胃饥饿素对高糖下视网膜微血管内皮细胞氧化应激及铁死亡的抑制作用

目的研究胃饥饿素对高糖下人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)氧化应激及铁死亡的影响。方法将体外培养的HRMEC分为对照组、高糖组、高糖+胃饥饿素组,分别采用常规培养基、含30 mmol/L D-葡萄糖培养基、含30 mmol/L D-葡萄糖+10 nmol/L胃饥饿素培养基培养24 h。采用细胞计数试剂盒8检测细胞增生情况;采用流式细胞术检测细胞活性氧簇(ROS)水平;采用试剂盒检测细胞中氧化应激指标还原型谷胱甘肽(GSH)浓度、丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性及Fe^(2+)浓度;采用透射电子显微镜观察线粒体结构;采用Western blot法检测HRMEC中铁死亡关键分子谷胱甘肽过氧化合物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达。结果对照组、高糖组、高糖+胃饥饿素组细胞增生率分别为(100.62±3.40)%、(63.74±4.25)%和(88.19±4.65)%,ROS荧光强度分别为15512.20±1347.53、46457.00±1072.65和22220.87±1669.20,GSH浓度分别为(68.52±7.61)、(21.45±1.57)和(55.68±5.15)μmol/L,MDA浓度分别为(0.79±0.10)、(2.47±0.27)和(1.08±0.15)μmol/L,SOD活性分别为(111.67±10.32)、(37.75±5.92)和(97.45±9.12)U/ml,Fe^(2+)浓度分别为(3.02±0.30)、(9.45±0.71)和(4.63±0.32)mmol/mgprot。各组间细胞增生率、ROS荧光强度、GSH浓度、MDA浓度、SOD活性及Fe^(2+)浓度总体比较,差异均有统计学意义(F=61.82、414.59、61.28、67.24、61.64,146.14,均P<0.001);与对照组相比,高糖组细胞增生率、GSH浓度和SOD活性均明显降低,ROS荧光强度、MDA浓度和Fe^(2+)浓度明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+胃饥饿素组细胞增生率、GSH浓度和SOD活性明显升高,ROS荧光强度、MDA浓度和Fe^(2+)浓度明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与对照组相比,高糖组细胞内线粒体铁死亡现象明显;与高糖组相比,高糖+胃饥饿素组线粒体状态明显改善。各组间细胞中GPX4、SLC7A11蛋白相对表达量总体比较,差异均有统计学意义(F=63.94、182.84,均P<0.001);与对照组相比,高糖组和高糖+胃饥饿素组细胞中GPX4、SLC7A11蛋白相对表达量均明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与高糖组相比,高糖+胃饥饿素组2种蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论胃饥饿素可促进高糖下的HRMEC增生,抑制高糖诱导的氧化应激和铁死亡。

p38MAPK介导Ghrelin对TNF-α诱导的人脑微血管内皮细胞MCP-1 mRNA表达的抑制

目的探讨Ghrelin对TNF-α诱导的人脑微血管内皮细胞(HBMEC)单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的影响及p38MAPK的作用。方法培养HBMEC,TNF-α组加入不同浓度TNF-α;Ghrelin预处理组先加入Ghrelin预处理1 h后,加入TNF-α。采用RT-PCR法检测MCP-1 mRNA的水平,免疫印迹法检测磷酸化p38(p-p38)的表达。结果经TNF-α刺激后,MCP-1 mRNA表达明显增强,并呈一定的浓度剂量依赖关系(P<0.05),胞质中的p-p38蛋白表达亦明显增加(P<0.05)。Ghrelin预处理可以减少MCP-1 mRNA及胞质中的p-p38蛋白表达(P均<0.05)。结论 Ghrelin可能通过抑制p-p38通路抑制TNF-α介导的HBMEC MCP-1 mRNA表达。

