,将其克隆到T载体后 ,测定... 根据已发表的猪瘟病毒序列 ,设计并合成了覆盖有 NS2 - 3全基因的 4对引物 ,应用RT -PCR技术从接种了猪瘟兔化弱毒 (hogcholeraviruslapinizedChinesestrain ,HCLV)的兔脾组织中 ,成功地扩增了 NS 2 - 3基因 ,将其克隆到T载体后 ,测定了其核苷酸序列。结果显示 ,所克隆的NS 2 - 3基因长 2 96 4个核苷酸 ,编码 988个氨基酸。用DNASIS和PROSIS软件分析表明 ,该基因具有丝氨酸类蛋白酶活性及含有解旋酶超家族特征性保守序列。核苷酸序列同源性分析表明 ,HCLV与国外报导的 8株HCV毒株“C”、Riems、ALD、GPE、Glentorf、CAP、Brescia和Alfort株NS 2 - 3基因核苷酸序列同源性分别为 99%、99%、96 %、96 %、95 %、95 %、94%和 86 % ,推导的氨基酸序列同源性分别为 99%、99%、98%、98%、98%、97%、97%和 95 % ,氨基酸序列的高度同源性表明了NS 2 - 3是猪瘟病毒中高度保守的蛋白质之一 ,这与该基因产物参与病毒复制及多聚蛋白前体加工过程中的重要作用相对应。 展开更多
关键词 中国猪瘟兔化弱毒 NS2-3基因 序列分析 疫苗
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猪瘟兔化弱毒疫苗与我国近年猪瘟野毒的免疫保护相关性试验 被引量:22
15
作者 丘惠深 郎洪武 王在时 《中国兽药杂志》 北大核心 1997年第3期1-3,共3页
2批猪瘟兔化毒睾丸细胞苗分别来自两家兽医生物药品厂,各分别免疫接种猪只,随后以5株猪瘟病毒野毒分别攻击,疫苗接种猪完全存活,对照猪完全死亡。此5株野毒分离自国内不同地区,并皆已经过细致的鉴定,以免疫荧光技术对猪扁桃体... 2批猪瘟兔化毒睾丸细胞苗分别来自两家兽医生物药品厂,各分别免疫接种猪只,随后以5株猪瘟病毒野毒分别攻击,疫苗接种猪完全存活,对照猪完全死亡。此5株野毒分离自国内不同地区,并皆已经过细致的鉴定,以免疫荧光技术对猪扁桃体进行了活体检查,各对照猪材料上能在攻击后一周时出现病毒,而疫苗接种猪在整个观察期间未出现病毒,据此。 展开更多
关键词 猪病 疫苗 猪瘟野毒 免疫
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猪瘟野毒混合毒实验室感染的研究 被引量:5
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作者 赵耘 王在时 +5 位作者 王琴 李博 丘惠深 宁宜宝 宋立 张广川 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期273-276,共4页
本研究以本所近年来所分离的高、中、低三株不同毒力 (HeNXH3.98、JL1 94和FJFQ1 99)的猪瘟野毒混合毒对敏感猪进行实验室感染试验 ,利用HCFA、RT_PCR及序列测定进行检测和分析 ,结果 2头试验猪均在感染后 2周发病死亡 ,表现典型的猪瘟... 本研究以本所近年来所分离的高、中、低三株不同毒力 (HeNXH3.98、JL1 94和FJFQ1 99)的猪瘟野毒混合毒对敏感猪进行实验室感染试验 ,利用HCFA、RT_PCR及序列测定进行检测和分析 ,结果 2头试验猪均在感染后 2周发病死亡 ,表现典型的猪瘟临床症状 ;序列测定及分析结果表明感染后 1周及 2周 2头实验感染猪所分离的病毒E2基因主要抗原编码区序列完全一致 ,核苷酸及氨基酸同源性均为 10 0 % ;与感染毒株序列比较 ,2头试验感染猪所分离的病毒E2基因主要抗原编码区序列与JL1 94株序列完全一致 ,核苷酸及氨基酸同源性均为 10 0 % ,且基因分群在同一群 ;而与HeNXH3.98和FJFQ1 99株序列则有一定的差异 ,且不在同一基因群或基因亚群。说明在多个猪瘟病毒存在的情况下 ,敏感猪存在对猪瘟病毒的优势选择。本试验的条件下 3株不同毒力的猪瘟野毒混合感染以中等毒力毒株JL1 展开更多
关键词 猪瘟野毒混合毒 感染 序列分析 优势选择
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我国猪瘟病毒兔化弱毒株囊膜糖蛋白E0基因的克隆及序列测定 被引量:6
17
作者 李红卫 刘湘涛 +2 位作者 李小兵 韩雪清 殷震 《中国病毒学》 CSCD 1999年第2期169-173,共5页
采用异硫氰酸胍一步法从480代猪瘟病毒兔化弱毒株(HCLV)脾毒中提取总RNA,以该RNA为模板,进行反转录,然后采用套式PCR扩增出HCLV的囊膜糖蛋白E0基因,琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将扩增出的E0基... 采用异硫氰酸胍一步法从480代猪瘟病毒兔化弱毒株(HCLV)脾毒中提取总RNA,以该RNA为模板,进行反转录,然后采用套式PCR扩增出HCLV的囊膜糖蛋白E0基因,琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将扩增出的E0基因克隆到pGEMT载体中,用自动序列分析仪对其进行序列测定。将测得的序列及推导的氨基酸序列与国外测得的C株相应序列进行比较,结果发现,它们之间核苷酸序列同源性为99.08%,氨基酸序列同源性为98.42%。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 兔化弱毒株 囊膜糖蛋白 E0基因 HcLV
