HSD3B2基因p.E25X新纯合突变致失盐型3β-羟类固醇脱氢酶缺乏症一例及文献复习

目的 总结一例失盐型3β-羟类固醇脱氢酶（3βHSD）缺乏症患儿的临床特点及HSD3B2基因突变结果,并结合文献分析,以提高临床医生对该病的认识.方法 2013年8月广州市妇女儿童医疗中心采用PCR及DNA直接测序法对1例13岁女性失盐型先天性肾上腺皮质增生症（CAH）伴反复卵巢囊肿患儿进行HSD3 B2基因分析,回顾患儿临床资料,并进行文献复习.结果 13岁女孩,新生儿期因失盐及轻度阴蒂肥大诊断为CAH,并予糖皮质激素替代治疗.9岁乳房发育,12岁月经初潮,初潮后曾因反复卵巢囊肿先后行腹腔镜手术及卵巢囊肿穿刺术,最大囊肿90 mm ×80 mm×80 mm.身高165 cm,体重55 kg,皮肤黝黑,氢化可的松替代治疗中血浆ACTH 17.10 pmol/L（参考值0 ～ 10.12 pmol/L）,血清睾酮1.31 nmol/L（参考值＜0.7 nmol/L）,硫酸脱氢表雄酮13.30μmol/L（参考值0.95 ～ 11.67 μmol/L）,皮质醇720 nmol/L（参考值130 ～ 772.8 nmol/L）,雄烯二酮、孕酮及17-羟孕酮正常,卵泡期雌二醇461 pmol/L,卵泡刺激素3.04 IU/L,黄体生成素8.52 IU/L.盆腔超声显示右侧附件58 mm×50 mm×35 mm卵巢囊肿,左侧卵巢正常及中期子宫内膜.HSD3B2基因分析显示2号外显子存在新纯合无义突变c.73G＞ T（p.E25X）,母亲为该突变携带者,生物学父亲未见异常.结论 女性经典型3βHSD缺乏症的临床特点为早期起病的失盐型CAH伴轻微男性化,青春期可出现月经紊乱及卵巢囊肿.基因型p.E25X新突变与经典失盐型3βHSD缺乏症有关.

1例3β-羟类固醇脱氢酶缺乏症临床特点及基因突变结果分析

为探索3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)缺乏症患儿的临床特点和基因突变特点,为临床诊治提供思路,本文对1例在广州市妇女儿童医疗中心遗传与内分泌科门诊就诊的3β-HSD缺乏症患儿的临床特点、激素水平检测结果及基因突变进行分析,并复习相关文献。本例患儿因皮肤色素沉着,阴蒂肥大就诊。B超显示子宫、卵巢组织。染色体核型为46XX。激素水平显示血促肾上腺皮质激素(ACTH)水平升高,血皮质醇(F)水平下降,硫酸脱氢表雄酮(DHEAs)水平增高,HSD3B2基因纯合错义突变,为第228位氨基酸由缬氨酸变为甲硫氨酸。3β-HSD缺乏症患儿可表现有失盐型及男性化型,与其他类型的先天性肾上腺皮质增生症不容易鉴别,△5类固醇增高及△5/△4类固醇比例增高提示3β-HSD缺乏症的可能,基因检测可进一步确诊。

2例3β-羟类固醇脱氢酶缺陷症的临床特点及分子遗传学研究

目的：分析2例3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）缺陷症患者的临床资料，从分子遗传学水平探讨其病因及发病机制。方法详细收集2例3β-HSD缺陷症患者临床资料，并提取其外周血白细胞基因组DNA，应用PCR技术扩增HSD3B2基因。 PCR产物纯化后直接测序。结果患者1，5岁，按女孩儿抚养。染色体核型46，XY，全身色素沉着，幼女外阴，阴蒂肥大，双侧隐睾；患者2，11岁，1岁时测得染色体核型46，XY，改为按男孩儿抚养。全身色素沉着，小阴茎，尿道下裂修补术后。2例患者血促肾上腺皮质激素（ACTH）水平升高，血皮质醇（F）水平下降。基因筛查显示2例患者携带HSD3B2基因纯合错义突变，分别为第155位氨基酸由脯氨酸变为亮氨酸（p．P155L），第82位氨基酸由丙氨酸变为苏氨酸（p．A82T），均为国内首次报道。结论46，XY的3β-HSD缺陷症患者主要表现为男性假两性畸形及肾上腺皮质功能不足，其明确诊断应依赖于类固醇激素检测及HSD3 B2基因筛查。