重组人生长激素治疗对小儿身材矮小血清IGF-1和Ghrelin水平及对体重指数影响

目的探讨重组人生长激素(rhGH)治疗对小儿身材矮小血清胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和饥饿激素(Ghrelin)水平及体重指数(BMI)影响。方法前瞻性选择攀枝花市中心医院于2018年3月至2020年3月身材矮小患儿82例,依据随机数字表法分为观察组41例与对照组41例。对照组常规的营养治疗,观察组患儿在对照组的基础上联合重组人生长激素注射液治疗,0.20 U·kg^(-1)·d^(-1),每晚睡前1 h皮下注射。2组疗程持续12个月。比较2组治疗前和治疗12个月后身高和身高标准差积分(HtSDS)变化,生长速率(HV)变化,血清IGF-1和Ghrelin水平变化及BMI变化。结果治疗12个月后,2组患儿身高高于治疗前,而HtSDS低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患儿身高高于对照组,而HtSDS低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗12个月后,2组患儿HV高于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患儿HV高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗12个月后,2组患儿血清IGF-1高于治疗前,血清Ghrelin水平低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患儿血清IGF-1高于对照组,血清Ghrelin水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗12个月后,2组患儿BMI低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05);观察组患儿BMI低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论rhGH治疗小儿身材矮小可提高患儿生长速率,促进患儿生长,提高血清IGF-1水平及降低Ghrelin水平,具有重要临床研究意义。

Ghrelin抑制多柔比星诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的实验研究

目的:探讨Ghrelin抑制多柔比星诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的机制。方法 :通过细胞培养、MTT、流式细胞检测、Tunnel法和Western blot观察酰基化Ghrelin对多柔比星诱导的人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡和凋亡相关蛋白表达的影响。结果:MTT检测证实多柔比星能有效诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡。流式细胞检测及Tunnel法检测发现Ghrelin能有效抑制多柔比星诱导的人乳腺癌细胞MDA-MB-231的凋亡。Western blot检测发现Ghrelin抑制多柔比星诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的同时伴有bcl-2表达增加、bax表达下降、bcl-2/bax值升高。结论:Ghrelin能有效抑制多柔比星诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡,推测其抑凋亡机制可能与抗线粒体凋亡因子释放有关。

重组人生长激素对特发性矮小症患儿血清Ghrelin及胰岛素样生长因子-1水平的影响

目的探究重组人生长激素(rHGH)联合小剂量司坦唑醇对特发性矮小症(SS)患儿血清食欲刺激素(Ghrelin)及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平的影响。方法选取2013年12月-2015年6月接受治疗的特发性SS患儿120例,按照随机数字表法分为对照组和观察组,每组60例。对照组患者使用小剂量司坦唑醇治疗,观察组患者在对照组基础上联合使用rHGH进行治疗。对比两组患者治疗前后生长速度(GV)、骨龄(BA)、预测成年身高(PAH),检测并比较两组Ghrelin、IGF-1水平变化情况。结果观察组治疗6、12及18个月后GV、PAH升高,并高于对照组(P<0.05)。两组治疗后血清Ghrelin、IGF-1水平均改善,其中观察组Ghrelin水平低于对照组(P<0.05),IGF-1水平高于对照组(P<0.05)。结论 rHGH联合常规治疗可更有效地治疗小儿特发性SS,其机制可能与rHGH具有调节Ghrelin、IGF-1水平,从而提高代谢并促进细胞生长有关。

Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞损伤保护作用的研究

目的研究促生长激素释放肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法体外培养的HUVECs,随机分为6组:正常对照组;Ghrelin(10-7mol/L)组;AngⅡ(10-7mol/L)组;AngⅡ(10-7mol/L)+Ghrelin不同浓度组:(Ghrelin10-8mol/L、10-7mol/L和10-6mol/L三个浓度组)。每组设6个复孔。用AngⅡ和Ghrelin联合干预细胞18h后,采用放射免疫方法测定内皮素-1(ET-1)含量;硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)含量;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果Ghrelin呈浓度依赖性地显著减少AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞的ROS生成及ET-1释放,且明显促进NO生成(P<0.05)。结论Ghrelin对AngⅡ体外诱导的HUVECs损伤有保护作用。

