茶黄素(TF_(1))对人肝癌Bel-7402细胞的抑制作用及机制研究

探究茶黄素(TF_(1))对人肝癌Bel-7402细胞的影响,并阐明其作用机制。通过CCK-8检测细胞活力,用平板克隆形成试验检测细胞增殖能力,细胞划痕愈合试验和Transwell小室法检测细胞迁移,用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、PARP)、迁移相关蛋白(E-cad、N-cad、Vimentin、MMP9)和信号通路相关蛋白(TGF-β、smad3、p-smad3)表达水平。结果表明,不同剂量TF_(1)均可抑制Bel-7402细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,并且存在剂量依赖性,剂量越大,抑制作用越强(P<0.05)。与对照组相比,试验组Bax、E-cad蛋白表达水平较高,Bcl-2、PARP,N-cad、Vimentin、MMP9、TGF-β、smad3、p-smad3表达水平较低(P<0.05)。茶黄素可能通过TGF-β信号通路抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖、迁移,且促进其凋亡。

油茶皂苷通过内质网应激途径诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的研究

目的探讨油茶皂苷诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用及其作用机制。方法采用MTT法考察了油茶皂苷对肿瘤细胞增殖的影响;用Western blot方法分析油茶皂苷对caspase-3、PARP、Bip、ATF6、IRE1、Perk、eIF2a和eEF2蛋白质表达的影响。结果油茶皂苷(10～30 mg.L-1)明显抑制HepG2细胞的增殖。同时可激活Caspase信号通路,诱发PARP底物的断裂;进一步上调IRE1表达量及活化Perk、eIF2a和eEF2蛋白。结论油茶皂苷通过内质网应激途径诱导人肝癌细胞HepG2发生凋亡。

白花丹醌对人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721增殖及其Bax/Bcl-2、Cyclin D1 mRNA表达的影响

目的探索白花丹醌对人肝癌细胞HepG2、SMMC-7721增殖的影响及其影响机制。方法人肝癌细胞HepG2和SMMC-7721分别与白花丹醌共培养,通过显微图像、MTT法检测了白花丹醌对上述两种肝癌细胞增殖情况的影响,利用实时荧光定量PCR(Qpcr)检测其Bax/Bcl-2,Cyclin D1mRNA表达的影响。结果显微照像和MTT法测定都表明白花丹醌能明显地抑制两种肝癌细胞的增殖;Qpcr检测表明,对HepG2和SMMC-7721,白花丹醌能明显上调Bax/Bcl-2mRNA比值(P=0.0017和P=0.00104),同时明显下调Cy-clin D1 mRNA水平(P=0.0287和P=0.0165)。结论白花丹醌能抑制HepG2、SMMC-7721的增殖,其机制与Bax/Bcl-2比值上升和Cyclin D1转录水平下降有关。

芦丁对HepG2细胞生长的影响

目的观察芦丁（Rutin）对人肝癌HepG2的生长和增殖的影响。方法体外培养HepG2细胞，用甲基塞唑基四唑（MTT）法、3^H—TdR掺人法测定芦丁对人肝癌HepG2的生长和增殖抑制情况，并且用荧光染色法在Olympus荧光显微镜下观察芦丁对HepG2细胞凋亡的影响，流式细胞仪检测细胞周期变化。结果芦丁能抑制HepG2细胞的生长、增殖、诱发细胞凋亡；在50～250μmol／L浓度范围内处理的HepG2，G0／G1期细胞增加，G2／M期细胞减少，细胞周期阻滞于G0／G1期。结论芦丁能抑制HepG2细胞的生长，并诱发细胞凋亡，呈浓度依赖性。

新型线粒体靶向铂类配合物Mor-platin抑制肝癌细胞HepG2增殖和抑制细胞球侵袭的研究

目的:探讨新型线粒体靶向性铂类配合物Mor-platin对人肝癌细胞HepG2的细胞增殖和细胞球侵袭的影响。方法:运用细胞毒性实验CCK-8法,比较新型线粒体靶向性铂类配合物Mor-platin和经典铂类抗癌药顺铂(cisplatin)对人肝癌细胞HepG2的细胞增殖抑制作用;利用激光共聚焦显微镜观察Mor-platin是否靶向于线粒体;利用透射电子显微镜观察Mor-platin对细胞线粒体形态的影响;流式细胞仪检测Mor-platin作用细胞后细胞凋亡的改变;建立三维肿瘤细胞球模型,探讨Mor-platin对细胞球侵袭的影响。结果:Mor-platin能够抑制HepG2细胞增殖,半数抑制浓度(IC_(50))少于cisplatin;Mor-platin能够靶向到线粒体;加Mor-platin后,细胞线粒体膜结构不完整,嵴不清晰或消失以及线粒体中有大片空白区域;Mor-platin引起的细胞凋亡具有剂量依赖性;三维肿瘤细胞球模型显示,Mor-platin处理的细胞球面积小于对照组。结论:新型线粒体靶向性铂配合物Mor-platin能够靶向于细胞的线粒体,引起线粒体形态变化,抑制细胞增殖,最终导致细胞凋亡,Mor-platin还能抑制三维肿瘤细胞球侵袭,比cisplatin具有更好的抗癌效果。上述研究结果提示Mor-platin具有成为新抗肿瘤药物的潜质。

