Effect of antisense human telomerase RNA on malignant behaviors of gastric carcinoma cell line SGC-7901

Objective:To studytheeffectsof antisensehumantelomeraseRNA(ahTR)transfectionon themalignantbeha-viorsof gastriccarcinomacelllineSGC-7901anditspotentialroleingenetherapyfortumor.Methods:AnantisensehTR eukaryoticexpressionvectorcontainingthesequenceof templateregionof telomererepeatswas transfectedintogastric carcinomacelllineSGC-7901withliposomeDOTAP.Theexpressionsof hTRRNAandantisensehTRRNAwereob-servedwithRT-PCR,telomeraseactivitywithPCR-ELISA.Telomerelengthwas measuredwithSouthernblot.Cellmor-phologyandcellularproliferationcapacitywerestudiedwithMTTassay.Cellcycledistributionandapoptoticstatewere observedwithflowcytometry.Efficiencyof cloneformationin softagarandtumorigencityin nudemicewereexamined andevaluatedinahTR-transfected7901cells,andplasmidpCL-neotransfected7901cellsandparental7901cellsserved as control.Results:AnantisensehTReukaryoticexpressionvectorwastransfectedinto7901cellssuccessfully.Thetelom-eraseactivityin ahTR-transfected7901cellswas decreasedfrom100%to about25%,andtelomerelengthin thecells shortenedfrom4.08kb to3.35kb at60populationdoublings(PDs).Comparedwithparental7901andpCL-neotransfect-ed7901cells,ahTR-transfected7901cellsdisplayedsomemorphologicalchanges,includingdecreasedcellatypiaandnu-cleus/cytoplasmratiounderlightmicroscope.Furthermore,ahTR-transfected7901cellsdisplayedgrowthinhibition,de-creasedinvasivecapacityin Borden’schamberinvasivemodel,increasedG 0 /G 1 phaserateandapoptoticrate,andrestored contactinhibitionanddensityinhibition.Surprisingly,ahTR-transfected7901cellslosttheircapacityof cloneformationin softagarandcarcinogensisinnudemice.Conclusion:AntisensehTRtransfectioncaninduce7901celldifferentiationand reverseitsmalignantphenotype.Thisstudyprovidesan excitingapproachfor cancertherapythroughtheinhibitionof telomeraseactivitywithantisensegeneandothertelomeraseinhibitors.

桂皮醛诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡及相关分子机制的探讨

目的:探讨桂皮醛对人胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡及其相关分子机制。方法:采用MTT法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测桂皮醛诱导的凋亡,Hoechst 33342染色法观察凋亡形态的变化;RT-PCR法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823细胞相关凋亡基因的影响;Western Bolt方法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823细胞相关凋亡蛋白的影响。结果:与对照组相比,桂皮醛有抑制人胃癌BGC-823细胞增殖的作用(P<0.01);桂皮醛能诱导凋亡的产生;桂皮醛能下调凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xL、Survivin,上调凋亡相关基因Bax、Bak;桂皮醛能下调凋亡相关蛋白Bcl-2、Procaspase-3,上调凋亡相关蛋白Bax。结论:桂皮醛对人胃癌细胞BGC-823的增殖具有抑制作用并能诱导凋亡,可能与内源性凋亡途径的激活有关。

华蟾素抑制人胃癌BGC-823细胞体外侵袭、迁移的机理

目的探讨华蟾素(Cinobufacin)体外抑制人胃癌BGC-823细胞侵袭的作用及其机制。方法以0.156 mg/L和0.313 mg/L华蟾素体外作用人胃癌BGC-823细胞,采用MTT法检测华蟾素对BCG-823细胞生长的抑制效果,Transwell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot法检测BGC-823细胞中NF-κB p56、MMP-9蛋白的表达量。结果华蟾素可浓度依赖性抑制体外BGC-823细胞增殖、迁移和侵袭,同时下调BGC-823细胞中NF-κB和MMP-9蛋白表达。结论华蟾素体外可抑制胃癌的转移,该作用可能通过下调NF-κB、MMP-9的表达相关。