Ghrelin对AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察促生长激素释放肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法将体外培养的HUVECs随机分为6组:正常对照组、Ghrelin组、AngⅡ组、AngⅡ+Ghrelin不同浓度组(Ghrelin 10-8、10-7、10-6mol/L 3个浓度组),每组6个复孔,分别用AngⅡ及Ghrelin干预18 h后,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测HUVECs的活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果与正常对照组比较,AngⅡ组HU-VECs存活率显著降低(P<0.01),凋亡率显著升高(P<0.01);Ghrelin呈浓度依赖性抑制AngⅡ诱导的细胞存活率下降及促细胞凋亡;单用Ghrelin对HUVECs无明显影响。结论Ghrelin可抑制AngⅡ诱导HUVECs凋亡作用,对内皮细胞具有保护作用。

重组人生长激素联合营养支持治疗儿童特发性矮小症的疗效及血清Ghrelin、IGF-1水平变化观察

目的观察重组人生长激素(rhGH)联合营养支持治疗儿童特发性矮小症(ISS)的疗效及血清饥饿激素(Ghrelin)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的水平变化情况。方法选取2017年6月至2019年5月安阳市妇幼保健院收治的90例ISS儿童作为研究对象,采用抽签法分为观察组和对照组,每组45例。对照组给予营养支持;观察组在对照组基础上予以rhGH治疗。比较两组治疗效果及血清Ghrelin、IGF-1水平。结果两组治疗后身高(Ht)、生长速率(GV)较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05)。两组体重(Wt)、骨龄(BA)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗后血清Ghrelin水平较治疗前低,而IGF-1水平较治疗前高(P<0.05),且观察组血清Ghrelin水平低于对照组,IGF-1水平高于对照组(P<0.05)。两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论rhGH联合营养支持治疗儿童ISS效果较好,能够降低血清Ghrelin水平、升高IGF-1水平,且不良反应较少。

生长激素释放多肽对高糖诱导视网膜色素上皮细胞的保护作用

目的:探讨生长激素释放多肽(Ghrelin)对高糖环境下人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞氧化应激的影响。方法:将体外培养的RPE细胞分为阴性对照组、高糖组、Ghrelin低浓度组、Ghrelin高浓度组。通过CCK-8法检测细胞存活率,氧敏感荧光探针H2DCFDA染色法观察细胞氧化损伤程度,流式细胞技术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的变化,分光光度计比色法检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果:CCK-8结果显示,分别用10-9mol/L、10-6mol/L Ghrelin预处理后,RPE细胞存活率分别为54.79%±3.43%和79.16%±3.29%,与高糖组(41.65%±3.42%)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。H2DCFDA荧光探针染色结果显示,Ghrelin预处理后RPE细胞内ROS生成量下降,氧化损伤细胞减少。分光光度计比色法结果显示,与高糖组相比,Ghrelin组细胞SOD活力增加,MDA含量下降。结论:Ghrelin可以抑制高糖诱导的人RPE细胞氧化损伤,其在糖尿病视网膜病变的发生发展过程中可能具有一定的细胞保护作用。

