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A novel human mAb (MERS-GD27) provides prophylactic and postexposure efficacy in MERS-CoV susceptible mice 被引量:14
1
作者 Peihua Niu Guangyu Zhao +4 位作者 Yao Deng Shihui Sun Wenling Wang Yusen Zhou Wenjie Tan 《Science China(Life Sciences)》 SCIE CAS CSCD 2018年第10期1280-1282,共3页
Dear Editor,Since September 2012, the Middle East respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV) cases have been reported in more than 27 countries, and more than 2,000 cases have been confirmed in the laboratory (http:/... Dear Editor,Since September 2012, the Middle East respiratory syndrome coronavirus (MERS-CoV) cases have been reported in more than 27 countries, and more than 2,000 cases have been confirmed in the laboratory (http://www.who.int/emergencies/mers-cov/en/). MERS-CoV causes an acute and severe respiratory illness with a high mortality rate(~35%) in humans (Shi et al., 2017, Zaki et al., 2012).Neutralizing antibodies targeting the spike of MERS-CoV have been shown to be a therapeutic option for treatment of lethal disease (Agrawal et al., 2016, Ying et al., 2014). 展开更多
关键词 provides prophylactic and postexposure efficacy in MERS-CoV susceptible mice A novel human mab MERS-GD27 Figure DPP
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鼠源性抗人HAAH mAb可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达 被引量:2
2
作者 汪桦 薛小平 +4 位作者 雷迎峰 宋凯 呼延霆 王伟 杨慧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期467-470,共4页
目的:从分泌抗人类天冬氨酰基β-羟化酶(HAAH)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞G3/F11中,克隆出鼠源an-ti-HAAH mAb重、轻链可变区基因,构建Anti-HAAH的单链抗体(scFv),并进行scFv基因的蛋白表达。方法:提取杂交瘤细胞G3/F11的总RNA,通过RT-... 目的:从分泌抗人类天冬氨酰基β-羟化酶(HAAH)单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞G3/F11中,克隆出鼠源an-ti-HAAH mAb重、轻链可变区基因,构建Anti-HAAH的单链抗体(scFv),并进行scFv基因的蛋白表达。方法:提取杂交瘤细胞G3/F11的总RNA,通过RT-PCR扩增出VH和VL基因;再利用重叠延伸PCR(SOE-PCR),通过设计在引物上的linker序列,将VH和VL拼接为完整anti-HAAHscFv基因。将测序正确的scFv基因克隆入pHEN1载体,并利用E.coliHB2151进行蛋白表达;通过SDS-PAGE,Western blot分析其表达状况,ELISA鉴定其抗原结合活性。结果:测序结果显示,本实验成功地构建出鼠源anti-HAAHVH-linker-VLscFv基因,且VH、VL均具有完整正确的小鼠抗体骨架区和互补决定区结构,所得的scFv基因片段全长744bp,编码248个氨基酸。SDS-PAGE和Westernblot分析表明,pHEN1-anti-HAAH在E.coliHB2151可表达为Mr约27000的可溶性scFv蛋白,表达量为7.8%。间接ELISA检测显示,可溶性鼠源anti-HAAHscFv蛋白具有较高的抗原结合活性。结论:成功扩增出的鼠源anti-HAAHmAbVH区和VL区基因,并构建为anti-HAAHscFv基因。然后,利用pHEN1载体对anti-HAAHscFv基因进行成功表达,为进一步研究其生物活性及应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人类天冬氨酰基β-羟化酶 单链抗体 抗体可变区 单克隆抗体 蛋白表达
