SEPTIN9与HOXA9基因甲基化在鉴别阑尾和卵巢来源腹膜假黏液瘤中的诊断价值

目的:腹膜假黏液瘤(pseudomyxoma peritonei,PMP)是一种罕见的腹膜恶性肿瘤综合征,其来源鉴别较困难。本研究旨在探讨SEPTIN9与HOXA9基因在阑尾黏液性肿瘤来源的PMP(appendiceal mucinous neoplasms-PMP,AMNs-PMP)与卵巢黏液性肿瘤来源的PMP(ovarian mucinous tumors-PMP,OMTs-PMP)中的甲基化水平及其对PMP鉴别的意义。方法:采用甲基化特异度聚合酶链反应(methylation-specific polymerase chain reaction,MS-PCR)检测SEPTIN9与HOXA9基因在正常阑尾(appendix control,APD control)组(n=10)、正常卵巢(ovary control,OV control)组(n=17)、AMNs-PMP组(n=40)及OMTs-PMP组(n=19)中的甲基化水平,同时对AMNs-PMP组及OMTs-PMP组的组织样本进行细胞角蛋白(cytokeratin,CK)7、CK20免疫组织化学检测。通过t检验分析SEPTIN9及HOXA9基因甲基化在AMNs-PMP组及OMTs-PMP组中表达差异并分析其与免疫组织化学联合检测的作用及价值。结果:AMNs-PMP组中SEPTIN9基因甲基化的阳性率明显高于OMTs-PMP组(92.5%vs 63.2%,P<0.01);OMTs-PMP组中HOXA9基因甲基化的阳性率显著高于AMNs-PMP组(94.7%vs 12.5%,P<0.001)。OMTs-PMP组中HOXA9基因甲基化的ΔCt值显著低于AMNs-PMP组(3.20±0.47 vs 8.63±0.61,P<0.001)。OMTs-PMP组中CK7的阳性率显著高于AMNs-PMP组(94.7%vs17.5%,P<0.001),AMNs-PMP组中CK20的阳性率显著高于OMTs-PMP组(97.5%vs 63.2%,P<0.001)。CK7(-)CK20(+)与SEPTIN9(+)HOXA9(-)基因甲基化在AMNs-PMP中诊断均有较高的敏感度(82.5%vs 87.5%)和特异度(均为94.7%);CK7(+)CK20(-)与SEPTIN9(-)HOXA9(+)基因甲基化在OMTs-PMP诊断中均有较低的敏感度(均为36.8%)、较高的特异度(97.5%vs 92.5%),而CK7(+)HOXA9(+)在与前2种组合特异度相似的情况下,其敏感度为89.5%,显著高于前二者。结论:SEPTIN9(+)HOXA9(-)可用于AMNs-PMP诊断,CK7(+)HOXA9(+)可用于OMTs-PMP诊断。SEPTIN9与HOXA9基因甲基化可成为AMNs-PMP及OMTs-PMP的潜在生物学标志物。

干扰HOXA9基因表达对BTT739细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨同源盒基因HOXA9表达对小鼠膀胱尿路上皮癌细胞系BTT739细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法免疫组化检测膀胱尿路上皮癌以及癌旁正常组织临床标本中HOXA9基因的表达情况;采用sh-RNA技术干扰BTT739细胞中HOXA9基因的表达后,进行克隆形成、CCK8、流式细胞术、Transwell和划痕等实验检测BTT739细胞增殖、凋亡、迁移以及侵袭等生物学特性的变化,并通过Western blot检测上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)特征因子E-cadherin、Vi⁃mentin和Snail的表达。结果膀胱尿路上皮癌组织中HOXA9基因的表达高于癌旁正常组织。sh-RNA敲低BTT739细胞中的HOXA9基因后,细胞增殖、迁移和侵袭能力显著下降,而细胞早期凋亡百分率增高,G1、G2期比例下降,S期升高;此外,EMT特征因子E-cadherin表达增强,Vimentin和Snail的表达下降。结论HOXA9基因具有促进小鼠膀胱尿路上皮癌细胞系BTT739细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用,是膀胱尿路上皮癌潜在的免疫治疗靶点,其机制可能涉及EMT机制。