生长素对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响及机制

目的观察生长素对血管紧张素Ⅱ所致的脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响。方法采取不同浓度的血管紧张素Ⅱ（10-9~10-6mol/L）刺激脐静脉内皮细胞24 h,获取最佳浓度（10-6mol/L）后用此浓度的血管紧张素Ⅱ分别刺激脐静脉内皮细胞0、6、12和24 h,观察脐静脉内皮细胞的增殖和迁移;并观察生长素（10-9~10-6mol/L）预处理2 h后与10-6mol/L血管紧张素Ⅱ共同孵育24 h和10-6mol/L生长素预处理0、0.5、1和2 h后与10-6mol/L血管紧张素Ⅱ共同孵育24 h对脐静脉内皮细胞增殖和迁移的影响。加入丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶信号通路阻滞剂PD98059（25μmol/L）、生长激素促分泌素受体1 a阻断剂（[Dys3]GHRP-6 25μmol/L）预处理人脐静脉内皮细胞,观察其对生长素影响血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞增殖和迁移的作用。水溶性四氮唑8法测细胞增殖,Transwell小室测细胞迁移,免疫印迹法测细胞中细胞外信号调节激酶1/2、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达。结果血管紧张素Ⅱ呈浓度和时间依赖性促进内皮细胞迁移和增殖。生长素抑制血管紧张素Ⅱ引起的内皮细胞迁移和增殖呈浓度和时间依赖性。PD98059（25μmol/L）预处理可以抑制血管紧张素Ⅱ促内皮细胞增殖作用,[Dys3]GHRP-6（25μmol/L）预处理阻断生长素对内皮细胞迁移和增殖的抑制作用。生长素可减少磷酸化细胞外信号调节激酶1/2的表达。结论生长素可抑制血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞增殖和迁移,其机制涉及细胞外信号调节激酶1/2途径。

人生长素对雌性大鼠心力衰竭心脏重塑及心肌细胞凋亡的影响

目的研究人ghrelin对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)致心力衰竭(heart failure,HF)大鼠心肌形态结构变化和心肌细胞凋亡的影响,探索生长素释放肽(growth hormone releasing-peptides,GHRPs)心脏保护活性机制。方法经心电图监测成功永久结扎成年雌性Wistar大鼠左冠状动脉前降支诱导AMI,经B型超声鉴定诱导HF模型成立或穿线不接扎成HF模型对照;以人ghrelin经尾静脉注射进行干预3周;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织形态结构变化;末端脱氧核苷酰基转移酶介导的d UTP切口末端标记技术分别研究心力衰竭大鼠心肌组织形态、细胞凋亡变化。结果 TUNEL染色结果:永久结扎后心肌细胞排列紊乱,呈颗粒变性,肿胀、核固缩。较多间质纤维化、炎细胞浸润:经人ghrelin干预的的虽有排列紊乱、肿胀和少量颗粒变性外未见典型固缩或严重间质少量纤维化,HF组心肌细胞凋亡指数明显高于ghrelin干预组(P<0.05)。结论外源性ghrelin减少HF大鼠心肌细胞凋亡,抑制心脏重塑而发挥心脏保护活性。