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抗胃癌单抗3H11可变区氨基端序列对抗体活性的影响 被引量:4
3
作者 李竞 王琰 +5 位作者 王卓智 刘群英 化冰 陈宇萍 朱迎春 董志伟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第4期369-373,共5页
采用 R T P C R 方法, 利用第一骨架区通用引物扩增重链 Fd 段和κ链的基因, 克隆到 Fab 表达载体中, 在大肠杆菌中获得了表达但未检测到抗原结合活性. 根据已克隆的3 H11 V L、 V H 的真实序列, 重新设计... 采用 R T P C R 方法, 利用第一骨架区通用引物扩增重链 Fd 段和κ链的基因, 克隆到 Fab 表达载体中, 在大肠杆菌中获得了表达但未检测到抗原结合活性. 根据已克隆的3 H11 V L、 V H 的真实序列, 重新设计κ链及 Fd 段5′端引物, 分别将骨架区引物在κ链及 Fd 段5′端所造成的氨基酸残基改变纠正为原始序列, 构建分别含有矫正后κ链或矫正后 Fd 以及二个链均得到矫正的 Fab 表达载体, 这些载体在大肠杆菌中均获得类似水平的表达, 对任何一个链的矫正均可部分恢复 Fab 段胃癌细胞的结合活性. 结果说明在构建小分子抗体时, P C R 引物引入的轻。 展开更多
关键词 胃癌 免疫球蛋白 可变区基因 单克隆抗体
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抗CD20单克隆抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的实验观察 被引量:4
4
作者 高磊 周倩 +2 位作者 钱卫珠 范晓强 郭亚军 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2008年第24期1864-1867,1881,共5页
目的:以人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型为基础,研究抗CD20单克隆抗体体内、体外活性,评价该抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的有效性。方法:体内实验:建立人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型。52只荷瘤鼠随机分为5组进行实验。用TUNE... 目的:以人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型为基础,研究抗CD20单克隆抗体体内、体外活性,评价该抗体联合CHOP化疗方案治疗人B细胞淋巴瘤的有效性。方法:体内实验:建立人B细胞淋巴瘤裸鼠皮下移植模型。52只荷瘤鼠随机分为5组进行实验。用TUNEL法检测肿瘤凋亡,并绘制肿瘤体积曲线和裸鼠体质量曲线。体外实验:用CellTiter96 AQueous非同位素细胞增殖试验试剂盒检测抗CD20单克隆抗体、化疗和联合化疗对Raji细胞体外杀伤作用,并绘制剂量反应曲线。结果:体内实验:鼠抗人CD20单抗组及嵌合CD20抗体组均出现大量肿瘤细胞凋亡。联合治疗组疗效最佳,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。化疗组及联合治疗组体质量下降明显,与其他组相比差异有统计学意义,P<0.05。体外实验:发现鼠抗人CD20单克隆抗体及嵌合型CD20抗体均可增加Raji细胞对化疗药物的细胞毒敏感性。结论:CD20单克隆抗体对B细胞淋巴瘤具有明显的抑制作用,可以诱发大面积肿瘤细胞凋亡,能提高肿瘤对化疗药物的细胞毒敏感性,且较常规化疗毒副反应小。 展开更多
关键词 抗CD20单克隆抗体 人B细胞淋巴瘤 化学治疗
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抗膀胱癌单抗Fab段基因的克隆及表达 被引量:3
5
作者 周丽君 王琰 +2 位作者 白银 张海荣 余莉章 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2002年第2期117-121,共5页
