基于脑心同治探索冠心Ⅱ号对抑郁模型大鼠海马BDNF及HPA轴的影响

目的观察中药复方冠心II号(GXII)对慢性不可预见性应激(CUMS)大鼠行为学及其对大鼠海马组织脑源性神经营养因子(BDNF),下丘脑-垂体-肾上腺皮质(HPA)轴的影响。方法建立CUMS模型8周后,将CUMS组随机分为模型对照组(MC)、GXII组(GXII)、氟西汀组(F),连同正常组(NC)共计4个组,连续15d灌胃GXII(2.5g·kg^(-1)·d^(-1))、氟西汀(3.5g·kg^(-1)·d^(-1))或等体积0.9%NaCl(5g·kg^(-1)·d^(-1))。采用高效液相色谱法(HPLC)测定大鼠血浆和脑组织中GXII的3种主要活性成分。旷场实验和强迫游泳实验进行行为学检测。Westerm blot测定大鼠海马BDNF,下丘脑促肾上腺皮质激素释放因子(CRF),促肾上腺皮质激素(ACTH)蛋白表达;酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清糖皮质激素(GC)表达。结果GXII灌胃大鼠后血清及脑组织中均能测定到羟基红花黄色素A、阿魏酸、丹酚酸B这3种生物活性成分。与MC组大鼠相比,2.5 g/(kg·d)的GXII大鼠在旷场试验中显著增加总距离(P<0.01),缩短强迫游泳试验的不动时间(P<0.01),增加BDNF表达(P<0.01),降低CRF(P<0.05)、ACTH(P<0.01)和GC(P<0.01)的表达。结论GXII能改善CUMS大鼠抑郁样行为的作用,增加大鼠海马BDNF蛋白表达及调节HPA轴可能是其抗抑郁样作用的机制之一。GXII灌胃大鼠后血清及脑组织中测定到的羟基红花黄色素A、阿魏酸、丹酚酸B这3种活性单体成分可能是其抗抑郁作用的潜在物质基础。

过氧化体增殖物激活型受体γ2基因多态性与2型糖尿病及其早期动脉粥样硬化的相关性

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体γ2基因多态性与2型糖尿病及早期动脉粥样硬化的关系。方法应用聚合酶链反应—限制性片长多态性检测大连地区汉族人2型糖尿病患者(包括动脉粥样硬化组和非动脉粥样硬化组)过氧化体增殖物激活型受体γ2基因外显子B的Pro12Ala变异。结果在动脉粥样硬化组、非动脉粥样硬化组及对照组中过氧化体增殖物激活型受体γ2基因Pro/Pro基因型频率分别为0.961、0.896及0.892,Pro/Ala分别为0.039、0.104及0.108,Ala/Ala均为0,过氧化体增殖物激活型受体γ2基因Pro12Ala变异在对照组和糖尿病组间以及非动脉粥样硬化组和动脉粥样硬化组间差异均无显著性(P=0.407,P=0.096)。结论过氧化体增殖物激活型受体γ2基因Pro12Ala变异与2型糖尿病及其早期动脉粥样硬化的发生无明显相关。

河田鸡VIPR-1基因外显子2HpaⅡ位点多态性与产蛋性状的关联分析

为研究VIPR-1基因位点多态性与产蛋性状的相关性,寻找影响产蛋性状的分子标记。本研究以河田鸡为试验材料,利用PCR-HpaⅡ-RFLP技术,对VIPR-1基因外显子2进行了多态性检测和基因型分析,并对该多态位点与产蛋性状进行关联分析。结果表明:扩增产物用HpaⅡ酶切检测出AA,AG和GG 3种基因型。不同基因型对开产日龄和300日龄蛋重没有显著相关(P>0.05),对240日龄产蛋数、300日龄产蛋数有显著影响(P<0.05)。其中GG基因型的240日龄产蛋数和300日龄产蛋数显著高于AG基因型和AA基因型,表现为差异显著(P<0.05),AG基因型的240日龄产蛋数和300日龄产蛋数高于AA基因型,但表现为差异不显著(P>0.05)。3种基因型240日龄产蛋数、300日龄产蛋数呈现GG基因型>AG基因型>AA基因型的趋势。G等位基因为优势等位基因。