蛇床子素对Y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞皮质功能的影响

目的研究蛇床子素(Osthole,Ost)对肾上腺皮质功能的影响。方法以Y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞为实验对象,以含10%、1%和0.1%血清培养液培养细胞,分别采用1、10、25、50、100、200μmol/L Ost处理Y1细胞24、48 h,以0.1%二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照组,腺苷酸环化酶激活剂(Bu)2cAMP为阳性对照组,倒置显微镜下观察细胞形态变化,采用ELISA法检测细胞分泌液皮质酮含量,RT-qPCR法检测类固醇急性调节蛋白(Star)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21α-羟化酶(Cyp21a1)、3β-羟基类固醇脱氢酶(Hsd3b2)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)、11β-羟化酶2(Cyp11b2)、17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶(Cyp17a1)及17β-羟基类固醇脱氢酶3(Hsd17b3)基因表达水平。结果 100、200μmol/L Ost组可明显抑制Y1细胞增殖,且对含0.1%血清培养液中细胞抑制作用更明显。与阴性对照组比较,阳性对照组Y1细胞Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Hsd3b2、Cyp11b1、Cyp17a1及Hsd17b3基因表达水平明显增强(P<0.05);干预24、48 h,50μmol/L Ost组Y1细胞皮质酮水平明显升高(P<0.05)。与24 h比较,干预48 h后,25、50μmol/L Ost组皮质酮含量明显升高(P<0.01)。干预24 h后,25、50μmol/L Ost组Star、Cyp21a1、Hsd3b2基因表达明显增强(P<0.05);干预48 h后,Star基因表达水平进一步增强(P<0.05),但Cyp11a1基因表达无明显差异(P>0.05)。干预24、48 h后,10、25、50μmol/L Ost组皮质酮合成酶Cyp11b1和性激素合成酶Cyp17a1基因表达明显增强(P<0.05);Ost对醛固酮合成酶Cyp11b2和性激素合成酶Hsd17b3基因表达水平未见明显作用。结论蛇床子素通过增强类固醇激素合成相关酶基因表达,参与调节肾上腺皮质功能,并以促进皮质酮的合成与分泌作用为主。

蛇床子素对TM3小鼠睾丸间质细胞增殖及雄激素合成与分泌的影响

目的:研究蛇床子素对体外培养的睾丸间质细胞雄激素合成与分泌的影响。方法:以TM3小鼠睾丸间质细胞为实验对象,采用1~320μmol/L蛇床子素干预TM3细胞24h、48h和72h,以MTT检测细胞增殖;采用5~80μmol/L蛇床子素干预TM3细胞24h和48h,RT-q PCR技术检测雄激素合成酶相关基因mRNA表达;采用80μmol/L蛇床子素干预TM3细胞15min^12h,RTq PCR技术检测即刻早期基因mRNA表达,并运用Western blot方法检测CYP17A1蛋白表达,ELISA方法检测细胞分泌液睾酮含量。结果:与对照组(Con)比较,160~320μmol/L蛇床子素作用48h和72 h均显著抑制TM3细胞增殖。不同浓度蛇床子素干预TM3细胞24h和48h后,与对照组比较,40μmol/L和80μmol/L蛇床子素显著促进类固醇急性调节蛋白(Star)基因表达;80μmol/L蛇床子素显著促进胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)基因表达;大于20μmol/L蛇床子素显著增强细胞色素P45017α1羟化酶(Cyp17a1)基因表达、尤其是干预48h上调幅度更大,但是对CYP17A1蛋白表达无明显作用;也显著促进3β类固醇脱氢酶(Hsd3b2)基因表达;大于10μmol/L蛇床子素干预24h可显著促进黄体生成素受体(Lhr)基因表达。此外,80μmol/L蛇床子素干预12h可显著促进Star和Nr4a2基因表达,作用15min^1h即可显著增强Nr4a1基因表达。且蛇床子素可升高TM3细胞睾酮水平。结论:蛇床子素具有促进小鼠睾丸间质细胞雄激素合成与分泌的药理作用。