目的:克隆抗膀胱癌单抗BDI的Fab段基因并在大肠杆菌中表达。方法:用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR),从分泌抗人膀胱癌的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆k链和Fd段基因,克隆到Fab表达载体中,在大肠杆菌表达噬菌体抗体和可溶Fab;运用PCR介导... 目的:克隆抗膀胱癌单抗BDI的Fab段基因并在大肠杆菌中表达。方法:用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR),从分泌抗人膀胱癌的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆k链和Fd段基因,克隆到Fab表达载体中,在大肠杆菌表达噬菌体抗体和可溶Fab;运用PCR介导的定位点突变改造V_H氨基端序列;用ELISA、免疫组化法等进行特异性鉴定。结果:从分泌抗膀胱癌的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆了重链Fd段和k链基因,在大肠杆菌中获得有抗原结合活性的噬菌体抗体和可溶性Fab的表达,但活性很弱,将V_H氨基端序列矫正为亲本单抗原始序列后,明显改善了其活性,通过ELISA、免疫组化及模拟抗体库筛选证实了所获抗体片段的特异性结合及在抗体库技术中的可用性。结论:获得了功能性抗膀胱癌小分子抗体,并再次提示抗体氨基端序列对抗体活性的影响的重要性。 展开更多
关键词 克隆 表达 抗膀胱癌单抗 免疫球蛋白可变区基因 FAB 膀胱癌
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利用五特征转基因小鼠获得的全人源抗VEGF单抗的抑制血管生成及抗肿瘤活性(英文)
6
作者 梁小庆 石晨阳 +4 位作者 王可 何心 刘思国 黄晓峰 刘煜 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期560-566,共7页
为研究一种全人源抗VEGF单克隆抗体在体外和体内的抑制血管生成和抗肿瘤活性,利用细胞划痕实验检测抗体抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移的活性;MTT法检测抗体抑制分泌VEGF的肿瘤细胞增殖能力;Annexin V/PI双染检测抗体诱导肿瘤细胞凋... 为研究一种全人源抗VEGF单克隆抗体在体外和体内的抑制血管生成和抗肿瘤活性,利用细胞划痕实验检测抗体抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移的活性;MTT法检测抗体抑制分泌VEGF的肿瘤细胞增殖能力;Annexin V/PI双染检测抗体诱导肿瘤细胞凋亡活性;通过建立胃癌原位模型,静脉注射给予不同剂量的抗体,免疫组化方法检测抗体在体内的抑制血管生成和抗肿瘤活性。结果表明一定剂量的全人源抗VEGF抗体能够显著抑制HUVEC细胞的迁移,明显抑制4种分泌VEGF的肿瘤细胞增殖并显示了一定的诱导肿瘤细胞凋亡的能力。静脉注射一定剂量的抗体能够显著抑制胃癌原位肿瘤的生长和肿瘤血管生成。进而表明该全人源抗VEGF单克隆抗体能够在体外和体内都表现出显著的抑制血管生成和抗肿瘤活性。 展开更多
关键词 五特征转基因小鼠 全人源单克隆抗体 抗血管生成 抗肿瘤
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利用五特征转基因小鼠制备全人源血管内皮生长因子165单克隆抗体
7
作者 刘煜 顾月 +3 位作者 恽冬杰 陈建泉 刘思国 张爱民 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期269-272,共4页
目的:利用转入人免疫球蛋白基因的五特征小鼠制备全人源血管内皮生长因子165(VEGF165)单克隆抗体,并初步探讨该单抗的抗肿瘤活性。方法:采用常规杂交瘤细胞融合技术,利用间接ELISA效价测定方法筛选能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株;比较了... 目的:利用转入人免疫球蛋白基因的五特征小鼠制备全人源血管内皮生长因子165(VEGF165)单克隆抗体,并初步探讨该单抗的抗肿瘤活性。方法:采用常规杂交瘤细胞融合技术,利用间接ELISA效价测定方法筛选能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株;比较了五特征小鼠和BALB/c小鼠的免疫效果;亲和色谱法从腹水中纯化单抗;利用分泌VEGF的人膀胱癌细胞系T24细胞考察单抗的体外抗肿瘤活性。结果:成功获得了4株能稳定分泌表达单抗的杂交瘤细胞株(V2,V50,V71,V75),建立了间接ELISA效价测定方法,发现同样方法免疫的BALB/c鼠血清效价约为五特征小鼠的10倍。采用甘露糖结合蛋白(MBP)亲和色谱柱从腹水中获得了纯化的单抗样品,经SDS-PAGE和Western blotting检测,证实该单抗为全人源VEGF165IgM单抗。体外抗肿瘤活性结果显示,V2、V75单抗对人类膀胱癌细胞系T24细胞的增殖有较好的抑制作用。结论:可利用五特征小鼠制备全人源抗VEGF单抗,该单抗具有潜在的抗肿瘤活性。 展开更多
