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pSG5/NS5A5BΔC质粒的构建及在Huh7细胞中的表达 被引量:3
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作者 王雪萍 李富军 +3 位作者 邓琳 长野(藤井)基子 北山喜久美 堀田博 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期31-34,共4页
目的:构建pSG5/NS5A5B△C质粒,并检验其在Huh7细胞中的瞬时表达。方法:使用已经构建的pTM1-NS2NS5A5B△C质粒为模板,根据pTM1、HCV NS5A5B△C、pSG5序列和酶切位点特点设计引物,PCR扩增得到HCVNS5A5B△C基因片段,将目的片段插入pSG5载体... 目的:构建pSG5/NS5A5B△C质粒,并检验其在Huh7细胞中的瞬时表达。方法:使用已经构建的pTM1-NS2NS5A5B△C质粒为模板,根据pTM1、HCV NS5A5B△C、pSG5序列和酶切位点特点设计引物,PCR扩增得到HCVNS5A5B△C基因片段,将目的片段插入pSG5载体中,经筛选阳性克隆、SacⅠ和BglⅡ分别酶切鉴定后,用FuGene6转染试剂转染入Huh7细胞。用免疫荧光染色、Western blot检测HCV NS5A5B△C在Huh-7细胞中的表达。结果:限制性内切酶SacⅠ和BglⅡ分别酶切鉴定后,琼脂糖凝胶电泳结果显示酶切片段大小和插入方向均与预计一致。荧光显微镜下可见转染的Huh7细胞表达带有绿色荧光的HCV NS5A5B△C蛋白,该蛋白主要表达于细胞质,表达率达40%以上。West-ern blot结果也证实在转染pSG5/NS5A5B△C的Huh7细胞中出现了大小与HCV NS5A5B△C(82ku)一致的条带。结论:成功构建了pSG5/NS5A5B△C质粒,并在Huh7细胞中成功瞬时表达,为进一步研究HCV蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白5A5B pSG5 huh7细胞
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HCV NS5B在人肝癌细胞系Huh7细胞内的表达及活性分析 被引量:1
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作者 孔令保 吴晓玉 +4 位作者 朱向东 刘好桔 刘志文 王园秀 熊舒 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第35期34-36,共3页
目的为靶向抗HCV药物筛选奠定基础。方法使用脂质体将包含HCV非结构蛋白5B(NS5B)基因的重组载体pcDNA-5B转染至人肝癌细胞系Huh7细胞,分别采用RT-PCR和Western Blot鉴定NS5B mRNA和蛋白表达,采用荧光素酶试验检测NS5B细胞内RNA依赖的RN... 目的为靶向抗HCV药物筛选奠定基础。方法使用脂质体将包含HCV非结构蛋白5B(NS5B)基因的重组载体pcDNA-5B转染至人肝癌细胞系Huh7细胞,分别采用RT-PCR和Western Blot鉴定NS5B mRNA和蛋白表达,采用荧光素酶试验检测NS5B细胞内RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性。结果转染的Huh7细胞出现1.8kb的特异性NS5B mRNA目的带及一条相对分子质量约66 kD的蛋白目的带,且后者具有细胞内RdRp活性。结论人肝癌细胞系Huh7细胞可成功表达具有细胞内RdRp活性的NS5B,以其为靶标的抗HCV药物可为临床治疗提供新思路。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 NS5B huh7细胞 表达 活性
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pSG5/TRIF质粒的构建及在Huh7细胞中的表达
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作者 王雪萍 王士雯 +5 位作者 杨洁 尹彤 王红娟 徐斌 朱庆磊 李泱 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期2498-2501,2504,共5页
目的构建pSG5/Myc-TRIF质粒,并检验其在Huh7细胞中的瞬时表达。方法首先用NotⅠ酶切既往构建的pCX4pur/Myc-TRIF质粒,平末端化,然后用EcoRⅠ酶切,获得TRIF片断。用SmaⅠ和EcoRⅠ先后酶切空载体pSG5。各酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳分析... 目的构建pSG5/Myc-TRIF质粒,并检验其在Huh7细胞中的瞬时表达。方法首先用NotⅠ酶切既往构建的pCX4pur/Myc-TRIF质粒,平末端化,然后用EcoRⅠ酶切,获得TRIF片断。用SmaⅠ和EcoRⅠ先后酶切空载体pSG5。各酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。与预期吻合后,电泳回收靶片段。行连接反应。经筛选阳性克隆,扩大培养、提取、纯化重组质粒。BamHⅠ酶切鉴定重组质粒pSG5/Myc-TRIF。分别用FuGene6转染试剂和重组牛痘病毒(rVV)预感染后用Lipofectin转染重组质粒入Huh7细胞。用免疫荧光染色、Westernblot检测pSG5/Myc-TRIF的表达。结果经限制性内切酶BamHⅠ酶切后,琼脂糖凝胶电泳结果显示酶切片段大小与预期一致。转染后,荧光显微镜下可见Huh-7细胞表达Myc-TRIF蛋白,而且用rVV预感染后Lipofectin转染较用FuGene6转染表达率大大提高。Western blot结果显示在转染pSG5/Myc-TRIF的Huh7细胞中,均出现了大小约100ku的条带。rVV预感染后用Lipofectin转染较FuGene6转染表达量高,与免疫荧光染色结果一致。结论成功构建了pSG5/Myc-TRIF质粒。用rVV预感染Huh7细胞后再用Lipofectin转染重组质粒可以提高表达效率。 展开更多
关键词 Toll-IL-1受体接头蛋白 丙型肝炎病毒 pSG5 huh7细胞
