人同源异型盒基因Hu-1位点的RFLPs研究

用12种限制性核酸内切酶分别对4至104条人类染色体进行酶谱分析,以寻找Hu-1基因附近的限制性酶切多态位点,仅发现了Bg 1Ⅱ酶的一个多态性位点。表现为Bg 1Ⅱ酶谱中除3.6kb片段外,杂合子型尚具6.3及6.6kb两种片段,而纯合子型则只有6.3或6.6kb一种片段。在所检查的104条染色体中6.6kb片段出现的频率为3.88％,而6.3kb片段出现的频率为96.12％。经统计分析,计算出Hu-1基因及其附近的核苷酸变异率为0.0017,大体上与人β珠蛋白基因簇及人α-1-抗胰蛋白酶基因的核苷酸变异率相似。文中对本工作的意义进行了初步讨论。

新型冠状病毒Wuhan-Hu-1株Np空间结构及其B细胞抗原表位的预测

新型冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2,SARS-CoV-2)是最新发现的一种可侵染人体的β属冠状病毒,该病毒入侵机体可引发新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019,COVID-19),该疫情的暴发在国内甚至国际上造成了严重影响。核衣壳蛋白(Nucleocapsid phosphoprotein, Np)相较于病毒编码的其它三种结构蛋白保守性更强,在病原诊断、疫苗设计和治疗等方面占据重要地位。预测Wuhan-Hu-1 Np的空间结构及其B细胞抗原表位,为开发SARS-CoV-2的表位疫苗和相关单抗奠定基础。采用MEGA5.05中的Neighbor-joining法构建基于SARS-CoV-2 Np的碱基序列的系统发生树;以SARS-CoV-2 Wuhan-Hu-1株为研究对象,其柔性区段、亲水性指数、抗原指数和蛋白质表面可能性等参数由DNAStar软件中的Protean模块进行分析预测,结合Phyre2在线工具模拟的空间结构,综合预测Wuhan-Hu-1 Np的B细胞优势抗原表位。结果发现:不同地区SARS-CoV-2 Np的碱基序列高度相似(99.6%-100%),Wuhan-Hu-1 Np氨基酸序列长419 aa,其空间构型相对规则,仅含少量α-螺旋而多见β-折叠、β-转角和无规则卷曲结构;多参数综合分析结果指示,可能的B细胞抗原表位位于52~59、69~75、83~89、106~115、119~124、130~136、154~166、217~227、243~249、267~273、299~315、333~339、347~363、379~385、389~401、403~411氨基酸区段。本研究旨在为开发SARS-CoV-2表位疫苗、快速诊断试剂、单克隆抗体等提供理论信息,为医治COVID-19给予一些新策略。

杜湖F_(1)母羊产后0~9周泌乳量及乳成分变化规律

旨在研究杜泊公羊与湖羊母羊杂交一代母羊(称杜湖F_(1))的泌乳量及乳成分含量变化规律,为杜湖F_(1)母羊的科学饲养提供参考依据。随机选取12只体质量(56.25±3.38) kg、年龄、胎次相近,体况一致,身体健康的杜湖F_(1)母羊,6只测定泌乳量,6只测定乳成分并分析其变化规律,试验期为9周。结果表明:杜湖F_(1)母羊具有较高的泌乳性能,9周总泌乳量为(75.98±10.15) kg,周平均泌乳量为(8.44±1.63)kg, 0~9周泌乳曲线方程为Y=7.98t^(0.038 7)e^(-0.001 3t),R^(2)=0.978;杜湖F_(1)母羊产后0周乳中固形物、蛋白质、脂肪、乳糖及灰分含量最高。以上研究结果可为杜湖F_(1)母羊早期断奶策略的制定以及饲养管理提供基础数据。

