人幽门螺杆菌HspA亚单位的基因克隆及序列分析

目的:获取幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)亚单位基因并进行核苷酸序列分析和同源性比较。方法:获取幽门螺杆菌的染色体DNA,PCR技术扩增获取HspA基因,将其定向插入pGEX-4T-1原核表达载体中进行核苷酸序列分析。结果:经酶切鉴定及基因序列证实HpHspA基因克隆成功,DNA序列与Genbank公布的序列比较有13个碱基存在差异,同源性为96%;由碱基序列推定编码的氨基酸残基序列没有发生变异,同源性为100%。结论:成功地将HpHspA基因克隆到了pGEX4T-1原核表达载体,为HspA的表达和研究奠定了实验基础。

幽门螺杆菌融合蛋白HspA-UreB在大肠杆菌中的表达与鉴定

目的在大肠杆菌中表达幽门螺杆菌(简称Hp)HspA-UreB融合蛋白,并探索其免疫反应性,为Hp基因工程疫苗的研制奠定基础。方法用PCR方法扩增郑州分离Hp菌株MEL-HP27的hspA和ureB基因,分别克隆入pNEB193中。测序后,回收两种基因片段,并以hspA-ureB的顺序连接插入原核表达载体pMAL-C2x进行融合表达。采用蛋白印迹法对表达产物进行鉴定。结果特异PCR法和酶切鉴定证实融合基因hspA-ureB克隆入表达载体中;重组质粒转化大肠杆菌TB1后,经IPTG诱导3h,SDS-PAGE电泳显示在119kDa处出现一条特异蛋白带,即麦芽糖结合蛋白(MBP)与HspA-UreB的融合表达形式,约占细菌总体蛋白含量的31%;该融合蛋白与Hp免疫小鼠血清和Hp阳性病人血清的Westernblot分析结果显示,在119kDa处出现特异杂交带。结论成功地在大肠杆菌中实现了Hp融合蛋白HspA-UreB的高效表达,并证实其具有良好的免疫反应性。

人临床株幽门螺旋杆菌热休克蛋白A亚单位基因克隆及序列分析

目的获取人临床株幽门螺旋杆菌（Hp）热休克蛋白A（HspA）亚单位基因。方法用聚合酶链反应（PCR）技术从Hp的染色体DNA扩增HspA基因，将其定向插入paMD18-T范隆载体中进行核苷酸序列分析。结果经酶切鉴定及基因序列证实HpHspA基因克隆成功。克隆载体pMD—HspA洲序结果显示HspADNA片段长度为357bp。利用生物软件Omiga2．0对临床分离的Hp和NCTC11637HspA基因序列进行同源性比较，发现有14个核苷酸差异，基因序列同源性96．08％；对编码氨基酸进行比较，发现有1个氨基酸差异，氨基酸同源性99．15％。同时将HpHspA序列与GenBank中公布的多株国外HpHspA序列进行比较，结果显示基因序列同源性在95．20％-96．36％之间，氨基酸序列同源性在98．31％一100％之间。结论成功地获得人临床株Hp保守的HspA基因，为HpHspA相关疫苗的研究奠定了实验基础。