元蘑多糖的降糖降脂及其抗衰老活性研究初报

研究了长白山地区著名野生食用菌元蘑的多糖组分的体外活性,通过水提醇沉法提取出元蘑多糖(HSP)经石油醚和Sevag试剂除杂后,通过DEAE纤维素-52离子交换层析和Sephadex G-100凝胶层析纯化,并测定了分离纯化后的组分对α-淀粉酶、胆固醇酯酶的抑制率、与胆酸盐的结合量。并通过线虫模型测定了元蘑多糖的抗衰老生物活性。在分离纯化试验中,由纯水、0.1、0.2 mol/L NaCl分别洗脱出了HSP-Ⅰ、HSP-Ⅱ、HSP-Ⅲ,再经凝胶层析后得到HSP-Ⅰ-1、HSP-Ⅱ-1。在活性试验中,HSP-Ⅰ-1、HSP-Ⅱ-1对α-淀粉酶的抑制率最高分别为1.48%、2.16%;对胆固醇酯酶的抑制率最高分别为34.26%、30.24%,抑制率与多糖质量浓度呈正相关,与石榴皮多糖和皂角米多糖相比具有较大的优势;与胆酸钠、甘胆酸钠、牛磺胆酸钠的结合量(m/m)平均分别为3.81%、3.40%;经过0.5、1.0 mg/mL元蘑多糖干预后的线虫平均寿命分别延长了8.6%、21.6%,且未对线虫产生生殖毒性。由此可知,元蘑多糖具有一定的降血脂和抗衰老活性,能够为元蘑的进一步开发提供理论依据。

亚侧耳栽培基质筛选及其生活条件探索

以亚侧耳为试材,利用5种作物秸秆替代部分(40%)木屑初步筛选亚侧耳栽培基质,采用单因素试验法,研究了不同培养条件对亚侧耳菌丝生长速率、胞外酶活性、木质素、纤维素、半纤维素降解率及失重率的影响,以期为作物秸秆替代木屑栽培亚侧耳提供参考依据。结果表明:在这5种农作物秸秆中,大豆和玉米秸秆处理的菌丝生长速度与全木屑无差异,综合失重率、纤维素、半纤维素和木质素降解率及5种胞外酶活性等指标,大豆和玉米秸秆可替代部分木屑;单因素试验探索亚侧耳生活条件中,综合所有测定指标分析表明在碳氮比27∶1、pH 7.0、料水比1∶1.8 g·mL^(-1)和22~25℃时更有利于亚侧耳菌丝的生长;相关性分析结果表明,菌丝生长速率与胞外酶活性、木质纤维素降解率和失重率之间的偶联性较强。综上所述,亚侧耳栽培部分替代木屑的适宜秸秆为玉米和大豆秸秆,最适生活条件为碳氮比27∶1、pH 7.0、料水比1∶1.8 g·mL^(-1)、温度22~25℃。

野生元蘑多糖的分离鉴定及其清除氧自由基作用

元蘑烘干后经热水提取,乙醇沉淀得粗多糖。粗多糖经Sevag法除蛋白后DEAE-纤维素(OH-)柱层析,分离得到两种多糖组份HsI和HsII,Sepharose CL-4B测得HsI和HsII分子量均为2.7725×104,红外光谱和NMR波普分析表明HsI和HsII均为含α和β两种构型的D-吡喃糖葡聚糖,其α和β两种构型比值HsI为2:1和HsII为1:1。单糖的连接方式为1-4连接和1-6连接,其比值HsI为1:1和HsII为2:1。邻苯三酚自氧化法对其清除氧自由基作用测定结果表明,元蘑多糖粗品和纯品HsI和HsII均具有清除氧自由基作用。

黄蘑多糖对荷瘤小鼠化疗的减毒增效作用

目的研究黄蘑Hohenbuehelia serotina多糖对环磷酰胺(CTX)化疗H22荷瘤小鼠的减毒和增效作用。方法建立小鼠体内移植性肝癌模型;小、中、大剂量治疗组分别ip黄蘑多糖提取物20、40、80mg/kg,连续给药10d,测定荷瘤小鼠的生命延长率和化疗药物CTX的毒副作用以及黄蘑多糖对CTX的减毒和增效作用。同时检测黄蘑多糖对淋巴细胞转化率、IL-2水平等免疫系统功能的影响。结果中、大剂量黄蘑多糖具有抑制肿瘤生长,延长荷瘤小鼠的生存率的作用。与CTX伍用可发挥协同作用,提高抑瘤率(P<0.05、0.01);提高荷瘤小鼠生存质量,体重、白细胞计数及免疫器官指数,与CTX阳性对照组比较均显示显著差异(P<0.05、0.01);实验结果显示黄蘑多糖与CTX伍用具有良好的减毒和增效作用,可增强荷瘤小鼠机体免疫力,提高淋转和IL-2的水平(P<0.05、0.01)。结论黄蘑多糖作为生物反应调节剂可提高机体的免疫力,增强CTX的抗肿瘤作用,同时减轻CTX的毒性。