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LncRNA CASC2靶向调控miR-155-5p及其对HCC细胞恶性表型的影响
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作者 刘猛 张德志 +1 位作者 朱少功 季节 《临床与病理杂志》 CAS 2024年第5期656-665,共10页
目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)癌易感性候选基因2(cancer susceptibility candidate gene 2,CASC2)在卵巢癌、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)等多种恶性肿瘤中发挥抑癌基因的作用,但其在HCC中的作用机制尚... 目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)癌易感性候选基因2(cancer susceptibility candidate gene 2,CASC2)在卵巢癌、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)等多种恶性肿瘤中发挥抑癌基因的作用,但其在HCC中的作用机制尚未完全清楚。本研究旨在分析CASC2在HCC组织中的表达及临床意义,并探讨CASC2对人肝癌细胞系Huh-7细胞恶性表型的影响及其可能的作用机制。方法:采用real-time RT-PCR检测HCC组织和HCC细胞系中CASC2和miR-155-5p的表达水平,分析CASC2的表达水平与HCC患者临床病理特征及预后的关系;采用双荧光素酶报告基因实验检测CASC2和miR-155-5p的靶向关系;将pcDNA3.1-CASC2重组质粒、pcDNA3.1空质粒、miR-155-5p模拟物(mimic)及miR-155-5p模拟物的阴性对照(miR-NC)分别或共同转染至Huh-7细胞中,并根据感染物的不同将细胞分为空白对照组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-CASC2组、pcDNA3.1-CASC2+miR-155-5p组、pcDNA3.1-CASC2+miR-NC组,再分别采用四甲基噻唑蓝(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法、Annexin V/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染色法、Transwell实验检测CASC2靶向调控miR-155-5p对Huh-7细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果:CASC2在HCC组织和细胞系中均表达下调,miR-155-5p在HCC组织和细胞系中均表达水平升高,两者呈显著负相关(r=−0.388,P<0.05)。HCC患者中CASC2的表达与甲胎蛋白水平、肿瘤大小、TNM分期、分化程度、肝内转移及不良预后均密切相关(均P<0.05)。CSAC2靶向负调控miR-155-5p的表达,pcDNA3.1-CASC2组细胞增殖活力显著低于空白对照组和pcDNA3.1组(均P<0.05);与pcDNA3.1-CASC2组相比,pcDNA3.1-CASC2+miR-155-5p组细胞的增殖活力增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3.1-CASC2组细胞凋亡率明显高于空白对照组和pcDNA3.1组(均P<0.05);与pcDNA3.1-CASC2组相比,pcDNA3.1-CASC2+miR-155-5p组细胞的凋亡率显著降低(P<0.05)。与空白对照组和pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-CASC2组迁移和侵袭细胞数量均显著降低(均P<0.05);与pcDNA3.1-CASC2组相比,pcDNA3.1-CASC2+miR-155-5p组迁移和侵袭的细胞数量均显著升高(均P<0.05)。结论:CASC2在HCC组织和细胞中呈低表达,与HCC预后密切相关,过表达CASC2可通过靶向调控miR-155-5p抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 肝细胞癌 癌易感候选基因2 HUH-7细胞 增殖 凋亡
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下调缺氧诱导性脂肪酸结合蛋白5(FABP5)表达抑制Huh7细胞的促血管生成能力 被引量:1
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作者 庞亿寒 肖衡 +1 位作者 廖锐 潘龙 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1092-1097,共6页
目的探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)在肝癌缺氧诱导的血管生成中的作用及机制。方法Huh7细胞进行常规培养及低氧培养;FABP5小干涉RNA(FABP5 siRNA)转染敲低Huh7细胞FABP5表达,反转录PCR检测FABP5 mRNA表达,Western blot法检测FABP5、血管... 目的探讨脂肪酸结合蛋白5(FABP5)在肝癌缺氧诱导的血管生成中的作用及机制。方法Huh7细胞进行常规培养及低氧培养;FABP5小干涉RNA(FABP5 siRNA)转染敲低Huh7细胞FABP5表达,反转录PCR检测FABP5 mRNA表达,Western blot法检测FABP5、血管内皮生长因子A(VEGFA)表达,ELISA检测Huh7细胞上清液VEGFA浓度;成管实验检测Huh7细胞上清液诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的成管能力。结果低氧培养后,FABP5 mRNA以及FABP5及VEGFA蛋白表达增加;采用FABP5 siRNA转染后,低氧培养Huh7细胞VEGFA表达及分泌均下降,低氧培养Huh7细胞上清液诱导HUVEC的成管能力下降。结论缺氧诱导Huh7细胞FABP5表达增加,敲低FABP5则抑制Huh7细胞VEGFA表达及HUVEC的成管能力。 展开更多