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猪瘟淋脾毒(耐热保护剂)活疫苗的热稳定性研究 被引量:4
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作者 刘业兵 张万林 +2 位作者 孙晔 王利永 王栋 《中国兽药杂志》 2004年第1期22-24,共3页
通过对 3种不同配方的冻干保护剂和冻干曲线与猪瘟兔化弱毒相溶性的比较研究 ,成功研制了适用于猪瘟淋脾毒活疫苗的耐热保护剂。用这种保护剂生产的该疫苗经 37℃保存1 0d的耐老化试验及在 2~ 8℃保存 1 2个月后仍然符合产品质量标准... 通过对 3种不同配方的冻干保护剂和冻干曲线与猪瘟兔化弱毒相溶性的比较研究 ,成功研制了适用于猪瘟淋脾毒活疫苗的耐热保护剂。用这种保护剂生产的该疫苗经 37℃保存1 0d的耐老化试验及在 2~ 8℃保存 1 2个月后仍然符合产品质量标准的要求。经 4770余头份疫苗的田间试验 ,证明该产品安全、有效 ,且便于运输和使用 ,显示出良好的热稳定性能。 展开更多
关键词 耐热保护剂 猪瘟兔化弱毒疫苗 田间实验 猪瘟淋脾毒活疫苗 产品质量标准
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猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株在原代牛睾丸细胞中增殖特性的研究 被引量:12
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作者 王镇 陆宇 丁明孝 《中国病毒学》 CSCD 2000年第2期170-179,共10页
以猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株 (CSFVC株 )为实验材料 ,研究该病毒株在原代牛睾丸细胞中增殖的基本特性与规律。找到了一株能够使用免疫荧光技术进行检测的C株猪瘟病毒 ,并对病毒滴度的测定方法进行了改进 ,发展完善了荧光斑技术 (F PFU... 以猪瘟病毒中国兔化弱毒疫苗株 (CSFVC株 )为实验材料 ,研究该病毒株在原代牛睾丸细胞中增殖的基本特性与规律。找到了一株能够使用免疫荧光技术进行检测的C株猪瘟病毒 ,并对病毒滴度的测定方法进行了改进 ,发展完善了荧光斑技术 (F PFU)。使用改进的病毒滴度测定方法 ,对接毒后培养上清中病毒滴度的变化趋势进行检测。在原代牛睾丸细胞中 ,接毒后 5d ,几乎所有的细胞都可被病毒感染 ;释放到培养液中有活性的病毒粒子达到 10 5F PFU/mL以上 ,后维持在该水平。对原代细胞中细胞种类随代次增加的变化趋势进行了观察 ,并对CSFV的增殖特点及生产中出现的一收毒价不稳定、多次收获病毒等现象的机制进行探讨。并对影响猪瘟病毒增殖的因素进行了实验 ,不仅加深了对猪瘟病毒C株在原代牛睾丸细胞中增殖规律的了解 。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 弱毒疫苗 c 病毒增殖 原代细胞
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猪瘟病毒流行株与疫苗株主要抗原编码基因差异研究 被引量:2
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作者 王在时 丘惠深 +3 位作者 郎洪武 李博 王琴 赵耘 《中国兽药杂志》 2001年第1期1-3,共3页
从全国 7个省市 1 2 0 0多份可疑猪瘟病料中分离出 9个猪瘟病毒 ( HCV)野毒株 ,编号分别为 HCV- 0 1~ 0 9。将 9株野毒分别通过 PK15细胞传 6代 ,测其毒价 ,并提纯做电镜观察 ,结果表明 :毒价范围在 1 0 -2~ 1 0 -7TCID50 ,电镜观察... 从全国 7个省市 1 2 0 0多份可疑猪瘟病料中分离出 9个猪瘟病毒 ( HCV)野毒株 ,编号分别为 HCV- 0 1~ 0 9。将 9株野毒分别通过 PK15细胞传 6代 ,测其毒价 ,并提纯做电镜观察 ,结果表明 :毒价范围在 1 0 -2~ 1 0 -7TCID50 ,电镜观察均可清晰地见到直径为 2 5~ 70 nm,略呈圆形的病毒颗粒 ,具有较完整的囊膜和纤突结构。从 9株野毒中选取 5株经猪瘟阴性猪各传 3~ 4代 ,测其毒力、病原性、致死性 ,结果表明 :各毒株在传代中其上述生物学特性上有变化和差别。用猪瘟兔化弱毒疫苗分别对这 5株野毒做免疫保护相关性试验 ,结果证明 :攻毒后的疫苗接种猪 1 0 0 %保护 ,而攻毒对照猪 1 0 0 %死亡 ,且对照猪在攻毒 1周后便出现猪瘟野毒感染 ,而免疫猪在整个观察期均未见到野毒感染。用不同剂量的猪瘟兔化弱毒细胞活疫苗分别接种不同妊娠期的怀孕母猪 ,从母猪所产 0~ 1 4日仔猪体内均未分离到猪瘟兔化弱毒 ,表明猪瘟兔化弱毒不通过胎盘垂直感染仔猪。将猪瘟野毒株、石门系强毒株、兔化弱毒株及 1 982年分离的郑州野毒等毒株进行主要抗原编码基因差异研究 ,结果表明 :猪瘟病毒可分为 2个基因组 6个基因亚组 ,HCV- 0 2、0 3、0 6、0 7等 4个野毒株与国内的 C株、石门强毒株、国外的 C株、日本 GPE株、ALD株、意? 展开更多
关键词 猪瘟病毒 野外分离株野毒 兔化弱毒 基因差异 疫苗株
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