湖羊及其不同杂交组合生长性能、产肉性能及肌肉品质比较分析

旨在比较湖羊及其与南丘羊和无角陶塞特羊杂交F_(1)代生长性能、产肉性能及肌肉品质的差异。在相同营养水平和饲养管理条件下单栏饲养3月龄左右的湖羊(♂湖羊×♀湖羊,HH)、陶湖F_(1)代羊(♂陶赛特羊×♀湖羊,TH)和南湖F_(1)代羊(♂南丘羊×♀湖羊,NH)公羔各16只。饲喂试验共95 d,包括15 d预试期。正试期开始后每天记录每只羊的采食量,每20 d测定一次体重及体尺指标。饲喂试验结束后,每个群体选择接近组内平均体重的7只试验羊屠宰,测定屠宰性能、胴体性状和肌肉品质,并计算育肥效益。结果表明:1)整个试验期间,陶湖F_(1)代和南湖F_(1)代羊的体重显著高于湖羊(P<0.05);试验结束时,与湖羊相比,陶湖F_(1)代羊的日增重显著升高,而饲料转化率显著降低,陶湖F_(1)代和南湖F_(1)代羊的体高显著降低,而胸围和管围均显著升高(P<0.05)。2)与湖羊相比,陶湖F_(1)代和南湖F_(1)代羊的宰前活重、胴体重和净肉重显著升高,南湖F_(1)代羊的屠宰率显著升高,胴体脂肪含量值(GR值)显著降低,而陶湖F_(1)代羊的眼肌面积显著升高(P<0.05)。3)与湖羊相比,南湖F_(1)代羊肌肉失水率显著降低;南湖F_(1)代羊肌肉熟肉率显著高于湖羊和陶湖F_(1)代羊(P<0.05);南湖F_(1)代和陶湖F_(1)代羊肌肉蛋白质含量显著高于湖羊(P<0.05)。4)陶湖F_(1)代和南湖F_(1)代羊育肥效益(320.72和318.05元)分别比湖羊(249.33元)高出71.39和68.72元。综上所述,杂交促进了后代的生长速度,降低了饲料转化率,改善了肌肉品质,增加了肌肉适口性和营养价值,进而提高了育肥效益,增加了当地肉羊养殖的竞争力。

穿琥宁粉针剂体外抗HIV-1作用

目的:探讨穿琥宁粉针剂在体外是否具有抗H IV作用.方法:采用荧光染料Calc ien AM标记H IV感染的慢性H9细胞(H9/H IV-1ⅢB)与不同稀释浓度的穿琥宁药物作用后,与靶细胞MT-2细胞混合培养,观察MT-2和H9/H IV-1ⅢB融合细胞的变化;MTT法检测穿琥宁对H IV感染细胞的保护作用;H IV-1P24抗原试剂盒检测药物作用后的细胞培养上清P24抗原含量的变化.结果:穿琥宁粉针剂能够抑制MT-2和H9/H IV-1ⅢB细胞融合(其抑制融合的EC50为5.49 mg/L,选择指数SI为327.6);能够保护H IV感染细胞的死亡(EC50为64.57 mg/L,SI为27.85)和减少HIV-1 P24抗原的表达(EC50为194.67 mg/L,SI为9.23).结论:穿琥宁粉针剂在体外具有抗HIV-1的作用.

Lrh-1基因在湖羊HPG轴中表达量变化研究

[目的]揭示湖羊发情周期不同阶段下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴组织中Lrh-1基因的表达变化规律。[方法]建立了湖羊Lrh-1基因的实时荧光定量(qRT-PCR)检测体系,测定其在发情前期、发情期、发情后期和间情期湖羊的下丘脑、垂体和卵巢间质组织中的表达量,分析Lrh-1基因在湖羊HPG轴的表达随发情周期变化的规律。[结果]建立的湖羊组织Lrh-1 mRNA检测体系扩增效率为92.44%,扩增效果良好。在湖羊的下丘脑、垂体和卵巢间质组织中均检测到Lrh-1基因mRNA的表达。其中,在发情后期下丘脑和卵巢间质组织中Lrh-1 mRNA相对表达量显著高于其他阶段的表达量(P<0.05),垂体组织中Lrh-1 mRNA相对表达量在发情周期不同阶段间差异不显著(P>0.05)。[结论]Lrh-1基因参与发情周期湖羊下丘脑、垂体和卵巢功能的行使,并且该基因的表达量变化可能与湖羊发情周期有关。

