槐耳清膏抑制MCF-7细胞裸鼠成瘤性实验研究

目的:构建裸鼠异种乳腺癌移植瘤模型(裸鼠接种MCF-7细胞),给予该模型鼠槐耳清膏处理,观察移植瘤组织病理变化特点,探讨其对裸鼠致瘤性的影响。方法:将裸鼠随机分为实验组和对照组,分别给予槐耳清膏(浓度150 mg·ml^(-1))和0.9%生理盐水各0.2 ml灌胃,每天两次,共30 d。观察裸鼠瘤体积及瘤体重的变化,显微镜观察移植瘤组织病理变化特点。结果:裸鼠在接种MCF-7细胞3周后,接种部位均长出肿瘤,成瘤率100%,实验组和对照组移植瘤重分别为(0.20±0.07)g和(0.57±0.32)g,实验组裸鼠移植瘤体重明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),两组移植瘤体积分别为(0.32±0.74)cm^3与(0.84±0.62)cm^3,实验组移植瘤体积较对照组小,具有统计学差异(P<0.01)。HE染色后,实验组裸鼠移植瘤镜下可见肿瘤组织细胞出现不同程度的退行性变,中央及边缘细胞出现大片缺血坏死区,在血供较丰富的区域表现尤为明显,而在坏死灶周围可见残存的肿瘤细胞。对照组细胞生长旺盛,有异型性,形态不规则,大小不等,细胞核大、浓染,可见病理性核分裂相,无明显坏死区。结论:在裸鼠体内,槐耳清膏能抑制乳腺癌细胞MCF-7的成瘤性,从而达到抑制乳腺癌细胞生长的作用。

槐耳清膏对乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其与调控miR-126表达的关系

目的:探讨槐耳清膏对乳腺癌MCF-7细胞裸鼠致瘤性生长抑制作用及其与调控miR-126表达的关系。方法:建立裸鼠乳腺癌MCF-7细胞皮下移植瘤模型,随机将裸鼠分为两组,实验组给予槐耳清膏(浓度150mg·ml^-1)0.2ml灌胃,对照组采用0.9%生理盐水0.2ml灌胃,每天两次,共30d,观察裸鼠瘤体积及瘤体重的变化;RT-PCR检测裸鼠移植瘤组织中miR-126的表达。结果:(1)裸鼠在接种MCF-7细胞3周后,实验组裸鼠移植瘤体重为(0.20±0.07)g,而对照组裸鼠移植瘤体重为(0.57±0.32)g,实验组裸鼠移植瘤体重明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。(2)实验组裸鼠移植瘤体积为(0.32±0.74)cm^3,而对照组裸鼠移植瘤体积为(0.84±0.62)cm^3,实验组移植瘤体积较对照组小,差异具有统计学意义(P<0.01)。(3)裸鼠移植瘤组织中miR-126表达实验组是对照组的2.406倍,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:槐耳清膏能抑制裸鼠乳腺癌MCF-7细胞的生长,其机制可能是通过上调miR-126的表达从而抑制乳腺癌的发生和发展。

槐耳清膏对缺氧结肠癌SW480细胞VEGF及HIF-1α表达的影响

目的:观察槐耳清膏对体外培养人结肠癌SW480细胞系VEGF和HIF-1α表达的影响.方法:体外培养人结肠癌SW480细胞48h,随机分为常氧对照组(NC组)、低氧对照组(HC组)和低氧槐耳组(HH组),HH组RPMI1640培养基含槐耳清膏(终浓度1g/L).半定量RT-PCR检测SW480细胞VEGF和HIF-1αmRNA表达水平,Western blot检测两者蛋白表达水平.结果:HH组和HC组VEGF、HIF-1αmRNA表达水平均显著高于NC组(4.71±0.07,4.54±0.02vs1.19±0.03;5.68±0.07,5.58±0.05vs1.21±0.05,均P<0.05),但HH组与HC组比较无统计学差异.HC组VEGF、HIF-1α蛋白表达均显著显著高于NC组(0.66±0.03vs0.38±0.02;0.58±0.04vs0.31±0.03,均P<0.05),与HC组比较,HH组VEGF和HIF-1α蛋白表达均显著下降(0.37±0.03,0.30±0.05,均P<0.05).结论:槐耳清膏通过下调人结肠癌SW480细胞内HIF-1α和VEGF蛋白表达抑制肿瘤生成.

