胃癌患者血清Her-2/neu ECD水平与肿瘤组织Her-2/neu表达的相关性及与临床特征的关系

目的从临床的角度探讨血清Her-2/neu胞外域部分(ECD)与肿瘤组织Her-2/neu表达之间的相关性及与临床特征的关系。方法初治胃癌患者46例进入研究,术前收集血清,采用ELISA方法检测Her-2/neu ECD水平,术后采用免疫组化方法对组织标本进行Her-2/neu表达的检测;同时获取15例正常人、22例胃良性病变患者血清为对照。结果胃癌患者中,7/46(15%)血清Her-2/neu ECD水平高于正常,组织Her-2/neu表达阳性者中38%血清Her-2/neu阳性,而组织表达阴性者中仅6%血清Her-2/neu ECD阳性,二者有相关性(P<0.05)。血清Her-2/neu ECD水平与年龄,性别,T分期,淋巴结转移,术后病理分期及肿瘤分化程度均无相关性(P>0.05);组织Her-2/neu表达与年龄,性别,T分期,术后病理分期及肿瘤分化程度均无相关性(P>0.05),但与有无转移淋巴结有相关性(P<0.05)。结论胃癌患者血清Her-2/neu ECD与肿瘤组织Her-2/neu表达有一致性,前者可以作为后者的补充检测方法。

早期乳腺癌患者手术、化疗后血清HER-2/neu ECD水平变化

目的:探讨乳腺癌患者手术或化疗后血清HER-2/neuECD水平变化的临床意义。方法:双抗体夹心ELISA法检测早期乳腺癌患者及其配对手术、化疗前后血清HER-2/neuECD水平,进行统计分析。结果:82例乳腺癌患者手术后,血清HER-2/neuECD水平90.24%(74/82)下降,3.66%(3/82,C.V≤5%)未变化,6.10%(5/82)升高;46例乳腺癌患者化疗后HER-2/neuECD水平升高组(15/46)对化疗的反应率73.33%(11/15)与HER-2/neuECD水平非升高组(HER-2/neuECD水平下降或不变,C.V≤5%,31/46)对化疗的反应率77.42%(24/31)无差别(P>0.05)。结论:检测乳腺癌患者血清HER-2/neuECD水平变化对预后可能具有一定的临床提示意义。

hIL-12及HER2/neu ECD修饰的生孢梭菌工程菌的构建及鉴定

目的构建人IL-12(hIL-12)基因和乳腺癌靶基因HER2/neu胞外区(ECD)分别修饰的生孢梭菌工程菌,探讨其在乳腺癌基因治疗中的作用。方法将hIL-12和HER2/neu ECD的基因分别连接到厌氧梭菌的内源性β-1,4-葡聚糖酶启动子和信号肽序列(eglAp)之后,得到融合基因eglAp-hIL-12和eglAp-HER2/neu。将融合基因插入大肠杆菌-厌氧菌穿梭质粒pIMP1,得到重组质粒pIMP1-ehIL-12和pIMP1-eHER2/neu。将重组质粒首先转化大肠杆菌DH5α,通过酶切和测序鉴定无误后,再用电穿孔法转化生孢梭菌;利用红霉素抗性筛选阳性克隆,采用菌液PCR和质粒提取鉴定阳性克隆,采用ELISA法对生孢梭菌培养上清中目的产物进行分析。结果酶切和测序结果表明重组质粒内的融合基因eglAp-hIL-12和eglAp-HER2/neu序列和读框正确,菌液PCR、质粒提取和ELISA结果显示hIL-12和HER2/neu ECD基因成功修饰生孢梭菌并表达。经过20多代抗生素压力筛选,重组生孢梭菌仍能稳定携带和表达外源基因。结论成功获得hIL-12和HER2/neu ECD基因分别修饰的生孢梭菌工程菌株,为进一步的抗肿瘤研究奠定基础。