穿心莲内酯联合5-FU对人胃癌BGC-823细胞的体内外抑制作用

目的:探讨穿心莲内酯联合5-Fu对人低分化胃癌细胞株BGC-823的协同抗肿瘤作用。方法:以人胃癌BGC-823细胞株为靶细胞,通过体外细胞培养和裸鼠移植瘤试验,采用MTT法检测、绘制效应-合用指数曲线、抑瘤率计算等方法。结果:穿心莲内酯在7.5～120μg/mL、5-FU在3.75～60μg/mL范围内均能抑制BGC-823细胞的生长,具有剂量-效应关系和时间-效应关系。两药联合作用24h、48h、72h时的中效抑制浓度分别为17.32、9.54、4.11μg/mL,显著小于单药应用组。72h效应-合用指数曲线表明两药在抑制效应≤0.97范围内可产生协同作用。穿心莲内酯联合5-FU对人BGC-823细胞裸鼠移植瘤的抑瘤率为(75.51±12.57)%,与单药组相比差异均有显著性。结论:穿心莲内酯、5-Fu能在体内外抑制人胃癌BGC-823细胞的生长,两药联合产生协同或相加作用。

ω-3多不饱和脂肪酸对人胃癌BGC-823细胞PGE_2、SOD和MDA的影响

目的:观察不同浓度ω-3多不饱和脂肪酸(EPA、DHA)对人胃癌BGC-823细胞存活情况、PGE2和脂质过氧化的影响。方法:采用MTT法测定肿瘤细胞存活率,酶联免疫吸附竞争法测定PGE2浓度,黄嘌呤氧化酶法测定总SOD活力,TBA法测定MDA含量。结果:30μg/ml和45μg/ml的EPA或DHA可显著降低肿瘤细胞存活率(P<0.001),细胞PGE2浓度和总SOD活力明显下降(P<0.05)、而MDA含量明显升高(P<0.05)。结论:ω-3多不饱和脂肪酸可通过PGE2代谢和脂质过氧化作用抑制人胃癌BGC-823细胞的生长。

Apoptin基因对人胃癌细胞BGC-823的抑制效应及与凋亡信号转导的关系

目的:探讨Apoptin基因对人胃癌细胞BGC-823的抑制作用及其参与胞内细胞信号转导的机制.方法:应用脂质体转染法将重组质粒pVAX1-Apoptin体外转染BGC-823细胞,运用噻唑兰(methylthiazolyltetrazolium,MTT)分析法检测重组质粒对BGC-823肿瘤细胞的抑制作用;通过AO/EB染色法对pVAX1-Apoptin转染的肿瘤细胞进行形态学观察;运用流式细胞术检测细胞线粒体跨膜电位(△Ψm);通过免疫印迹检测细胞色素c(cytochromec,Cytoc)释放;应用底物显色法检测Caspase-3/9活性.结果:pVAX1-Apoptin转染比pVAX1具有更强的抑瘤效应(10μg质粒转染72h后,23.37%vs99.61%,P<0.01),并且肿瘤细胞的死亡方式以凋亡为主.实验结果显示,pVAX1-Apoptin转染导致细胞线粒体跨膜电位下降,与pVAX1转染BGC-823细胞相比有显著差异(46.7%±7.26%vs70.66%±5.98%,P<0.01);同时伴随细胞色素c的释放.另外,pVAX1-Apoptin和pVAX1转染细胞的Caspase-3/9活性具有显著差异(Caspase-9:0.181±0.032vs0.079±0.013,P<0.01;Caspase-3:0.242±0.041vs0.058±0.023,P<0.01).结论:pVAX1-Apoptin转染BGC-823肿瘤细胞导致线粒体跨膜电位下降,并刺激释放细胞色素c,从而激活Caspase-9.经细胞色素c激活的Caspase-9进而活化凋亡通路下游关键作用因子,并对BGC-823肿瘤细胞产生抑制效应.

丹参酮ⅡA对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响

背景与目的：探讨丹参酮ⅡA（tanshinoneⅡA，TanⅡA）对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响。材料与方法：采用0～10μg／ml Tan ⅡA分别作用于BGC-823细胞48h及72h，MTT比色法观察药物对细胞生长的抑制效应；2、5、10μg／ml TanⅡA分别作用于细胞72h，应用HE染色、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术分析药物对细胞凋亡的影响。结果：TanⅡA明显抑制BGC-823细胞增殖、诱导细胞凋亡，镜下可见BGC-823细胞明显的凋亡特征性改变；5、10μg／ml Tan ⅡA处理组细胞DNA电泳可见典型的“梯状”条带；FCM结果显示5、10μg／ml TanⅡA处理组细胞，凋亡率分别为（20．60±1．84）％、（31．03±1．47）％，与对照组（5．23±0．39）％比较差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：在一定条件下，TanⅡA可抑制人胃癌BGC-823细胞增殖，诱导其凋亡。

