荔枝草抗炎质量标志物的研究

目的阐明荔枝草抗炎质量标志物,并对其含量进行测定,为荔枝草药材质量控制提供参考。方法采用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF-MS/MS)表征荔枝草的主要成分,根据二级质谱裂解碎片信息,并结合文献数据,进行分析鉴定。进一步通过SwissADME平台,从鉴定获得的化学成分中筛选出口服生物利用度(Oralbioavailability,OB)高且符合类药五原则的活性成分;运用SwissTargetPrediction数据库查找和预测荔枝草的成分靶点;通过在线人类孟德尔遗传数据库(Online MendelianInheritanceinMan,OMIM)、GeneCards数据库等筛选疾病靶点。采用String11.5数据库和Cytoscape3.7.2软件构建PPI网络,并筛选核心靶点。利用DAVID6.8进行基因本体(Gene ontology,GO)注释和KEGG通路富集分析,对富集得到的通路进行实验验证,以阐明其作用机制。对关键通路采用反向溯源分析潜在的药效物质基础进行实验验证,并建立高效液相含量测定方法。结果从荔枝草中共鉴定出36个主要成分,包括黄酮类、萜类化合物等;进一步筛选出活性成分与疾病交集靶点190个;通过网络拓扑筛选获得核心靶点18个;富集分析发现荔枝草抗炎作用主要涉及的通路为NF-κB信号通路、PI3K-Akt信号通路、TNF信号通路。对NF-κB信号通路进行反向溯源得到高车前苷、高车前素、木犀草素和异鼠李素4个相关成分,分子对接发现其与PTGS2的活性位点的结合能分别为-9.5、-9.7、-9.4和-9.4 kcal·mol^(-1),均具有良好的对接活性。根据质量标志物的可测性,确定高车前苷和高车前素可作为荔枝草的抗炎质量标志物。Western blot实验结果表明高车前苷和高车前素能显著降低COX-2和NF-κB p-p65的表达(P<0.05,P<0.01)。结论荔枝草抗炎质量标志物为高车前苷和高车前素,可通过NF-κB通路发挥抗炎作用。

荔枝草活性成分的研究

唇形科鼠尾草属植物荔枝草(Salvia plebeia R.Br.)的全草粗提物,对单纯疱疹病毒有体外抑制作用。从中分到八个单体化合物,鉴定了其中六个单体为高车前素(hispidulin,I);泽兰黄酮(nepetin,III);4-羟基苯基乳酸(4-hydroxyphenyllactic acid,IV);咖啡酸(caffeic acid,V);高车前甙(homoplanta-ginin,VII);假荆芥属甙(nepitrin,VIII)。其中咖啡酸对单纯疱疹病毒具有体外抑制作用。

高效液相色谱法测定复方荔枝草颗粒剂中高车前苷含量

目的 :建立测定复方荔枝草颗粒剂中高车前苷含量的高效液相色谱法。方法 :以KF -C18(2 5 0mm× 4 6mm ,10 μm)为分析柱 ,流动相为甲醇 -水 -pH 3 5的 1 0mol·L-1磷酸盐缓冲液 (4 0∶5 5∶5 ) ;柱温为 45℃ ;检测波长为 335nm ;流速为 1 0mL·min-1,采用面积外标法。结果 :线性范围 3 12× 10 -3 ～ 0 2 0 μg ,平均回收率为 96 96 %～ 10 1 5 % ,RSD <0 6 9% (n =3)。结论 :本法简便、灵敏、重现性好 ,可用于测定该颗粒剂高车前苷的含量和质量标准的控制。

蛤蟆草化学成分的研究

目的进一步揭示蛤蟆草药理活性的物质基础,并对蛤蟆草的化学成分进行系统研究。方法采用溶剂法提取其化学成分,经硅胶柱层析并通过波谱解析(IR,UV,1H-NMR)鉴定了4种化合物的结构。结果4种化合物分别被鉴定为5,7,4′-三羟基-6-甲氧基黄酮-7-D葡萄糖甙(Ⅰ),高车前甙元(Ⅱ),原儿茶酸(Ⅲ),4-羟基苯乳酸(Ⅳ)。结论原儿茶酸(Ⅲ),4-羟基苯乳酸(Ⅳ)首次从该种植物中分离得到。

高效液相色谱法测定车前草中高车前甙的含量

目的：建立测定车前草中高车前甙含量的高效液相色谱法。方法：以Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ７Ｃ１８（４．６×２５０ｍｍ，１０μ）为分析柱，流动相为甲醇水（ｐＨ３．５，１．０ｍｏｌ／Ｌ）磷酸盐缓冲液（４０∶５５∶５）；柱温４５℃；检测波长：３３５ｎｍ；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，采用面积外标法。结果：线性范围６．２５×１０－３～０．２０μｇ，平均回收率为１００．８％，ＲＳＤ为１．１９％（ｎ＝９）。结论：本法简便、灵敏、重现性好，可用于车前草中高车前甙含量测定。