槐耳清膏对LPS致小鼠炎症反应的调节作用

目的制备脂多糖(LPS)致炎小鼠模型,观察槐耳清膏对小鼠炎症反应的调节作用。方法ICR小鼠随机分为正常对照组、LPS组、槐耳清膏低剂量组(4mg/kg)、中剂量组(6mg/kg)和高剂量组(8mg/kg),每组10只。6d后测定小鼠脾脏指数,HE染色观察小鼠肺脏组织的病理变化;ELISA检测小鼠血清IL-6、TNF-α的表达,RT-qPCR检测小鼠脾脏IL-6、TNF-αmRNA的变化。结果与正常对照组相比,LPS组小鼠的脾脏指数(5.09±0.80)和IL-6[(52.22±8.41)pg/ml]、TNF-α[(56.40±5.97)pg/ml]、IL-6 mRNA(3.16±0.89)和TNF-αmRNA(3.02±0.84)表达水平均显著升高,小鼠肺部炎症反应增加,说明LPS致炎症模型制备成功;与LPS组相比,高剂量槐耳清膏干预后的脾脏指数(3.62±0.69)和IL-6[(37.65±6.35)pg/ml]、TNF-α[(34.94±5.12)pg/ml]、IL-6 mRNA(1.32±0.15)和TNF-αmRNA(1.29±0.19)均有显著的降低(均P<0.05)。结论槐耳清膏可抵抗由LPS所致小鼠炎症,降低炎症性细胞因子的表达,有良好的抗炎效果。

槐耳清膏增加人胃腺癌细胞MKN45对顺铂敏感性研究

目的:体外观察槐耳清膏在增加人胃腺癌MKN45细胞对顺铂(DDP)敏感性中的作用并探讨可能的机制。方法:MTT法观察不同浓度槐耳清膏、DDP单独或联合应用对MKN45细胞生长的抑制作用,并通过计算Q值判定两药合用的效果;用流式细胞仪检测槐耳清膏与DDP联用对MKN45细胞凋亡和细胞周期的影响。结果:单药槐耳清膏及DDP均能抑制MKN45细胞的增殖,且抑制率呈明显的剂量、时间依赖关系;两药联用作用24h时,表现为协同效应,而作用48h时主要表现为相加效应;槐耳清膏与DDP联用能显著增加MKN45细胞的凋亡率,并诱导细胞阻滞于S期。结论:槐耳清膏不仅能直接抑制胃癌细胞MKN45的增殖,与DDP联用时还能增加胃癌细胞对化疗的敏感性,而这种增敏作用可能是通过增加诱导细胞凋亡和S期阻滞而实现的。

槐耳清膏对结肠癌SW480细胞增殖能力影响及其机制探讨

目的:探索槐耳清膏对体结肠癌SW480细胞增殖能力影响及其机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测槐耳清膏对SW480细胞增殖能力的作用,并探求最佳作用浓度;将体外培养细胞随机分为常氧组(NC组)、低氧组(HC组)和低氧槐耳组(HH组),逆转录聚合酶链反应(RT PCR)检测各组血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平。结果:槐耳清膏对SW480细胞抑制率随药物浓度增加而上升,1 mg/mL时抑制率最大(66.7%),与氟尿嘧啶组(浓度为10μg/mL)相比无统计学意义。HH组和HC组VEGF mRNA表达均显著高于NC组,分别为4.71±0.07,4.54±0.02和1.19±0.03(P<0.05),但HH组与HC组比较差异无统计学意义。HC组VEGF蛋白表达显著高于NC组,分别为0.66±0.03和0.38±0.02(P<0.05),HH组较HC组VEGF蛋白表达均显著下降,分别为0.37±0.03和0.66±0.03(P<0.05)。结论:槐耳清膏可抑制SW480细胞增殖,1 mg/mL时抑制率最大。其机制为槐耳清膏下调细胞内VEGF蛋白表达,从而抑制肿瘤生长。

槐耳清膏对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的研究槐耳清膏在体外对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法将对数生长期的PANC-1胰腺癌细胞用不同浓度的槐耳清膏溶液处理不同时间。应用荧光显微镜观察细胞的形态学变化,CCK-8法检测槐耳清膏对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化,划痕实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化,Western blot观察槐耳清膏对凋亡相关蛋白和上皮细胞-间充质转化相关蛋白表达的影响。结果槐耳清膏处理后的PANC-1细胞变大,形态不规则,细胞质内空泡增多,对细胞增殖的抑制率和凋亡率呈浓度和时间依赖性地增加(P<0.05)。细胞周期实验显示,槐耳清膏处理后的细胞阻滞于G1期,且其所占比例随药物浓度及作用时间的增加而增加(P<0.05)。槐耳清膏抑制细胞迁移,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。随着槐耳清膏药物浓度的增加,细胞穿过基膜的数量减少(P<0.05)。随时间及槐耳清膏药物浓度的上升,Bad、Caspase-3、Caspase-9、磷酸化p53、上皮性钙黏附蛋白表达增强,Bcl-2、神经性钙黏附蛋白、Akt表达减弱(P<0.05)。结论槐耳清膏能抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,减弱细胞侵袭和迁移能力,可能是通过磷脂酰肌醇3-激酶/Akt信号通路实现的。