池蝶蚌STAT基因的克隆及功能分析

为了探究池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)信号转导及转录激活因子STAT基因的初步功能,通过RACEPCR技术首次在池蝶蚌中获得STAT的c DNA全长序列(Gen Bank ID:KY123702),命名为Hs STAT,Hs STAT全长为2752 bp,5′-非编码区(5′UTR)为121bp,3′-非编码区3′UTR为264 bp,开放阅读框(ORF)为2367 bp,编码788个氨基酸;生物信息学分析发现该蛋白结构域主要由STAT_int、STAT_alpha、STAT_bind、SH2四个经典保守性功能域组成;缬氨酸最多占12.9%。色氨酸使用频率为100%。二级结构中α螺旋最多占46.83%、β折叠最少占8.5%。Hs STAT蛋白亲水性指数为–0.531,是亲水性蛋白。预测到棕榈酰化修饰位点1个,小泛素相关修饰序列3个,磷酸化修饰位点22个。系统进化树分析显示,Hs STAT与光滑双脐螺STAT5B和盘鲍STAT5聚在一支;亚细胞定位结果显示Hs STAT定位于血细胞的细胞质中;荧光原位杂交结果显示Hs STAT主要在细胞核。q PCR结果显示Hs STAT在所有的组织中均有表达,其在组织中的表达量在肝胰腺中最高,在血细胞中最低。细胞增殖实验显实验组增殖率为119%,高于对照组。实验已克隆到Hs STAT的全长序列,Hs STAT可能为STAT5亚型,具有促进SMCC-7721细胞增殖的功能,推测具有池蝶蚌细胞的信号转导功能参与池蝶蚌的先天免疫。