关键词 五特征小鼠 全人源单抗 抗肿瘤 血管内皮生长因子165
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抗人小细胞肺癌单抗2F7人-鼠嵌合Fab片段基因的构建和表达
8
作者 林琳 鲁驰 +2 位作者 朱明洁 胡晶莹 赵新泰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期173-176,共4页
目的 :通过基因工程抗体改造获得具有与人小细胞肺癌有特异性反应的人 鼠嵌合抗体 2F7Fab片段。方法 :采用RT PCR技术从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆该抗体的重、轻链可变区基因 ,将 2F7单抗的重、轻链可变区基因装入带... 目的 :通过基因工程抗体改造获得具有与人小细胞肺癌有特异性反应的人 鼠嵌合抗体 2F7Fab片段。方法 :采用RT PCR技术从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆该抗体的重、轻链可变区基因 ,将 2F7单抗的重、轻链可变区基因装入带有人恒定区基因的表达载体pSW1 Fab中 ,构建得到pSW1 2F7Fab ,转化受体菌E .coilXL1 Blue ,IPTG诱导表达 ,经Westernblot和ELISA鉴定表达蛋白的活性。结果 :从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆获得了抗体重、轻链可变区基因。测序证实 2F7单抗的重链 (VH)可变区基因全长 36 2bp ,编码 12 0个氨基酸 ;轻链 (VL)可变区基因全长 319bp ,编码10 5个氨基酸。构建的 2F7人 鼠嵌合Fab表达载体诱导后获得了目的蛋白的表达 ,主要分泌在菌液的上清中 ,表达量较高且稳定 ,具有与NCI H1 2 8细胞特异性结合的活性。结论 :构建和表达了抗人小细胞肺癌单抗 2F7人 鼠嵌合Fab片段 ,表达产物具有与抗原结合的特异性 ,为进一步研究和应用打下了基础。 展开更多
关键词 抗人小细胞肺癌单抗 人-鼠嵌合抗体 FAB片段 基因工程
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利用bcl-2抗Fas凋亡特性联合Fas抗体促进人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖 被引量:1
9
作者 蒋黎 兰林 +2 位作者 李俊刚 王宇明 刘国栋 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第19期2445-2447,2450,I0003,共5页
目的移植bcl-2转基因HepaRG细胞到小鼠体内,并联合使用Jo2抗体诱导鼠肝细胞凋亡策略,促进人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖。方法SCID鼠经脾移植2×106bcl-2转基因HepaRG细胞,移植后1d始腹腔注射0.2mg/kgJo2抗体,每周1次,持续10周为实验... 目的移植bcl-2转基因HepaRG细胞到小鼠体内,并联合使用Jo2抗体诱导鼠肝细胞凋亡策略,促进人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖。方法SCID鼠经脾移植2×106bcl-2转基因HepaRG细胞,移植后1d始腹腔注射0.2mg/kgJo2抗体,每周1次,持续10周为实验组;移植未转染bcl-2基因的HepaRG细胞,同样给予Jo2抗体腹腔注射为对照1组,移植未转染bcl-2基因的HepaRG细胞,未腹腔注射Jo2抗体为对照2组,建立人鼠嵌合肝动物模型。从2周开始,后4、8、12、16、20、24周,分别采用免疫组化、免疫荧光和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同时相点实验组和对照组嵌合肝中肝组织人清蛋白以及人清蛋白mRNA,并用酶联免疫法(ELISA)定量检测鼠血清人清蛋白的含量。结果实验组和对照组小鼠均能存活至24周,鼠肝组织和血清中均能检测到清蛋白的表达。实验组肝组织和血清人清蛋白的表达均可持续到24周,人血清清蛋白高峰值为95.32ng/mL,出现在16周;而对照1组肝组织和血清人清蛋白的表达可持续到20周,人血清清蛋白高峰值为42.37ng/mL,出现在12周;对照2组肝组织和血清人清蛋白的表达可持续到12周,人血清清蛋白高峰值为22.91ng/mL,出现在8周。结论利用bcl-2抗Fas凋亡特性,转染bcl-2基因的HepaRG细胞移植并联合小剂量Jo2抗体腹腔注射SCID鼠,有利于人鼠嵌合肝中人肝细胞的增殖和存活。 展开更多