小檗碱对人胃癌细胞株BGC-823诱导凋亡的研究

目的:研究小檗碱对人胃癌BGC- 82 3细胞诱导凋亡的作用。方法:应用荧光显微镜、透射电镜、流式细胞仪和TUNEL染色研究小檗碱对人胃癌BGC- 82 3细胞诱导凋亡的作用。结果:小檗碱作用人胃癌BGC -82 3细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化,细胞核固缩、染色质凝集成新月状紧贴于核膜周边,核碎裂、染色质片断化、凋亡小体形成等。流式细胞仪上出现典型的亚二倍体凋亡峰。TUNEL染色显示,随小檗碱浓度增加和作用时间延长,细胞凋亡率增加。结论:小檗碱对人胃癌BGC- 82 3细胞有诱导凋亡作用。

小檗碱对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响

用MTT法、克隆分析、流式细胞仪及免疫组织化学法 ,观察了小檗碱对人胃癌细胞株BGC 82 3增殖的影响 ,结果发现小檗碱对人胃癌细胞株BGC 82 3有抑制增殖作用 ,且与药物浓度呈正相关。其机理主要为使突变型 p5 3和 p2 1蛋白的表达下调 ,阻滞胃癌细胞进入细胞周期 ,使人胃癌细胞BGC 82 3的细胞周期阻滞于G0 /G1期。

小归芍超临界提取物对人胃癌BGC-823细胞Bcl-2、PCNA基因表达的影响

目的:研究小归芍超临界提取物对人胃癌BGC-823细胞Bcl-2、PCNA基因表达的影响。方法:通过培养人胃癌BGC-823细胞方法,采用Western Blotting分别检测Bcl-2和PCNA基因蛋白的表达量。结果:小归芍超临界提取物单用体外作用48h能够明显抑制人胃癌细胞BGC-823细胞Bcl-2及PCNA的表达,可能是其抑制肿瘤细胞增殖的机制之一。

姜黄素抑制人胃癌BGC-823细胞生长并诱导其凋亡的机制研究

目的:探讨姜黄素抑制人胃癌BGC-823细胞生长并促人胃癌BGC-823细胞凋亡的生物学作用及其调控机制。方法:常规体外培养对数生长期胃癌BGC-823细胞,细胞分为对照组,低、中、高姜黄素处理组四组,姜黄素浓度分别为0mg/L5,mg/L1,0mg/L,20mg/L。姜黄素处理24h后,采用甲基噻唑(MTT)比色法及流式细胞仪测定细胞增殖水平及细胞凋亡率;采用免疫组化法测定细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达;采用PCR检测Caspase-3的mRNA表达水平。结果:MTT检测显示姜黄素能抑制人胃癌BGC-823细胞増殖,呈现浓度依赖性;流式细胞仪显示姜黄素能有效诱导细胞的凋亡,呈现浓度依赖性,其中20mg/L姜黄素处理24h后细胞凋亡率为48.3%;免疫组化试验表明姜黄素处理使人胃癌BGC-823细胞中Bax表达水平上调,同时Bcl-2蛋白表达水平下调;且细胞中Caspase-3的mRNA表达水平受姜黄素诱导而增高。结论:姜黄素对人胃癌BGC-823细胞的增殖具有明显抑制作用,呈浓度依赖性促进细胞凋亡,这种生物学效应可能与激活Bax蛋白表达、抑制Bcl-2蛋白表达而活化Caspase-3的信号通路有关。该研究为深入探讨姜黄素诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡的机制提供了重要依据。

蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823凋亡及其细胞周期的影响

目的:观察蜂毒素体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:采用MTT法观察不同浓度的蜂毒素(32,16,8,4,2μg/mL)体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响,并用流式细胞仪检测其诱导的细胞凋亡和周期阻滞效应。结果:①与对照组比较,蜂毒素有抑制人胃癌细胞株BGC-823增殖的作用(P<0.01),随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大,呈现剂量依赖性。②蜂毒素浓度从4μg/mL开始,即可诱导细胞产生凋亡,随着剂量的增加诱导凋亡的效果更加明显。③在细胞周期方面,与阴性对照比较,蜂毒素作用24小时后S期细胞比例上升,而G0/G1期比例明显下降,蜂毒素浓度达到16μg/mL时G0/G1期前出现明显的亚二倍体区。结论:蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823的增殖具有抑制作用,且能够引起该细胞的凋亡及改变其细胞周期。