可手术胃癌血清HER-2/neu ECD水平与临床特征及疗效的研究

目的:探讨可手术胃癌患者血清HER-2/neu胞外域部分(ECD)水平与临床特征及疗效的关系。方法:收集江苏省连云港市第二人民医院2010年01月至2010年12月,可手术胃癌患者46例进入研究,术前、术后收集血清,同时获取15例正常人、22例胃良性病变患者血清为对照组。另外收集7例血清HER-2/neuECD阳性患者四周期化疗后血清。采用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测血清HER-2/neu ECD水平。结果:胃癌患者中,7/46(15%)血清HER-2/neu ECD水平高于正常;血清HER-2/neu ECD水平与患者年龄,性别,T分期,淋巴结转移,术后病理分期及肿瘤分化程度均无相关性(P>0.05);胃癌术后血清HER-2/neu ECD水平较术前有明显的降低,四周期辅助化疗后较术后血清HER-2/neu ECD水平无明显降低。结论:可手术胃癌患者血清HER-2/neu ECD水平与年龄,性别,T分期,淋巴结转移,术后病理分期及肿瘤分化程度均无相关性;血清HER-2/neu ECD水平可以作为疗效判断的指标。

进展期胃癌患者新辅助化疗及术后血清Her-2/neuECD水平变化

目的探讨进展期胃癌患者行新辅助化疗及手术后血清Her-2/neu ECD水平的变化及临床意义。方法采用双抗体夹心ELISA法检测海口市人民医院胃肠外科2011年2月～2012年6月42例进展期胃癌患者在新辅助化疗及手术前后血清Her-2/neu ECD水平,并统计根治手术率,进行统计学分析。结果 42例进展期胃癌患者行新辅助化疗后,血清Her-2/neu/neu ECD水平57.14%(24/42)下降,33.33%(14/42)未变化,9.52%(4/42)升高;化疗后血清Her-2/neu ECD水平下降组根治性切除率75.0%(18/24),化疗后血清Her-2/neu ECD水平升高、不变组根治性切除率44.44%(8/18),组间差异有显著性(P<0.05);而且根治性手术后患者与姑息术后患者血清Her-2/neu ECD水平下降率比较(分别为80.77%、31.25%),组间差异有显著性(P<0.05)。结论动态检测进展期胃癌患者新辅助化疗及手术前后血清Her-2/neu ECD水平变化对判断化疗、手术疗效及预后具有一定的临床意义。

人HER2／neu胞外区在毕赤酵母中的表达及鉴定

目的在毕赤酵母中高效表达HER2/neu胞外区,制备具有与天然HER2/neu相同结构和生物学活性的重组人HER2/neu胞外区(rhHER2/neu ECD)。方法用RT-PCR法自人mRNA中克隆her2/neu ECD基因,构建真核表达载体pPICZα/her2/neu ECD。经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X-33。用PCR法筛选基因转染后Zeocin抗性阳性的克隆,用SDS-PAGE法筛选高表达HER2/neu ECD工程菌,用Western印迹法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的HER2/neu ECD。结果经RT-PCR法克隆的her2/neu ECD基因序列与GenBank登录的cDNA序列一致。将her2/neu ECD基因定向插入pPICZα,构建pPICZα/her2/neu ECD真核表达载体,经电转化获得Zeocin抗性阳性的克隆。SDS-PAGE和Western印迹法分析证实了甲醇诱导的培养基上清中含有HER2/neu ECD,分子量110kDa。HER2/neu ECD表达量达120mg/L。结论克隆her2/neu ECD基因并构建和筛选出高效表达HER2/neu ECD的毕赤酵母工程菌。

乳腺癌患者手术和化疗前后血清HER2 ECD水平的变化

目的探讨乳腺癌患者手术、化疗前后血清HER2 ECD水平变化的临床意义。方法用双抗体夹心ELISA法(酶联免疫吸附法)检测乳腺癌患者及其配对手术、化疗前后血清HER2 ECD水平,进行统计分析。结果乳腺癌患者血清HER2 ECD水平与正常人和良性乳腺病患者有明显差异(P<0.01);手术后59例乳腺癌患者血清HER2 ECD水平89.8%(53/59)下降,10.2%(6/59)升高,而33例良性乳腺病患者69.7%(23/33)下降,30.3%(10/33)升高,两者差异有统计学意义(P<0.05);血清HER2 ECD水平升高组(8/59)对化疗反应率100.0%(8/8),而非升高组(51/59)对化疗反应率74.51%(38/51),两者无差别(P>0.05)。结论动态监测乳腺癌患者血清HER2ECD水平对评价其手术、化疗疗效有一定的临床提示意义。

