黄连解毒汤对快速老化模型小鼠海马蛋白表达的影响

目的:研究黄连解毒汤(HLJDT)对快速老化模型小鼠(senescence accelerated mouse,SAM)的快速老化亚系SAM-prone/8(SAMP8)海马蛋白表达的影响,以期从分子水平较深入地阐明HLJDT治疗阿尔茨海默病(AD)的机制。方法:将12月龄SAM的快速老化亚系SAMP8和抗快速老化亚系SAM-resistance/1(SAMR1)分为SAMR1对照组、SAMP8模型组和HLJDT给药组,应用双向凝胶电泳结合质谱鉴定,观察HLJDT对SAM海马组织蛋白表达的影响。结果:与SAMR1相比,SAMP8海马中有29个蛋白点的表达发生显著变化;给予HLJDT后有38个蛋白点的表达发生显著变化。选取部分HLJDT的作用蛋白点进行质谱分析结合数据库检索,共鉴定出12个蛋白,这些蛋白涉及到能量代谢、转录调控、细胞骨架、氨基酸代谢等功能。其中有4个蛋白是SAMP8与SAMR1海马蛋白比较存在显著差异的蛋白,给予HLJDT后其蛋白表达得到了明显改善。结论:HLJDT通过调节SAMP8脑中与能量代谢、信号转导、细胞骨架及氨基酸代谢等相关蛋白的表达,从多途径对SAMP8的老化起到了改善作用。

黄连解毒汤醋酸乙酯溶性化学成分的研究

目的：研究黄连解毒汤（由黄连、黄芩、黄柏、栀子等4味中药组成的复方）的化学成分，为其药代动力学和药效动力学研究提供物质基础。方法：采用各种柱色谱方法进行分离、纯化，NMR和MS等方法进行结构鉴定。结果：从黄连解毒汤的醋酸乙酯可溶性部分得到35个化合物，其中的20个化合物分别鉴定为／3-谷甾醇（1），千层纸素A（2），汉黄芩素（3），熊果酸（4），黄芩新素Ⅰ（5），韧黄芩素I（6），黄芩新素Ⅱ（7），柠檬苦素（8），5，2’-二羟基-6，7，8，3′-四甲氧基黄酮（9），白杨素（12），黄芩苷元（17），韧黄芩素Ⅱ（19），5，7，2’-三羟基-6，8-二甲氧基黄酮（21），石虎柠檬素A（22），6，2＇-二羟基-5，7，8，6＇-四甲氧基黄酮（26），粘毛黄芩素Ⅲ（28），5，7，4’-三羟基-8-甲氧基黄酮（29），5，7，2’，6＇-四羟基黄酮（30），汉黄芩素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸甲酯苷（31）和胡萝卜苷（34）。结论：根据已报道4味中药化学成分的研究结果，判断所有黄酮类化合物（2，3，5～7，9，12，17，19，21，26，28～30和31）来源于黄芩；化合物8，22来源于黄柏；化合物22在黄柏中首次发现。

黄连解毒汤细粉及超细微粉组织特征扫描电镜观察

目的:比较黄连解毒汤中药细粉和超细微粉形态学上的差异。方法:黄连解毒汤中药分别进行普通粉碎和超微粉碎,利用扫描电镜对两种不同粉碎方式得到的粉末进行观察。结果:超细微粉碎颗粒大小均匀,电镜下观察基本无完整细胞存在。结论:黄连解毒汤经超微粉碎后,粉末颗粒细微均匀,复方均质度明显改善,绝大多数细胞破壁。

超微粉碎对黄连解毒汤中黄芩苷溶出的影响

目的:比较普通粉碎和超微粉碎对黄连解毒汤中黄芩苷溶出量的影响。方法:用HPLC法测定。色谱柱为Nova-PakC18(3.9mm×150mm),流动相为甲醇-重蒸水-磷酸(47∶53∶0.2),流速为1ml/min,柱温为30℃,波长为280nm。结果:超微粉碎可增加黄芩苷的溶出,在超声提取下超细微粉中黄芩苷溶出量比细粉提高32.5%;而在简化提取(开水冲搅)下,超细微粉中黄芩苷溶出量比细粉提高51.15%。结论:超微粉碎没有改变黄连解毒汤固有的药效学物质,但提高了黄连解毒汤中黄芩苷溶出量。