关键词 脂肪酸结合蛋白5(FABP5) huh7细胞 血管生成 细胞缺氧
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HepG2和Huh7细胞CYP3A4、CYP3A5和PXR基因非编码单核苷酸多态性分析
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作者 窦瑶杰 郑庆蒙 +2 位作者 徐晨 张莉蓉 杨卫红 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2023年第5期613-617,共5页
目的:对HepG2和Huh7细胞中CYP3A4、CYP3A5和PXR基因的重要非编码单核苷酸多态性(SNP)进行分析。方法:提取HepG2和Huh7细胞基因组DNA,PCR后进行测序分析。结果:在HepG2细胞中CYP3A4 rs2242480、rs3735451、rs2246709、rs4646440、rs12333... 目的:对HepG2和Huh7细胞中CYP3A4、CYP3A5和PXR基因的重要非编码单核苷酸多态性(SNP)进行分析。方法:提取HepG2和Huh7细胞基因组DNA,PCR后进行测序分析。结果:在HepG2细胞中CYP3A4 rs2242480、rs3735451、rs2246709、rs4646440、rs12333983都为突变杂合子;而在Huh7细胞中上述前4个SNP为野生纯合子,最后1个为突变纯合子。在这两种细胞中,CYP3A4 rs35599367、rs4646437、rs35564277都为野生纯合子,rs2740574为突变纯合子。在HepG2和Huh7细胞中CYP3A5 rs776746分别为突变杂合子和突变纯合子。在两种细胞中,PXR rs3814055、rs2276706、rs6785049为突变杂合子,rs13059232为突变纯合子。上述14个SNP中,HepG2细胞突变杂合子较多,而Huh7细胞野生纯合子及突变纯合子较多。结论:HepG2和Huh7细胞中CYP3A4、CYP3A5 SNP基因型不完全相同,而PXR SNP基因型相同。 展开更多
关键词 CYP3A4 CYP3A5 PXR 单核苷酸多态性 HepG2细胞 huh7细胞
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Saikosaponin A induces apoptosis and upregulates autophagy in Huh7 cells
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作者 Qing-Wei Zhang Jun Bao +2 位作者 Zhi-Long Jia Jie-Xia Sheng Er-Qing Dai 《Journal of Hainan Medical University》 2019年第2期1-5,共5页
Objective: It is discussed whether saikosaponin A induces apoptosis of human hepatoma Huh7 cells is related to the change of autophagy level.Methods: The effects of different concentrations of SSA on proliferation and... Objective: It is discussed whether saikosaponin A induces apoptosis of human hepatoma Huh7 cells is related to the change of autophagy level.Methods: The effects of different concentrations of SSA on proliferation and apoptosis of Huh7 cells were detected by MTT and flow cytometry, and then constructed recombinant plasmid pEGFP-N1-LC3B and transfected into Huh7 cells. After intervened by SSA culture medium, the autophagy level was observed under confocal microscope. The expression of apoptosis proteins Bax, Bcl-2, PCNA and autophagy-related proteins LC3B, Beclin1, and Apg12-Apg5 were detected by Western Blot. Results: SSA can significantly inhibit the proliferation of Huh7 cells, promote apoptosis, increase the number of autophagy bodies in the cytoplasm, up-regulate the expression of Bax, LC3B-II, Beclin1, Apg12-Apg5 and down-regulate the expression of Bcl-2, PCNA. Conclusion:SSA induced apoptosis of Huh7 cells in vitro and upregulated the autophagy level. 展开更多
关键词 SAIKOSAPONIN A(SSA) huh7 cells AUTOPHAGY APOPTOSIS Bax PCNA LC3B BECLIN1
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芬太尼与5-氟尿嘧啶联合应用对MCF-7乳腺癌细胞增殖与细胞周期的影响 被引量:4
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作者 王志学 雷燕 +2 位作者 王利军 张晓侠 李汝泓 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期3276-3278,共3页