HOXB4、PRDM16及HOXA9在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的:检测HOXB4、PRDM16及HOXA9在急性髓系白血病(AML)患者骨髓中的表达水平,探讨其临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR方法,检测40例初治或复发AML患者、9例完全缓解患者和19例对照者(非恶性血液病患者及健康供者)骨髓细胞HOXB4、PRDM16及HOXA9 mRNA表达水平,分析其与疾病特征、临床疗效之间关系。结果:初治或复发AML患者骨髓细胞中HOXB4、PRDM16和HOXA9表达水平均明显高于非恶性血液病患者(P<0.05);初治或复发AML患者HOXB4基因表达水平与骨髓白血病细胞比例成正相关(r=0.39),HOXB4、PRDM16和HOXA9基因的表达水平两两之间具有相关性;AML不同病程阶段(初诊、复发、缓解)HOXB4、PRDM16基因表达水平差异具有统计学意义;按预后危险度分层将初治及复发AML患者分为高、中、低危3组,3组之间HOXB4、PRDM16、HOXA9表达水平的差异无统计学意义;经2个疗程正规化疗,缓解组(CR/PR)患者治疗前的3个基因表达水平均低于未缓解组治疗前水平(P<0.05);上述3个基因低表达组缓解率均高于高表达组(P<0.05)。结论:HOXB4、PRDM16、HOXA9基因表达水平与AML患者肿瘤负荷、疗效和预后存在一定的关系。在初治和复发的AML患者骨髓细胞高表达,缓解后其表达水平下降,表达高者化疗效果差,缓解率低。

miR-196a靶向调控HOXA9基因的实验研究

目的:研究HOXA9基因的表观遗传学调控机制,筛选靶向调控HOXA9基因的microRNA。方法:利用Tar-getscan在线分析软件预测特异性靶向HOXA9基因3'端非编码区域(3’UTR)的microRNA,采用PCR方法从1例健康供者DNA中扩增HOXA9基因3’UTR序列,插入经XbaI和PstI双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-M,采用脂质体SuperFect包裹荧光素酶重组质粒及microRNA表达质粒转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。构建miR-196a结合位点突变的HOXA9基因3’端非编码区域突变型荧光素酶报告载体,采用脂质体SuperFect包裹荧光素酶突变型重组质粒及miR-196a表达质粒转染293T细胞,应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性。miR-196amimics以脂质体Hiperfect转染至MV4-11细胞,实时定量PCR及Westernblot检测HOXA9mRNA及蛋白的表达。结果:成功构建了含有1628bp的HOXA9基因3’UTR序列的荧光素酶报告重组质粒pGL3-HOXA9-3’UTR,并通过酶切及基因测序方法的鉴定;荧光素酶报告实验提示miR-196a组荧光素酶活性明显低于对照组。成功构建了miR-196a的2个结合位点突变的HOXA9基因3’UTR序列的突变型荧光素酶报告重组质粒pGL3-HOXA9-mut3’UTR,并通过基因测序方法的鉴定。miR-196a可以下调野生型质粒的荧光素酶活性,不影响突变型质粒的荧光素酶活性。MV4-11细胞中过表达miR-196a,可以明显下调HOXA9mRNA及蛋白表达。结论:miR-196a通过靶向结合HOXA9基因3’UTR的结合位点特异调控HOXA9基因。