黄连解毒汤对APP/PS1小鼠海马记忆功能的影响

目的通过观察黄连解毒汤(Huanglian Jiedutang,HLJDT)对APP/PS1双转基因小鼠行为学以及白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响,探讨HLJDT对阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法以5月龄的APP/PS1双转基因小鼠为研究对象,设为模型组、HLJDT组(433g·kg^(-1))处理,对照组为5月龄同背景小鼠,每组各8只。采用Morris水迷宫和新物体识别实验检测HLJDT对AD小鼠学习记忆能力的改善;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测IL-1β和TNF-αmRNA表达水平。结果HLJDT可以改善APP/PS1双转基因小鼠空间及非空间学习记忆能力,并降低IL-1β和TNF-αmRNA表达水平(P<0.05)。结论HLJDT的抗炎功效,可能是通过调控IL-1β和TNF-α的表达实现的。

黄连解毒汤加味治淋病性尿道炎17例

黄连解毒汤加味治疗淋病性尿道炎17例,痊愈15例,显效1例,无效1例。

黄连解毒汤对阿尔茨海默病小鼠闭锁小带蛋白表达的影响

目的通过观察黄连解毒汤(huanglian jiedutang,HLJDT)对APP/PS1双转基因小鼠闭锁小带蛋白(ZO-1)表达的影响,探究其对阿尔茨海默病的保护机制。方法将APP/PS1双转基因小鼠随机分为6组:模型组、多奈哌齐组(2 mg·kg^(-1)·d^(-1))、黄连解毒汤低、中、高剂量(1.5、3、6)g·kg^(-1)·d^(-1),C57BL/6小鼠为正常组,每组8只。采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,采用Western blot实验对小鼠海马区β-淀粉样蛋白(Aβ)和ZO-1蛋白进行检测,采用实时荧光定量PCR技术对海马区Aβ和ZO-1 mRNA表达进行检测。结果与正常组比较,模型组小鼠的穿越平台次数明显减少(P<0.05),目标象限游程明显减少(P<0.05),Aβ蛋白表达明显增加(P<0.05),ZO-1蛋白表达明显减少(P<0.05),AβmRNA表达明显增加(P<0.05),ZO^(-1) mRNA表达明显减少;与模型组比较,多奈哌齐组和HLJDT高剂量组小鼠穿越平台次数明显增加(P<0.05),目标象限游程明显增加(P<0.05),Aβ蛋白表达明显减少(P<0.05),ZO-1蛋白表达明显增加(P<0.05),AβmRNA表达明显减少(P<0.05),ZO-1 mRNA表达明显增加。结论HLJDT改善小鼠学习记忆能力和对神经保护作用,可能是通过降低Aβ表达,升高ZO^(-1)表达实现的。

黄连解毒汤调节HIF-1α/VEGF信号通路改善APP/PS1双转基因小鼠学习记忆能力的作用机制

目的:基于缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路探讨黄连解毒汤(HLJDT)对淀粉样前体蛋白(APP)/早老素1(PS1)双转基因小鼠学习记忆的影响。方法:40只5月龄APP/PS1小鼠,分为模型组、多奈哌齐组(0.001 g·kg^(-1)·d^(-1))、黄连解毒汤低、中、高剂量(1.5、3、6 g·kg^(-1)·d^(-1)),C57BL/6小鼠8只为正常组。连续给药45 d,进行Morris水迷宫实验,测定脏器指数,透射电镜观察小鼠脑血管内皮细胞形态结构,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马区APP、HIF-1α、VEGF、VEGFA及脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测APP、HIF-1α、VEGF mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠潜伏期明显延长(P<0.05),目标平台周围路程及时间明显缩短(P<0.05),脑和脾脏的脏器指数明显降低(P<0.05),血管内皮细胞核固缩,胞质不丰富,海马区APP、HIF-1α、VEGF、VEGFA蛋白表达增加(P<0.05),BDNF蛋白表达降低(P<0.05),APP、HIF-1α、VEGF mRNA表达增加(P<0.05)。与模型组比较,HLJDT高剂量组潜伏期明显缩短(P<0.05),目标平台周围路程及时间延长(P<0.05),脑和脾脏的脏器指数明显升高(P<0.05),血管内皮细胞细胞器结构较清晰,海马区APP、HIF-1α、VEGF、VEGFA蛋白表达降低(P<0.05),BDNF蛋白表达增加(P<0.05),APP、HIF-1α、VEGF mRNA表达降低(P<0.05)。结论:HLJDT可通过降低HIF-1α和VEGF表达来提高小鼠学习记忆能力,从而发挥对神经的保护作用。

