LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨LINC00943调节miR-126-5p/HOXB2轴对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法qRT-PCR检测45例ESCC组织和细胞系中LINC00943表达;MTT法、流式细胞仪、Transwell小室检测敲低LINC00943对KYSE30细胞增殖、凋亡、侵袭的影响;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、HOXB2表达;双荧光素酶报告基因实验验证miR-126-5p与LINC00943和HOXB2的关系;体内构建ESCC裸鼠模型,分为si-NC、si-LINC00943组,测量肿瘤质量、肿瘤体积、移植瘤组织中miR-126-5p、HOXB2表达及肿瘤肿瘤组织细胞凋亡率。结果在ESCC组织和细胞系中LINC00943 mRNA表达升高(P<0.05);与si-NC组比较,si-LINC00943组KYSE30细胞增殖活力、迁移与侵袭细胞数、HOXB2、PCNA、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白表达降低,miR-126-5p、Bax、Cleaved Caspase-3表达及细胞凋亡率升高(P<0.05);下调miR-126-5p,可减弱LINC00943敲低对KYSE30细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-126-5p与LINC00943、miR-126-5p与HOXB2存在靶向调控关系(P<0.05);体内实验显示,抑制LINC00943表达可显著降低移植瘤质量、体积及HOXB2表达,升高miR-126-5p表达和肿瘤组织细胞凋亡率(P<0.05)。结论LINC00943在ESCC组织及细胞系中高表达,敲低LINC00943可能通过上调miR-126-5p表达,抑制HOXB2表达,促进ESCC细胞凋亡,抑制其增殖、迁移与侵袭。

HOXB2在卵巢癌中的异常表达及其临床意义

目的分析卵巢癌(OC)中HOXB2中的表达,探讨HOXB2在OC中的潜在诊断和预后价值。方法从Gene Expression Omnibus(GEO)数据库获得OC的基因数据(GSE66957)。然后,利用STRING数据库和Cytohubba软件筛选差异表达的基因(DEGs),筛选出核心基因HOXB2,并用基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)途径评估了DEGs基因参与OC的关键途径。通过人类蛋白质图谱(HPA)数据库分析OC中HOXB2的表达。该研究纳入88例OC患者,收集患者相关信息,使用Kaplan-Meier评估HOXB2表达量和临床特征对OC患者生存率的影响。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和免疫组化检测OC组织及其癌旁组织中HOXB2的表达水平。结果该研究中,从数据集中获得了5003个差异基因,其中包括2733个上调基因和2270个下调基因,其中HOXB2是显著上调基因。KEGG分析表明,常见的DEGs与细胞黏附分子和金黄色葡萄球菌有关。GO分析表明,常见的DEGs主要参与上皮管形态发生、含有胶原的细胞外基质的调控。基于HPA数据库,HOXB2在OC中高表达。Kaplan-Meier分析表明,HOXB2的高表达与较差的总生存率显著相关。qPCR结果也证明了这一点,与癌旁相比,OC组织中HOXB2表达显著升高;免疫组化结果显示HOXB2在OC组织中明显高表达,差异有统计学意义。结论该发现有助于进一步探索OC的发展机制,并为未来OC治疗的一个有前途的选择。

miR-191-5p通过靶向调控HOXB2影响人口腔鳞状细胞癌细胞的增殖与凋亡

目的:探究miR-191-5p通过靶向HOXB2对人口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡的影响。方法:免疫组化和qRT-PCR检测人OSCC病灶和癌旁组织中miR-191-5p和HOXB2的表达。qRT-PCR检测人OSCCSCC-4、CAL-27和正常人口腔角化表皮细胞HOK(对照)细胞中miR-191-5p和HOXB2的表达。通过Targetscan预测miR-191-5p与HOXB2的结合位点,用双荧光素酶报告基因验证miR-191-5pmimic对h-HOXB2-3'UTR转录活性的抑制作用。CCK-8实验和AnnexinV/PI流式双染检测miR-191-5pinhibitor和pcDNA-HOXB2对CAL-27的细胞生物学特征影响。Westernblot检测Wnt3a/β-catenin信号通路在CAL-27细胞的变化。结果:人OSCC组织中miR-191-5p高表达,HOXB2低表达。在CAL-27细胞中miR-191-5p高表达,HOXB2低表达,在HOK细胞中miR-191-5p低表达,HOXB2mRNA高表达。miR-191-5pmimic显著抑制h-HOXB2-3'UTR-wt的转录活性。miR-191-5pinhibitor和pcDNA-HOXB2能抑制CAL-27细胞的增殖并促进凋亡,降低细胞Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平,两者共转染效果更显著。结论:miR-191-5p抑制人OSCC细胞的增殖、促进凋亡,作用机制与靶向调控HOXB2及抑制其下游Wnt3a/β-catenin信号传递有关。