呋喃骈呋喃木脂素的体外抗肿瘤活性

利用 MTT快速比色法 ,以长春新碱 (Vincristin Sulfas)为阳性对照 ,研究了从玄参科(Scrophulariaceae)兰石草属兰石草 (L ancea tibetica Hook Fet Thoms)中提取的呋喃骈呋喃木脂素对人肝癌细胞 (SMMC- 772 1) ,人宫颈癌细胞 (Hela) ,中国仓鼠肺成纤维细胞 (V79)及小鼠黑色素肉瘤细胞 (B16 )的体外抗肿瘤活性 .结果显示 :呋喃骈呋喃木脂素 L C1对 4种细胞均有较强的抑制作用 ,IC50 在 4 0 .2～ 87.9μg/ m L范围 ,它对 B16的抑制作用强于长春新碱 .但是 ,L C2和 L C3均无抗癌活性 (>4 0 0 μg/ m L) ,可能 L C2和 L C3的酚羟基上的 H被糖基取代而使抗癌活性丧失 .

莪术油配伍椒目仁油对小鼠移植性肿瘤的抑制作用

目的观察不同剂量莪术油配伍椒目仁油对小鼠移植性肿瘤S180的抑瘤作用,以及对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480的体外抑瘤作用。方法 72只二级昆明小鼠采用肿瘤移植法建立小鼠荷瘤动物模型;椒莪软胶囊灌胃给药,剂量分别为0.3、0.6、1.2 ml/kg;氟尿嘧啶22.5 mg/kg作为阳性对照药腹腔注射给药;连续给药15 d,观察药物对肿瘤生长的抑制作用。对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480进行传代培养后,制备不同剂量(椒莪软胶囊0.015 625、0.031 25、0.062 5、0.125、0.25、0.5、1、2、4 mg/ml)含药血清、氟尿嘧啶阳性药血清和肿瘤移植模型不用药对照血清,作用于人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480,四甲基偶氮唑蓝比色法观察血清对两种细胞的抑制作用。椒莪软胶囊0.0、6.25、12.5、25.0μg/ml给药15 h后,经流式细胞仪测定对人源性肝癌细胞株HepG2细胞凋亡的影响。结果①椒莪软胶囊0.3、0.6、1.2 ml/kg肿瘤抑制率分别为19.73%、32.22%和46.68%。随着给药剂量的增加,坏死的肿瘤细胞所占比例也相应增加,生长活跃的肿瘤细胞逐渐减少。②抑制作用随剂量升高而作用增强,对人源性肝癌细胞株HepG2体外最低药物物浓度为0.062 5 mg/ml,对大肠癌细胞株SW480体外最低药物浓度为0.125 mg/ml。③椒莪软胶囊可明显促进人源性肝癌细胞株HepG2的细胞凋亡。结论椒莪软胶囊对小鼠移植性肿瘤有明显的抑制作用,对人源性肝癌细胞株HepG2和大肠癌细胞株SW480有明显的抑制作用。椒莪软胶囊在临床具有广阔的应用前景。