黄连解毒汤调控FBXL5/IRP2改善VaD小鼠脑铁代谢紊乱、髓鞘损伤及激越攻击行为

目的:探讨黄连解毒汤通过调控F盒富含亮氨酸重复序列蛋白5(FBXL5)/铁调节蛋白2(IRP2)通路对血管性痴呆(VaD)小鼠脑铁代谢紊乱、髓鞘损伤及攻击行为的影响。方法:将60只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、模型组、利培酮组(2 mg·kg^(-1)·d^(-1))和黄连解毒汤低、中、高剂量组(0.25、0.5、1 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。采用双侧颈总动脉狭窄(BCAS)法建立VaD模型。从第7周开始给予药物干预2周。在第9周进行行为学评估,包括触摸逃避实验和居民入侵者测试。行为学测试结束后,收集下丘脑腹外侧腹内侧(VMHvl)组织样本。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测髓鞘相关糖蛋白(MAG)、髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、4-羟基-2-壬烯醛(4-HNE)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、转铁蛋白受体1(TFR1)、铁蛋白轻链(Ft-L)、膜铁转运蛋白1(FPN1)、FBXL5和IRP2表达;免疫荧光检测MBP荧光强度;透射电镜观察髓鞘超微结构改变;Perl's染色检测组织铁沉积;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果:与假手术组比较,模型组小鼠啃咬次数、攻击行为、易激惹评分明显升高,攻击潜伏期显著缩短(P<0.01);MAG、MOG和MBP的表达水平及MBP的荧光强度均显著降低(P<0.01),髓鞘超微结构紊乱。Ft-L、TFR1表达升高,FPN1表达降低,铁沉积增加(P<0.01)。抗氧化剂GPX4和SOD降低,4-HNE和脂质过氧化产物MDA升高(P<0.01)。FBXL5蛋白表达降低,IRP2蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组比较,黄连解毒汤中、高剂量组和利培酮组小鼠啃咬次数、攻击行为和激惹评分降低(P<0.05,P<0.01),攻击潜伏期增加(P<0.01);黄连解毒汤中、高剂量组MAG、MOG、MBP表达水平及MBP免疫荧光均升高(P<0.01)。超微板层结构排列有序;Ft-L、TFR1表达降低,FPN1表达升高,铁沉积减少(P<0.01);GPX4、SOD表达水平升高,4-HNE、MDA表达水平降低(P<0.01);FBXL5蛋白表达升高,IRP2蛋白表达降低(P<0.01)。结论:黄连解毒汤可能通过调控VMHvl区FBXL5/IRP2表达,改善VaD小鼠脑铁代谢紊乱、髓鞘损伤及激越攻击行为。

黄连解毒汤抑制NLRP3炎症小体活化改善脓毒血症小鼠急性肝损伤的机制

目的:探讨黄连解毒汤通过抑制炎症小体NOD样受体蛋白3(NLRP3)活化抑制细胞焦亡来缓解脂多糖(LPS)诱导的脓毒血症小鼠急性肝损伤(ALI)的机制研究。方法:将54只雄性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、黄连解毒汤低、中、高剂量组(3.08、6.15、12.30 g·kg^(-1))、地塞米松组,每组9只,治疗组灌胃对应剂量的黄连解毒汤7 d,治疗结束后腹腔注射LPS(15 mg·kg^(-1))建立小鼠脓毒血症模型,地塞米松组在造模后1.5 h腹腔注射地塞米松(0.05 g·kg^(-1))进行治疗,造模12 h后记录小鼠脓毒血症评分(MSS);处死小鼠并取血液与肝脏组织;生化分析仪检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、IL-18含量;苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肝脏的病理变化;免疫荧光法检测NLRP3蛋白含量;免疫组化法检测适配蛋白(ASC)蛋白含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织中NLRP3、ASC、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、消皮素D(GSDMD)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝脏组织中GSDMD、Caspase-1、IL-1β、IL-18 mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠ALT和AST水平显著上升(P<0.01);炎症因子在血清中含量显著上升(P<0.01);小鼠肝脏有水肿、坏死等病理学损伤现象;NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白表达显著上升(P<0.01);GSDMD、Caspase-1、IL1β、IL-18 mRNA表达显著上升(P<0.01)。与模型组比较,各治疗组小鼠炎症因子含量显著下降(P<0.01);肝脏组织病理损伤减轻;肝组织NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01);GSDMD、Caspase-1、IL-1β、IL-18mRNA表达水平明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:黄连解毒汤可通过抑制NLRP3炎症小体的活化抑制细胞焦亡,减轻炎症反应,进而对LPS诱导的脓毒血症小鼠急性肝损伤起到治疗作用。