湖羊Lrh-1基因cDNA序列及组织表达谱分析

本研究以湖羊肝脏为材料对肝受体类似物-1(Liver receptor homolog-1,Lrh-1;NR5A2)基因序列进行RT-PCR和RACE测定,并用DNAman、Tmpred、Signal P 3.0、Expasy等生物信息学分析软件和在线工具,对Lrh-1cDNA序列及其蛋白的理化特性、跨膜结构、信号肽和二级结构进行生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR方法检测湖羊Lrh-1基因的组织表达谱。结果表明,湖羊Lrh-1基因cDNA序列全长1 488bp,与牛的核酸序列相似度最高,为98%,编码区共编码495个氨基酸,氨基酸序列与牛、人、马、猴、犬、小鼠、褐鼠的氨基酸同源性分别为98%、97%、96%、97%、97%、86%和86%;Lrh-1mRNA在湖羊脑、消化及生殖系统组织中均有表达且具有组织特异性,其中在下丘脑组织中的表达量相对最高。

血清DNA甲基转移酶1、DNA甲基转移酶3a在宫颈癌及癌前病变中的表达及与人乳头瘤病毒感染的相关性

目的检测宫颈癌及癌前病变病人血清中DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)表达水平,探讨二者与人乳头瘤病毒(HPV)感染的相关性。方法选取2017年9月至2019年9月于焦煤集团中央医院收治住院的宫颈癌病人58例及癌前病变病人70例作为观察组。选取同期入院体检的正常女性志愿者50例作为对照组。采用酶联免疫吸附(ELI⁃SA)法检测血清中DNMT1、DNMT3a表达水平,检测各组HPV感染情况,将观察组根据是否感染HPV分为HPV感染组和HPV未感染组,比较两组间血清DNMT1、DNMT3a表达水平。分析血清DNMT1、DNMT3a水平与宫颈癌及癌前病变组病人病情严重程度及HPV感染类型的关系。结果宫颈癌及癌前病变病人血清DNMT1[(44.72±9.36)μg/L、(26.78±5.84)μg/L比(13.03±2.65)μg/L]、DNMT3a[(607.48±125.19)μg/L、(415.03±82.56)μg/L比(346.12±67.34)μg/L]表达显著高于对照组(P<0.05),宫颈癌病人血清DNMT1、DNMT3a表达显著高于癌前病变组(P<0.05)。血清DNMT1、DNMT3a水平与宫颈癌病人FIGO分期、CIN分级、HPV危险程度均相关(P<0.05)。血清DNMT1、DNMT3a诊断宫颈癌的AUC分别为0.918、0.875,截断值分别为36.049μg/L、563.431μg/L,特异性分别为92.9%、94.3%,敏感度分别为82.8%、70.7%;二者联合诊断宫颈癌的AUC为0.960,特异性为94.3%,敏感度为91.4%。各组HPV感染情况结果显示,宫颈癌组病人HPV阳性率最高为100.00%,宫颈癌前病变组HPV阳性率为61.43%,对照组HPV阳性率为6.00%,三组HPV感染情况差异有统计学意义(P<0.05)。HPV感染组病人及健康女性血清DNMT1、DNMT3a表达水平高于HPV未感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫颈癌及癌前病变病人血清DNMT1、DN⁃MT3a呈高表达,宫颈癌病人HPV感染率显著高于癌前病变病人,HPV感染病人血清DNMT1、DNMT3a表达水平升高,且高表达DNMT1、DNMT3a水平与宫颈癌及癌前病变病人病情严重、HPV感染高危相关。

酸枣优良新品种邢州1号的选育

邢州1号是在邢台市山区从野生酸枣资源中经过8年时间选育出的优良加工制汁、药用酸枣新品种。该品种树体较小,树势极强,干性较强,骨干枝角度较小,结果后逐渐开张。果实圆形,果皮较薄、紫红色,果肉黄白色、质地致密、较脆、汁液适中,味酸甜;种仁饱满。能早果早丰,连续结果能力强。耐瘠薄,抗干旱,抗病能力强。