葡萄籽原花青素增强X射线辐射敏感性的实验研究

目的:研究葡萄籽原花青素(GSPs)对人肝癌HepG2细胞、人宫颈癌Hela细胞和人白血病K562细胞的X射线增敏作用,并探讨其作用机制。方法:应用SRB法和集落形成法测定GSPs对三株细胞的X射线增敏作用,单因素方差分析确定各因素对细胞杀伤的贡献,单击多靶模型曲线拟合计算增敏比。结果:SRB检测结果表明,GSPs可以抑制三株细胞的增殖,呈现时间和剂量依赖效应;但对不同细胞的增殖抑制作用差异较大,对人白血病K562细胞的抑制作用最强,对人肝癌HepG2细胞、人宫颈癌Hela细胞的抑制作用较弱;对X射线增敏作用结果表明,GSPs对人白血病K562细胞的增敏作用最强,最佳增敏剂量为6.25～12.5μg/mL,对人肝癌HepG2和人宫颈癌Hela细胞的增敏作用相似,最佳增敏剂量为12.5～25μg/mL;集落形成法检测结果表明,应用增敏剂量的GSPs后,对人白血病K562细胞表现出较好的辐射增敏作用,平均致死剂量D0值和准阈剂量Dq减小,细胞对X射线辐射敏感性增加,亚致死损伤修复减少,增敏比为1.94。结论:GSPs可以增强肿瘤细胞对X射线的敏感性,最佳增敏剂量为12.5～25μg/mL,其机理可能通过抗氧化作用,调节细胞细胞内氧平衡,诱导细胞产生G1期阻滞而发挥辐射增敏作用。

放射线对肝癌细胞中端粒酶启动子活性的影响

目的:研究放射线对不同的肝癌细胞株中人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子活性的影响。方法:报告质粒phTERTp-Luc经脂质体METAFECTENE介导瞬时转染4种不同的肝癌细胞株后,给予2 Gyγ射线照射,观察照射组与非照射组中荧光素酶的表达。结果:瞬时转染4种不同的肝癌细胞株后,检测到照射可经hTERT启动子而诱导荧光素酶的表达增强,即hTERT启动子在2 Gy照射组中比在非照射组中具有更高的活性。结论:2Gyγ射线可以诱导肝癌细胞中hTERT启动子活性增强,有望用于增强肝癌细胞中hTERT启动子介导的靶向基因治疗,并为进一步深入研究奠定了基础。

旱生香茶菜总二萜对人肝癌细胞株增殖、荷人肝癌细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的影响

目的:研究旱生香茶菜总二萜(IXD)对人肝癌细胞株(CA)增殖、荷CA裸鼠皮下移植瘤生长的影响。方法:体外试验采用磺酰罗丹明B(SRB)法测试IXD对CA的IC50值,体内试验测定IXD不同剂量对荷CA裸鼠移植瘤增殖的抑制率。结果:IXD对CA的IC50值为6·17μg/ml,其在剂量为100、200(mg·kg)/d应用12d时抑制率分别为33·52%、38·19%,与生理盐水阴性对照组比较具有显著性差异(P<0·05)。结论:IXD对CA有较强的细胞毒活性,对荷CA裸鼠移植瘤生长具有一定的抑制作用。

橙皮素衍生物对肝癌细胞SMMC-7721的促凋亡作用

目的以橙皮素为原型,合成了新型化合物HY-12,研究其体外对SMMC-7721细胞的促凋亡作用及机制。方法在3个时间点(24、48、72 h)采用MTT比色法观察不同浓度HY-12对肝癌细胞、肝细胞增殖的影响,计算半数抑制率(IC50)。根据结果选取了24 h,12.5×10-6,25×10-6,50×10-6mol/L 3个浓度进行下述实验。通过Annexin V/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率;制备细胞爬片,Hoechst 33342染色,在荧光倒置显微镜下观察细胞凋亡的形态学改变;采用Western blot法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白水平的表达情况。结果 (1)MTT法显示在对肝细胞活性无显著影响的前提下,HY-12在体外可抑制SMMC-7721细胞的增殖,且具有剂量-时间依赖性;(2)流式细胞仪检测显示HY-12作用后,SMMC-7721细胞凋亡率增加,且呈浓度依赖性趋势;(3)经Hoechst 33342染色,药物处理后细胞核皱缩断裂呈现亮蓝色新月状;(4)Western blot结果显示药物处理可以使Bax蛋白表达上调,相反地Bcl-2蛋白表达下调。结论橙皮素衍生物HY-12有明显抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖作用。其机制可能是通过调节Bcl-2、Bax表达以诱导细胞凋亡。HY-12可能成为治疗肝癌的有效化疗药物。

柔肝解毒方含药血清体外抗肝癌的实验研究

目的:通过体外抑制肿瘤细胞增殖试验,观察柔肝解毒方体外防治肝癌的药效作用。方法:制备柔肝解毒方含药血清,用MTT法观察含药血清对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721细胞增殖的影响。结果:柔肝解毒方含药血清能显著抑制人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721的增殖,对HepG2的最高抑制率为69.73%,对SMMC-7721的最高抑制率为62.64%,与空白对照组及PBS组相比差异显著(P<0.01);最高剂量组与含5-氟尿嘧啶血清抑制肝癌细胞的效果相比,无显著性差别(P>0.05)。中药组的抑制率呈一定的量效关系,随着给药剂量的增加其抑制率升高。结论:柔肝解毒方具有良好的体外抗肝癌的药效作用。