黄连解毒汤辅助治疗脑梗死急性期并发胃动力障碍的临床疗效

目的:探讨黄连解毒汤辅助治疗脑梗死急性期并发胃动力障碍的临床疗效。方法:将60名脑梗死急性期并发胃动力障碍火毒证患者随机分为西医对照组(对照组)和中医联合治疗组(观察组),每组各30例。对照组给予脑梗死基础治疗,另据患者胃肠道症状,予相关西医对症治疗。观察组在对照组的基础上加用黄连解毒汤。疗程均为7 d。观察两组患者治疗前、治疗第4、7天的神经功能缺损评分、胃肠功能障碍评分。分别于治疗前、治疗第7天测量两组患者胃电图参数、血清瓜氨酸(CIT)、胃动素(MTL)水平。并比较两组患者临床疗效。结果:与本组治疗前比较,两组患者治疗第4、7天神经功能缺损评分、胃肠功能障碍评分均明显降低(P<0.05);与第4天比较,两组患者治疗第7天上述指标降低更明显(P<0.05)。治疗后与对照组同期比较,观察组患者治疗第4、7天神经功能缺损评分、胃肠功能障碍评分均明显降低(P<0.05)。与本组治疗前比较,两组患者治疗第7天胃窦、胃体胃电振幅及血清CIT、MTL水平均明显升高(P<0.05),胃窦、胃体胃电频率差异无统计学意义。与对照组治疗后比较,治疗第7天观察组患者胃窦、胃体胃电振幅及血清CIT、MTL水平均明显升高(P<0.05),胃窦、胃体胃电频率差异无统计学意义。治疗7 d后,观察组患者总有效率为90.00%(27/30),对照组患者总有效率为76.67%(23/30),观察组高于对照组,但差异无统计学意义。两组患者治疗过程中均未出现不良反应。结论:黄连解毒汤辅助治疗可有效改善脑梗死急性期并发胃动力障碍患者的神经功能损伤症状及胃肠功能障碍症状,升高患者胃窦、胃体部胃电慢波振幅,改善胃动力障碍,同时升高血清CIT、MTL水平,改善失衡的胃肠分泌功能。

基于NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路探讨黄连解毒汤治疗急性痛风性关节炎的作用机制

目的:观察黄连解毒汤对急性痛风性关节炎(AGA)模型小鼠炎性损伤的影响,探讨黄连解毒汤治疗AGA的作用机制。方法:40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组和黄连解毒汤组。采用踝关节注射单钠尿酸盐(MSU)晶体混悬液建立小鼠AGA模型,给药组分别给予黄连解毒汤水煎液(5 g·kg^(-1))和秋水仙碱(0.83 mg·kg^(-1)),每天测量小鼠右踝关节肿胀程度,7 d后苏木素-伊红(HE)染色检测踝关节组织病理改变。另外40只C57BL/6J小鼠同样分组处理,造模18 h后,取右踝关节,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测关节炎症因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6和NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase‑1)mRNA的表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量;蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测NLRP3炎性小体和Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠右踝关节显著肿胀(P<0.01),HE染色观察到踝关节明显异物肉芽肿,其间有炎症细胞浸润,黄连解毒汤干预后可以缓解踝关节肿胀(P<0.05,P<0.01),异物肉芽肿减小。与正常组比较,模型组踝关节组织中炎症因子IL-1β含量和IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA表达显著升高(P<0.01),NLRP3炎性小体、Caspase‑1 mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),NLRP3、Caspase-1、TLR4和NF-κB蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,黄连解毒汤干预明显降低炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6和NLRP3炎性小体、Caspase‑1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01),显著降低关节组织中炎症因子IL-1β、TNF-α和IL-6含量(P<0.01),下调NLRP3、Caspase‑1、TLR4、NF-κB蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:注射MSU晶体导致AGA小鼠关节局部炎性免疫损伤,黄连解毒汤干预减轻炎性免疫损伤,可能与其调控NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路相关。

