Htra2基因内含子5-59A/G位点多态性与帕金森病的相关性研究

目的探讨粤西地区汉族人群中Htra2(又被称作Omi)基因内含子5-59A/G位点(rs2241027)的单核苷酸多态性(SNP)与帕金森病(PD)的相关性。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,检测56例PD患者和109例健康人的Htra2基因内含子5-59A/G位点多态性的基因型。结果病例组A等位基因频率(46.4%)倾向高于对照组(36.7%)(P=0.073);AA基因型频率(21.4%)亦倾向高于对照组(11.0%)(P=0.072)。经性别分层分析发现,男性AA基因型频率(25.7%)高于对照组(10.3%)(P=0.041);病例组A等位基因频率(48.6%)倾向高于对照组(34.6%)(P=0.051)。结论 5-59A/G位点等位基因A和AA基因型均可能增加PD的发病风险,特别是男性。

放射线诱导的HtrA2基因表达对人葡萄膜黑色素OCM-1细胞的影响

背景与目的:葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)是成人最常见的眼内原发性恶性肿瘤,其恶性程度高,转移早。放射治疗是多年来葡萄膜黑色素瘤最常用的方法之一,但辐射抗性和受照部位正常组织的损伤是长期困扰UM放疗的问题。本实验运用放射线可调控的HtrA2基因联合疗法,探讨其对UM的抑制作用。方法:含Egr1启动子的pIRES-Egr1-Omi/HtrA2(pEgr1-HtrA2)质粒体外转染入OCM-1细胞,转染后的细胞暴露于不同剂量的放射线中。将移植瘤模型小鼠分为对照组、放射组、基因组和基因放射组,每组10只。应用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测HtrA2基因的mRNA表达和蛋白表达。流式细胞仪检测联合处理后的OCM-1细胞凋亡情况。通过克隆形成实验检测HtrA2基因对放射敏感性的影响。在动物实验中测量联合治疗后肿瘤体积。结果:转染pEgr1-HtrA2质粒后,放射组HtrA2 mRNA表达在8 Gy达到高峰,且HtrA2蛋白表达较放射前明显增加(P<0.05),OCM-1细胞凋亡显著增加。克隆形成实验显示,HtrA2基因可增强OCM-1细胞放射敏感性。与对照组相比,基因放射组肿瘤生长被显著抑制(P<0.05)。结论:转染pEgr1-HtrA2质粒后可在放射线调控下增加HtrA2基因表达,并能增强OCM-1细胞对放射的敏感性,抑制肿瘤细胞生长。

HTRA2基因G1195A变异与华中地区帕金森病的相关性研究

目的探讨HTRA2基因G1195A变异与华中地区汉族人群帕金森病(PD)的关系。方法采用病例对照研究提取208例散发性PD患者及234名正常对照者外周血基因组DNA,采用PCR直接测序方法检测HTRA2基因第7号外显子序列。根据Genbank检索到HTRA2基因序列,将正常对照者和散发性PD患者组测得的序列用DNAMAN7进行比对,寻找突变。结果 PD组与正常对照者DNA样品均未发现G1195A突变。结论 HTRA2基因G1195A变异不是华中地区汉族PD患者发病的主要致病因素,有待深入研究。

Omi/HTRA2基因与华中地区汉族人群帕金森病的相关性

目的探讨Omi/HTRA2基因4-6号外显子与华中地区汉族人群帕金森病(Parkinson disease,PD)发病的相关性。方法采用病例对照研究方法,收集208例散发性PD患者及298名性别、年龄、民族等相匹配的正常健康体检者的血样。提取外周血基因组DNA,采用PCR直接测序方法检测全部样本Omi/HTRA2基因4-6号外显子序列。根据Genbank上Omi/HTRA2基因序列,测序结果用DNAMAN7进行比对,寻找突变并计算突变率。结果病例组和对照组Omi/HTRA2基因4-6号外显子区均未发现突变。结论 Omi/HTRA2基因突变可能并不是华中地区汉族PD患者发病的主要致病因素,两组间的确切关系需要进一步研究。

