猪肺炎支原体通过抑制SPLUNC1功能破坏呼吸道炎性反应平衡

【背景】猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae,Mhp)通过定植猪呼吸道黏膜层,破坏呼吸道炎性反应平衡,引起炎性损伤和持续性感染。短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(short palate lung and nasal epithelial clone1,SPLUNC1)是呼吸道黏膜分泌的具有重要抗菌和抗炎功能的蛋白,被认为是呼吸道黏膜面对危险信号时的“信号传感器”。【目的】从Mhp和SPLUNC1相互作用入手,分析Mhp感染对SPLUNC1表达的影响以及SPLUNC1对Mhp引起的炎性反应的调控作用,揭示Mhp引起炎性损伤的新机制,为解决Mhp持续性感染问题提供参考。【方法】利用猪肺炎支原体对猪支气管上皮细胞(porcine bronchial epithelial cells,PBECs)感染模型和猪体感染模型,通过荧光定量PCR、间接免疫荧光和Western-blotting等方法,分别检测Mhp感染后对肺脏中SPLUNC1以及体外PBECs中SPLUNC1转录和表达的影响。克隆并扩增猪源SPLUNC1基因通过酶切鉴定,构建成功SPLUNC1真核和原核表达重组质粒pCDNA3.1-SPLUNC1以及pET28a-SPLUNC1。与此同时,设计靶向SPLUNC1的siRNA干扰片段。利用体外SPLUNC1蛋白孵育、体内呼吸道黏膜SPLUNC1抗体封闭,通过Mhp CCU50检测明确SPLUNC1对Mhp体内外生长的影响。在猪支气管上皮细胞中,通过过表达或siRNA干扰SPLUNC1基因,后感染Mhp,利用Western-blotting、间接免疫荧光以及酶联免疫吸附方法,明确SPLUNC1对Mhp的黏附作用、诱导炎性因子表达以及MAPK信号通路活化的影响。【结果】Mhp感染猪后可引起肺脏实变,主要组织病理表现为肺脏炎性损伤,同时显著上调肺泡灌洗液中趋化因子CXCL8和炎性因子TNFα和IL-1β分泌。Mhp体内外感染后,体内肺脏和体外猪支气管上皮细胞中SPLUNC1的转录和表达均显著下调。以上研究表明,Mhp可诱导肺脏炎性反应,抑制SPLUNC1表达。另一方面,体外PBECs中过表达SPLUNC1后,Mhp感染引起的CXCL8表达显著减少;siRNA干扰SPLUNC1后,Mhp感染引起的CXCL8表达显著增加,表明SPLUNC1负调控Mhp感染引起的CXCL8表达。基于Mhp感染入侵呼吸道过程,本研究进一步解析SPLUNC1负调控CXCL8表达的机制。结果表明:无论是SPLUNC1和Mhp体外孵育,还是SPLUNC1抗体体内封闭,Mhp的体内外生长均未受影响;SPLUNC1的过表达或siRNA干扰对Mhp体外黏附PBECs的能力也无显著影响;过表达SPLUNC1可抑制pERK和IκBα的激活,相反SPLUNC1 siRNA干扰后,可促进pERK和IκBα的激活。以上研究证明SPLUNC1不是通过调控Mhp的生长和黏附,而是通过负调控MAPK-ERK通路的活化来调控CXCL8的表达。【结论】SPLUNC1可通过MAPK-ERK信号通路来调控炎性因子的过度表达,维护宿主炎性平衡;与此同时,Mhp感染后可通过抑制SPLUNC1的表达来破坏宿主炎性反应的平衡调控,进而引起炎性损伤。本研究为解析Mhp感染损伤机制提供依据。