湖羊与澳湖F_(1)代羔羊短期育肥效果的比较

本研究以湖羊和澳湖F_1代羔羊(澳洲白绵羊♂×湖羊♀)为研究对象,对其生长性能、屠宰性能、体组成和肌肉品质进行比较分析,综合评估湖羊与澳湖F_1代羔羊育肥效果。随机选择湖羊和澳湖杂交F_(1)代羔羊各61只,在相同的饲养环境和日粮下进行育肥和性能测定。饲养试验结束后立即屠宰,对试验羊只的生长性能、屠宰性能、体组成和肌肉品质等指标进行系统测定和比较。结果显示,湖羊和澳湖F_1羔羊育肥期初始体重(0 d)、末期体重(60 d)无显著差异(P> 0.05),全期平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)无显著差异(P> 0.05),但在育肥前期(0~20 d)湖羊的ADG极显著高于澳湖F_(1)代羔羊(P <0.01),而在育肥中期(20~40 d)和后期(40~60 d)澳湖F_(1)代羔羊的ADG均显著高于湖羊(P <0.05)。澳湖F_1代羔羊的胴体胸围、臀围和眼肌面积显著大于湖羊(P <0.05)。澳湖F_(1)代羔羊的心脏重、肝脏重、肺脏重及其相对重(宰前活重)均极显著高于湖羊(P <0.01),但皮毛重、肾周脂重、肠系膜重、尾脂重及其相对重(宰前活重)均极显著低于湖羊羔羊(P <0.01)。湖羊的熟肉率和屠宰结束后45 min肌肉pH极显著大于澳湖F_(1)代羔羊(P <0.01),但澳湖F_(1)代羔羊肌肉失水率、屠宰结束后24 h肉色b*2值和l*2值极显著优于湖羊(P <0.05)。总体上来看,湖羊早期生长发育较快,但澳湖F_(1)代羔羊后期生长潜力较大,且胴体性能优于湖羊,胴体脂肪沉积比湖羊少,肉用性能明显提高。

RACE法克隆湖羊SPLUNC1基因及序列分析

通过克隆湖羊短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate,lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)基因的cDNA序列,为研究其蛋白的结构和功能奠定基础。参照GenBank上牛、山羊的SPLUNC1基因的cDNA序列,设计简并引物,分别扩增出5′和3′端目的片段,测序后进行拼接,获得湖羊SPLUNC1基因cDNA全长序列,并对序列进行分析。结果表明:克隆的湖羊SPLUNC1基因cDNA序列全长为1 091bp(GenBank登录号KJ749828),其中开放阅读框为768bp,共编码255个氨基酸。构建的氨基酸进化树结果显示湖羊SPLUNC1与预测绵羊的氨基酸同源性最高,山羊次之。

卵泡液IGF-1、β-HCG、TGF-β1水平预测体外受精-胚胎移植临床结局的价值

目的探究卵泡液胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、转化生长因子-β1(TGF-β1)预测体外受精-胚胎移植(IVF-ET)临床结局价值。方法选取2017年7月至2019年8月唐山市妇幼保健院接受IVF-ET的95例不孕患者作为研究对象。观察IVF-ET结局,分析不同卵泡液IGF-1、β-HCG、TGF-β1水平患者IVF-ET结局的差异,比较妊娠和未妊娠患者卵泡液IGF-1、β-HCG、TGF-β1水平,绘制受试者操作特征(ROC)曲线,分析卵泡液各指标预测IVF-ET结局的价值。结果95例患者中,获卵数、卵裂数、优质胚胎数分别为(17.30±2.28)个、(13.60±2.22)个、(3.94±0.82)个,临床妊娠率为48.42%;高IGF-1、β-HCG水平及低TGF-β1水平患者获卵数、卵裂数、优质胚胎数、临床妊娠率高于低IGF-1、β-HCG水平及高TGF-β1水平患者(P<0.05);妊娠患者卵泡液TGF-β1水平低于未妊娠患者,β-HCG、IGF-1水平高于未妊娠患者(P<0.05);预测IVF-ET结局曲线下面积(AUC):β-HCG<IGF-1<TGF-β1<三者联合。结论卵泡液IGF-1、β-HCG、TGF-β1水平对IVF-ET临床结局均具有良好预测价值,三者联合检测的预测价值最高。

