重组人促红细胞生成素对人脐静脉内皮细胞HoxB2及HoxD3 mRNA表达影响

目的研究重组人促红细胞生成素(rHuEPO)调节体外培养内皮细胞参与血管生成机制。方法从人脐静脉体外分离培养内皮细胞(HUVEC),采用形态学观察及血管内皮细胞Ⅷ因子相关抗原(Ⅷ-R Ag)免疫组织化学方法检测进行内皮细胞鉴定,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测HUVEC同源盒HoxB2及HoxD3基因mRNA表达变化。结果与对照组比较,rHuEPO可明显上调内皮细胞HoxB2及HoxD3 mRNA表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 rHuEPO可调节内皮细胞HoxB2及HoxD3 mRNA表达,这种调节作用可能是其促血管生成的主要原因之一。

维生素A缺乏导致新生大鼠枕颈部畸形的机制研究

目的：探讨维生素 A 缺乏导致新生大鼠枕颈部畸形的作用机制。方法：将40只5周龄雌性健康 SPF 级 SD 大鼠随机分为2组，正常对照组20只，维生素 A 缺乏组20只；20只适龄雄性健康 SPF 级 SD 大鼠分笼饲养。正常对照组饲以 AIN －93M饲料，维生素 A 缺乏组饲以缺乏维生素 A 的 AIN －93M饲料，雄性大鼠饲以 AIN －93M饲料。饲养至第10周从雌性大鼠的目外眦取血，采用酶联免疫吸附法检测2组雌鼠血清维生素 A 含量，鉴定大鼠模型。造模成功后，将大鼠按雌2雄1的比例合笼交配，第2天清晨检查阴栓，有阴栓者记为 E0 d。于妊娠 E11．5 d 取2组半数的孕鼠，麻醉处死后剖腹，每只孕鼠取出2只胚胎，剥离被膜，置于液氮中，然后转移至－80℃的冰箱里保存待测。于妊娠 E21 d 取新生鼠，麻醉处死后剥离皮肤筋膜以及内脏，置于95％的酒精中固定待测。采用 RT －qPCR 方法检测胚胎 Hoxd3基因 mRNA 表达情况；采用双色染色法制作大鼠骨骼标本，观察新生鼠枕颈部骨骼发育情况。结果：①雌鼠血清维生素 A 含量。维生素 A 缺乏组大鼠血清维生素 A 含量明显低于正常对照组[（214±39）ng·mL －1，（432±54）ng·mL －1，t ＝14．636，P ＝0．000]。②胚胎 Hoxd3基因 mRNA 的表达量。维生素 A 缺乏组胚胎 Hoxd3基因表达量低于正常对照组（0．58±0．11，1．03±0．14，t ＝10．407，P ＝0．000）。③新生鼠枕颈部骨骼形态。正常对照组可见枕骨与寰枢椎发育正常，对位关系良好；维生素 A 缺乏组可见寰椎后弓与枕骨大孔后缘角度增大，寰枢椎对位关系异常，寰枢椎后弓角度增大，C2～C7椎弓及棘突高度降低、宽度变窄，且相邻椎体间隙增大。结论：维生素 A 缺乏可以导致新生大鼠枕颈部结构发育异常，这可能与其胚胎发育期 Hoxd3基因 mRNA 表达水平下降有关，但其具体的分子生物学机制还有待进一步研究。

维生素A缺乏对小鼠胚胎Hoxd3基因表达的影响

目的:通过制作雌鼠维生素A缺乏模型,检测小鼠胚胎Hoxd3基因视黄酸受体(Retinoic acid receptors,RARs)表达的情况,探讨枕颈部发育和畸形形成中,维生素A缺乏调控Hoxd3基因表达的机制。方法:将健康的C57BL/6雌鼠32只随机分成2组,即正常对照组(N)和维生素A缺乏组(VAD),每组16只。N组给予AIN-93M配方饲料喂养,VAD组给予维生素A缺乏饲料(根据给予AIN-93M配方修改)喂养。造模成功后,于妊娠E11.5d,麻醉孕鼠后剖腹取出胚胎,采用RT-QPCR方法检测胚胎Hoxd3基因和视黄酸受体mRNA表达情况。结果:RT-QPCR检测显示,VAD组Hoxd3基因和RARs mRNA表达水平降低,与N组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:维生素A缺乏可以导致胚胎发育时期Hoxd3基因和RARs mRNA表达水平下降,易导致枕颈部的先天性畸形,此机制与作为配体的RA合成减少以及RARs普遍受到抑制有关。