促凋亡基因HtrA2在急性髓系白血病中的表达及临床意义

目的:研究促凋亡基因HtrA2在急性髓系白血病(AML)中的表达及临床意义。方法:收集78例AML患者(初发组、完全缓解组和难治组)及同期就诊的25例对照组骨髓及外周血标本,提取总RNA,检测HtrA2基因的表达水平,分析不同组别、不同型别之间的HtrA2基因的表达水平。同期随访17例患者。结果:初诊组、完全缓解组和难治组的HtrA2的表达量存在较大的差异,最高值与最低值比值高达68.76,HtrA2水平在不同的患者存在较大差异,3组间差异有统计学意义(χ~2=35.13,P<0.05)。FAB各型别间HtrA2基因的相对表达量差异无统计学意义(F=0.004,P>0.05)。随诊患者治疗后其HtrA2基因表达明显高于治疗前(P>0.05)。HtrA2基因可以影响患者生存时间(Wald=4.979,P<0.05),而年龄和性别对患者生存状态的影响无统计学意义(Wald分别为2.426和0.883,P>0.05),随访期患者生存曲线分析显示患者的中位生存时间为34.50个月。结论:HtrA2基因的表达水平的检测有助于AML的诊断,治疗及预后评估。

急性髓系白血病中HtrA2和WT1基因的表达

本研究通过检测HtrA2和WT1基因在急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞及细胞系中的表达,探讨其表达水平与临床变量的关系及二者之间的相关性。应用RQ-PCR方法检测104例初诊AML患者的HtrA2和WT1基因表达水平;比较其表达量与正常对照的差别,并分析与年龄、性别、白细胞计数、诊断分型、预后分型及治疗疗效的关系;比较治疗前后表达量的变化,分析HtrA2与WT1二者相关性。结果表明:AML患者骨髓细胞中HtrA2表达量显著低于正常对照组(P<0.01),而WT1则显著高于正常对照组(P<0.01);二者表达量与患者年龄、性别、白细胞计数无关;HtrA2在不同的NCCN预后分组中表达量无显著差异,而WT1在预后良好组表达量明显低于预后中等组(P=0.003);无论完全缓解(CR)组还是非完全缓解(non-CR)组HtrA2表达量在治疗后均显著高于治疗前(P<0.05),而WT1表达量只有在CR组治疗后才低于治疗前(P<0.01),non-CR组治疗后虽然也低于治疗前,但差异无统计学意义;HtrA2与WT1的表达水平呈弱负相关(r=-0.249,P=0.011)。结论:HtrA2和WT1表达与白血病的发生、发展密切相关,二者表达水平呈负相关,上调HtrA2基因的表达和干扰WT1基因的表达有望成为白血病治疗的靶点。

KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2在老年白血病病人中的表达及与预后的相关性研究

目的探讨KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2在白血病病人中的表达及与预后的相关性。方法选择2016年7月至2018年1月收治的老年白血病病人156例作为研究对象,设为观察组,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)67例,急性髓系白血病60例,慢性髓系白血病(CML)29例,所有病人均给予常规方法治疗,随访2年。选择同期健康体检的老年人79例,设为对照组。完成基因组DNA提取,检测KIR2DL4基因分型;采用实时荧光PCR技术测定2组促凋亡基因HtrA2 mRNA水平;对KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2表达与老年白血病病人预后的相关性进行分析。结果2组KIR2DL4基因多态性中2DL4-001、2DL4-005、2DL4-006、2DL4-008、2DL4-0011差异无统计学意义(P>0.05);观察组9A型KIR2DL4高于对照组(P<0.05);10A型KIR2DL4低于对照组(P<0.05)。观察组HtrA2 mRNA水平高于对照组(P<0.05)。随访期间死亡54例,死亡率为34.62%。死亡组2DL4-0011、9A型KIR2DL4检出率均高于存活组(P<0.05),10A型KIR2DL4检出率和HtrA2表达水平低于存活组(P<0.05)。多因素Cox回归分析结果表明老年白血病病人预后与2DL4-006、9A型KIR2DL4基因多态性及HtrA2表达水平均有关(P<0.05)。结论KIR2DL4基因多态性及促凋亡基因HtrA2在老年白血病病人中表达异常,其水平与预后存在相关性。