目的研究芬太尼与5-氟尿嘧啶(FU)联合应用对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖与细胞周期的影响。方法药物作用24、48、72 h后噻唑蓝(MTT)法测定MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制情况,选取48 h,通过流式细胞技术(FCM)检测细胞周期情况。结果增殖抑制情... 目的研究芬太尼与5-氟尿嘧啶(FU)联合应用对人乳腺癌细胞(MCF-7)增殖与细胞周期的影响。方法药物作用24、48、72 h后噻唑蓝(MTT)法测定MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制情况,选取48 h,通过流式细胞技术(FCM)检测细胞周期情况。结果增殖抑制情况:芬太尼单独应用时,与未处理组相比,均引起平均增殖抑制率(IR)增加(P<0.05);三种浓度的芬太尼与5-FU联合应用作用48、72 h时,均具有协同作用(P<0.05);平均IR随着其中芬太尼浓度增加依次增加。细胞周期影响:单独应用芬太尼处理时,G0/G1期细胞比例随着芬太尼浓度的增加依次增加(P<0.05),S期比例依次降低(P<0.05),增殖指数(PI)亦依次降低。联合用药时,G0/G1期细胞比例随其中芬太尼浓度的增加依次增加(P<0.05),S期、G2/M期细胞、PI随芬太尼浓度的增加依次降低(P<0.05);三种浓度芬太尼与5-FU联合应用,在对G2/M期细胞比例和PI减少方面均具有协同作用(P<0.05)。结论一定浓度的芬太尼、5-FU及联合应用对MCF-7乳腺癌细胞有增殖抑制作用,两药联合应用,既抑制了G0/G1期到S期的转化,又抑制了S期向G2/M期的转化,可显示出协同作用。并且对增殖抑制和细胞周期的影响也与芬太尼的浓度有一定的剂量-时间依赖关系。 展开更多
关键词 芬太尼 5-氟尿嘧啶 MCF-7 MTT 流式细胞技术 增殖 细胞周期
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蛋白激酶CK2抑制剂TBB对甲状腺鳞癌细胞株SW579 CK2β和Akt表达的影响 被引量:5
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作者 刘超 刘洋 +2 位作者 赵颂 王翠瑶 肖建英 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期276-280,共5页
目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25μmol·L-1)和Wortmannin组(终浓度为100... 目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25μmol·L-1)和Wortmannin组(终浓度为100 nmol·L-1)。MTT比色法测定细胞生长抑制率,同时测定蛋白激酶CK2的活性。采用RT-PCR方法检测SW579细胞CK2β及Akt的mRNA表达,分析各处理组CK2β及Akt基因表达变化。采用Western blotting方法检测SW579细胞CK2β及Akt的蛋白表达,分析各处理组CK2β及Akt的蛋白表达变化。结果:与对照组比较,TBB组SW579细胞生长抑制率明显增加(P<0.01),细胞内CK2的活性明显降低(P<0.01)。RT-PCR结果表明,与对照组比较,TBB组CK2β的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),Akt的mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。Western blotting结果表明,与未处理组比较,Wortmannin组内源性CK2的活性无明显变化(P>0.05),TBB组CK2β的表达明显降低(P<0.01),同时Akt Thr308和Ser473磷酸化状态受到抑制(P<0.01),总Akt水平无明显变化。结论:TBB可降低SW579细胞蛋白激酶CK2β的表达,进而再下调Akt的活性。 展开更多
关键词 四溴苯三唑 甲状腺鳞癌 CK2β AKT/PKB SW579
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表达不同氨基端二级结构HCVNS3/4A点突变质粒的构建及在Huh7细胞中的表达 被引量:1
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作者 王雪萍 李富军 +2 位作者 长野(藤井)基子 北山喜久美 堀田博 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期720-723,731,共5页
目的构建表达不同氨基端二级结构HCVNS3/4A的点突变质粒,并在Huh7细胞中进行表达。方法以pSG5/M-H05-5/4A为模板(A1-1),根据分型标准设计点突变引物。首先构建4个单点突变质粒:pSG5/M-H05-5(A1-2)/4A(A1-2)(Y56F),pSG5/M-H05-5(B1-1)/4A... 目的构建表达不同氨基端二级结构HCVNS3/4A的点突变质粒,并在Huh7细胞中进行表达。方法以pSG5/M-H05-5/4A为模板(A1-1),根据分型标准设计点突变引物。首先构建4个单点突变质粒:pSG5/M-H05-5(A1-2)/4A(A1-2)(Y56F),pSG5/M-H05-5(B1-1)/4A(B1-1)(L80Q),pSG5/M-H05-5(B2-1)/4A(B2-1)(V51A),pSG5/M-H05-5(B2-2)/4A(B2-2)(S61A)。然后,分别以A1-2,B2-1,B2-2为模板,再将第80位的赖氨酸点突变为谷氨酸(L80Q),构建另外3个双点突变质粒:pSG5/M-H05-5(B1-2)/4A(B1-2),pSG5/M-H05-5(A2-1)/4A(A2-1)和pSG5/M-H05-5(A2-2)/4A(A2-2)。每个质粒均进行序列测定验证点突变成功。用FuGene6转染试剂将构建物转染入Huh7细胞,并应用间接免疫荧光试验和Western blotting检测构建物的表达。结果免疫荧光实验检测到NS3的4种亚细胞定位方式:点状,弥漫样,面包圈样,及短棒状。Western Blotting亦显示构建物均成功表达,同时发现A2-1和B2-1亚型NS3/4A存在不完全切割现象,表明与其他亚型相比,A2-1和B2-1NS3 in cis丝氨酸蛋白酶活性较弱。结论成功构建表达不同氨基端二级结构HCV NS3/4A点突变质粒,为抗不同亚型HCV的深入研究提供基础。 展开更多