关键词 BCL-2 HepaRG细胞 Fas抗体/Jo2 mab 移植 人鼠嵌合肝/动物模型
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^(35)S 标记抗人肝癌单克隆抗体Hepama-1的制备
10
作者 周桢堂 庄道玲 +4 位作者 吴元芳 张雨龙 贺战军 刘关福 要福增 《同位素》 CAS 1998年第3期163-167,共5页
采用H235SO4与苯胺合成35S-苯胺硫酸盐,经高温转换成35S-对氨基苯磺酸,然后再用碳二亚胺交联到抗人肝癌单克隆抗体Hepama-1上。所得35S-MAbHepama-1用Elisa方法检测仍保持良好的免疫活性... 采用H235SO4与苯胺合成35S-苯胺硫酸盐,经高温转换成35S-对氨基苯磺酸,然后再用碳二亚胺交联到抗人肝癌单克隆抗体Hepama-1上。所得35S-MAbHepama-1用Elisa方法检测仍保持良好的免疫活性。产品最高比活度可达51.8GBq/g,放化纯度>95%,放化产率以H235SO4投料计算最高可达27%,以35S-对氨基苯磺酸投料计算最高可达45%,适用于做荷瘤裸鼠动物模型放免治疗研究实验。 展开更多
关键词 肝癌 单克隆抗体 Hepama-1 硫35标记
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全人源抗TRAIL-R1/-R2单克隆抗体肿瘤治疗的研究进展 被引量:2
11
作者 宗卫娇 芦凤亮 +1 位作者 刘晔 金艾顺 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2014年第4期344-348,共5页
目前全人源TRAIL受体(TRAIL-Rs)的单克隆抗体(单抗)对肿瘤靶向治疗已进入临床Ⅰ~Ⅳ期研究。TRAIL-Rs单抗可分别与死亡受体TRAIL-R1和TRAIL-R2结合,形成死亡诱导信号复合体(DISC),诱导肿瘤细胞凋亡,成为抗肿瘤抗体药物研发的... 目前全人源TRAIL受体(TRAIL-Rs)的单克隆抗体(单抗)对肿瘤靶向治疗已进入临床Ⅰ~Ⅳ期研究。TRAIL-Rs单抗可分别与死亡受体TRAIL-R1和TRAIL-R2结合,形成死亡诱导信号复合体(DISC),诱导肿瘤细胞凋亡,成为抗肿瘤抗体药物研发的热点之一。全人源TRAIL-Rs单抗与放疗、化疗药物或其它制剂以及免疫治疗方法联合应用在肿瘤治疗中取得了显著的效果,为临床抗肿瘤治疗提供了新方案。 展开更多
关键词 TRAIL TRAIL受体 TRAIL-Rs单抗 肿瘤治疗
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人红细胞生成素单克隆抗体的制备、鉴定及应用研究 被引量:3
12
作者 施水良 曾怡 +1 位作者 金以丰 谢弘 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第1期54-59,共6页
用rhEPO作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞融合,用碱性PAGE方法进一步分离并纯化的rhEPO,包被PVC板,对杂交瘤用ELISA方法进行筛选,获得两株稳定分泌抗hEPO单抗的杂交瘤细胞株。经鉴定分别属于IgG_1、IgG_(2... 用rhEPO作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞融合,用碱性PAGE方法进一步分离并纯化的rhEPO,包被PVC板,对杂交瘤用ELISA方法进行筛选,获得两株稳定分泌抗hEPO单抗的杂交瘤细胞株。经鉴定分别属于IgG_1、IgG_(2b),轻链均为k链,K_d分别为5.53×10^(-10)mol/L和1.34×10^(-10)mol/L。用Western blot方法证明两者对hEPO具有高度的专一性,能特异地识别rhEPO和尿源hEPO。所制备单抗可作为亲和层析的配体,用于再生障碍性贫血病人尿中EPO及哺乳类工程细胞所表达的hEPO的分离、纯化,并可用于hEPO的定量检测。 展开更多
关键词 人红细胞生成素 单克隆抗体 制备 鉴定
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人源抗TLR4抗体IgG的制备及其中和特性分析 被引量:2
13
作者 杨瑾 唐奇 +6 位作者 熊四平 蔡炳刚 朱旭辉 王长军 汪茂荣 冯振卿 朱进 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期777-781,786,共6页