胃生长素对晚期糖基化终产物致人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的 观察胃生长素对晚期糖基化终产物（AGE）致人脐静脉内皮细胞（HUVEC）损伤的影响.方法 体外分离及培养HUVEC细胞株,制备糖基化牛血清白蛋白（AGE-BSA）.处理细胞时AGE-BSA终浓度为200 mg/L,胃生长素预作用时间为24h.将细胞分为无血清组、不同浓度胃生长素组（0.01,0.1,1和10 μmol/L）、AGE-BSA组和不同浓度胃生长素（0.01,0.1,1和10 μmol/L）＋ AGE-BSA组,AGE-BSA处理48 h后采用噻唑蓝法检测细胞存活率;将细胞分无血清组、AGE-BSA组和不同浓度胃生长素（0.01,0.1,1和10 μmol/L）＋ AGE-BSA组,AGE-BSA处理48 h后Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况;将细胞分为无血清组、AGE-BSA组和胃生长素（1μmol/L）＋AGE-BSA组,AGE-BSA处理24 h后,电镜观察细胞超微结构变化;将细胞分为无血清组、胃生长素组（1 μmol/L）,AGE-BSA组和胃生长素（1μmol/L）＋AGE-BSA组,检测细胞内活性氧簇（ROS）水平.结果 不同浓度胃生长素组中,胃生长素剂量依赖性促进细胞增殖,0.1,1和10 μmol/L胃生长素组与无血清组细胞存活率比较差异均有统计学意义[（109±18）％、（113±15）％、（115±14）％比（100±11）％,P＜0.05];胃生长素预处理抑制AGE-BSA所致HUVEC存活率下降,呈剂量依赖性,1和10 μmol/L胃生长素＋AGE-BSA组与AGE-BSA组比较差异有统计学意义[（87±18）％、（97±19）％比（45±10）％,P＜0.05].胃生长素剂量依赖性抑制AGE-BSA所致细胞凋亡,0.1,1和10 μmol/L胃生长素＋AGE-BSA组细胞凋亡数量与AGE-BSA组比较差异有统计学意义[（14.7±9.5）％、（5.2±1.9）％、（4.5±2.1）％比（19.4±5.3）％,P＜0.05].电镜下见AGE-BSA组凋亡细胞数量增多,细胞核呈致密浓染,或呈碎块状,线粒体呈絮状变;胃生长素＋ AGE-BSA组细胞凋亡明显减轻.无血清组、胃生长素组、AGE-BSA组和胃生长素＋AGE-BSA组ROS水平分别为（1.00±0.10）、（0.75±0.07）、（1.50±0.17）、（1.10±0.14）,其中胃生长素组低于无血清组（P＜0.05）,AGE-BSA组明显高于无血清组（P＜0.01）,胃生长素＋ AGE-BSA组明显低于AGE-BSA组（P＜0.01）.结论 胃生长素能抑制AGE诱导脐静脉内皮细胞凋亡及ROS的增加.

食欲刺激素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞活性氧生成及内皮素1表达

目的研究食欲刺激素(Ghrelin)在不同浓度下对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)活性氧(ROS)生成和内皮素1(ET-1)表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用AngⅡ和Ghrelin联合干预细胞18 h后,采用流式细胞术测定细胞内ROS水平,放射免疫方法测定ET-1含量,用RT0-PCR法测定ET-1 mRNA表达。结果AngⅡ明显增加HUVECs的ROS生成[(21.4±2.2)比(2.9±0.9)10^(-7)mol/L]和ET-1分泌(111.3±7.9比43.2±9.7)ng/L,P<0.05;Ghrelin对基础ROS及ET-1分泌无影响,但在10^(-8)～10^(-6)mol/L范围内剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导ROS生成[(14.2±0.7)、(10.4±1.4)和(6.6±0.5)10^(-7)mol/L]及ET-1分泌[(119.3±7.2)、(101.5±2.8)和(72.3±8.8)ng/L]与AngⅡ组(40.5±12.7)ng/L比较,P均<0.05;RT-PCR显示AngⅡ明显增加ET-1 mRNA表达,此作用可为Ghrelin所抑制,且在10^(-8)～10^(-6)mol/L浓度范围呈浓度依赖性。结论Ghrelin能够抑制AngⅡ诱导的HUVECs ROS的生成,ET-1的释放及ET-1 mRNA表达,且在一定的浓度范围内(10^(-8)～10^(-6)mol/L)呈浓度依赖性。