基于嵌入式ARM的微流控PCR检测系统设计

为了实现微流控设备功能的集成化、提高交互系统的可操作性,提出一种基于嵌入式ARM的微流控聚合酶链式反应(PCR)控制系统及上位机软件的设计方案。系统硬件采用多个嵌入式ARM控制器与功能模块相互协调,制定可扩展的通信机制和协议,实现微流控PCR检测过程中的流路运动、温度控制、荧光信号采集等功能的集成控制。采用Qt结合SQLite数据库设计了上位机软件,利用多线程和节点映射,实现对硬件模块的协调控制以及检测信息存储。实验表明:该系统运行稳定,人机交互效果好,可操作性高,满足微流控PCR的集成功能需求。

中华绒螯蟹螺原体研究综述

螺原体是一种独特的原核生物,其种类繁多,是昆虫和一些植物的病原体,如果不对其进行有效控制,往往会造成相当严重的经济损失。文章主要从宿主分布、毒力因子、形态和运动能力、细胞骨架以及宿主免疫反应等方面对其进行了介绍,希望能够为螺原体的控制提供一定的借鉴。

细菌及病毒感染的宿主导向治疗

病原菌对抗菌药物耐药性的逐年增加及新型未知致病微生物的频繁出现与流行严重威胁着人类健康,因此迫切需要开发各种新型抗感染药物。宿主导向的抗细菌和病毒感染治疗(HDT)可作用于宿主-病原体相互作用中各个阶段的宿主组分或因素,相比于直接靶向病原微生物本身的药物,HDT具有研发周期较短、研发成本较低、治疗范围广以及能有效防止或减缓抗菌药物耐药性发展的优势。鉴于大部分HDT方法基于宿主-病原体相互作用和失衡理论,该文从阻止病原微生物对细胞的入侵、干扰病原微生物在宿主细胞内的持续存在、提升宿主的抗感染反应及调节过度炎症反应等几个方面对HDT药物进行介绍。

抗炎宿主防御肽治疗脓毒症机制研究进展

脓毒症是一种感染性疾病。近年来脓毒症已成为重症监护病房患者病死的主要原因,且其发病率和致死率呈现逐年上升趋势。尽管对于脓毒症的治疗有了一定的进展,如应用器官功能技术与抗感染治疗,但会产生如治疗周期长、治疗效果差且易产生耐药等问题,没有实质性地改善脓毒症患者的治疗效果,因此急需开发治疗效果好且不易产生耐药问题的新型药物。抗炎宿主防御肽(抗炎肽)是一类具有抗炎活性的多肽,因其来源广泛便于合成、毒副作用低且不易产生耐药问题而受到广泛的关注。本文对抗炎肽的理化性质和治疗脓毒症的作用机制进行综述,以期为治疗脓毒症的药物开发提供新思路。

雷公藤春碱和雷公藤新碱的免疫抑制作用

雷公藤春碱(wilfortrine)和雷公藤新碱(euonine)ip 40及80 mg/kg对以溶血素反应为指标的体液免疫具有明显的抑制作。用雷公藤春碱ip 160mg/kg对GVHR为指标的细胞免疫也具有抑制作用。雷公藤新碱对DNCB所引起迟发超敏反应具有显著的抑制作用,并且能够降低小鼠碳廓清率和脾脏、胸腺的重量。

活化淋巴细胞与慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型的比较

目的 :将本室建立的用活化淋巴细胞诱导的系统性红斑狼疮 (SLE)样小鼠模型与国际上公认的用慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型进行比较 ,进一步探索SLE的发病机理。方法 :分别将亲代Balb c小鼠淋巴细胞经静脉和用ConA活化的(Balb c×C5 7BL 6 )F1代小鼠淋巴细胞经皮下途径输入F1代小鼠 ,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体 ,用免疫荧光法检测抗核抗体 (ANA)荧光核型和肾小球内免疫复合物沉积 ,用免疫印迹法检测抗可溶性核抗原 (ENA)抗体。结果 :亲代淋巴细胞免疫F1代小鼠所致的慢性GVHR和活化F1代小鼠淋巴细胞均可诱导F1代小鼠产生高滴度的抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体等ANA ,并且肾脏都有明显的IgG类免疫复合物沉积。但亲代淋巴细胞免疫组ANA核型以颗粒型、核仁型为主 ,ENA多肽谱多在 32、47、6 7kD处显色 ;而活化淋巴细胞免疫组以胞浆型、周边型、均质型为主 ,ENA多肽谱在 2 8、47、6 7kD处显色。结论 :这 2种方法均可诱导出SLE样综合征 ,但其抗核抗体谱有所不同。