目的 :构建全人源抗人Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗体轻、重链表达载体,在293Free style细胞中表达并纯化,分析该重组全分子抗体的生物学活性。方法:设计引物扩增全人源抗人TLR4抗体可变区编码序列,将其分别克隆到真核表... 目的 :构建全人源抗人Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)抗体轻、重链表达载体,在293Free style细胞中表达并纯化,分析该重组全分子抗体的生物学活性。方法:设计引物扩增全人源抗人TLR4抗体可变区编码序列,将其分别克隆到真核表达载体p FUSE-CHIg-h G1和p FUSE-CLIg-hl中,共转染至293Free style细胞,表达产物用protein A亲和层析柱纯化。应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、Western blot、免疫共沉淀、质谱分析及蛋白芯片检测抗体的免疫学特性,并检测该抗体对人单核细胞淋巴瘤THP1细胞肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α表达的影响。结果:成功构建全人源抗人TLR4抗体真核表达载体,获得的全分子抗TLR4抗体保持了与抗原的结合活性,对THP-1细胞TNF-α表达的抑制率可达85.7%。结论:重组全人源抗TLR4 Ig G保持了与TLR4的结合特异性,并具有明显的中和作用,对炎症治疗具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 TOLL样受体4 全人源抗体 中和抗体
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小鼠抗人腺病毒55型六邻体(HAdV55 Hexon)蛋白单克隆抗体的制备 被引量:2
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作者 袁若栋 董阳超 +9 位作者 武福星 段甜 薛潘 张剑 袁明城 薛智丰 张海军 张欠欠 高小朋 雷迎峰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期544-551,共8页
目的制备特异性小鼠抗人腺病毒55型六邻体蛋白(HAdV55 Hexon)单克隆抗体(mAb)。方法以化学合成HAdV 55、3、4、7、16、21的Hexon基因为模板,PCR扩增后分别构建原核表达质粒pET28a-HAdV55 Hexon与真核表达质粒pCAGGS-HAdV3、4、7、16、21... 目的制备特异性小鼠抗人腺病毒55型六邻体蛋白(HAdV55 Hexon)单克隆抗体(mAb)。方法以化学合成HAdV 55、3、4、7、16、21的Hexon基因为模板,PCR扩增后分别构建原核表达质粒pET28a-HAdV55 Hexon与真核表达质粒pCAGGS-HAdV3、4、7、16、21、55 Hexon;将pET28a-HAdV55 Hexon质粒转化至大肠杆菌(E.coli)感受态细胞BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,将纯化的包涵体经过变性与复性后利用切向流膜过滤系统获得纯化蛋白;将pCAGGS-HAdV55 Hexon用于拔罐免疫BALB/c小鼠,HAdV55 Hexon蛋白用于加强免疫,通过杂交瘤技术制备抗HAdV55 Hexon的mAb,并进行抗体效价测定、抗体亚类鉴定;对上述抗体利用pCAGGS-HAdV55 Hexon转染HEK293T细胞和BHK细胞分别进行Western blot法和免疫荧光法(IFA)以鉴定其特异性;选择其中效价高的两株抗体,进一步利用pCAGGS-HAdV3、4、7、16、21、55 Hexon转染细胞分别进行Western blot法和IFA做交叉反应性分析。结果成功构建pET28a-HAdV55 Hexon和pCAGGS-HAdV55 Hexon、3、4、7、16、21表达质粒;IPTG诱导pET28a-HAdV55 Hexon转化的BL21细菌,HAdV55 Hexon蛋白主要以包涵体形式表达,经过变性及复性后超滤得到纯化的HAdV55 Hexon蛋白;筛选得到6株可分泌HAdV55 Hexon mAb的杂交瘤细胞株,抗体亚类分析显示2株为IgG2a亚型,4株为IgG2b;获得与HAdV3 Hexon、HAdV4 Hexon、HAdV7 Hexon、HAdV16 Hexon、HAdV21 Hexon无交叉反应性的2株高效价的特异性HAdV55 Hexon抗体。结论获得的特异性小鼠抗HAdV55 Hexon的mAb为建立其抗原检测方法提供了实验基础。 展开更多
关键词 人腺病毒55型(HAdV55) 六邻体蛋白(Hexon) 单克隆抗体(mab)
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β_1-整合素与乳腺癌细胞凋亡关系的实验研究
15
作者 王莹 许德顺 刘延英 《锦州医学院学报》 2002年第6期29-31,共3页