高效液相色谱法测定荔大前合剂中的高车前苷含量

[目的 ]建立测定荔大合剂中高车前苷含量的高效液相色谱法。 [方法 ]色谱条件 :以KromasilODS( 2 5 0mm× 4 .6mm ,5 μm)为分析柱 ,流动相为甲醇 -水 -(pH3.5 ,1 .0mol·L- 1)磷酸盐缓冲液 ( 4 5∶5 0∶5 ) ;柱温 :4 5℃ ;检测波长 :335nm ;流速 :1 .0mL·min- 1,采用面积外标法。 [结果 ]线性范围 3.36× 1 0 - 3 ～ 0 .2 1 5μg ,平均回收率为 98.8% ,RSD为 2 .1 4 % (n=9)。 [结论 ]本法可作为该制剂的质量控制标准。

荔枝草中高车前苷的提取分离和光谱色谱特征图谱的建立

目的对荔枝草中高车前苷提取分离,并对其进行纯度测定及结构鉴定。方法利用硅胶柱色谱方法分离纯化样品并用高效液相色谱测定样品纯度,用理化性质及光谱学方法对其进行结构鉴定。结果荔枝草体积分数70%乙醇提取物用乙酸乙酯萃取并经硅胶柱色谱分离纯化,得到跟高车前苷Rf值相同的化合物,其纯度达98.2%,经红外光谱、核磁共振波谱、氢谱、质谱鉴定为5,4′-二羟基-6-甲氧基-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,即高车前苷(homoplantaginin)。结论本文建立了分离纯化高车前苷的方法,并建立了完整的高车前苷理化鉴别方法及光谱色谱特征图谱。

荔大前合剂质量标准的研究

采用聚酰胺薄膜色谱法鉴别荔大前合剂中荔枝草,展开剂为甲醇-乙酸-水(65:15:20)。用高效液相色谱法测定,以ODS(250mm×4.6mm,5μm)为分析柱,甲醇-磷酸盐缓冲液(45:55)为流动相;检测波长为335nm柱温45℃,用面积外标法。结果表明,根据聚酰胺薄膜色谱图可鉴定制剂中荔枝草。当高车前苷在3.36×10^(-3)～0.215μg范围内呈线性。平均回收率为98.8％,RSD为2.14％。

HPLC法同时测定大鼠血浆中高车前苷和高车前素的浓度

目的建立HPLC法同时测定大鼠血浆中高车前苷、高车前素浓度的方法,初步探索高车前苷口服吸收规律。方法以大豆苷元为内标,采用液-液2次萃取处理大鼠血浆样品。采用AgilentCT-C18（250mm×4.6mm,5μm）和汉邦C18预柱（10mm×4.6mm,5μm）;流动相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（25∶75）;检测波长：335nm;流速：1.0mL·min^-1;柱温：30℃。以150mg·kg^-1剂量灌胃给药高车前苷,测定不同时间点大鼠体内高车前苷、高车前素的血药浓度。结果内源性杂质对样品测定无干扰。高车前苷在0.0433-2.163nmol·mL^-1,高车前素在0.333-16.65nmol·mL^-1范围内线性关系良好。血浆中高车前苷和高车前素的绝对回收率分别为82.41%-84.27%、91.00%-93.41%,方法回收率分别为97.58%-104.46%和95.41%-97.60%,日内精密度（RSD）均小于5.18%,日间精密度（RSD）均小于7.84%。样品冻融稳定性良好。灌胃给药高车前苷后,药物主要以高车前素的形式被吸收,高车前素的曲线下面积（AUC）为高车前苷的5.4倍。结论该法快速、灵敏、准确,可用于同时测定大鼠血浆中高车前苷、高车前素的含量。口服给药高车前苷,主要以高车前素的形式被吸收。

小蓟化学成分的分离与鉴定

目的研究小蓟的化学成分。方法采用硅胶、凝胶、ODS柱色谱以及HPLC制备法对小蓟的乙醇提取物进行分离纯化,利用理化性质和波谱学手段鉴定其结构。结果从小蓟乙醇提取物中分离得到14个化合物,经鉴定分别为邻二苯酚（1,2-benzenediol,1）、反式对香豆酸葵酯（decyl transp-coumarate,2）、原儿茶醛（protocatechualdehye,3）、对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid,4）、香草酸（vanillic acid,5）、刺槐素（ermanine,6）、岳桦素（acacetin,7）、马齿苋酰胺（oleracein E,8）、芹菜素（apigenin,9）、木犀草素（luteolin,10）、槲皮素（quercetin,11）、异山柰素-7-O-β-D-葡萄吡喃糖苷（isokaempferide-7-O-β-D-glucopyranoside,12）、高车前苷（homoplantaginin,13）和蒙花苷（linarin,14）。结论化合物1-4、7、8和13为首次从小蓟中分离得到。