短期应用单克隆抗体CD_3预防肾移植术后早期排斥反应

①目的 探讨短期应用单克隆抗体CD3 (OKT3 )预防肾移植术后早期严重排斥反应的效果和安全性。②方法 对照组 35例肾移植病人术后常规应用甲基泼尼松龙、环磷酰胺、泼尼松、骁悉和环孢霉素A ;实验组33例在上述用药基础上 ,术后前 5d连续应用OKT3 5mg静脉注射。③结果 实验组除 1例肾小管坏死的病人因发生急性排斥反应、自发性移植肾破裂而切除肾脏 ,无其他严重并发症。对照组 2例发生加速排斥反应 ,应用OKT3 后 1例加速排斥反应逆转 ,1例死亡 ;4例发生急性排斥反应 ,应用OKT3 后全部逆转。两组排斥反应发生率比较差异有显著性 (χ2 =4 .72 5 ,P <0 .0 5 )。④结论 肾移植术后短期应用OKT3 能有效地预防早期严重排斥反应 。

玉米灰斑病菌致病过程的寄主反应研究

通过对玉米灰斑病菌侵染后的显症过程的系统观察,可在组织水平上说明该病菌与寄主互作反应存在分化或多样性:玉米灰斑病菌不同菌株侵染后显症过程表现出明显的差异;玉米灰斑病菌在侵袭力上存在多样性,菌株间对同一种品种的致病性表现多样化,或者同一菌株对不同品种侵染引起的寄主反应表现为多样性;病斑反应型的分化,玉米灰斑病菌侵染玉米品种或自交系后,主要有7种病斑反应类型,即RH型(长矩形具褪绿晕圈病斑)、RN型(长矩形无褪绿晕圈病斑)、IRH型(不规则形具褪绿晕圈病斑)、IRN型(不规则形无褪绿晕圈病斑)、SH型(斑点形具褪绿晕圈病斑)、RI型(长矩形与不规则形混合病斑)和RS型(长矩形与斑点形混合病斑),若发病严重,病斑连成片,而且这些反应类型出现的频率也不同。

造血干细胞移植后HLA-G表达与移植物抗宿主反应的相关性研究

背景长期以来,许多研究者花费大量精力致力于研究移植排斥与存活相关的机制,但对造血干细胞移植、器官移植的了解依然缺乏。自从上世纪90年代发现HLA-G在诱导母亲与胎儿耐受起着重要的生理作用以来,研究HLA-G作用于异体移植的观点已经得到有力支持。一些研究报道已经证实,同种移植中HLA-G的出现以及可溶性sHLA-G的血清/血浆水平的增加与更好的移植耐受,并增加移植物的存活都有相关性。目的本研究确定造血干细胞移植后血浆sHLA-G水平和单个核细胞(mononuclear cells)膜HLA-G表达与移植物抗宿主反应的关系。方法 225名首次造血干细胞移植患者依据移植物抗宿主反应的活性,分为急性移植物抗宿主反应组(acute GVHR)和慢性移植物抗宿主反应组(chronic GVHR),分别为96名和129名。健康献血者95名作为对照组。流式细胞法分析单核白细胞膜HLA-G(mHLA-G)表达。ELISA法检测血浆中可溶性HLA-G(sHLA-G)含量。ROC曲线评价sHLA的临界值与预判GVHR活性的相关性。RT-PCR和Western印迹分别分析HLA-G mRNA表达和蛋白一致性。免疫组化染色检测12名移植患者皮肤组织HLA-G表达状态。结果外周血单个核白细胞在acute GVHR组和chronicGVHR组都有低表达。急性组外周血中单核细胞CD14+mHLA-G1+细胞占(45.53±17.32)%,而慢性组中只有(10.22%±5.78)%,两者比较差异有统计学意义。sHLA-G5表达水平在急性组有显著性增加。sHLA-G5预判急性GVHR的最佳临界值是253.9μg/L,有很高的诊断准确度。12名acute GVHR患者中10名皮肤组织HLA-G表达阳性。RT PCR和Western印迹分析显示急性GVHR组的血浆sHLA-G5水平显著高于慢性组。结论 ROC曲线分析得出血浆sHLA-G5水平的临界值253.9μg/L可用于预测造血干细胞移植后移植物对宿主的急性排除反应。单核细胞CD14+HLA-DR-HLA-G+细胞具有干细胞特征,该细胞将可能用于移植排除反应的预防和治疗。