关键词 pSG5 点突变 HCVNS3/4A 二级结构 Huh 7细胞
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Apatinib联合5-Fu协同抑制乳腺癌MCF-7细胞的体外研究 被引量:7
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作者 安改丽 李旭 +3 位作者 冯璐 黄尚科 白俊 赵新汉 《实用癌症杂志》 2017年第5期702-705,共4页
目的探讨阿帕替尼(Apatinib)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用。方法采用人乳腺癌细胞株MCF-7,首先采用MTT法及应用流式细胞仪测定不同浓度apatinib作用后对其细胞增殖和周期的影响,其次将MCF-7细胞分为4组,即对照组、A... 目的探讨阿帕替尼(Apatinib)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用。方法采用人乳腺癌细胞株MCF-7,首先采用MTT法及应用流式细胞仪测定不同浓度apatinib作用后对其细胞增殖和周期的影响,其次将MCF-7细胞分为4组,即对照组、Apatinib单药组、5-Fu单药组、Apanitib+5-Fu联合组。对各组细胞给予相应药物处理,48 h后分别应用流式细胞仪检测各组药物对MCF-7细胞株凋亡的作用。结果 Apatinib单药对MCF-7细胞有增殖抑制作用,且存在时间剂量依赖关系,而对其细胞周期影响不大。与对照组相比,Apatinib联合5-Fu作用后有协同诱导凋亡作用,经流式细胞仪检测,Apatinib组诱导的细胞凋亡率为12.05%,5-Fu组为25.76%。与单药组比,Apatinib+5-Fu联合组凋亡率升高更为明显,达34.90%(P<0.05)。结论 Apatinib和5-Fu的联合应用在体外协同抑制乳腺癌MCF-7细胞并诱导凋亡,使抗肿瘤活性显著增强。 展开更多
关键词 阿帕替尼 5-氟尿嘧啶 MCF-7 细胞增殖 细胞凋亡
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5,7-双羟色胺损毁大鼠中缝背核对内侧前额叶皮层锥体神经元电活动的影响 被引量:1
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作者 王爽 高捷 +4 位作者 苏兴利 郭玉芳 霍健 王湘 曾文 《陕西医学杂志》 CAS 2011年第6期656-657,663,共3页
目的:研究5,7-双羟色胺(5,7-DHT)损毁大鼠中缝背核后内侧前额叶皮层(mPFC)中锥体神经元放电频率和放电形式的变化。方法:应用在体细胞外电生理学记录的方法,观察5,7-双羟色胺损毁大鼠中缝背核后,mPFC锥体神经元自发电活动的变化。结果:... 目的:研究5,7-双羟色胺(5,7-DHT)损毁大鼠中缝背核后内侧前额叶皮层(mPFC)中锥体神经元放电频率和放电形式的变化。方法:应用在体细胞外电生理学记录的方法,观察5,7-双羟色胺损毁大鼠中缝背核后,mPFC锥体神经元自发电活动的变化。结果:实验组大鼠锥体神经元的放电频率显著升高(P<0.001),使其从0.52±0.10H z升至1.25±0.20H z,放电形式趋向爆发(P<0.001)。结论:脑内5-HT递质系统对内侧前额叶皮层锥体神经元的电活动有显著影响。 展开更多
关键词 5 7-二羟色胺 额叶前皮层 锥体细胞 电生理学过程
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5-氮杂-2′-脱氧胞苷逆转RASSF1A基因甲基化对人乳腺癌MCF-7细胞的影响 被引量:1
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作者 周小娟 王云梅 +1 位作者 刘娟 李新红 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2009年第21期2327-2331,共5页
目的:探讨启动子甲基化对乳腺癌MCF-7细胞RASSF1A基因的作用及5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预对启动子甲基化的影响,为临床治疗乳腺癌奠定理论基础.方法:用1,3,5,7,9μmol/L不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7乳腺癌细胞株,通过MTT检测5... 目的:探讨启动子甲基化对乳腺癌MCF-7细胞RASSF1A基因的作用及5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预对启动子甲基化的影响,为临床治疗乳腺癌奠定理论基础.方法:用1,3,5,7,9μmol/L不同浓度的5-Aza-CdR处理MCF-7乳腺癌细胞株,通过MTT检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株存活率的影响;建立5μmol/L,10μmol/L的浓度梯度流式细胞仪检测5-Aza-CdR对MCF-7乳腺癌细胞株生长周期及凋亡率的影响,MSP(甲基化PCR)检测5-Aza-CdR处理前后RASFF1A抑癌基因的甲基化状态,RT-PCR检测处理前后抑癌基因RASSF1A mRNA表达情况.结果:5-Aza-CdR抑制体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞,诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和细胞周期停滞在G0/G1期,呈浓度依赖性.经5-Aza-CdR处理人乳腺癌MCF-7细胞后,MSP检测RASSF1A基因发生了甲基化,RT-PCR检测RASSF1A mRNA恢复了表达.结论:RASSF1A基因启动子甲基化是导致其失活的主要原因,5-Aza-CdR可以逆转乳腺癌细胞株MCF-7细胞RASSF1A基因启动子甲基化状态,使其重新表达. 展开更多
关键词 MCF-7细胞 RASSF1A基因 5-氮杂-2′-脱氧胞苷
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5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的影响 被引量:2