不同采收期荔枝草中黄酮成分含量的动态变化研究

目的:为荔枝草的最佳采收期提供实验依据。方法:采用Lichrospher C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm);0.5%的甲酸水溶液-乙腈梯度洗脱,流速1.0mL/min,柱温:25℃,检测波长342nm。结果:高车前苷与假荆芥属苷分别在0.0472～0.472μg(r=0.9999)和0.0275～0.275μg(r=0.9999)范围内呈良好的线性关系。结论:该方法简单,结果准确可靠,重现性好。荔枝草在5月上旬未开花前黄酮含量积累达到最大,可参考作为荔枝草药材的最佳采收期。

高效液相色谱法同时测定荔枝草提取物中迷迭香酸、高车前苷、高车前素及芹菜素含量

目的建立同时测定荔枝草提取物中迷迭香酸、高车前苷、高车前素及芹菜素含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱为Phenomenex C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%磷酸水(A)-甲醇(B),梯度洗脱(0~8 min时15%B^38%B,8~17 min时38%B^56%B,17~28 min时56%B^82%B,28~35 min时82%B^95%B),检测波长为335 nm,流速为1 mL/min,柱温为35℃。结果迷迭香酸、高车前苷、高车前素及芹菜素质量浓度分别在2.812 5~112.500 0,6.745~269.800,3.615~144.600,4.88~195.20 mg/L范围内与峰面积线性关系良好。荔枝草提取物中迷迭香酸、高车前苷、高车前素及芹菜素含量分别为6.186,18.253,9.665,11.162 mg/g。结论该方法准确,可靠,重复性好,可用于荔枝草提取物的质量评价与控制。

百蕊草化学成分分离

目的：研究百蕊草的化学成分。方法：对百蕊草95%乙醇提取物采用各种柱色谱方法分离纯化,通过理化常数测定和光谱分析鉴定化合物结构。结果：从百蕊草中分离纯化了10个化合物,分别鉴定为木犀草素-7-O-葡萄糖苷（1）,芹菜素-7-O-葡萄糖苷（2）,芦丁（3）,芹菜素-8-C-α-L-阿拉伯糖苷（4）,高车前苷（5）,大蓟苷（6）,蒙花苷（7）,芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷（8）,柯伊利素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷（9）,金圣草黄素（10）。结论：化合物10为首次从百蕊草属植物中分离得到,化合物4-9为首次从檀香科植物中分离得到。

高车前苷油水分配系数的测定及大鼠在体肠吸收动力学研究

目的:测定高车前苷的油水分配系数,考察其在大鼠肠道的吸收动力学特性。方法:采用高效液相(摇瓶法)测定高车前苷在正辛醇(水、正辛醇)不同pH缓冲液体系中的油水分配系数;采用大鼠单向在体肠灌流法研究高车前苷吸收特性,用紫外分光光度法测定酚红浓度以标定体积,用高效液相色谱法测定高车前苷在大鼠不同肠段中的浓度。结果:在正辛醇(水体系中,高车前苷的油水分配系数为18.07(lgP=1.26),在正辛醇(缓冲液体系中分配系数受溶液pH值影响不大。高、中、低浓度高车前苷的吸收速率常数(Ka)、有效渗透系数(Peff)无显著性差异,且在大鼠各肠段的Ka,Peff均为空肠>十二指肠>回肠>结肠。结论:高车前苷在全肠段均有不同程度的吸收,其吸收机制为被动扩散。

高车前苷改善棕榈酸所致的血管内皮细胞凋亡

目的:探讨高车前苷对棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用及其机制。方法:建立棕榈酸诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡模型,荧光显微镜下观察细胞凋亡形态,以Annexin V-FITC染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率,并用荧光显微镜检测细胞内活性氧和一氧化氮的水平。结果:高车前苷(1,10μmol/L)明显抑制由棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡,降低内皮细胞内活性氧的水平和增加细胞内一氧化氮的生成。结论:高车前苷对棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡具有保护作用,其作用机制与抗氧化应激有关。