沉默Hoxa9基因可促进胫骨骨折后的成骨分化及骨折愈合

背景:研究表明,Hoxa10基因受到miRNA的调节后与成骨分化存在一定的关联性,但有关Hoxa9在成骨分化和胫骨骨折愈合中的表达和功能尚未见报道。目的:初步探讨Hoxa9对体外骨髓间充质干细胞成骨分化的影响及其体内模型的骨折损伤的治疗作用。方法:①体外实验:在成骨诱导培养基中培养小鼠骨髓间充质干细胞,分别进行Hoxa9基因被shHoxa9沉默或被MSCV-Hoxa9过表达处理;②体内实验:构建胫骨骨折模型大鼠,分别用Hoxa9和shHoxa9干预。结果与结论:①体外实验qRT-PCR及Western blot检测显示,Hoxa9的过表达能够明显抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化(P<0.05),细胞中成骨相关基因标记骨钙素、骨桥蛋白、Runx2和胶原蛋白Ⅰ的mRNA及蛋白均下调(P<0.05),细胞中钙化结节的数量、成骨分化能力及碱性磷酸酶活性显著降低(P<0.05),而沉默Hoxa9的表达可逆转上述现象;②体内实验组织学染色结果表明,经Hoxa9干预的大鼠组织中骨性损伤明显增加,未发现组织间胶原纤维和愈合损伤组织内的软骨,shHoxa9干预大鼠显示骨的大小和数量明显增加,检测到组织间胶原纤维和愈合损伤组织内的软骨;③体内实验qRT-PCR及Western blot检测发现,Hoxa9干预的大鼠骨折损伤组织中成骨相关基因标记骨钙素、骨桥蛋白、Runx2和胶原蛋白Ⅰ的mRNA及蛋白均下调(P<0.05);而shHoxa9组大鼠骨折损伤组织中成骨相关基因标记骨钙素、骨桥蛋白、Runx2和胶原蛋白Ⅰ的mRNA及蛋白均上调(P<0.05);④上述数据说明,沉默Hoxa9基因可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,进而促进骨折愈合。

人类巨细胞病毒对粒系祖细胞分化过程中HOXA9基因表达的影响

目的探讨脐血造血干祖细胞(HSPC)向粒系祖细胞(CFU-G)增殖过程中HOXA9基因表达情况,并且用人类巨细胞病毒(HCMV)进行干扰,探讨HCMV对HOXA9基因的影响。方法体外定向培养CFU-G,经MTT法检测后,HCMV-AD169滴度为106蚀斑形成单位(PFU)/mL,按0.1mL105PFU/mL接种培养体系。采用RT-PCR技术测定HOXA9基因表达。结果随时间推移,HOXA9基因在增殖分化的第7天表达最强烈,第12天表达明显减弱;HOXA9基因受HCMV影响下调(P<0.05)。结论 HOXA9基因在脐血粒系祖细胞发育过程中呈规律表达,提示HOXA9基因与粒系造血活动有相关性;HCMV下调HOXA9表达的同时,HCMV干扰细胞集落生成较正常组差,提示HCMV可能通过调控HOXA9基因表达异常引起HSPC增殖分化异常。

β-catenin、Wnt1、Smad4、Hoxa9、Bmi-1与食管鳞癌预后的关系

目的:探讨β-catenin、Wnt1、Smad4、Hoxa9、Bmi-1基因与食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)预后及临床病理的关系.方法:从南京医科大学附属第一医院2002-07/2003-12106例ESCC石蜡标本中随机选取70例.运用免疫组织化学及实时定量PCR检测70例ESCC患者肿瘤切除石蜡标本中待测基因的mRNA及蛋白表达水平,统计学分析其与ESCC预后及临床病理的关系.结果:ESCC中的β-catenin、Wnt1、Smad4、Hoxa9、Bmi-1mRNA表达水平明显高于癌旁组织(0.0821±0.0416vs0.0185±0.0201,P=0.0000;1.9934±1.9888vs0.8863±0.6658,P=0.0184;0.0298±0.0215vs0.0189±0.0187,P=0.0017;2.098±0.091vs1.016±0.078,P=0.0000;2.181±2.158vs0.931±0.894,P=0.0152).ESCC中的β-catenin、Wnt1、Smad4、Hoxa9、Bmi-1的蛋白水平明显高于癌旁组织(0.2835±0.0844vs0.2352±0.0670,P=0.0003;0.3830±0.0947vs0.2721±0.1474,P=0.0000;0.2637±0.0348vs0.2042±0.0180,P=0.0000;0.2058±0.0316vs0.1218±0.0518,P=0.0000;0.2736±0.0834vs0.2251±0.0571,P=0.0001).除Smad4外,待测基因mRNA及蛋白质表达水平均与病理分期和淋巴结转移相关(均P<0.05),高表达者预后较差(均P<0.05),但Hoxa9蛋白质表达水平与预后无关(P>0.05).Smad4mRNA表达水平与病理分期和淋巴结转移相关(均P<0.05),mRNA低水平表达者预后欠佳(均P<0.05);蛋白质表达水平与病理分期有关(P<0.05),但与淋巴结转移无关(P>0.05),与患者预后无关(P>0.05).Logistic多因素分析显示预后有关的因素有β-catenin、Wnt1、Bmi-1表达阳性或Wnt1及β-catenin二者表达阳性者或Wnt1、β-catenin、Bmi-1三者表达阳性者(χ2=17.65,P=0.0072).结论:Wnt1/β-catenin、Bmi-1高表达者预后不佳,表达水平与ESCC临床病理分期、淋巴结转移呈逆相关;Smad4、Hoxa9mRNA表达水平虽与ESCC预后及临床病理分期、淋巴结转移相关,但可能不是独立的预后因素.