生长激素释放肽基因多态性与青春期前特发矮小患儿重组人生长激素治疗疗效的关系研究

目的 探讨生长激素释放肽(Ghrelin)基因多态性与青春期前特发矮小患儿重组人生长激素(rhGH)治疗疗效的关系。方法 我院儿童保健科门诊诊治的特发性矮小症儿童及青少年48例作为研究组,选取同期来我院体检的健康儿童48例作为对照组。采集受试儿童的静脉血,PCR扩增Ghrelin基因rs696217和rs26312位点目的片段,使用测序仪进行测序,对比两组Ghrelin基因rs696217和rs26312位点的多态性,并分析不同基因型特发矮小患儿治疗前和治疗1年后的生长速率(GV)、年龄对应身高标准差积分(HtSDSca)、骨龄身高标准差积分(HtSDSba)、生长因子结合蛋白3 (IGFBP3)和胰岛素样生长因子1(IGF-1)水平。结果 特发矮小组的身高、体重、BAI、BAD、IGF-1和IGFBP-3水平明显低于对照组(P<0.05);对照组和特发矮小组rs696217位点和rs26312位点基因分布情况比较差异无统计学意义(P>0.05);特发矮小组中Ghrelin基因rs696217和rs26312位点不同基因型的生长速率明显低于对照组(P<0.05);rs696217位点中GT、TT基因型是特发矮小患病的危险因素(P<0.05);特发矮小组患儿Ghrelin rs696217基因型CC中GV、IGFBP-3和IGF-1水平明显高于CA型和AA型(P<0.05),HtSDSca、HtSDSb比较差异无统计学意义(P>0.05);特发矮小组患儿Ghrelin rs26312各基因型中GV、HtSDSca、HtSDSb、IGFBP-3和IGF-1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Ghrelin基因rs696217位点GT、TT型与特发性矮小发病及rhGH的疗效相关,对临床rhGH治疗青春期前特发矮小具有一定的指导意义。

重组人生长激素治疗儿童特发性矮小症的疗效及对血清Ghrelin和IGF-1水平的影响

目的:探讨重组人生长激素(rhGH)治疗儿童特发性矮小症(ISS)的疗效及对血清饥饿激素(Ghrelin)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平的影响。方法:选取2014年1月-2016年8月期间我院收治的ISS患儿114例为研究对象。按照随机数字表法分为实验组(n=57)与对照组(n=57)。其中对照组给予常规治疗,实验组在对照组基础上联合rhGH治疗,两组疗程均为12个月。比较两组患儿的临床疗效,同时观察并对比两组患儿治疗前后血清Ghrelin以及IGF-1水平。结果:治疗后两组患儿身高、生长速率均较治疗前升高,且实验组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后两组患儿体重、总甲状腺素、骨龄、空腹血糖水平较治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组患儿血清Ghrelin水平较治疗前降低,且实验组低于对照组,血清IGF-1水平较治疗前升高,且实验组高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验组不良反应发生率为5.26%,与对照组的0.00%比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:ISS患儿应用rhGH治疗效果满意,可明显改善ISS患儿体内血清IGF-1、Ghrelin水平,安全无副作用,促进患儿健康成长。

Ghrelin以非经典受体依赖性方式促进人胚胎干细胞定向分化为心肌细胞的研究

目的探讨Ghrelin对人胚胎干(hES)细胞定向分化为心肌细胞的影响。方法以不同浓度Ghrelin诱导hES细胞定向分化为心肌细胞,显微镜下计数搏动细胞团的比例,应用实时PCR检测心肌特异性标志物的表达。应用RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色检测分化细胞中生长激素促分泌物受体1α(GHS-R1α)的表达,添加GHS-R1α拮抗剂[D-lys3]-GHRP-6,观察其对Ghrelin促分化作用的影响。结果与对照组比较,10-10、10-9及10-8 mol/L Ghrelin均可增加搏动细胞团的比例[搏动比例分别为(12.9±1.4)%,(19.5±2.2)%及(13.5±3.1)%vs(10.3±2.2)%,P<0.05]。RT-PCR分析显示,Ghrelin可上调α-肌球蛋白重链(α-MHC)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的表达[α-MHC:100%vs(40.1±13.2)%,P<0.001;cTnI:100%vs(52.6±9.8)%,P<0.001]。RT-PCR、Western blot及免疫荧光染色均显示GHS-R1α在不同阶段的分化细胞中表达,但酰基化和非酰基化Ghrelin的促分化作用相似,且添加GHS-R1α拮抗剂不能阻断Ghrelin的促分化作用。结论 Ghrelin可促进hES细胞定向分化为心肌细胞,该作用可能由GHS-R1α以外的信号途径所介导。