HCMV感染对HEL细胞HOXB2,HOXB3,HOXB4及HOX8基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对HEL细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :HEL细胞表达HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8;HOXB2基因于HCMV感染后 15h表达增加 ,4 8h达高峰 ,随后回落 ,至 12 0h再达高峰。HEL细胞HOXB3和HOXB4基因的表达在HCMV感染后不同时间无明显变化。HOXB8基因于HCMV感染后 15～ 4 8h表达轻微下调 ,72h回升 ,96h表达增加 ,12 0h达高峰 ;ATRA能轻微上调HCMV感染晚期HEL细胞HOXB8基因的表达 ,但对HCMV感染后HOXB2和HOXB4基因的表达无明显调节作用。结论 :HCMV能诱导HOXB2及HOXB8基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用。

巨噬细胞对血管内皮细胞增殖、Hoxb2、血管内皮生长因子受体和整合素ανβ3表达的影响

目的建立人巨噬细胞系U937与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304体外共培养模型,以刀豆蛋白A(ConA)作为U937激活剂,研究巨噬细胞调节血管生成的机制。方法实验分4组:ECV-304、ConA+ECV-304、U937+ECV-304和ConA+U937+ECV-304。将ECV-304细胞接种,待60%融合时按照不同的分组进行共培养48h后,流式细胞仪检测细胞周期的变化;采用3H-TdR掺入试验检测内皮细胞DNA合成变化;RT-PCR技术检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR和同源盒(homebox)Hoxb2基因mRNA表达水平的变化;免疫荧光在流式细胞仪上检测整合素受体ανβ3表达的变化。结果ConA激活的U937细胞可使内皮细胞S期、DNA合成明显增加(P<0.01);ConA刺激的U937细胞使内皮细胞VEGF受体KDR(0.879±0.003)、Hoxb2基因mRNA的表达水平(0.947±0.003)和整合素受体ανβ3的表达水平(10.26±1.73)明显上调(P<0.01)。结论ConA活化的巨噬细胞可通过影响内皮细胞的细胞周期、DNA合成、VEGF受体KDR、Hoxb2及整合素受体ανβ3的表达来促进内皮细胞的增殖、迁移及与基质的黏附,从而调节血管的生成。

人巨细胞病毒感染对脐血红系祖细胞发育过程中Hoxb2,Hoxb4基因表达的影响

背景:人巨细胞病毒感染可损害造血系统,甚至造成骨髓衰竭。人巨细胞病毒感染抑制红系祖细胞增殖和分化,是否与受染红系祖细胞增殖的基因异常表达有关?目的:观察人巨细胞病毒和/或全反式维甲酸对人脐血造血干细胞向红系祖细胞定向增殖分化过程进行干预后Hoxb2、Hoxb4基因表达的变化。方法:取12例正常足月顺产新生儿断脐后的胎盘段脐血,采用造血干细胞体外培养技术及实时荧光定量聚合酶链反应方法,以人巨细胞病毒-AD169和(或)6×10-8mol/L的全反式维甲酸持续干预人脐血造血干细胞向红系定向增殖分化过程,检测空白组、全反式维甲酸组、人巨细胞病毒组、全反式维甲酸+人巨细胞病毒组在培养第3,7,10天红系祖细胞Hoxb2、Hoxb4基因的表达情况。结果与结论:各组Hoxb2、Hoxb4基因均在增殖分化的第3天已有表达,第7天表达明显增加,第10天表达最强烈。与空白组相比,人巨细胞病毒组明显下降;与人巨细胞病毒组相比,全反式维甲酸+人巨细胞病毒组的Hoxb2、Hoxb4基因表达量明显增加(P<0.05)。提示人巨细胞病毒可能通过调控Hoxb2、Hoxb4基因异常表达而引起造血功能异常;Hoxb2、Hoxb4均与红系造血有相关性;6×10-8mol/L全反式维甲酸能显著上调正常红系祖细胞Hoxb2、Hoxb4基因的表达,也能上调经人巨细胞病毒感染的红系祖细胞Hoxb2、Hoxb4基因的表达。