结核分枝杆菌融合蛋白和分泌蛋白对人肝癌细胞HepG-2影响和作用

目的探讨结核分枝杆菌融合蛋白对人肝癌细胞HepG-2的抑制作用。方法构建含3种目的基因的表达载体pProEXHTa-Ag85B-Hsp16.3、pProEXHTa-Ag85B-ESAT6和pProEXHTb-Hsp16.3,分别转入宿主菌E.coli DH5α中,诱导表达后分别获得Ag85B-Hsp16.3、Ag85B-ESAT6和Hsp16.3三种蛋白,纯化后复性。分别作用于肝癌细胞HepG-2,MTT法检测细胞生长情况。结果成功纯化并复性三种蛋白。MTT实验结果显示,三种蛋白均对HepG-2细胞的生长具有抑制作用,抑制强度与蛋白终浓度和作用时间相关,但各蛋白的抑制作用无明显差异。结论结核分枝杆菌的部分分泌蛋白对肝癌细胞HepG-2具有抑制作用。

钙调蛋白拮抗剂对人胃癌细胞效应机理的研究——钙调蛋白与磷酸二酯酶活性测定分析*

我们曾经证明钙调蛋白(Calmodulin,CaM)拮抗剂三氟拉嗪(Trifluoperazine,TFP)有抑制人胃癌细胞增殖和诱导细胞形态向正常分化的效应。本文用CaM活性测定箱方法测定了TFP处理的人胃癌MGC-803细胞胞质内的CaM活性。同时也测定了磷酸二酯酶(Phosphodiesterase.PDE)活性的变化。结果表明TFP选择性抑制胞质内依赖Ca^(2+)/CaM的PDE活性。氨茶碱有抑制CaM活化PDE的作用。本文对TFP作用机理及在调控癌细胞增殖及分化中的意义进行讨论。

利多卡因抑制内皮细胞粘附因子表达进而抑制肝癌细胞粘附脐带静脉内皮细胞

目的探讨利多卡因对血管内皮细胞粘附因子表达的影响。方法采用不同浓度利多卡因预处理脐带静脉内皮细胞(HUVECs)30 min后,加入肿瘤坏死因子α(TNFα)进行刺激。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测选择素E(CD62E)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达量,蛋白免疫印迹分析NF-Kappa B(NF-κB)通路蛋白的改变,并通过细胞粘附实验评估利多卡因预处理对肝癌细胞(Hep G2)粘附于HUVECs的影响。结果利多卡因预处理可以明显抑制p65并抑制Hep G2粘附于HUVECs。q RT-PCR结果表明利多卡因预处理可明显抑制TNF-α刺激后的CD62E、VCAM-1和ICAM-1表达水平的增高。结论利多卡因可能通过抑制NF-κB通路进而抑制细胞粘附因子表达并抑制结肝癌细胞粘附于血管内皮细胞。

脱氧野尻霉素衍生物抗乙型肝炎病毒的体外试验研究

目的：观察脱氧野尻霉素（DNJ）衍生物N-苄基-1-脱氧野尻霉素（PDNJ）与N-壬基-1-脱氧野尻霉素（NN—DNJ）的体外抗乙型肝炎病毒（HBV）作用。方法：以HBV DNA转染的人肝癌细胞株HepG22，2，15细胞为靶细胞，以不同浓度的试验药物培养细胞，在第6天、第10天时应用时间分辨免疫荧光分析法和荧光实时定量聚合酶链反应法检测培养基上清液中HBsA队HBeAg和HBV DNA，同时应用MTT法检测药物对细胞的毒性。结果：P—DNJ、NN—DNJ在试验浓度（5～125μg·mL^-1）内未见细胞毒性作用，在浓度为125μg·mL^-1时能显著减少细胞培养基上清液中HBsAg、HBeAg、HBV DNA的分泌。结论：P—DNJ、NNDNJ在体外细胞培养试验中发现有杭HBV作用。