不同剂量重组人生长激素治疗对特发性矮小症患儿骨代谢、甲状腺功能和血清Ghrelin、IGF-1水平的影响

目的:探讨不同剂量重组人生长激素(r HGH)治疗对特发性矮小症(ISS)患儿骨代谢、甲状腺功能和血清食欲刺激素(Ghrelin)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)水平的影响。方法:选取2017年3月~2020年2月期间来我院接受治疗的ISS患儿60例,根据随机数字表法分为低剂量组(给予剂量0.10 U/kg·d进行治疗)和高剂量组(给予剂量0.20 U/kg·d进行治疗),各为30例。比较两组患儿生长发育情况[身高、体重、生长速度(GV)、身高标准积分(Ht SDS)]、骨代谢[骨碱性磷酸酶(BAP)、I型前胶原氨基端前肽(PINP)、I型胶原交联羧基末端肽(β-CTX)]、甲状腺功能[促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)]和血清Ghrelin、IGF-1水平。观察不良反应发生情况。结果:治疗1年后,高剂量组身高、体重、GV、Ht SDS高于低剂量组(P<0.05)。高剂量组治疗1年后BAP、PINP高于低剂量组,β-CTX低于低剂量组(P<0.05)。两组患儿治疗1年后TSH、FT3、FT4组内对比无统计学差异(P>0.05)。高剂量组Ghrelin低于低剂量组,IGF-1水平高于低剂量组(P<0.05)。两组总的不良反应发生率组间对比无统计学差异(P>0.05)。结论:相对于0.10 U/kg·d剂量的r HGH,0.20 U/kg·d剂量的r HGH可更好的促进ISS患儿生长发育,调节骨代谢和血清Ghrelin、IGF-1水平,且对人体甲状腺功能无影响。

妊娠期糖尿病母亲乳汁中胃生长素、脂联素、瘦素、真胰岛素水平及其与婴儿生长的关系

目的：探讨妊娠期糖尿病（gestational diabetes mellitus，GDM）产妇初乳和成熟乳中胃生长素、脂联素、瘦素、真胰岛素的水平及其与婴儿体格发育的关系。方法2010年1月至8月在中国医学科学院北京协和医院产科及北京妇产医院产科分娩的妊娠26周确诊为GDM、单胎妊娠、足月分娩、无其他合并症的孕妇及其健康新生儿，共52对，作为GDM组。同期单胎妊娠、足月分娩、无任何合并症的健康产妇及其健康新生儿，共49对，作为对照组。取产妇初乳和90 d的成熟乳，采用酶联免疫吸附试验检测乳汁中胃生长素、脂联素、瘦素及真胰岛素水平，婴儿90日龄时测量体重、身长及头围。采用两独立样本t检验、秩和检验及Spearman相关分析进行统计分析。结果（1）与对照组相比，GDM组胃生长素水平在初乳[136.7（102.7-181.4）与175.4（137.5-235.0）ng/L，t=－2.737]和成熟乳中[111.8（77.5-184.2）与210.9（147.3-381.9）ng/L，t=－3.268]均较低，脂联素水平在初乳[21.7（14.6-51.8）与57.0（23.1-113.9）μg/L，t=－2.858]和成熟乳中[11.7（8.4-14.4）与15.1（11.9-18.5）μg/L，t=－2.625]也较低，真胰岛素水平在初乳[22.8（13.4-50.2）与20.4（7.8-30.8） mU/L，t=－2.007]和成熟乳中[33.6（22.5-54.1）与23.5（13.5-31.6） mU/L，t=－2.009]较高，差异均有统计学意义（P值均＜0.05）。（2）GDM组初乳中，真胰岛素水平与胃生长素水平负相关（r=－0.342），与脂联素水平正相关（r=0.305）；在对照组中，成熟乳中的真胰岛素水平与初乳（r=0.456）和成熟乳中的瘦素水平正相关（r=0.629）；差异均有统计学意义（P值均＜0.05）。（3）GDM组初乳中，脂联素水平与新生儿出生体重负相关（r=－0.323），瘦素/脂联素比值与出生体重（r=－0.403）和出生头围（r=－0.327）负相关；成熟乳中脂联素水平与婴儿90日龄时身长负相关（r=－0.406）。对照组初乳中瘦素/脂联素比值与新生儿出生头围负相关（r=－0.370）；成熟乳中脂联素水平与婴儿90日龄时体重正相关（r=0.432）。差异均有统计学意义（P值均＜0.05）。结论 GDM组母乳中的激素水平与对照组不同，可能共同参与了对婴儿生长的调控作用。