不同培养料对元蘑胞外酶活性的影响

为了探明不同培养料对胞外酶活性的影响,设计了3种培养料配方,分别取其在菌丝覆面、菌丝半瓶、菌丝满瓶、原基出现、开伞期、子实体成熟6个生长期的粗酶夜,测定其分泌的纤维素酶、半纤维素酶、漆酶、淀粉酶等胞外酶的活性。结果表明,在不同培养料和不同生长发育阶段,元蘑菌丝所分泌的胞外酶活性具有明显的差异性,但同种酶在不同培养料中酶活性的变化趋势是一致的。这说明,培养料的不同对胞外酶活性的变化趋势影响小,但是对其活性影响较大。

元蘑谷物膨化食品的最佳配方研究

元蘑谷物休闲膨化食品是以元蘑、大米和小米为主要原料制得的休闲膨化食品。本试验通过单因素试验、正交试验和感官鉴定,确定了元蘑谷物休闲膨化食品的最佳配方为:元蘑20 g,大米150 g,小米40 g,水分11%,盐1.5%,鲜味剂0.18%。制得的元蘑谷物休闲膨化食品产品呈浅棕色,质地均匀,有元蘑的自然气味和谷物香气,口感酥脆,味道鲜美,市场前景良好。

元蘑游离必需氨基酸的测定

利用反相高效液相色谱法对元蘑游离必需氨基酸进行测定,结果表明元蘑游离氨基酸中含有7种必需氨基酸,色氨酸含量最高,达到1.56mg/g,但缺乏蛋氨酸。

菌糠袋栽元蘑技术初步研究

实验以木耳菌糠替代部分木屑栽培元蘑,分别以15%,30%,45%的菌糠代替木屑制成培养料,与未加菌糠的培养料进行产量比较试验。结果表明：在常规培养料的基础上加一定比例的木耳菌糠栽培元蘑是可行的。木耳菌糠添加量15%~30%时,可缩短发菌天数,但菌糠添加量为45%时,则延长了发菌天数。木耳菌糠添加量是30%时子实体生长良好,出菇整齐;且发菌比对照（CK）快,出菇好、优质菇多、生物效率稍差。综合各种因素,从成本和生态效益考虑,以木耳菌糠替代部分木屑栽培元蘑的最佳栽培配方（配方②）为菌糠30%,硬杂木屑48%,麦麸17%,豆饼粉1.5%,玉米粉1.5%,蔗糖1%,石膏粉1%。

元蘑多糖水提工艺研究

以水作溶剂,研究不同提取条件对元蘑多糖含量的影响,同时通过正交试验得出最佳的提取条件为浸提温度90℃、浸提时间4h、料液比3∶100(g/mL),得到的多糖含量为22.82%。

黄蘑子实体总糖的提取

以黄蘑子实体为材料,对黄蘑总糖的提取工艺进行研究,正交实验确定提取黄蘑子实体总糖的最佳条件为料液比1∶25,提取温度90℃,提取时间3h。

亚侧耳菌丝生长的最适pH值和温度的测定

该文研究了pH值和温度两种因素对亚侧耳菌丝生长的影响，试图求出最适宜亚侧耳菌丝生长的pH值和温度。研究中pH值为5，6，7，8，9，温度为22℃，24℃，26℃，28℃，30℃。试验结果表明：以菌丝的日增长长度为统计指标进行两因素方差分析，再通过对茵丝增长长度的平均值进行多重比较，最后得出pH6为亚侧耳菌丝生长的最佳酸碱度，26-28℃均适宜亚侧耳菌丝的生长，且亚侧耳菌丝生长的最佳组合为温度26℃、pH6。

亚侧耳原生质体的制备与再生研究

主要探讨了亚侧耳原生质体制备和再生条件。结果表明,以0.6mol·L-1的NaCl配制成浓度为2%、pH值6.5的溶壁酶溶液,32℃恒温水浴酶解菌龄8d的亚侧耳菌丝体3h,获得原生质体的产量最高。0.6mol·L-1的蔗糖作为再生培养基中的渗透压稳定剂时,再生率最高为6.0×10-2。

长白山野生黄蘑抗肿瘤活性多糖的研究

用热水,1％草酸铵和5％氢氧化钠依次抽提出长白山野生黄蘑子实体中的多糖组分FⅠ,FⅡ和FⅢ。再经乙醇沉淀、离子交换层析、凝胶过滤和亲和层析等方法进一步分离纯化,得到20余种多糖成份。通过皮下注射小鼠Sarcoma 180实验法对各多糖组分进行抗肿瘤活性检定,FⅠ_0,FA—1,FA—2,FⅡ—2,FⅢ—1—b和FⅢ—2—b等6组份具有较强的抗肿瘤活性。其中初步判定结果;FⅠ_0为异半乳聚糖和β—D—葡聚糖的混合物;FA—1及FA—2为含有异半乳糖和蛋白质的β—D—葡聚糖;FⅡ—2为β—D—葡聚糖;FⅢ—1—b和FⅢ—2—b为β—1,3;1,6—D—葡聚糖。