基于调节肠道菌群探讨清热类方治疗糖尿病的研究进展

糖尿病已成为全球增长最快的公共卫生问题之一,其病理机制复杂,受多重因素影响。人体肠道内有数百万亿的微生物,大致分为益生菌、中性菌、致病菌三类,处于动态平衡,构成复杂的肠道微生态系统,肠道微生态系统的平衡和稳态对维持机体内环境稳定、维系人体健康至关重要。随着高通量测序技术的快速发展,肠道菌群分布不平衡已被证实是促进胰岛素抵抗(IR)进展的重要原因,增加糖尿病的发生风险。近年来,对肠道菌群的调控成为防治糖尿病及其并发症的新途径、新靶点。中医药对糖尿病、肥胖症等代谢性疾病的治疗由来已久,独具特色与优势,但其尚不明确的作用机制限制了中药的现代化、产业化。肠道菌群与宿主之间的和谐共生与中医理论"人与自然和谐统一"相一致,中医药对肠道微生物群的影响逐渐成为当今医学研究的热门领域。有研究认为糖尿病起源于"肠道内热",目前已有一些相关的实验研究和临床研究的文献表明部分清热类方对失衡的肠道菌群具有一定调节作用,为此探讨肠道菌群与糖尿病的关联性,分析清热类方(大柴胡汤、葛根芩连汤、黄连解毒汤、乌梅丸)通过调节肠道菌群防治糖尿病热证的作用机制,以期为治疗糖尿病药物的进一步开发提供新的理论依据和研究线索。

基于方证对应理论的黄连解毒汤肠道吸收分析

目的:基于方证对应理论研究正常和脑缺血病理状态下黄连解毒汤中指标成分肠吸收情况的差异性,探讨临床对症治疗脑缺血疾病的合理性。方法:以黄连解毒汤中盐酸小檗碱、黄芩苷、栀子苷为检测指标,建立在体单向肠灌流模型,考察不同浓度黄连解毒汤在正常和脑缺血大鼠的肠吸收情况。结果:与正常组比较,不同浓度黄连解毒汤中盐酸小檗碱、黄芩苷、栀子苷在脑缺血模型组大鼠不同肠段的肠吸收均有一定程度增加,其中盐酸小檗碱在十二指肠、空肠有显著性增加;黄芩苷在全部肠段的肠吸收均有显著性增加;栀子苷在空肠、回肠、结肠有显著性增加。结论:黄连解毒汤主要药效成分在脑缺血大鼠的肠道吸收情况优于正常组,为该复方临床对症治疗脑缺血疾病的合理性提供实验依据,体现了中医方证对应理论。

黄连解毒汤对Aβ25-35诱导的HT22细胞NF-κB活化及炎症因子水平的影响

目的：探讨黄连解毒汤对β-淀粉样蛋白25-35（β-amyloid protein 25-35,Aβ（25-35））诱导的HT22细胞核转录因子-κB（NF-κB）活化及炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）,IL-6,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响。方法：培养HT22细胞,HT22细胞分为空白组、模型组、多奈哌齐组（0.000 9 g·kg-1）和黄连解毒汤低、高剂量组（2.7,8.1 g·kg-1）,空白组、模型组加入空白血清,各药物组分别加入含药血清1 h后,模型组和各药物组细胞分别加入Aβ（25-35）（40μmol·L-1）,24 h后运用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测p-NF-κB p65表达水平;免疫荧光法检测分析各组NF-κB p65核移位情况;用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白含量及实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测IL-1β,IL-6,TNF-αmRNA的表达情况。结果：与空白组比较,模型组的IL-1β,IL-6,TNF-α蛋白分泌及其mRNA表达增多,NF-κB活化水平增高（P〈0.05）;与模型组比较,黄连解毒汤低、高剂量组及多奈哌齐组的炎性因子及mRNA表达量均减低（P〈0.05）,并且能抑制NF-κB活化。结论：黄连解毒汤可降低Aβ（25-35）诱导HT22细胞炎症反应,从而减轻Aβ（25-35）神经毒性作用,作用机制可能与抑制NF-κB活化有关。