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作者 王淑芬 谢宛玉 +1 位作者 郑兴 曹建国 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2009年第1期22-25,共4页
目的:研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)对人卵巢癌COC1裸鼠移植瘤生长的影响。方法:建立人卵巢癌COC1裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组:生理盐水组、顺铂组(2mg/kg)、低剂量ADFMChR组(6mg/kg)、中剂量ADFMChR组(18mg/kg)和高剂... 目的:研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)对人卵巢癌COC1裸鼠移植瘤生长的影响。方法:建立人卵巢癌COC1裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组:生理盐水组、顺铂组(2mg/kg)、低剂量ADFMChR组(6mg/kg)、中剂量ADFMChR组(18mg/kg)和高剂量ADFMChR组(54mg/kg),每组4只。观察各组裸鼠移植瘤生长情况,裸鼠体重的变化,检测裸鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐(CRE)及外周血白细胞计数;PI染色流式细胞术(FCM)测定移植瘤细胞凋亡率。结果:ADFM-ChR有明显抑制移植瘤生长的作用,低剂量组、中剂量组和高剂量组的瘤重抑制率分别为42.86%,62.76%和77.55%。ADFMChR3种剂量组处理裸鼠的外周血白细胞数和血清谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐(CRE)与生理盐水对照组的差异均无统计学意义(P>0.05)。PI流式细胞术结果显示ADFMChR诱导移植瘤细胞凋亡,呈剂量依赖性。结论:ADFMChR通过诱导细胞凋亡抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤的生长。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素 治疗应用 凋亡
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PC5、PC7、VEGF-C、D及其受体VEGFR-3mRNA在非小细胞肺癌淋巴转移中的表达及意义 被引量:3
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作者 常超 王平 张利斌 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期742-748,共7页
背景与目的:浸润与转移是恶性肿瘤的重要生物学特性,经血管和淋巴管播散是肿瘤转移的两条重要途径。淋巴管是实体肿瘤转移的最早通路之一,但与肿瘤血管相比,对肿瘤淋巴管的研究甚少。近年,随着血管内皮生长因子-C(vascular endothelial ... 背景与目的:浸润与转移是恶性肿瘤的重要生物学特性,经血管和淋巴管播散是肿瘤转移的两条重要途径。淋巴管是实体肿瘤转移的最早通路之一,但与肿瘤血管相比,对肿瘤淋巴管的研究甚少。近年,随着血管内皮生长因子-C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C@、血管内皮生长因子-D(vascular endothelial growth factor-D,VEGF-D@以及多种淋巴管内皮特异性标志物,如淋巴管内皮透明质酸受体-1(lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor-1,LYVE-1@、血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3@、肾小球足突膜蛋白(glomerular podocyte membrance mucoprotein,podoplanin@和同源异型盒转录因子(the homeobox transcription factor,Prox-1@等先后被鉴定,淋巴管生成已成为肿瘤转移研究领域的热点之一。本文探讨前蛋白转换酶(proprotein convertase,PC@5、7,VEGF-C、-D及其受体VEGFR-3在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC@中的表达规律及其在NSCLC发生发展、淋巴转移及预后中的意义。方法:以20例经病理确诊的NSCLC组织、肿瘤周边组织为实验组,以9例肺良性病变组织为对照组,采用实时荧光定量RT-PCR方法对上述组织中PC5、PC7、VEGF-C、VEGF-D及VEGFR-3mRNA的表达进行定量分析。结果:①NSCLC组织中PC5、PC7、VEGF-C、VEGF-D及VEGFR-3mRNA的表达量均显著高于肿瘤周边组织及肺良性病变组织(P<0.05@。②PC5、PC7、VEGF-C、VEGF-D及VEGFR-3mRNA的表达量与NSCLC患者的性别、年龄、肿瘤的大小、组织学类型、分化程度无关,但与肿瘤的淋巴结转移(P=0.000,P=0.000,P=0.012,P=0.000,P=0.004@、PTNM分期(P=0.011,P=0.012,P=0.013,P=0.011,P=0.028@显著相关。③PC5与VEGF-C(r=0.461,P=0.041@、VEGF-D(r=0.793,P=0.000@及VEGFR-3(P=0.498,P=0.026@mRNA表达存在相关性;PC7与VEGF-C(r=0.450,P=0.047@、VEGF-D(r=0.699,P=0.001@及VEGFR-3(r=0.616,P=0.004@mRNA表达存在相关性。并且,VEGF-C与VEGF-D(r=0.532,P=0.016@、VEGF-C与VEGFR-3(r=0.607,P=0.001@及VEGF-D与VEGFR-3mRNA的表达(r=0.451,P=0.048@均存在相关性。结论:淋巴管生成因子VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3及调节其成熟的转换酶PC5、PC7mRNA在NSCLC中表达显著增高,并且通过VEGF-C、VEGF-D/VEGFR-3信号通路诱导淋巴管内皮细胞新生和淋巴管生成,促进淋巴结转移和肿瘤生长;VEGF-C、VEGF-D及其受体VEGFR-3可能成为检测NSCLC淋巴转移和评估预后的重要分子指标;实时荧光定量RT-PCR技术是一种简单客观敏感的检测肿瘤微转移的方法,有助于早期肺癌淋巴微转移的检测。 展开更多