重组穿梭质粒pIMP1-eHER2/neu的构建及其生孢梭菌稳定转化株的筛选与鉴定

目的:制备人原癌基因HER2/neu的细胞外区域(ECD)基因修饰的重组生孢梭菌,为进一步研究其抗肿瘤作用奠定基础。方法:利用SOE-PCR将HER2/neu ECD基因连接到厌氧菌的内β1,4-葡聚糖酶的启动子和信号肽基因(eg-lAp)下游,构建融合基因eglAp-HER2/neu;将其插入大肠杆菌-厌氧菌穿梭质粒pIMP1,构建重组质粒;首先将重组质粒导入大肠杆菌DH5α内并进行鉴定;然后用电穿孔法将重组质粒导入生孢梭菌。利用红霉素抗性筛选重组生孢梭菌;采用菌液PCR鉴定阳性克隆。结果:酶切和测序结果显示,插入质粒pIMP1内的eglAp-HER2/neu融合基因序列及读框正确。菌液PCR结果表明,重组质粒pIMP1-eHER2/neu成功转化生孢梭菌;经过20多代抗生素压力筛选,重组生孢梭菌仍能稳定携带pIMP1-eHER2/neu。结论:成功制备了重组质粒pIMP1-eHER2/neu生孢梭菌的稳定转化株,为其进一步的抗肿瘤作用研究奠定基础。

胃癌患者手术前后血清TSGF、AFP及HER-2/neuECD的变化及其临床意义

目的探讨胃癌患者手术前后血清恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)、甲胎蛋白(AFP)及HER-2/neu胞外域部分(ECD)的变化及其临床意义。方法选取2014年5月至2016年5月间青岛市市立医院收治的接受胃癌根治术的80例胃癌患者,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别对患者血清TSGF、AFP及HER-2/neu ECD水平进行检测,计算手术前后上述血清指标水平下降情况。将血清TSGF和AFP分别降低20U/ml和5ng/ml及以下的患者设定为低降低组,将分别降低20U/ml和5ng/ml以上的患者设定为高降低组。统计分析不同病理参数患者手术前后血清TSGF、AFP及HER-2/neu ECD水平降低情况,不同降低组患者胃癌复发及累计生存情况受手术前后血清TSGF、AFP及HER-2/neu ECD水平的影响情况。结果高中分化、有淋巴结转移、临床分期Ⅲ+Ⅳ期患者手术前后的血清TSGF、AFP及HER-2/neu ECD水平降低程度均显著低于低分化、无淋巴结转移、临床分期Ⅰ+Ⅱ期患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。不同年龄患者手术前后血清TSGF、AFP及HER-2/neu ECD水平降低程度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。血清TSGF、AFP及HER-2/neu ECD水平低降低组患者的18个月胃癌复发均显著高于高降低组(均P<0.05),18个月累计生存率均显著低于高降低组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论胃癌患者手术前后血清TSGF、AFP及HER-2/neu ECD的降低程度受分化程度、淋巴结转移和临床分期等临床病理参数的影响,能够对患者的术后复发及累计生存情况进行有效衡量。

胃癌患者手术前后血清TSGF、AFP及HER-2/neu ECD的变化与意义

目的探讨胃癌患者手术前后血清TSGF、AFP及HER-2/neu ECD的变化及意义,为肿瘤标志物水平预测手术预后提供临床依据。方法对本院82例行胃癌根治术的患者进行回顾性分析:(1)分析术后3个月、6个月、1年的血清肿瘤特异生长因子TSGF、甲胎蛋白AFP及表皮生长因子受体HER-2/neu ECD降低情况;(2)不同临床病理参数的TSGF、AFP及HER-2/neu ECD降低情况;(3)肿瘤标志物不同降低水平的胃癌复发和累计生存率的影响。结果 (1)术后3个月后,血清TSGF、AFP及HER-2/neu ECD水平均降低,且与术后6个月、1年差异有统计学意义;(2)除了年龄外,其余病理参数在同一分级的降低情况差异均有统计学意义;(3)除了术后3个月外,低降低组的复发率高于高降低组,且术后900 d累计生存率低于高降低组,除TSGF(P<0.01,Log-rank检验),其余两个指标为P<0.05。结论血清TSGF、AFP及HER-2/neu ECD手术前后的变化不仅可用来评价治疗效果,也可用来衡量术后的复发和生存情况。