靶向hoxa9 siRNA联合小剂量阿糖胞苷对U937细胞增殖、凋亡的影响

目的探讨利用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默hoxa9基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对U937细胞增殖、凋亡的影响。方法设计合成针对hoxa9的特异性siRNA,应用脂质体介导转染U937细胞。利用RT-PCR法、Western blot法分别检测各组细胞hoxa9 mRNA、蛋白的表达;siRNA和(或)小剂量Ara-C分别作用U937细胞后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果靶向hoxa9的siRNA可有效沉默hoxa9的表达,hoxa9 mRNA及蛋白相对水平明显下降。RNAi联合小剂量Ara-C作用于U937细胞后对细胞增殖抑制作用最强,48 h细胞凋亡率显著升高,与其余组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论靶向hoxa9的siRNA联合小剂量Ara-C能显著抑制U937细胞增殖并促进其凋亡,为研究hoxa9联合化疗治疗白血病的作用机制及应用于临床提供实验依据。

siRNA干扰沉默HOXA9基因对急性白血病K562细胞凋亡的影响

白血病是一种发生于造血组织的恶性疾病,其特点是某一类型白血病细胞在骨髓组织或其他造血组织中呈肿瘤性增生。白血病发病率占儿童恶性肿瘤的第一位。在我国白血病的患者30%是儿童。急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）约占儿童急性白血病的20%,过去20年,5年生存率已上升至60%[1]。

铅对造血干细胞和生殖细胞Hoxa9基因表达的影响

目的观察铅对大鼠骨髓和睾丸组织Hoxa9基因表达的影响,探讨其毒性作用机制。方法选用Wistar大鼠20只,随机分为2组,每组10只分别为铅组和对照组。铅组给予0.2%醋酸铅水溶液自由饮用,对照组给予蒸馏水。结果①铅组大鼠游泳时间显著低于对照组(P<0.01);②铅组大鼠睾丸组织显著萎缩,细胞凋亡、坏死明显,可见凋亡小体;③铅组大鼠骨髓和睾丸组织标本着色较浅,Hoxa9mRNA阳性细胞较少。铅组骨髓和睾丸组织Hoxa9mRNA表达率显著低于对照组。结论铅可影响骨髓和睾丸组织Hoxa9基因表达,引起贫血,产生生殖毒性。

携带同源盒基因HOXA9的逆转录病毒载体的构建和鉴定

目的构建携带同源盒基因(homeobox gene)HOXA9的逆转录病毒载体,并建立稳定产毒的包装细胞株。方法 PCR扩增HOXA9基因编码区全长序列克隆至逆转录病毒载体MSCVneo,经酶切、测序鉴定。将重组载体脂质体转染包装细胞系PT67,以G418筛选稳定产毒细胞株。收集病毒悬液并测定病毒滴度。结果重组逆转录病毒载体MSCVneo经酶切、测序鉴定正确。将筛选所得的高效产毒细胞株命名为PT67/MSCVneo-HOXA9,测定病毒滴度为5×105CFU/ml。结论成功构建了携带HOXA9基因的逆转录病毒载体,建立了稳定、高效、准确产生逆转录病毒的细胞株。