灯盏花自交不亲和SRK基因编码区甲基化分析

为研究灯盏花自交不亲和基因SRK(Eb SRK)的DNA甲基化变异,本文利用甲基化敏感限制性内切酶-PCR法,对Eb SRK基因中包含CCGG位点的部分编码区进行甲基化分析,同时,利用RT-PCR检测Eb SRK基因在灯盏花不同组织中的表达情况。实验结果显示,Eb SRK基因中的两个CCGG位点不存在甲基化,而Eb SRK基因在不同组织该基因的表达量有显著的差异性。这说明对Eb SRK等位基因的抑制不是由于Eb SRK基因中CCGG位点甲基化引起,而存在其他的调控机理。

心钠素基因甲基化状态与表达调控

目的 :研究在大鼠老化过程中心钠素 ( ANF)基因的甲基化状态和该基因表达与调控的关系。方法 :采用限制性核酸内切酶 Hpa 和 Msp 消化大鼠基因组 DNA,用 [α- 3 2 P]d CTP进行ANF- c DNA标记探针 ,Southern blot杂交。结果 :老化过程中大鼠心房和心室 ANF基因内部至少存在一处未甲基化的序列。结论 :在老化过程中 ,大鼠心房和心室组织中的 ANF基因甲基化状态在转录水平上可能未参与该基因的表达调控 。

天津地区汉族人血小板膜GPⅡb HPA-3基因多态性与缺血性脑卒中复发的关系

目的本研究了解天津地区汉族人群血小板膜GPⅡbHPA-3基因多态性的分布情况,探讨其与缺血性脑卒中(IS)复发的关系。方法应用聚合酶链式反应结合限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对全部样本进行基因分型,并抽样测序验证。结果首发病例组ab35.1%、aa32.0%、bb33.0%、a等位基因49.5%、b等位基因50.5%;对照组分别为23.7%、51.1%、25.2%、63.0%、37.0%。b等位基因频率IS组与对照组分别是55.3%、37.0%,P=0.000。首发组与复发组等位基因比较有显著性,其中b等位基因频率分别是50.5%、64.2%,P=0.023。结论血小板膜GPⅡbHPA-3基因多态性与天津地区汉族人IS发生及复发相关,bb基因型可能是该人群IS的危险因素及复发高危因素,b等位基因可能是该人群IS发病及复发的危险因素。

短小棒状杆菌CpG-DNA提取方法的研究

目的:建立一种高效纯化CP-CpG-DNA的方法,为研究DNA免疫增强佐剂功能奠定基础。方法:应用经超声破碎、蛋白酶K消化、CTAB沉淀及酚、氯仿抽提等步骤从短棒杆菌(Corynebacterium parvum,CP)中提取基因组DNA(CP-CpG-DNA)。结果:琼脂糖凝胶电泳检测,CP-CpG-DNA主要集中在2.3Mb;CP-CpG-DNA经限制性内切酶HpaII酶切后,琼脂糖凝胶电泳检测,得到小于1000bp的片断。结论:建立的高效纯化CP-CpG-DNA方法,获得的CP-CpG-DNA纯度较好,而且CP-CpG-DNA中存在大量非甲基化CpG位点,可用于DNA免疫增强佐剂的应用。

DNA甲基化敏感位点(CCGG)文库克隆载体的构建

目的:旨在建立一种简便易行的DNA甲基化文库构建载体,用于筛选细胞中具有甲基化敏感性CCGG位点的DNA片段。方法:根据HpaⅡ/MspⅠ酶切体系对甲基化酶敏感性不同的特点,通过在PCR引物中添加CCGG酶切位点的方法,将扩增得到的目的片段连接到无CpG甲基化的质粒载体上。结果:成功构建了含双CCGG位点的pCpGfree-HpaⅡ/MspⅠ-1质粒载体。结论:所构建的pCpGfree-HpaⅡ/MspⅠ-1质粒载体CCGG位点未发生甲基化,故可以用于构建含有甲基化CCGG序列的DNA甲基化文库。