关键词 前蛋白转换酶5、7 血管内皮生长因子C、D 血管内皮生长因子受体3 非小细胞肺癌 淋巴转移
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5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素对体外培养人卵巢癌细胞作用的初步探讨 被引量:5
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作者 李姣玲 谢宛玉 曹建国 《美国中华临床医学杂志》 2005年第4期323-326,共4页
目的 探讨5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)对体外培养人卵巢癌细胞系COCl细胞的作用。方法 体外培养中国仓鼠正常卵巢上皮细胞系(CHO-K1)、人卵巢癌细胞系(COCl),每种细胞实验组中分别加入不同浓度ADFM-ChR,对照组加入等... 目的 探讨5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)对体外培养人卵巢癌细胞系COCl细胞的作用。方法 体外培养中国仓鼠正常卵巢上皮细胞系(CHO-K1)、人卵巢癌细胞系(COCl),每种细胞实验组中分别加入不同浓度ADFM-ChR,对照组加入等量PBS。采用改良MTT比色法分别检测ADFMChR作用CHO-K1、COCl不同时间后的细胞增殖抑制率,用流式细胞仪分析法分别检测CHO-K1、COCl细胞的细胞周期分布度凋亡率。结果 ADFMChR对COCl细胞的增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性,对CHO-K1细胞的增殖抑制作用弱,差异有显著性(P〈0.01)。ADFMChR作用于COCl细胞后细胞周期分布及凋亡率与CHO-K1细胞比较,G0/G1期细胞明显增多,且G1期细胞前出现明显的亚G1凋亡峰。结论 ADFMChR对卵巢癌细胞系COCl的增殖具有明显的抑制作用,呈剂量-效应关系和时间-效应关系。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素 凋亡 肿瘤细胞
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NFATc1-ERK5通路介导流体剪切力促进成骨细胞BMP7表达 被引量:1
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作者 丁宁 闫亮 +1 位作者 万浪 夏亚一 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2018年第3期358-363,共6页
目的:探讨成骨细胞中NFATc1与ERK5调控关系,并研究流体剪切力(FSS)调节BMP7表达的信号通路。方法:实验分为6组,即空白组、FSS组、Cs A(Cyclosporin,NFATc1抑制剂)组、XMD8-92(ERK5抑制剂)组、FSS+Cs A组、FSS+XMD8-92组。用Western Blo... 目的:探讨成骨细胞中NFATc1与ERK5调控关系,并研究流体剪切力(FSS)调节BMP7表达的信号通路。方法:实验分为6组,即空白组、FSS组、Cs A(Cyclosporin,NFATc1抑制剂)组、XMD8-92(ERK5抑制剂)组、FSS+Cs A组、FSS+XMD8-92组。用Western Blot方法检测不同干预条件下NFATc1、ERK5、p-ERK5以及BMP7蛋白表达水平并进行比较。结果:12 dyn/cm^2FSS作用45 min能够显著提高NFATc1、p-ERK5在成骨细胞内水平,400 nmol/L Cs A干预30 min能够有效抑制NFATc1表达量升高以及ERK5磷酸化,但5μmol/L XMD8-92作用1 h仅能够抑制ERK5磷酸化,而对NFATc1没有作用。此外,FSS促进MC3T3-E1细胞中BMP7表达量升高,Cs A和XMD8-92任何一种抑制剂均能显著阻止BMP7表达。结论:FSS在成骨细胞中通过NFATc1来调控ERK5磷酸化,BMP7为ERK5下游靶点受NFATc1-ERK5通路调控。 展开更多
关键词 NFATc1 ERK5 BMP7 流体剪切力 成骨细胞
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虎杖苷上调miR-877-5p抑制肝癌Huh-7细胞增殖、迁移及侵袭
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作者 戴鹏 戴丽 +1 位作者 李德龙 张伟 《解剖学研究》 CAS 2023年第5期441-446,共6页
目的探讨虎杖苷对肝癌Huh-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。方法体外培养人肝癌细胞Huh-7,随机分组:对照组、低剂量虎杖苷组、中剂量虎杖苷组、高剂量虎杖苷组;应用克隆形成实验、CCK-8法、划痕实验与Transwell实验分别... 目的探讨虎杖苷对肝癌Huh-7细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其可能作用机制。方法体外培养人肝癌细胞Huh-7,随机分组:对照组、低剂量虎杖苷组、中剂量虎杖苷组、高剂量虎杖苷组;应用克隆形成实验、CCK-8法、划痕实验与Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭;q RT-PCR法检测肝癌组织、癌旁组织与Huh-7细胞中miR-877-5p的表达量;E-cadherin、N-cadherin蛋白含量由Western blot法检测。