RNA干扰技术抑制HLX1基因表达对滋养细胞生物学性能的影响

目的:研究小分子干扰RNA(siRNA)技术抑制人类同源异型盒基因HLX1的表达对胎盘滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞生物学性能的影响。方法:常规体外培养HTR-8/SVneo细胞,设实验组(转染HLX1基因的特异性siRNA)、阴性对照组(转染阴性对照siRNA)及空白对照组(除不含siRNA片段,余试剂与另两组相同)3组分别进行瞬时转染。用流式细胞术测定siRNA转染效率,应用实时定量PCR技术和蛋白印迹法测定转染后各组HTR-8/SVneo细胞中HLX1 mRNA和蛋白的表达;应用MTT比色实验、Matrigel侵袭实验分别检测转染后各组细胞的增殖能力与侵袭能力的变化。结果:(1)转染24h后测得siRNA转染效率达(86.3±2.6)%。(2)转染48h后HLX1 mRNA的表达水平下调(77.0±1.2)%(P<0.01),转染72h后HLX1蛋白的表达水平下调(82.6±1.2)%(P<0.01),与HLX1 mRNA的表达水平下调相一致。(3)转染HLX1 siRNA 24h后,HTR-8/SVneo细胞的增殖活性已受到抑制,转染72h后细胞增殖抑制最显著,抑制率达到(58.1±4.4)%(P<0.01)。(4)转染HLX1 siRNA后,HTR-8/SVneo细胞侵袭Matrigel基质胶的能力受到显著抑制,其穿膜细胞数为(29±3)个,与空白对照组(穿膜细胞数为[53±8]个)相比,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HLX1基因表达水平的下降可以显著抑制滋养细胞的增殖活性与侵袭能力;HLX1基因表达异常可能通过影响滋养细胞增殖、侵袭等过程参与IFGR、子痫前期等疾病的发生。

肝细胞生长因子对滋养细胞HLX1基因的表达及侵袭能力的影响

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）对胎盘滋养细胞株HTR-8／SVneo细胞HLX1基因的表达及侵袭能力的影响。方法常规体外培养HTR-8／SVneo细胞，用不同浓度HGF（0、10、20、50、100ng／InL）处理细胞48h，设0浓度组为对照组；用HLX1 siRNA转染细胞24h后继续以20ng／mLHGF刺激48h，分空白对照组（MC）、siRNA＋HGF组、Mc＋HGF3个实验组；应用实时荧光定量RT—PCR和蛋白印迹法测定各组细胞中HLX1 mRNA和蚤白的表达；明胶酶谱测定上清中MMP一2的表达；Matrigel侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力。结果④HGF处理组细胞HLX1 mRNA表达水平与对照组比较上调了90％～475％（P〈0．01），且与HGF呈剂量依赖性；20ng／mLHGF使HLX1蛋白表达水平上调（156．7±6．4）％，P〈0．01；②siRNA＋HGF组与Mc组比较，细胞HLX1 mRNA和蛋白的表达水平分别下降（54．57±0．31）％及（68．44±2．48）％，P〈0．01；③20ng／mLHGF处理组细胞其上清MMP．2表达水平与对照纽比较上调（394．6±2．9）％，P〈0．01；siRNA＋HGF纽与MC组比较MMP-2表达水平下降（81．5±0．6）％，P〈0．01；④20ng／mLHGF处理的HTR-8／SVneo细胞穿过Matrigel的细胞数为（71±5）个，与对照组（50±3）个比较侵袭能力明显增强（P〈0．01）；siRNA＋HGF组穿膜细胞数明显减少为（20±4）个，MC组为（43±3）个，两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HGF可提高HTR-8／SVneo细胞HLX1基因的表达及细胞的侵袭力，且侵袭力的增加可能与HLX1表达水平升高有关，．