胃促生长素对人主动脉平滑肌细胞增殖及线粒体融合蛋白2表达的影响

目的通过体外培养人主动脉平滑肌细胞(HASMCs),研究胃促生长素(ghrelin)对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及线粒体融合蛋白2(Mfn-2)表达的影响。方法体外培养HASMCs,第4~6代细胞用于试验。给予不同浓度(10^(-9)、10^(-8)、10^(-7)、10^(-6)、10^(-5) mol/L)的ghrelin或10^(-6) mol/L ghrelin不同时间(0、6、12、18、24h)处理,用四甲基偶氮唑蓝比色(MMT)法观察其对HASMC增殖的影响。RT-PCR,Western blot方法检测不同处理方法对Mfn-2表达的影响。结果 10^(-7)~10^(-5) mol/L的ghrelin可明显抑制HASMC增殖,浓度为10^(-6) mol/L抑制作用最为明显(P<0.01)。ghrelin在6~24h内均能明显抑制HASMC增殖,在24h达最高峰(P<0.01)。10^(-6) mol/L ghrelin能明显上调Mfn-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01)。10^(-6)mol/L ghrelin在18h上调Mfn-2mRNA和蛋白表达的作用最为明显(P<0.01)。结论 ghrelin可能通过上调Mfn-2的表达来抑制HASMC增殖。

复方地黄合剂联合生长激素对青春期大鼠性发育的调控作用

目的:探讨复方地黄合剂联合生长激素(rhGH)对青春期大鼠性发育及生长的调控作用。方法:将SPF级4周龄雌性SD大鼠随机分为正常组、中药组、rhGH组和联合组,分别予生理盐水或相应药物干预。每天观察实验动物阴道口开放(VO)时间;干预2周后计算子宫、卵巢指数及胫骨长度;Real-time荧光定量PCR法检测下丘脑组织KiSS-1、GPR54、Ghrelin mRNA的表达;ELISA法检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、Ghrelin以及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的表达。结果:中药组与联合干预组大鼠VO时间均较单用rhGH明显推后(P<0.05),且联合干预组大鼠胫骨长度较中药组显著增加(P<0.05)。中药组大鼠子宫卵巢脏器指数明显降低,加用rhGH联合干预后子宫、卵巢指数未见明显增加(P>0.05)。中药组下丘脑KiSS-1、GPR 54 mRNA表达均降低,而rhGH组KiSS-1、GPR54 mRNA表达明显增高(P<0.01),联合干预后亦呈降低趋势;Ghrelin mRNA表达各组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。中药组血清LH、FSH、Ghrelin较正常组均明显降低(P<0.01),而rhGH组均明显升高(P<0.01),联合组干预后亦呈明显降低趋势(P<0.01);血清IGF-1各组之间没有显著性差异(P>0.05)。结论:复方地黄合剂可以抑制KiSS-1、GPR54基因表达,调控外周FSH、LH激素水平,抑制性发育,配合生长激素可以有效增加动物体长,二者合用可达到控制性早熟和改善终身高的效果。