番茄黑环病毒检测方法的建立

通过汁液摩擦接种的方法接种几种鉴别寄主,筛选出检测番茄黑环病毒(TBRV)的一套鉴别寄主。同时建立了免疫学电镜检测方法。根据TBRV外壳蛋白基因的保守序列设计2对引物,应用RT-PCR均能从TBRV的6个分离物中扩增到与预期大小相同的DNA片段。利用抽提的质粒研究了RT-PCR方法检测TBRV的灵敏度。

环糊精包含络合反应的荧光法研究

主客体包含化合物或络合物属引人注目的研究课题。环糊精(简称CD)、冠醚及穴醚等是重要的主体分子。CD为D-吡喃葡萄糖单元以α-1,4-糖苷键结合取椅式构象的环状低聚糖,尤以含6、7、8单元的α-CD、β-CD、γ-CD具有实际价值。CD分子具有特殊的结构和功能:它们均为内部疏水而端口亲水的锥形空腔结构,能与许多化合物形成主客体包含络合物,亦可成为优良的酶模拟模型,故在医药、卫生、食品、分离、分析、合成等领域广泛应用。对此已采用极谱法、伏安法、电导法、荧光法等进行研究。

异体肾移植^（99m）Tc－DTPA肾动态显像的实验研究及临床应用

通过狗异体肾移植动态肾显像的研究，为临床应用提供依据．方法：建立标准狗异体肾移植模型，以９９ｍＴｃ-ＤＴＰＡ为示踪剂，对１５条狗异体肾移植后进行肾动态显像监测．结果：稳定期（ｎ＝１０）肾显像清晰，移植肾高峰计数／主动脉高峰计数（Ｋ／Ａ）均值３．６５±１．１８．２０分钟膀胱／移植肾放射性计数（Ｂ／Ｋ））比值＞１（１００％）；排异早期（ｎ＝１０）肾显像清晰．Ｋ／Ａ均值１．９８±０．６７（Ｐ＜０．０１），肾清除核素速率明显降低，Ｂ／Ｋ比值＜１（１００％）；排异晚期（ｎ＝１０）肾显像差，膀胱不显像．临床检查８例肾移植病人，正常肾动态显像３例，包括１例自体肾移植和１例异体肾移植，两者肾功能均正常，１例急性排异早期，用大剂量糖皮质激素冲击疗法３天，肾恢复利尿但血Ｃｒ尚未恢复正常；异常肾动态显像５例，其中２例急性排异病情较轻和２例严重急性排异病人，肾动态显像表现分别与上述动物实验的排异早、晚期的异常显像相符，１例并发急性尿路梗阻病人移植肾血流灌注正常，排泄受阻，功能相呈梗阻型．结论：９９ｍＴｃ-ＤＴＰＡ肾动态显像的Ｂ／Ｋ比值能发现早期排异的肾功能异常，Ｋ／Ａ比值反映肾血流灌注情况．与排异的严重程度相关；该检查还能早期反映抗?