高质量抗体揭示Rad1蛋白在细胞中新的潜在活动机理（英文）

一组在进化上(从酵母到人)保守的基因Rad9、Rad1和Hus1在细胞周期监控点调控和DNA损伤修复中发挥重要作用.这三个蛋白可以形成环形异源三聚体,即9-1-1蛋白复合体.9-1-1复合体被认为是Rad9、Rad1和Hus1行使功能的主要形式.到目前为止,没有一个好的抗Rad1的抗体,严重阻碍了对Rad1和9-1-1复合体的研究.在本研究中,我们成功地制备了一株小鼠抗Rad1蛋白的单克隆抗体.这个抗体能够有效地检测小鼠和人的内源Rad1蛋白,可以用于酶联免疫吸附、蛋白质免疫印迹、免疫共沉淀和免疫荧光等实验.利用该抗体,我们发现在DNA损伤剂羟基脲(HU)的诱导下,小鼠Rad1蛋白在Rad9+/+小鼠胚胎干细胞中表达明显增加,而在Rad9-/-的小鼠胚胎干细胞中没有观察到该现象,这表明Rad9对Rad1的蛋白表达有调控作用.此外,内源的Rad1蛋白主要分布在细胞质中,在HU处理后并没有迁移进入细胞核的现象,这与先前广泛被人们所接受的在DNA损伤压力下Rad1和Hus1能够迁移进入细胞核并与Rad9形成9-1-1蛋白复合体的说法相矛盾.综合看来,Rad1和9-1-1蛋白复合体的分子作用机制比预期的要复杂,我们成功制备的Rad1单克隆抗体将成为研究Rad1以及9-1-1蛋白复合体的强有力的工具.

湖羊IGF-1基因5’侧翼区多态性与羊毛弯曲度性状的关联分析

为探寻湖羊IGF-1基因5′侧翼区多态性及其对羊毛弯曲度性状的影响,选用128只湖羊作为实验材料,对IGF-1基因5'侧翼区进行扩增、测序和PCR-SSCP检测,探讨IGF-1基因5′侧翼区的遗传特征,寻找与羊毛弯曲度性状相关的遗传标记,为湖羊羊毛弯曲度标记辅助选择提供理论依据。结果表明:湖羊IGF-1基因5'侧翼区突变位点有AA、AB、BC三种基因型,基因型频率分别为0.609 4、0.093 8和0.296 8。AB型与AA型相比,在外显子1前的第649 bp有一处G→A突变,BC型与AA型相比,在外显子1前的第651 bp处发生G→C突变,在外显子1前的第649 bp有一处G→A突变。卡方独立性检验结果表明,不同基因型个体羊毛花纹类型和基因型之间不存在显著相关关系(P>0.05)。该研究初步认为,IGF-1基因5'侧翼区多态性与羊毛弯曲度性状之间没有显著关联(P>0.05)。

淋巴细胞抗原6复合物基因座E抑制新型冠状病毒不同变异株刺突蛋白介导的感染侵入

目的研究淋巴细胞抗原6复合物,基因座E(lymphocyte antigen 6 complex,locus E,LY6E)对新型冠状病毒(severe acute respiratpry syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)不同变异株刺突蛋白(spike protein,S蛋白)介导的感染侵入的抑制作用。方法构建来源于人的血管紧张素转换酶2(angiotensin-converting enzyme 2,ACE2)表达质粒;建立Flp-In T-Rex 293/LY6E诱导表达细胞系和Flp-In T-Rex 293/氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltransferase,CAT)诱导表达细胞系,转染人ACE2表达质粒,并通过免疫印迹方法检测ACE2和LY6E在T-Rex 293细胞中的表达情况;构建SARS-CoV-2(Wuhan-Hu-1株系、D614G突变株系、Delta突变株系,以及Omicron BA.1、BA.2、BA.2.12.1、BA.3、BA.4/5、BF.7突变株系)和拉沙热病毒(Lassa fever virus,LASV)假病毒感染系统,利用假病毒荧光素酶报告基因检测LY6E对SARS-CoV-2及其突变株刺突蛋白介导侵入的抑制作用;通过Nano-Glo活细胞检测系统,检测LY6E对SARS-CoV-2突变株刺突蛋白介导的合胞体形成的抑制作用;构建甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)假病毒感染系统,经两性霉素B处理后,利用假病毒荧光素酶报告基因检测LY6E对SARS-CoV-2及其突变株刺突蛋白介导侵入的抑制作用。结果构建的Flp-In T-Rex293/LY6E诱导表达细胞系对SARS-CoV-2(Wuhan-Hu-1株系、D614G突变株系、Delta突变株系,以及Omicron BA.1突变株系)假病毒侵入细胞有明显抑制作用,SARS-CoV-2假病毒感染四环素(tetracycline,Tet)处理组与非处理组的相对感染率差异有统计学意义[SARS-CoV-2野生型株系假病毒(WTpp):t=33.920,P<0.001;SARS-CoV-2突变株系假病毒(D614Gpp):t=31.478,P<0.001;Deltapp:t=30.257,P<0.001;Omicronpp:t=21.041,P<0.001];LY6E对SARS-CoV-2不同突变株S蛋白介导的合胞体形成有明显抑制作用,LY6E表达组与未表达组的相对荧光单位差异有统计学意义(D614G:t=18.90,P<0.001;Delta:t=22.28,P<0.001;BA.1:t=8.995,P<0.001;BA.2:t=13.57,P<0.001;BA.2.12.1:t=15.48,P<0.001;BA.3:t=13.65,P<0.001;BA.4/5:t=16.74,P<0.001;BF.7:t=22.29,P<0.001);两性霉素B处理没有改变Flp-In T-Rex 293/LY6E诱导表达细胞系对SARS-CoV-2(Wuhan-Hu-1株系、D614G突变株系、Delta突变株系,以及Omicron BA.1突变株系)假病毒侵入细胞的抑制作用,也没有改变LY6E对IAV感染的增强作用,IAV假病毒感染Tet处理组与非处理组的相对感染率差异有统计学意义(t=3.343,P<0.05)。结论LY6E抑制SARS-CoV-2野生型(Wuhan-Hu-1株系)及多种突变株(D614G突变株系、Delta突变株系,以及Omicron突变株系)刺突蛋白介导的感染侵入;两性霉素B没有改变LY6E对SARS-CoV-2(Wuhan-Hu-1株系、D614G突变株系、Delta突变株系,以及Omicron突变株系)的抑制作用。