Omi/HtrA2与Livin对子痫前期及子痫患者胎盘凋亡的影响

目的:检测子痫前期及子痫患者(观察组)和正常晚期妊娠孕妇(对照组)胎盘组织中Omi/HtrA2基因与凋亡抑制蛋白Livin基因表达,探讨Omi/HtrA2与Livin在子痫前期及子痫胎盘凋亡中的作用。方法:采用免疫组织化学SP法检测60例观察组和20例对照组分娩后胎盘组织中Omi/HtrA2与Livin表达。结果:Omi/HtrA2主要在胎盘组织中滋养细胞及间质细胞胞质中表达,观察组表达水平(150.46±26.59)高于对照组(132.11±18.43),子痫前期重度(161.17±19.45)高于子痫前期(136.79±26.57)(P<0.05);Livin主要在胎盘组织中合体滋养细胞及间质细胞的细胞核中表达,观察组表达水平OD值(116.07±22.40)低于对照组(136.73±20.81)(P<0.01),但子痫前期与子痫前期重度组间比较无差异(P>0.05)。结论:Omi/HtrA2、Livin均参与了胎盘的凋亡,在子痫前期及子痫发生发展中可能有重要作用。

胃癌组织中Omi/HtrA2的表达及与预后的关系

目的 探讨丝氨酸蛋白酶Omi/HtrA2在胃癌组织中的表达及其与胃癌临床病理特征及预后的关系.方法 采用免疫组化法检测68例胃癌组织、15例癌旁组织及15例正常胃黏膜组织中Omi/HtrA2的表达,并分析其表达与胃癌临床病理特征及预后的关系.结果 Omi/HtrA2在胃癌组织中的阳性表达率为73.5%（50/68）,高于癌旁组织（13.3%,2/15）和正常胃黏膜（6.7%,1/15）,差异有统计学意义（P＜0.05）.胃癌组织中Omi/HtrA2的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小及浸润深度无关（P＞0.05） 与肿瘤的分化程度、淋巴结转移和临床分期有关（P＜0.05）.本组胃癌患者5年总体生存率为63.3%,其中Omi/HtrA2表达阳性组和阴性组分别为72.0%和61.1%,两组比较,差异并无统计学意义（P＞0.05）.结论 Omi/HtrA2在胃癌组织中高表达,其表达与胃癌分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关,但并不影响胃癌患者的预后.

急性髓系白血病患者HtrA2基因、Set基因表达与疗效和预后的关系研究

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者HtrA2基因、Set基因表达与疗效和预后的关系。方法:选择2017年6月~2019年6月来我院进行治疗的90例病历资料完整的初诊为AML患者作为本次研究对象,作为AML组,另选取同时期来我院进行健康体检的90例志愿者作为对照组。检测HtrA2基因、Set基因在两组受试者外周血中的表达;分析HtrA2基因、Set基因的表达与AML患者年龄、性别、白细胞计数、NCCN预后分型和疗效的关系。结果:HtrA2基因在AML组中表达水平低于对照组,Set基因在AML组中表达水平高于对照组(P<0.05)。HtrA2基因的表达和年龄、性别、白细胞计数无关(P>0.05);Set基因的表达和年龄、性别无关(P>0.05),与白细胞计数有关(P<0.05)。HtrA2基因在NCCN不同的预后分组中的表达差异无统计学意义(P>0.05);Set基因在NCCN不同的预后分组中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。HtrA2基因和Set基因在不同疗效患者中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AML患者HtrA2基因表达下降,Set基因表达升高,Set基因和HtrA2基因具有评估AML疗效的潜力,Set基因可辅助评估AML患者的预后。