姜黄素对人胃腺癌细胞株BGC-823生长抑制及诱导凋亡的作用

目的探讨姜黄素对人胃腺癌细胞BGC-823的生长抑制及诱导凋亡作用。方法 MTT法检测不同浓度姜黄素对人胃腺癌BGC-823细胞的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50);将1.2μmol/L姜黄素作用于BGC-823细胞24、48、72h,用DAPI染色检测细胞凋亡;用RT-PCR、Western blotting法分别检测姜黄素对Bax、Bcl-2基因以及Bax、Bcl-2、caspase-3蛋白的影响。结果不同浓度的姜黄素作用于BGC-823细胞0～72h后,细胞呈不同程度的抑制作用,随着药物浓度的增加,抑制率明显上升,作用48h的IC50为1.2μmol/L。DAPI染色可见典型的凋亡细胞形态学特征。RT-PCR、Western blotting结果显示1.2μmol/L姜黄素可以增加Bax表达、减少Bcl-2表达和激活caspase-3。结论姜黄素对人胃腺癌BGC-823细胞有生长抑制和诱导凋亡的作用,这可能与增加Bax表达、减少Bcl-2表达、激活caspase-3有关。

蜂毒素对胃癌细胞株BGC-823生物行为学的影响

目的观察蜂毒素体外对人胃癌细胞BGC-823增殖、黏附、侵袭的影响,评价其抑瘤的效果。方法采用MTT法、细胞黏附人工重组基底膜培养小室(Transwell小室)法,观察蜂毒素体外对人胃癌细胞BGC-823增殖、黏附和侵袭能力的影响。结果与对照组比较,蜂毒素有抑制人胃癌细胞BGC-823增殖的作用(P<0.01),随着药物浓度的增大以及作用时间的延长,其对细胞的抑制率也明显增大,呈现时间及浓度的依赖性。蜂毒素作用人胃癌细胞BGC-823后,细胞的黏附能力明显降低(P<0.01),侵袭的细胞数较对照组明显减少(P<0.01)。结论蜂毒素对人胃癌细胞BGC-823的增殖具有抑制作用;且能抑制人胃癌细胞BGC-823的粘附能力和侵袭能力。

新城疫病毒HN基因重组体对人胃癌细胞BGC-823凋亡作用机制研究

目的本实验研究旨在探讨含新城疫病毒HN基因的重组质粒对人胃癌细胞BGC-823凋亡的联合作用机制。方法将含有HN基因的重组质粒pIRVP3IL-18HN经脂质体介导转染人胃癌细胞BGC-823,通过MTT方法检测细胞活力;电镜下观察细胞形态;罗丹明123和DCFA染色测定线粒体跨膜电位(△Ψ)和活性氧(ROS)水平变化;底物染色反应检测Caspase-3活性。结果重组质粒pIRVP3IL-18HN转染人胃癌细胞BGC-823后,MTT法结果显示致肿瘤细胞死亡率升高,细胞活力下降;电镜观察肿瘤细胞呈现明显凋亡状态;与阴性空白质粒对照显示,线粒体△Ψ下降,ROS水平升高;Caspase-3活性被激活。结论含新城疫病毒HN基因的重组质粒可以诱导人胃癌细胞BGC-823进入特定的凋亡程序,从而导致人胃癌细胞BGC-823的凋亡。

乌索酸体外抑制人胃癌BGC-823细胞增殖的作用

目的探讨乌索酸（UA）对体外培养的人胃癌细胞系BGC-823增殖的抑制作用。方法用MTT法在不同浓度、不同给药时间、不同溶剂溶解的条件下，以5-Fu作对照，观察uA对人胃癌细胞系BGC-823细胞的体外增殖抑制效果。结果UA在低浓度条件下（5～20mg／L）对BGC823细胞抑制率呈浓度依赖性。25～2000mg／L时随着浓度的增加抑制率无明显差异；UA对BGC-823细胞作用呈时间依赖性；不同溶剂溶解UA，抑制率无差异（P〉0．05）；UA对BGC-823细胞抑制率明显高于5Fu（P〈0．01）。结论uA对体外培养的人胃癌细胞系BGC-823有明显的增殖抑制作用，用药量小时呈现浓度依赖性及时间依赖性；其增殖抑制作用强于5Fu。溶剂不同对UA增殖抑制作用无影响。