重组人促红细胞生成素对人脐静脉内皮细胞HoxB2及HoxD3 mRNA表达影响

目的研究重组人促红细胞生成素(rHuEPO)调节体外培养内皮细胞参与血管生成机制。方法从人脐静脉体外分离培养内皮细胞(HUVEC),采用形态学观察及血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原(Ⅷ-R Ag)免疫组织化学方法检测进行内皮细胞鉴定,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测HUVEC同源盒HoxB2及HoxD3基因mRNA表达变化。结果与对照组比较,rHuEPO可明显上调内皮细胞HoxB2及HoxD3 mRNA表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 rHuEPO可调节内皮细胞HoxB2及HoxD3 mRNA表达,这种调节作用可能是其促血管生成的主要原因之一。

全反式维甲酸对脐血红系祖细胞Hoxb2、Hoxb4基因表达的影响

本研究探讨全反式维甲酸(ATRA)对人脐血造血干细胞向红系定向增殖分化过程进行干预后hoxb2、hoxb4基因表达的影响。取12例正常足月顺产新生儿断脐后的胎盘段脐血,采用造血干细胞体外培养技术及FQ-RT-PCR方法,以6×10-8mol/L的ATRA干预人脐血造血干细胞向红系定向增殖分化的过程,进而检测空白对照组、ATRA组在培养的第3天、第7天和第10天红系祖细胞hoxb2、hoxb4基因表达情况。结果表明:本实验各组的hoxb2、hoxb4基因在第3天时开始少量表达,在第7天表达明显升高,而在第10天表达最强烈。在空白对照组中,第3天、第7天、第10天hoxb4基因相对表达量较hoxb2高。与空白对照组相比较,ATRA组Hoxb2、Hoxb4基因表达量明显增加。结论:hoxb2、hoxb4基因在脐血HSC向红系定向增殖分化过程中(体外)均有表达,说明hoxb2、hoxb4均与红系造血有相关性,且与hoxb2相比,可能hoxb4与红系造血相关性较大;6×10-8mol/L的ATRA能显著上调正常红系祖细胞hoxb2、hoxb4基因的表达。

HOXB2反义寡核苷酸对原代脐静脉内皮细胞生物学特性的影响

目的 探讨同源盒基因B2 (HOXB2 )反义硫代寡核苷酸对原代脐静脉内皮细胞生物学特性的影响。方法 采用荧光标记观察HOXB2反义寡核苷酸 (Asodn)在内皮细胞中的分布 ;观察不同浓度HOXB2反义寡核苷酸对内皮细胞DNA合成的影响 ;应用流式细胞仪和RT PCR观察其对细胞周期及HOXB2表达的影响。结果 经脂质体介导 ,转染 15min胞核有较弱荧光染色 ,4～ 8h胞核荧光最强 ,16h荧光减弱、消散 ;HOXB2反义寡核苷酸能抑制内皮细胞DNA的合成 ,表现出浓度依赖效应 ,能延缓内皮细胞由G1期进入S期 ;同时HOXB2mRNA表达水平在 2 4～ 4 8h明显下降。结论 HOXB2在内皮细胞增殖中起重要作用 。

巨噬细胞对内皮细胞系同源盒B2基因和血管内皮生长因子受体mRNA及整合素ανβ3表达的影响

目的 体外观察巨噬细胞(M)对血管内皮细胞同源盒(HOX)B2基因mRNA和血管内皮生长因子(VEGF)受体KDRmRNA及整合素ανβ3表达的影响。 方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞系ECV304,分为(1)ECV304组; (2)ECV304 +伴刀豆球蛋白A(conA,终浓度25mg/L)组; (3)ECV304+人M系U937组:ECV304细胞中加入1×105 /mlU937细胞; (4)ECV304+U937+conA组:ECV304中加入1×105 /mlU937细胞及终浓度25mg/L的conA.反应48h后,用免疫荧光技术检测各组ECV304细胞整合素ανβ3的表达情况,并用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)技术检测细胞KDRmRNA和HOXB2基因mRNA的表达水平。 结果 ECV304组细胞的整合素ανβ3、KDRmRNA及HOXB2基因mRNA的表达水平分别为6. 7±1. 5、0. 633±0. 012、0. 674±0. 004。ECV304+U937+conA组细胞上述指标较ECV304组均明显上调(P<0. 01 ),分别为10. 2±1. 7、0. 879±0 003、0. 947±0 003。其余两组细胞上述指标与ECV304组比较,差异均无统计学意义(P>0. 05).结论 被conA活化的M通过影响内皮细胞的KDRmRNA、HOXB2mRNA基因及整合素ανβ3的表达,来促进内皮细胞增殖、迁移及与基质黏附,从而调节血管生成。