黄连解毒汤对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化的干预作用及其机制

目的:研究黄连解毒汤对高脂饮食诱导的载脂蛋白E基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化的干预作用。方法:高脂饮食建立ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化模型,给予黄连解毒汤进行干预。通过苏木素-伊红(HE)染色观察动脉粥样硬化病变后主动脉病理形态变化;全自动生化分析仪检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测主动脉沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)与核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肝脏腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)与过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)mRNA表达水平,检测主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)与NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)mRNA表达水平。结果:与正常组比较,模型组血管中有大量脂质积累,血清中TG、TC、LDL-C水平均显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);主动脉SIRT1蛋白表达水平显著降低,NF-κB蛋白表达显著升高(P<0.01);主动脉TNF-α、IL-6、IL-1β、NLRP3 mRNA表达显著升高(P<0.01);肝脏AMPK与PPARαmRNA表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,黄连解毒汤可减少动脉粥样硬化模型小鼠主动脉脂质积累及炎症反应,降低TC、TG、LDL-C水平(P<0.01),升高HDL-C水平(P<0.01);黄连解毒汤可显著升高ApoE^(-/-)小鼠主动脉内SIRT1蛋白表达水平(P<0.01),降低NF-κB蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤可明显下调小鼠主动脉内TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA表达水平(P<0.05,P<0.01);黄连解毒汤可显著上调小鼠肝脏组织AMPK mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:黄连解毒汤对ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化主动脉斑块形成有一定的干预作用,其机制可能与降低血清TC、TG、LDL-C水平、升高HDL-C水平从而发挥降血脂作用,上调SIRT1蛋白、降低NF-κB蛋白、降低TNF-α、IL-6等炎症因子等保护血管免受炎症损伤及提高AMPK与PPARα水平参与自噬与凋亡反应有关。

黄连解毒汤调控炎性免疫抗类风湿性关节炎机制

目的:观察黄连解毒汤对胶原诱导性关节炎(CIA)模型小鼠病理改变及免疫损伤的影响,探讨黄连解毒汤抗类风湿性关节炎的可能机制。方法:24只DBA/1小鼠,随机分为正常组、模型组、甲氨喋呤组和黄连解毒汤组,每组6只,采用Ⅱ型胶原诱导建立CIA小鼠模型,给药组给予黄连解毒汤水煎液(5 g·kg^(-1))和甲氨喋呤(0.5 mg·kg^(-1))干预,观察小鼠关节肿胀症状,每3 d进行关节炎指数评分,评分达到峰值后取材;流式细胞仪检测外周血粒细胞、单核细胞、T淋巴细胞;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测关节炎症因子表达;微计算机断层扫描技术(Micro-CT)扫描踝关节;苏木素-伊红(HE)染色检测关节组织病理改变。结果:与正常组比较,模型组小鼠关节肿胀,关节炎指数评分明显升高(P<0.05);外周血粒细胞比例明显升高(P<0.05),单核细胞、T淋巴细胞比例明显降低(P<0.05),中性粒细胞淋巴细胞比例(NLR)显著升高(P<0.01);关节组织炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6表达升高(P<0.01);Micro-CT可见踝关节明显骨质破坏,病理可见到关节周围组织存在大量的炎性细胞浸润、滑膜增生。与模型组比较,黄连解毒汤组小鼠关节肿胀症状明显减轻,关节炎指数评分明显降低(P<0.05);外周血T淋巴细胞比例升高,NLR显著降低(P<0.01);关节中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表达显著下降(P<0.01);骨破坏及关节组织病理损伤情况明显改善。结论:Ⅱ型胶原导致CIA小鼠全身和关节局部炎性免疫损伤,黄连解毒汤干预减轻炎性免疫损伤,并且对关节局部的作用更为显著,从而抑制CIA小鼠关节病变和骨破坏。