胃复方含药血浆对人胃癌BGC-823细胞增殖及垂体瘤转化相关基因表达的影响

目的:探讨胃复方含药血浆对人胃癌BGC-823细胞的抑制作用及其机制。方法:MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞技术检测细胞周期,RT-PCR及Western blot法检测细胞中垂体瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)、骨髓细胞瘤病毒癌基因(cellular-myelocytomatosis viral oncogene, c-Myc)、人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTERT)的mRNA及蛋白表达水平。结果:胃复方含药血浆低、中、高剂量组的吸光度(OD)值依次降低并与作用时间负相关,抑制率(IR)依次升高并与作用时间正相关;胃复方含药血浆不同浓度组干预胃癌细胞72 h后,其G0/G1期细胞比率显著增加,并与其浓度正相关;S期和G2/M期细胞比率均显著减少,并与其浓度负相关。各组含药血浆作用于胃癌细胞72 h后,与空白血浆组比较,5-Fu组、中药组均对PTTG、c-Myc、hTERT的mRNA相对表达量、蛋白表达量有下调作用并呈剂量依赖性。结论:胃复方含药血浆可能下调PTTG、c-Myc、hTERT的表达以阻滞细胞周期进程,从而抑制人胃癌BGC-823细胞增殖达到抗肿瘤作用。

鳕鱼皮寡肽对人胃癌细胞BGC-823增殖影响的实验研究

目的探讨鳕鱼皮寡肽(cod skin of oligopeptide,CSO)对人胃癌细胞(BGC-823)增殖的影响。方法用不同浓度(20、40、60、80mg/ml)CSO处理体外培养的BGC-823,72h后显微镜下观察细胞生长情况;分别于24、48、72h,应用CCK-8法检测细胞增殖情况并计算50%细胞抑制率(IC_(50));处理后24h采用流式细胞术测定细胞凋亡及细胞周期的改变情况。结果与对照组相比,经CSO处理后,镜下BGC-823数目减少。CCK-8检测结果显示,BGC-823数目减少呈剂量、时间依懒性(均P<0.05),并且CSO对BGC-823作用24、48和72h的IC_(50)分别是87.34、68.14、44.55mg/ml。对照组BGC-823存活率为(86.62±10.32)%,60mg/ml组BGC-823存活率为(24.18±6.59)%,差异有统计学意义(P<0.05);对照组BGC-823晚期凋亡率为(1.81±0.35)%,60mg/ml组BGC-823晚期凋亡率为(55.84±5.89)%,差异有统计学意义(P<0.05)。在G1期,对照组BGC-823细胞分布为(61.13±10.32)%,60mg/ml组BGC-823细胞分布为(79.74±10.21)%,差异有统计学意义(P<0.05);在S期,对照组BGC-823细胞分布为(23.04±8.64)%,60mg/ml组BGC-823细胞分布为(10.42±5.36)%,差异有统计学意义(P<0.05);在G2期,20mg/ml组BGC-823细胞分布为(9.96±2.68)%,40mg/ml组BGC-823细胞分布为(6.93±1.25)%,60mg/ml组BGC-823细胞分布为(9.84±3.79)%,与对照组BGC-823细胞分布(15.83±5.89)%相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 CSO可阻滞BGC-823生长周期,促进BGC-823凋亡,抑制增殖,从而抑制肿瘤细胞的生长。

ω-3多不饱和脂肪酸对人胃癌BGC823细胞周期及凋亡的影响

目的利用人胃癌BGC823细胞体外培养实验,观察不同浓度ω3多不饱和脂肪酸(EPA、DHA)对肿瘤细胞周期及凋亡的影响。方法采用MTT法、凋亡形态学检查和流式细胞检测肿瘤细胞周期及凋亡情况。结果30和45μg/ml的EPA或DHA可显著降低肿瘤细胞存活率(P<0.001);Hoechst33258染色和透射电镜可见细胞凋亡现象;流式细胞检测bcl2基因蛋白表达明显下降(P<0.05),G0/G1细胞明显增加,G2/M和S期细胞明显减少(P<0.05)。结论ω3多不饱和脂肪酸可诱导人胃癌BGC823细胞凋亡和阻滞细胞在G0/G1期,细胞增殖受到抑制。