建兰花叶病毒检测标准方法的建立

经过2004￣2005两年对上海口岸进境和进境后种植的260个兰花品种上建兰花叶病毒(CyMV)检测方法的研究,分别建立了检测和鉴定兰花上建兰花叶病毒的DAS-ELISA、电镜观察、鉴别寄主反应、RT-PCR和IC-RT-PCR的方法。

环糊精在高分子材料制备中的作用

环糊精具有良好的生物相容性和环境友好性,并且来源丰富、价格低廉,其在高分子合成领域中的应用越来越受到关注。研究表明,难溶于水的有机单体与环糊精形成的复合物可以直接在水相中通过自由基成功地引发聚合。这一方面使反应过程更加绿色化,减轻污染;另一方面,通过调整配方和工艺,可以进一步简化流程,控制产物结构,提高产物质量。本文从环糊精及环糊精/单体复合物分子结构出发,较为系统的综述了近些年来环糊精在聚合反应中的应用成果。

猪带绦虫(Taenia solium)囊尾蚴发育过程中的周围宿主反应

首次系统地研究了猪囊尾蚴发育过程中的周围宿主反应。结果显示 ,宿主炎性细胞在囊尾蚴周围出现有先后顺序。初期以嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞为主 ,随后巨噬细胞及上皮样细胞开始出现 ,并在虫体周围呈围墙样增生 ,最后在虫体外围形成结缔组织包囊。从病理组织学结果可以看出 。

抗西瓜花叶病毒刺角瓜种质材料筛选

为确定甜瓜近缘种刺角瓜种质对西瓜花叶病毒(WMV)的抗性,在日光温室内,采用苗期人工摩擦接种的方法进行20份刺角瓜材料的抗性鉴定。结果表明,刺角瓜是西瓜花叶病毒的专性寄主,有较丰富的抗性种质,其中,PI292190表现为免疫,PI202681、Hm4-1-1、Hm1-4-1等3份种质表现为高抗。研究结果可为刺角瓜的抗病机制研究和挖掘、转育抗病毒基因提供丰富的抗性材料。

治疗用抗人T淋巴细胞McAb(WuT_3)功能试验方法的研究

为评价治疗用抗人Ｔ淋巴细胞单克隆抗体（ＭｃＡｂ）ＷｕＴ３和ＯＫＴ３的免疫抑制作用，进行了兔皮内移植物抗宿主反应（ＧＶＨＲ）的研究。对试验方法的有关因素：如胎牛血清（ＦＣＳ）和环磷酰胺对ＧＶＨＲ的影响，淋巴细胞浓度和局部反应大小的关系，以及反应出现高峰的时间等进行了观察。建立和稳定了试验方法，并用此方法对ＷｕＴ３和ＯＫＴ３的免疫抑制作用进行了对比。结果表明，两种ＭｃＡｂ均可抑制ＧＶＨＲ，并对ＷｕＴ３和ＷｕＴ４两种ＭｃＡｂ联合应用的效果进行了初步探讨。

异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病的预防措施

目的 探讨异基因造血干细胞移植（Allo-HSCT）治疗恶性血液病时急性移植物抗宿主病（aGVHD）的预防策略.方法 对15例异基因造血干细胞移植患者联合采用重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-CSF）动员,-7 d（回输干细胞前为-,回输后为＋,回输时为0）始环孢素静脉滴注、麦考酚吗乙酯口服;-5～-4 d环磷酰胺静脉滴注,-5 d～-2 d抗胸腺细胞球蛋白静脉滴注;-6 d～＋10 d白细胞介素11（IL-11）皮下注射;＋1 d、＋3 d、＋6 d及＋11 d甲氨蝶呤静脉滴注预防aGVHD.结果 15例患者完全植入,aGVHDⅡ～Ⅳ度的发生率20.0%,Ⅳ度的发生率6.7%,随访中位时间为30.7（4～65）个月,无复发,无恶性血液病存活.结论 异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病时联合采用含有rhG-CSF、环孢素、麦考酚吗乙酯、环磷酰胺、抗胸腺细胞球蛋白、IL-11及短程甲氨蝶呤的方案预防aGVHD疗效可靠,值得推广.