SLE患者血清对人脐静脉内皮细胞ICAM-1和MCP-1表达的影响及氟伐他汀的干预作用

目的:观察抗核抗体(ANA)和抗ds-DNA抗体对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)表达的影响及他汀类药物氟伐他汀(fluvastatin,flu)干预后的变化,以探讨ANA和抗ds-DNA抗体在系统性红斑狼疮(SLE)血管炎中的致病机制和flu对血管内皮保护作用。方法:体外培养HUVEC,收集女性SLE患者血清(以抗核抗体全套为依据,分3组:ANA阴性、ANA滴度1:80、ANA滴度1:80和抗ds-DNA抗体均阳性的患者每组各5例)及女性健康对照者血清作为干预因素,分为空白对照组、正常对照组、SLE血清组1、2、3和SLE血清与氟伐他汀共同干预组。应用免疫细胞化学和双抗体夹心ELISA法检测不同干预因素对HUVECICAM-1和MCP-1的蛋白表达影响。结果:正常对照组和SLE血清组1与空白对照组相比,ICAM-1和MCP-1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);SLE血清组2和SLE血清组3的ICAM-1与MCP-1表达高于正常对照组和SLE血清组1(P均<0.01)。氟伐他汀(1×10-5mol/L)能显著降低SLE血清组2和SLE血清组3刺激的HUVEC表达ICAM-1与MCP-1(P<0.01,P<0.05)。结论:ANA阳性(滴度为1:80),尤其是ANA和抗ds-DNA抗体均阳性的SLE血清可激活HUVEC,使其细胞内和细胞培养上清液中ICAM-1和MCP-1的蛋白表达增加;ANA阴性的SLE血清不能激活HUVEC,不能使其细胞内和细胞培养上清液中ICAM-1和MCP-1的蛋白表达增加。氟伐他汀可下调激活的HUVEC表达ICAM-1和MCP-1。

新型冠状病毒VSV假病毒的构建及其感染能力的初步研究

目的 在二级生物安全实验室条件下,通过构建新型冠状病毒(新冠病毒)VSV假病毒,研究新冠病毒及其流行变异株的侵入特性。方法 通过购买的新冠病毒(Wuhan-Hu-1株)VSV-luc假病毒构建VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒;利用VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒构建新冠病毒VSV假病毒。通过分子克隆对新冠病毒S基因相应位点进行突变,构建新冠病毒不同变异株的刺突蛋白表达质粒,由此包装出新冠病毒各种变异株假病毒。比较新冠病毒Wuhan-Hu-1株与D614G株、Delta株在不同细胞系中的感染能力。结果 新冠病毒VSV假病毒构建成功。评价新型冠状病毒Wuhan-Hu-1株、D614G株、Delta株在4种不同细胞系中侵入情况,与Wuhan-Hu-1株相比,D614G株和Delta株的感染水平均明显增加(P均<0.05),同时在Calu-3和Caco-2细胞系中,Delta株的感染水平明显强于D614G株(P均<0.05)。利用模拟细胞-细胞间传播的感染试验发现,Delta株感染HEK-293T细胞与Vero细胞的能力明显高于D614G株(P均<0.05)。结论 新冠病毒Delta株的感染能力明显强于Wuhan-Hu-1株和D614G株。VSV假病毒系统能够模拟、替代新冠病毒活病毒在侵入细胞的过程中的生理功能,并且安全可靠、易于量化、应用广泛,在新冠病毒研究领域中能够发挥重要作用.