HOXA9基因抑制肝癌细胞HepG2迁移与侵袭能力的实验研究

目的:探讨同源盒基因HOXA9对肝细胞肝癌细胞株HepG2迁移与侵袭能力的影响。方法:采用Endo FectinTM-Max转染试剂将HOXA9基因真核表达载体及其空载体转染至HepG2细胞,并应用脂质体法转染HOXA9 siRNA序列及阴性对照序列,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)及Western blot方法检测转染后HOXA9的mRNA和蛋白表达水平。以划痕实验和Transwell方法检测转染后细胞的迁移和侵袭能力。结果:在肝癌细胞HepG2中瞬时转染HOXA9真核表达载体后,其mRNA和蛋白表达明显增加,划痕实验检测发现48h细胞愈合率明显抑制,Transwell实验发现迁移和侵袭至下室的细胞数目明显减少;而转染HOXA9siRNA序列后,HepG2细胞中HOXA9 mRNA及蛋白表达明显下调,划痕实验显示48h划痕愈合率增加,Transwell实验显示迁移和侵袭至下室的细胞数目明显增多。结论:HOXA9基因对肝癌细胞HepG2的迁移和侵袭能力有明显抑制作用,为进一步研究HOXA9在肝细胞肝癌发生和进展中的作用奠定了基础。

HOXA9基因与恶性肿瘤关系的研究进展

HOXA9基因是同源盒(HOX)基因家族中的一员,其编码产物是一种重要的转录调节因子,在控制胚胎发育和调节细胞分化过程中发挥重要作用。近年来的研究发现,HOXA9基因的异常表达与急性白血病、恶性胶质瘤、卵巢癌、肺癌、乳腺癌等多种肿瘤密切相关。在不同类型肿瘤或肿瘤的不同阶段,HOXA9通过参与肿瘤细胞的增殖、凋亡或分化过程而具有双重作用(促癌作用或抑癌作用),产生这种差异的具体机制尚不清楚。本文对HOXA9的结构、功能及其与肿瘤关系的研究做一综述。

HOXA9在髓系白血病细胞HL-60中的表达及药物对其干预作用

本研究旨在观察同源盒基因(HOX)HOXA9在髓系白血病细胞HL-60中的表达和药物干预对其表达的影响,在mRNA水平和蛋白水平探讨HOX介导白血病的发病机制。用实时荧光定量PCR法观察HOXA9 mRNA的表达,Western blot法观察HOXA9蛋白的表达,以及全反式维甲酸(ATRA 1μmol/L)或三氧化二砷(As2O3 1μmol/L)对HOXA9表达的调节作用。结果表明:ATRA组和As2O3组的HOXA9基因表达都呈先上升后下降趋势,第1天就有表达,在第2天表达上升,而在第3天表达降低。ATRA组和As2O3组的HOXA9蛋白第1天就有表达,对照组与ATRA处理组HOXA9蛋白表达呈先上升后下降趋势;As2O3处理组HOXA9蛋白表达呈逐渐下降趋势。ATRA组HOXA9基因的表达在第1-3天均较对照组高(P<0.05);As2O3组HOXA9基因表达水平与对照组比较,第2天增高(P<0.05),第1,3天差异无统计学意义。ATRA组HOXA9蛋白的表达水平在第1-3天均较对照组高(P<0.05);As2O3组HOXA9蛋白表达量与对照组比较,第1天增高(P<0.05),第2天降低(P<0.05),第3天变化无统计学差异。结论:HOXA9在人髓系白血病细胞HL-60中有表达,1μmol/L ATRA能上调HL-60细胞中HOXA9mRNA和蛋白的表达,ATRA、As2O3治疗白血病的机制可能与调节HOXA9 mRNA和蛋白的表达有关。

HOXA9 mRNA在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究HOXA9 mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及临床意义。方法收集125例NSCLC标本,采用实时荧光定量RT-PCR方法检测NSCLC组织及相应癌旁组织中HOXA9 mRNA的表达情况。采用受试者工作特性曲线(ROC)分析HOXA9 mRNA对NSCLC诊断及疾病进展的预测价值,并分析HOXA9的临床病理意义。结果 HOXA9 mRNA在NSCLC表达量为1.059±0.591,明显低于相应的癌旁肺组织(P<0.01)。NSCLC中HOXA9 mRNA表达量与临床TNM分期、淋巴结转移和EGFR蛋白表达均呈负相关(P<0.01);而与患者吸烟状况呈正相关(P<0.05)。结论 HOXA9低表达可能与NSCLC的发生、发展相关,HOXA9 mRNA可能成为判断NSCLC进展潜在的评估指标。