结果相较于对照组,虎杖苷剂量依赖性的抑制细胞克隆形成数(分别为103.58±9.23、50.89±4.08,F=103.107,P=0.000),并通过促进E-cadherin蛋白表达(分别为0.16±0.02、0.55±0.05,F=187.778,P=0.000)抑制N-cadherin蛋白表达(分别为0.67±0.05、0.23±0.02,F=203.048,P=0.000)抑制细胞迁移(分别为71.96±5.94、28.12±2.54,F=164.192,P=0.000)和侵袭(分别为123.45±12.11、59.56±5.35,F=97.705,P=0.000);此外,虎杖苷刺激组细胞高表达miR-877-5p(分别为1.00±0.00、2.96±0.24,F=250.276,P=0.000),且成剂量依赖性。肝癌组织中miR-877-5p的表达量相较于癌旁组织显著降低(分别为1.00±0.08、0.32±0.03,t=55.712,P=0.000);miR-877-5p过表达相较于对照组被证实抑制肝癌细胞细胞克隆形成数(分别为108.41±11.37、59.33±5.12,t=11.808,P=0.000)、侵袭(分别为122.77±10.81、64.46±5.94,t=14.182,P=0.000)及迁移能力(分别为72.12±5.58、34.56±3.17,t=17.558,P=0.000);相较于虎杖苷+anti-miR-NC组,敲低虎杖苷刺激的肝癌细胞中miR-877-5p的表达可以逆转虎杖苷诱导的细胞克隆形成数(分别为48.52±4.50、89.23±7.88,t=13.459,P=0.000)、迁徙(分别为26.88±2.54、59.43±5.17,t=16.952,P=0.000)和侵袭抑制(分别为55.07±4.58、104.03±10.15,t=13.190,P=0.000)。结论虎杖苷可通过上调miR-877-5p表达而破坏肝癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。 展开更多
关键词 肝癌 虎杖苷 miR-877-5p 细胞增殖 迁移 HUH-7细胞
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5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素体外抗肝癌作用
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作者 王宇 张亮 +1 位作者 周建国 周秀田 《齐齐哈尔医学院学报》 2011年第22期3606-3607,共2页
目的研究白杨素(ChR)衍生物5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素(5-ally-7-gen-difluormethylenechrysin,ADFMChR)对体外培养肝癌SMMC-7721细胞生长抑制作用及诱导凋亡的作用机制。方法 1)细胞计数法研究ADFMChR对SMMC-7721细胞生长曲线及细胞... 目的研究白杨素(ChR)衍生物5-烯丙基-7-二氟亚甲氧白杨素(5-ally-7-gen-difluormethylenechrysin,ADFMChR)对体外培养肝癌SMMC-7721细胞生长抑制作用及诱导凋亡的作用机制。方法 1)细胞计数法研究ADFMChR对SMMC-7721细胞生长曲线及细胞倍增时间的影响;2)Western blot法分析ADFMChR对SMMC-7721细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化情况。结果 1)细胞计数结果表明:0.3μM~30.0μM浓度的ADFMChR与对照组相比均可抑制SMMC-7721细胞生长,且呈浓度和时间依赖性;常规培养SMMC-7721细胞群体倍增时间为23.81小时,当ADFMChR为30.0μM时则可使其延长至61.22小时;2)Western Blot分析证实ADFMChR上调Bax和下调Bcl-2呈浓度依赖性。结论以ChR为先导物,选择性引入烯丙基和二氟亚甲氧基的衍生物ADFMCHR对肝癌的生长抑制作用较ChR明显增强,可能与细胞增殖周期延长,Bcl-2/Bax比值下降,诱导细胞凋亡相关。 展开更多
关键词 肝癌 5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素 细胞增殖周期 细胞凋亡
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蝙蝠葛碱在人乳腺癌MCF-7细胞对5氟尿嘧啶敏感性的研究 被引量:3
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作者 李红阳 孙亮 +2 位作者 姜醒 苑光军 刘艳 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2017年第5期385-389,共5页
目的探讨人乳腺癌MCF-7细胞受蝙蝠葛碱(Dauricine,Dau)作用后,对5氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的影响。方法分别以终浓度为2.5μg/mL的蝙蝠葛碱、50μg/mL的5-FU、2.5μg/mL的蝙蝠葛碱和50μg/mL的5-FU作用于人乳腺癌细胞MCF-7,运用MTT法检测... 目的探讨人乳腺癌MCF-7细胞受蝙蝠葛碱(Dauricine,Dau)作用后,对5氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的影响。方法分别以终浓度为2.5μg/mL的蝙蝠葛碱、50μg/mL的5-FU、2.5μg/mL的蝙蝠葛碱和50μg/mL的5-FU作用于人乳腺癌细胞MCF-7,运用MTT法检测细胞增殖活性,Transwell实验分析细胞的迁移,DAPI染色检测细胞的凋亡,Western blot法检测cyclinD1和Bcl-2蛋白的表达。结果MTT实验结果显示联合使用阈下浓度的蝙蝠葛碱增强了5-FU对细胞增殖的抑制;Transwell实验表明联合应用阈下浓度的蝙蝠葛碱进一步加剧了5-FU对细胞迁移的抑制;DAPI染色说明联合应用阈下剂量的蝙蝠葛碱加强了5-FU对细胞凋亡的诱导,Western blot实验表明联合应用阈下浓度的蝙蝠葛碱进一步抑制了cyclinD1和Bcl-2蛋白的表达。结论蝙蝠葛碱可有效增强人乳腺癌MCF-7细胞对5-FU的敏感性。 展开更多
关键词 蝙蝠葛碱 5氟尿嘧啶 乳腺癌 MCF-7细胞
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