荔枝草化学成分的研究

目的研究荔枝草Salvia plebaia的化学成分。方法利用硅胶色谱、Sephadex LH-20色谱等方法进行分离纯化,通过理化鉴别和波谱方法鉴定化合物结构。结果从荔枝草中分离鉴定了10个化合物,分别为β-谷甾醇(β-sitosterol,1)、齐墩果酸(oleanic acid,2)、粗毛豚草素(hispidulin,3)、2α,3β,24-三羟基-12-烯-28-齐墩果酸(2α,3β,24-trihydroxy-olea-12-en-28-oic acid,4)、3,4-二羟基苯甲酸(3,4-dihydroxy benzoic acid,5)、2α,3β-二羟基-12-烯-28-乌苏酸(2α,3β-dihydroxy-urs-12-en-28-oic acid,6)、2α,3β-二羟基-12-烯-28-齐墩果酸(2α,3β-dihydroxy-olea-12-en-28-oic acid,7)、高车前苷(homoplantaginin,8)、印度荆芥苷(nepitrin,9)、β-胡萝卜苷(β-daucosterol,10)。结论化合物2、4～7为首次从该植物中分得,化合物4为首次从该属植物中分得。

HPLC测定荔枝草提取物中高车前苷的含量

目的:建立荔枝草提取物中高车前苷含量的高效液相(HPLC)测定方法。方法:Hedera ODS-2色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm),流动相甲醇-0.5%冰醋酸水溶液(50∶50),柱温30℃,流速1 mL·min-1,检测波长335 nm。结果:高车前苷在0.20～2.01μg呈良好的线性关系,平均回收率101.70%,RSD 1.84%。结论:该方法简便、准确、专属性强,可以作为荔枝草提取物中高车前苷含量测定的一种有效方法。

雪荔复方中高车前苷在大鼠各组织中的分布研究

目的:研究雪荔复方灌胃给药后在大鼠体内的组织分布特点,为其临床应用提供理论依据。方法:采用HPLC法,Agilent TC-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水(55∶45),流速0.8 mL.min-1,组织样本采用机械匀浆,乙腈沉淀处理供测定。结果:大鼠灌胃给药后的组织分布实验表明,胃中高车前苷含量最高,1 h时高车前苷浓度最高为(7.496±0.636)μg.g-1,4 h降低至(5.237±0.373)μg.g-1,7 h降低至(1.763±0.157)μg.g-1,其次为肾,小肠组织,心、脾、肺中含量相对较低。结论:大鼠灌胃给药后高车前苷在各组织中均有分布,其在肾脏的高分布是雪荔复方治疗尿路感染的主要原因。

痔瘘熏洗剂特征图谱和含量测定方法的研究

目的:建立高效液相色谱法同时测定痔瘘熏洗剂中没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚14个成分的含量,并建立HPLC特征图谱。方法:采用Hedera-ODS-2 C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.1%磷酸(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱,柱温25℃,进样量10μL,检测波长330 nm(0～30 min),256 nm(31～95 min),以虎杖苷为参照峰,用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A版)对15批制剂进行相似度分析。结果:没食子酸、咖啡酸、虎杖苷、金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、高车前草苷、白藜芦醇、高车前草素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的线性范围分别为0.079 3～2.537 0、0.010 0～0.032 2、0.015 4～0.491 3、0.002 6～0.084 1、0.003 7～0.111 5、0.005 1～0.062 7、0.024 2～0.775 4、0.005 7～0.181 9、0.002 1～0.067 3、0.000 8～0.025 2、0.009 5～0.303 8、0.001 8～0.056 7、0.000 4～0.012 1、0.000 2～0.005 2 mg·mL^(-1),平均加样回收率分别为100.3%、111.7%、102.4%、118.7%、98.2%、104.2%、107.9%、120.1%、91.8%、84.1%、95.8%、102.4%、79.8%、117.6%,15批制剂中上述14个成分的含量范围分别为0.529 6～0.792 1、0.006 7～0.012 0、0.135 6～0.273 2、0.014 9～0.039 4、0.011 8～0.037 4、0.030 7～0.080 6、0.295 8～0.882 4、0.017 9～0.039 4、0.007 3～0.020 9、0.001 6～0.004 4、0.023 9～0.060 0、0.004 3～0.010 0、0.001 1～0.002 9、0.000 6～0.001 6 mg·mL^(-1)。15批制剂的相似度均在0.98以上。结论:本研究建立了痔瘘熏洗剂的特征图谱及多指标成分含量的测定方法,为制剂的质量控制及深入研究奠定了基础。

RP-HPLC法测定不同产地荔枝草药材中高车前苷和高车前素的含量

目的:建立测定不同产地荔枝草药材中高车前苷和高车前素含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Discovery C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水(27:73,V/V,pH2.4),流速为1.0ml/min,检测波长为335nm。结果:高车前苷和高车前素的质量浓度分别在20.44～204.40和5.04～50.40μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系(r分别为0.9997、0.9991);平均加样回收率分别为98.8%和98.9%,RSD分别为2.62%和2.20%(n均为9)。以山东所产荔枝草质量为佳。结论:本方法简单、准确、精密度高、重复性好,可用于荔枝草药材的质量控制。