元蘑单孢杂交育种试验研究

进行了元蘑生产菌株和野生菌株的调查与采集工作,选定4个菌株作为亲本,应用单孢杂交技术进行品种选育,最终选育出1个元蘑优良品种。

正交设计法对保健野菇片提取工艺的影响研究

采用正交设计方法对保健野菇片的提取工艺进行研究,以总多糖、微量元素得率为检测指标,考察加水量、煎煮时间、煎煮次数对提取效果的影响.结果加水25倍量、煎煮2次、时间2 h为最佳提取工艺,确定该工艺科学合理,能够保证产品质量.

木耳菌糠对元蘑胞外酶活性的影响

[目的]筛选利用木耳菌糠栽培元蘑的最佳配方。[方法]设计4种配方,选取元蘑菌丝生长期、原基形成期和子实体发育期等阶段,测定其羧甲基纤维素酶(CMC)、半纤维素酶(HC)、淀粉酶(AMY)、漆酶(LAC)4种胞外酶的活性。[结果]在不同配方中,元蘑菌丝体所分泌的CMC、HC、AMY和LAC酶活具有明显的差异,但同种酶的活性在不同配方中变化趋势基本一致;经过显著性分析,配方1、配方2和配方3胞外酶活性无显著差异,但配方4的酶活显著低于其他3种配方。[结论]在胞外酶水平上,配方1、配方2和配方3用来栽培元蘑都是可行的。从经济成本考虑,配方3(菌糠含量为36%)为最佳配方。

利用秋季闲置黑木耳棚室栽培元蘑的研究

以元蘑1号和元蘑5号为试验材料,利用秋季闲置黑木耳棚室进行元蘑栽培研究,对2种元蘑菌株菌丝长势、生长速度、污染率、出菇集中程度、子实体形态特征、单袋产量和生物转化率进行比较研究,筛选适合秋季黑木耳棚室栽培的元蘑菌株。结果发现:元蘑1号菌丝生长速度较元蘑5号快,污染率较元蘑5号低;出菇管理中发现,元蘑1号出菇较集中,子实体品质、单袋产量和生物转化率均较元蘑5号高。结论为元蘑1号适合利用黑木耳棚室栽培出菇。

元蘑菌糠在百日草栽培中的应用研究

实验将元蘑菌糠按照0%、10%、20%、30%、40%比例分别添加到腐殖土、普通土中,用于栽培百日草,通过测定百日草的发芽率、株高、开花时间以及土壤中微生物数量来研究元蘑菌糠对百日草生长的影响。实验结果表明:施加10%元蘑菌糠的腐殖土栽培百日草的效果最佳。

响应面法优化元蘑多糖提取工艺及其饮料的制备

以元蘑为实验原料,采用酶提取法提取多糖,以元蘑多糖提取液为原料加入适当蔗糖,柠檬酸配制成一种元蘑多糖饮料。通过单因素实验和Box-Behnken得到最佳工艺条件为:酶添加量3%,酶解温度60℃,酶解时间3h,多糖提取率为3.29%。通过感官评价得出,元蘑多糖饮料最佳配方为:元蘑多糖提取液添加量为70%,蔗糖添加量为8%,柠檬酸添加量为0.2%。元蘑多糖提取液制备饮料口味清香,酸甜可口,为元蘑产品进一步深加工提供思路。

野生亚侧耳多糖的提取和对巨噬细胞Raw264.7的免疫调节作用研究

本研究从亚侧耳子实体中分离出水溶性亚侧耳多糖(HSP),通过体外实验评估其对Raw264.7巨噬细胞的免疫调节作用。采用WST-1法检测HSP对巨噬细胞增殖作用的影响,Griess试剂检测一氧化氮(NO)浓度,ELISA法检测HSP对淋巴细胞中一肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和前列腺素E2(prostaglandins E2,PGE2)等细胞因子分泌量的影响,反转录聚合酶链式反应分析诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)、白细胞介素-6(IL-6)、TNF-α和IL-1β的转录水平表达量。结果表明,HSP可显著提高Raw264.7细胞内NO的浓度,在HSP浓度为100.00μg/m L时,NO的分泌量达到最大值(29.94 mmol/L)。与空白组相比,HSP可以显著提高TNF-α、IL-1β、PGE2等免疫因子(P<0.05)的分泌量,其中IL-1β、PGE2的25μg/m L剂量组中各因子分泌量(31.9524 pg/m L,1.8174 ng/m L)均与LPS(脂多糖)阳性对照组相接近。反转录聚合酶链式反应分析结果表明,HSP能够提高iNOS和COX-2的蛋白表达量。HSP具有免疫调节的功能,可以作为免疫调节剂添加到功能性食品和药品中。