孕激素通过HOXA9对人卵巢癌细胞增殖和迁移的机制研究

目的探讨HOXA9在孕激素抑制卵巢癌发展过程中的作用机制。方法(1)按照孕激素醋酸甲羟孕酮(MPA)药物浓度梯度(0.1、1、10、50、100μmol/L)培养人卵巢癌细胞HO-8910,作用24 h、48 h、72 h后,光学显微镜观察细胞形态;CCK-8检测细胞存活率,确定IC_(50);Annexin V-FITC双染法检测细胞凋亡率。(2)将细胞分为H0-8910细胞4组:(1)NC组;(2)孕激素组;(3)孕激素+si-HOXA9组;(4)孕激素+ov-HOXA9组。H0-8910细胞分别转染HOXA9敲降或过表达质粒后使用MPA处理或不转染质粒单独使用使用MPA处理72 h,qPCR和Western blot分别用于检测HOXA9 mRNA和蛋白表达水平以及上皮间质转化(EMT)相关蛋白(Vimentin,N-cadherin,E-cadherin)的表达变化;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell实验用于检测细胞侵袭能力。结果(1)孕激素刺激后,HO-8910细胞株生长状态变差,排列稀疏,细胞增殖,迁移以及侵袭能力受到抑制(P<0.0001),且细胞凋亡率上升(P<0.0001);(2)通过cck8结果计算得MPA处理H0-8910细胞72 h的IC_(50)值为2.680μmol/L;(3)相较于人卵巢上皮细胞CP-H055,HOXA9在人卵巢癌细胞株HO-8910,SKOV3,A2780和OVCAR3中mRNA均高表达(P<0.01),HOXA9蛋白在HO-8910中同样高表达(P<0.001);(4)孕激素可抑制HOXA9的表达(P<0.0001),敲降HOXA9后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制更为明显(P<0.0001),而过表达HOXA9后,孕激素对HO-8910侵袭和迁移能力的抑制稍有减弱(P<0.0001);(5)孕激素使E-cadherin蛋白表达上升(P<0.01),而Vimentin,N-cadherin蛋白表达下降(P<0.001);敲降HOXA9后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响更为明显(P<0.05),而过表达HOXA9后,孕激素对HO-891中EMT相关蛋白表达影响减弱(P<0.05)。结论孕激素通过抑制HOXA9基因的表达,抑制细胞增殖,迁移,侵袭以及EMT进程等恶性生物学表型,从而抑制卵巢癌发展进程。

卵巢浆液性肿瘤组织中的HOXA9蛋白的表达及其对卵巢癌预后的影响

目的:探讨浆液性卵巢癌高HOXA9表达的临床病理意义。方法:对178例浆液性卵巢癌患者、72例卵巢交界性肿瘤患者和69例良性卵巢肿瘤患者进行HOXA9免疫组织化学染色。HOXA9高表达与卵巢癌临床病理特征的关系采用χ2检验和Fisher精确检验。采用Kaplan-Meier法计算总生存(OS)率,用Cox比例风险模型分析预后因素与患者生存期的关系。结果:浆液性卵巢癌中HOXA9蛋白表达阳性率(75.8%,135/178)明显高于良性浆液性肿瘤(34.8%,24/69,P<0.05)。同样,浆液性卵巢癌中HOXA9蛋白强阳性表达率(59.6%,106/178)明显高于良性浆液性肿瘤(11.6%,8/69,P<0.05)。高级别(65.1%,71/109)卵巢癌中强阳性HOXA9蛋白表达率显著高于低级别病例(47.8%,33/69,P=0.014),同样转移卵巢癌中HOXA9蛋白强阳性表达率(72.6%,69/95)显著高于无转移卵巢癌(42.2%,35/83,P<0.001)。关于FIGO临床分期,晚期(ⅡB~ⅢC)卵巢癌中强阳性HOXA9表达率为69.1%(65/94),而在早期(I^IIA期)病例中仅为46.4%(39/84),两者比较差异有统计学意义(P=0.003)。HOXA9强表达患者的OS率低于HOXA9弱表达患者(Log-rank=43.765,P<0.001)。多因素分析显示,HOXA9是卵巢癌患者的独立预后因子。结论:HOXA9的表达与卵巢癌的分级和转归密切相关,可作为临床治疗有用的特异性标志物。