护肾Ⅰ号对顺铂致肾损伤预防作用的实验研究

目的研究护肾Ⅰ号对顺铂所致贵州小型猪急性肾损伤的预防作用。方法将贵州小型猪随机分为正常对照组、顺铂模型组、中药预防组。每天给中药预防组小型猪灌服护肾Ⅰ号煎剂,连续灌胃5 d,以4 mg/kg顺铂一次性腹腔注射,膀胱插管收集尿液,动态观察给顺铂前后第0、1、3、6、24、489、6 h时段小型猪的尿量,测尿中肌酐及尿素氮浓度,计算各时段肌酐和尿素氮的排出量。结果与正常对照组比较,顺铂模型组尿量和肌酐、尿素氮的排出量显著减少,中药预防组的各项指标得到明显改善。结论护肾Ⅰ号可预防顺铂所致的肾损伤。

虎栀合剂防治α-异硫氰酸萘酯致大鼠急性肝损伤的实验研究

目的:探讨虎栀合剂(Hu Zhi Mixture,HZM)防治α-异硫氰酸萘酯(α-maphthy1 Isothiocyanate,ANIT)致大鼠急性肝损伤的效应及机制。方法:将大鼠随机分为4组:正常对照组、造模对照组、虎栀合剂治疗组、泼尼松对照组。检测大鼠在造模48h后,血清中肝功能、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、肝组织中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量,光镜下观察肝脏组织学改变。结果:HZM能明显改善造模引起的肝组织学及肝功能变化,降低TNF-α、MDA水平,而SOD含量显著增高。泼尼松对照组能部分改变各项指标。结论:HZM防治ANIT致大鼠急性肝损伤切实有效。其作用机制可能与其拮抗作用,减少TNF-α、MDA的产生,提高SOD活性有关。

大麻素对星形胶质细胞谷氨酸释放的影响及机制研究

目的:观察人工合成大麻素HU210对体外培养中脑腹侧被盖(VTA)区星形胶质细胞谷氨酸释放的影响,并探讨抑制星形胶质细胞谷氨酸释放的药物治疗途径。方法:体外培养大鼠VTA脑区星形胶质细胞,RT-PCR及免疫荧光染色检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及大麻素受体1(CB1R)的表达。将培养的星形胶质细胞分为4组:对照组(培养基中只加入0.2%DMSO),HU210组(培养基中加入3μM HU210),HU210+AM281组(培养基同时加入3μM HU210及3μM AM281)和HU210+Riluzole组(培养基同时加入3μM HU210及3μM Riluzole),各组4孔。干预30 min后,采用谷氨酸检测试剂盒观察各组星形胶质细胞培养基中谷氨酸浓度。再培养VTA脑区星形胶质细胞,分为对照组(培养基中只加入0.2%DMSO)和Riluzole组(培养基中加入3μM Riluzole),干预30 min后,利用Western Blot印迹分析Riluzole干预后谷氨酸转运体-1(GLT-1)表达水平的变化。结果:RT-PCR及免疫荧光染色显示,星形胶质细胞内有广泛CB1R的表达。与对照组比较,HU210组星形胶质细胞谷氨酸的释放显著增加(P<0.01),HU210+AM281组及HU210+Riluzol组星形胶质细胞谷氨酸的释放较HU210组均显著降低(P<0.01);且HU210+Riluzol组星形胶质细胞的GLT-1表达较对照组升高(P<0.05)。结论:HU210可能通过激活星形胶质细胞的CB1R促进星形胶质细胞释放谷氨酸。Riluzole可能通过升高星形胶质细胞的GLT-1的表达,逆转HU210所致的谷氨酸释放。