黄连解毒汤对Aβ_(1-42)诱导AD大鼠学习记忆能力及胆碱能系统的影响

目的:探讨黄连解毒汤对β-淀粉样蛋白(Aβ)1-42诱导阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力和胆碱能系统的影响。方法:选用60只雄性SD大鼠,分为正常组,模型组,石杉碱甲组(2.1×10-5g·kg^(-1)),黄连解毒汤高、中、低剂量组(6,3,1.5 g·kg^(-1))。运用Aβ1-42海马注射复制AD大鼠模型,术后连续灌胃治疗4周,进行Morris水迷宫实验。苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马病理改变,腹主动脉取血,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清、海马中乙酰胆碱(ACh),乙酰胆碱酯酶(AchE),胆碱乙酰转移酶(ChAT)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测海马α7nAChR mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组动物脑组织皮质区神经元坏死、海马区锥体细胞或颗粒细胞坏死、排列紊乱和炎性细胞浸润等病理改变明显,大鼠逃避潜伏期延长、逃逸平台次数降低、有效区域停留时间、有效区域游泳路径均减少(P<0.05,P<0.01),血清中ACh,ChAT浓度降低(P<0.01),海马中ACh,AchE,ChAT含量,α7nAChR蛋白,α7nAChR mRNA表达降低(P<0.01);与模型组比较,黄连解毒汤中剂量组逃避潜伏期变短(P<0.05),逃逸平台次数、有效区域游泳路径、有效区域停留时间增加(P<0.05,P<0.01),血清ACh,ChAT含量和海马AchE,ChAT,α7nAChR mRNA表达上升(P<0.05),海马α7nAChR蛋白表达升高明显(P<0.01);高剂量组有效区域有效区域停留时间延长(P<0.01);逃逸平台次数增加,血清ACh,ChAT含量和海马ACh,AchE,α7nAChR蛋白,α7nAChR mRNA表达上升(P<0.05)。结论:黄连解毒汤可显著改善Aβ1-42诱导AD大鼠学习记忆能力,其作用机制可能与改善Aβ1-42所导致的胆碱能系统损伤,增强胆碱能系统功能有关。

黄连解毒汤抗炎作用与临床应用研究进展

黄连解毒汤作为清热解毒方中的典型代表,具有多种药理作用,且在临床应用广泛。笔者通过查阅中国知网,PubMed等数据库近年来公开发表的关于黄连解毒汤作用功效及临床应用的文献,针对黄连解毒汤的作用功效,尤其在抗炎方面的作用进行总结,旨在发现黄连解毒汤发挥抗炎作用的主要发生途径及总结黄连解毒汤的临床应用。经过总结发现,黄连解毒汤是通过多种通路共同调节发挥抗炎作用的,黄连解毒汤发挥抗炎作用的主要途径有调节经典炎症通路白细胞介素-17(IL-17)信号通路,肿瘤坏死因子(TNF)信号通路,Toll样受体4(TLR4)信号通路,以及最新发现的调节粒细胞免疫等。通过这些途径降低血清中的炎症因子水平来实现其抗炎作用。黄连解毒汤也因其独特的抗炎优势被广泛应用于临床,可用于治疗治疗心脑血管疾病,消化系统疾病,皮肤炎症和脓毒症等其他感染性疾病。鉴于此,该文就黄连解毒汤的抗炎作用与临床应用进行综述,为下一步开展深入研究提供借鉴与思路。

黄连解毒汤通过诱导自噬减轻脓毒症小鼠肝损伤

目的:探讨黄连解毒汤对盲肠结扎穿孔术(CLP)诱导的脓毒症小鼠肝损伤保护作用中自噬相关蛋白的表达。方法:将60只8周龄C57BL/6小鼠随机分为假手术组、脓毒症模型组、黄连解毒汤低、高剂量组(1.44,2.88 g·kg^(-1))共4组(n=15)。连续给药3 d,末次给药1 h,盲肠结扎穿孔术建立脓毒症模型。观察小鼠24 h生存率;另取5只,术后12 h处死小鼠,收集血清和肝组织。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中炎症因子白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1β(IL-1β)的水平;生化法检测血中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织的病理变化;TdT介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)染色观察肝细胞凋亡指数(AI);蛋白免疫印迹法检测肝组织中高迁移率族蛋白1(HMGB1),自噬效应蛋白1(Beclin1),自噬标志物微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ/Ⅰ(LC3-Ⅱ/Ⅰ)的表达。结果:与假手术组比较,模型组小鼠12,24 h生存率明显降低,血清中炎症因子IL-6,TNF-α,IL-1β水平明显升高(P<0.05),AST,ALT活性明显增加(P<0.05),肝细胞肿胀、炎症细胞浸润,肝细胞凋亡,HMGB1表达明显增加(P<0.05),自噬相关蛋白Beclin1的表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ增加(P<0.05);与模型组比较,各给药组脓毒症小鼠12,24 h生存率明显提高,炎症因子IL-6,TNF-α水平及AST,ALT活性明显降低(P<0.05),肝组织损伤明显减轻,肝细胞凋亡减少(P<0.05),HMGB1的表达明显减少(P<0.05),Beclin1的表达及LC3-Ⅱ/Ⅰ明显增加(P<0.05)。结论:黄连解毒汤可能通过诱导自噬、抑制凋亡等机制,减轻CLP所致脓毒症小鼠肝损伤。