淫羊藿苷与黄芩苷联合多柔比星对肝癌细胞APRIL表达和血管内皮细胞生长抑制的研究

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(ICA)、黄芩苷(BAI)联合化疗药多柔比星(ADM)抑制肝癌HepG2细胞APRIL、VEGF的表达,进而抑制血管内皮细胞生长的作用机制。方法:MTT法检测血管内皮细胞ECV304的增殖活性;RT-PCR法检测HepG2细胞APRIL表达水平和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的表达情况;免疫细胞化学检测HepG2细胞VEGF表达水平。结果:HepG2细胞中VEGF蛋白、APRIL和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的mRNA均呈高表达状态,且APRIL与VEGF两者高表达呈显著正相关(P<0.001);HepG2细胞经25μg/mLICA、200μg/mLBAI、2μg/mLADM以及12.5μg/mLICA+1μg/mLADM、100μg/mLBAI+1μg/mLADM5组药物处理后,与未用药对照组相比,APRILmRNA表达水平明显下降;HepG2细胞经5组药物处理后的上清液与未用药对照组相比,对ECV304细胞具有明显的增殖抑制作用,抑制率分别为(2.79±5.57)%、(15.20±3.79)%、(12.10±4.50)%、(19.34±8.17)%和(20.27±4.77)%(P均<0.05);HepG2细胞经5组药物处理后,与未用药对照组相比,VEGF的表达水平明显下降。结论:A-PRIL具有促进静脉内皮细胞ECV304增殖的作用。ICA、BAI联合ADM能降低HepG2细胞中APRIL与VEGF的表达水平,从而发挥其抑制血管内皮细胞ECV304生长的作用。

丹参酮ⅡA与丹参酮ⅡA磺酸钠对HepG2细胞的抑制作用

目的比较丹参酮ⅡA与丹参酮ⅡA磺酸钠对人肝癌HepG2细胞的体外增殖抑制作用。方法采用改良MTT法测定丹参酮ⅡA与丹参酮ⅡA磺酸钠对HepG2的增殖抑制作用,倒置显微镜下观察两者对HepG2细胞的形态学影响。结果3.4～27.2μmol·L-1丹参酮ⅡA对HepG2细胞有明显的增殖抑制作用,并呈时间和剂量依赖性,而对应各浓度丹参酮ⅡA磺酸钠对HepG2细胞均无增殖抑制作用。结论丹参酮ⅡA对HepG2细胞具有显著增殖抑制作用,其与丹参酮ⅡA磺酸钠在抗肝癌的药效方面可能存在差异。

表柔比星联合川芎嗪对人肝癌细胞TGF-β1/Smads通路的影响

目的:研究表柔比星(epirubicin,EPI)联合川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对人肝癌细胞TGF-β1/Smads通路的影响,以探讨联合用药的效果。方法:人肝癌细胞分为4个组,即对照组、EPI6.0μg/m L组、TMP0.2mg/m L组、EPI6.0μg/m L+TMP0.2mg/m L组,各组给予对应药物干预24h,CCK-8细胞计数法测定细胞增殖水平的变化,real-time PCR方法检测各组肝癌细胞TGF-β1、Smad4及Smad7 mRNA表达,western-blot方法检测各组细胞TGF-β1及Smad4蛋白表达。结果:在EPI、TMP及EPI+TMP干预24h后,肝癌细胞的增殖明显受到抑制,肝癌细胞TGF-β1及Smad7的mRNA及蛋白表达明显下调,而Smad4的mRNA及蛋白表达明显上调,联合用药的效果较单一药物效果强(均P<0.05)。结论:EPI及TMP的抗肝癌作用机理之一可能与它们对肝癌细胞TGF-β1/Smads通路的调控有关,联合用药的效果较单一药物效果强。

羟基喜树碱双嵌段共聚物纳米粒的抗肿瘤作用

目的研究羟基喜树碱双嵌段共聚物纳米粒(MePEG-PLGA-HCPT-NPs)的抗肿瘤作用。方法选择人肝癌细胞株Bel-7402为体外模型,采用MTT法观察体外肝癌细胞的生长和增殖抑制情况,评价MePEG-PLGA-HCPT-NPs对肝癌细胞的毒性作用;采用激光共聚焦荧光显微镜技术观察其对肝癌细胞摄取药物的影响;采用小鼠H22肝癌细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验观察荷瘤动物的生长情况,测定肿瘤生长抑制率。结果 MePEG-PLGA-HCPT-NPs能抑制肝癌细胞的生长增殖,且随羟基喜树碱浓度的升高而增强;激光共聚焦荧光照片显示载药纳米粒能有效地被Bel-7402细胞摄取;MePEG-PLGA-HCPTNPs对小鼠的H_(22)实体瘤生长具有明显的抑制作用,低、中、高剂量组的生长抑瘤率分别为37.62%、50.31%和70.25%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MePEG-PLGA-HCPT-NPs具有较强的体外、体内抗肿瘤作用。与羟基喜树碱注射剂相比,MePEG-PLGA-HCPT-NPs的抑瘤率更高,且与剂量有关,并对肿瘤生长的抑制更为持久。