CDX2和HOXA9蛋白在膀胱癌组织中的表达及其与预后的关系

目的:分析尾型同源盒转录因子2与同源框蛋白A9在膀胱癌组织中的表达及其与预后的关系。方法:分析2014-12~2016-12在我院行膀胱癌根治术100例患者的临床资料。另选取同期行良性膀胱炎而进行手术患者100例作为对照组,两组均获取膀胱组织后行免疫组织化学法测定尾型同源盒转录因子2(CDX2)与同源框蛋白A9(HOXA9)的表达,并对膀胱癌患者行3年随访,计算3年累积生存率,计算与膀胱癌预后之间的关系。结果:膀胱癌组织CDX2和HOXA9蛋白阳性率分别为47.0%、65.0%,均高于癌旁组织、正常黏膜组织,CDX2和HOXA9蛋白高表达患者3年累积生存率分别为38.10%、39.39%,均低于CDX2和HOXA9蛋白低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman检验分析,CDX2和HOXA9蛋白表达与患者预后呈正相关性(P<0.05)。结论:膀胱癌组织中尾型同源盒转录因子2与同源框蛋白A9表达均有所提高,与患者生存预后关系密切。

前列腺癌患者癌组织中miR-647和HOXA9表达水平及其与预后的关系分析

目的通过检测前列腺癌组织中微小RNA(microRNA,miR)-647、同源盒A9(HOXA9)表达水平,分析miR-647、HOXA9与前列腺癌患者预后的关系。方法收集本院108例前列腺癌患者术中切除的癌组织及其对应的癌旁组织,使用qRT-PCR技术检测组织中miR-647和HOXA9 mRNA表达水平,免疫组化法检测HOXA9蛋白表达水平,并分析miR-647、HOXA9表达水平与患者临床病理特征及预后的关系;Pearson相关系数分析miR-647与HOXA9的相关性。结果前列腺癌组织中miR-647表达水平(0.65±0.12)显著低于癌旁组织(1.01±0.09)(P<0.05),HOXA9 mRNA表达水平(1.86±0.37)明显高于癌旁组织(1.03±0.10)(P<0.05);癌组织中HOXA9蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05);前列腺癌组织中miR-647与HOXA9呈负相关(r=-0.680,P=0.000);miR-647、HOXA9表达水平与患者T分期、淋巴结有无转移、Gleason评分以及前列腺特异抗原(PSA)水平有关(P<0.05);生存分析表明,miR-647高表达、HOXA9低表达时患者生存率较高;miR-647、HOXA9、Gleason评分是影响患者预后的相关因素(P<0.05)。结论miR-647在前列腺癌中低表达,而HOXA9高表达,miR-647与HOXA9呈负相关,两者表达水平与部分临床病理特征以及术后3年生存率有关,可影响患者预后。

靶向HOXA9基因RNAi慢病毒载体增加人急性单核细胞白血病U937细胞的药物敏感性

目的:探讨慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默同源盒A9(homeobox A9,HOXA9)基因对人急性单核细胞白血病U937细胞药物敏感性的影响。方法:应用蛋白质印迹法从4条针对HOXA9基因的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体中筛选出1条敲减效率最高的包装成慢病毒HOXA9/GV118RNAi-LV#2。实验分成未感染对照组(control,CON)、阴性对照组(negative control,NC)及敲减组(knock down,KD)。HOXA9/GV118RNAi-LV#2感染U937细胞后,应用实时荧光定量PCR法检测HOXA9 mRNA的沉默效率,蛋白质印迹法检测HOXA9蛋白的表达,MTT法和FCM检测病毒感染前后U937细胞对长春新碱(vincristine,VCR)和柔红霉素(daunorubicin,DNR)的敏感性及细胞凋亡率变化,RT-PCR法检测DNR作用后各组细胞中MDR-1mRNA的表达。结果:KD组细胞中HOXA9mRNA的沉默效率在55%以上,HOXA9蛋白的表达量明显减少。VCR及DNR作用KD组细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值明显降低(P<0.01),药物敏感性明显增强;VCR和DNR作用后,KD组细胞的凋亡率明显增加(P<0.01);DNR作用后,KD组U937细胞中MDR-1mRNA的表达水平明显下调(P<0.01)。结论:靶向HOXA9基因的RNAi慢病毒可稳定沉默HOXA9基因的表达,在一定程度上提高U937细胞对化疗药物的敏感性。