目的 探讨乳腺癌细胞凋亡与β1-整合素作用的关系。方法 人乳腺癌细胞SK -BR - 3在培养中以不同浓度的抗 β1-整合素单克隆抗体的作用下 ,观察其对TNF -α诱导的凋亡并计算凋亡率。结果 加入凋亡诱导剂后 ,凋亡细胞由正常生长的 2 8... 目的 探讨乳腺癌细胞凋亡与β1-整合素作用的关系。方法 人乳腺癌细胞SK -BR - 3在培养中以不同浓度的抗 β1-整合素单克隆抗体的作用下 ,观察其对TNF -α诱导的凋亡并计算凋亡率。结果 加入凋亡诱导剂后 ,凋亡细胞由正常生长的 2 85± 0 4 1增加到 2 5 6 2± 1 4 1(P <0 0 1) ;而加入抗 β1-整合素单克隆抗体的实验组凋亡细胞数明显减少 ,且随加入抗体浓度的增加而再度减少。结论 TNF -α对SK -BR - 3人乳腺癌细胞凋亡的诱导作用可能是由 β1-整合素参与的介导作用实现的 ,且存在着一种在一定范围内的量、效依赖关系。 展开更多
关键词 实验研究 人乳腺癌细胞 抗β1-整合素单克隆抗体 凋亡诱导
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人红细胞生成素单克隆抗体的制备研究
16
作者 朱绿松 李文辉 梁秋波 《黑龙江医药》 CAS 2000年第1期21-22,共2页
将杂交瘤细胞接种子BAIB/C小鼠腹腔内,令细胞增殖,抽取接种杂交瘤细胞后两周左右的腹水,采用硫酸胺盐析,饱和度为50%,然后上DEAE-Cellulose DE52柱,NaCl浓度梯度洗脱,所得单克隆抗体纯度达90%,可用于免疫亲和柱的制备。
关键词 人经细胞生成素 单克隆抗体 制备 hEPO
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小鼠抗人呼吸道合胞病毒磷蛋白(P蛋白)单克隆抗体的制备和鉴定
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作者 司竣宇 詹炉停 +5 位作者 依含 赵敏 张伟 孙永鹏 郑子峥 夏宁邵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1035-1041,共7页
目的制备抗人类呼吸道合胞病毒(HRSV)磷蛋白(P蛋白)单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法以原核表达系统表达的HRSV P蛋白重叠肽段作为免疫原,采用杂交瘤技术筛选P蛋白单克隆抗体,Western blot法验证筛选获得的单克隆抗体与P蛋白的结合活性... 目的制备抗人类呼吸道合胞病毒(HRSV)磷蛋白(P蛋白)单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法以原核表达系统表达的HRSV P蛋白重叠肽段作为免疫原,采用杂交瘤技术筛选P蛋白单克隆抗体,Western blot法验证筛选获得的单克隆抗体与P蛋白的结合活性,免疫荧光细胞化学染色确定获得的单克隆抗体能否用于RSV感染后HEp-2细胞中P蛋白的检测。结果筛选出反应性好、特异性识别HRSV P蛋白的单克隆抗体P181-15A3、P211-16D8。获得的单克隆抗体通过Western blot法验证可与P蛋白结合,并可用于RSV感染后HEp-2细胞中P蛋白的免疫细胞化学检测。结论成功制备了小鼠抗HRSV P蛋白的单克隆抗体。 展开更多
关键词 人类呼吸道合胞病毒(HRSV) 磷蛋白(P蛋白) 单克隆抗体
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人转铁蛋白受体特异性单克隆抗体的研制及其初步鉴定
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作者 翟源惠 刘云 +4 位作者 刘晓芬 张萃 吴强 汪琦 刘晓波 《广东药科大学学报》 CAS 2017年第3期403-407,共5页
目的建立能分泌人转铁蛋白受体(TfR)特异性抗体的杂交瘤细胞株,并对其分泌的抗体进行初步鉴定。方法将人肝癌细胞株HepG2分离纯化的TfR蛋白,采用常规法免疫BALB/C小鼠;采用间接ELISA法测定免疫血清抗体效价;采用常规聚乙二醇(PEG)介导法... 目的建立能分泌人转铁蛋白受体(TfR)特异性抗体的杂交瘤细胞株,并对其分泌的抗体进行初步鉴定。方法将人肝癌细胞株HepG2分离纯化的TfR蛋白,采用常规法免疫BALB/C小鼠;采用间接ELISA法测定免疫血清抗体效价;采用常规聚乙二醇(PEG)介导法,将免疫小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细胞株SP2/0融合,用含HAT培养基筛选杂交瘤细胞;采用间接ELISA和Cell-ELISA法筛选TfR抗体阳性的杂交瘤细胞;采用有限稀释法进行克隆和多次亚克隆以建立稳定分泌TfR抗体的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注射经石蜡油致敏的小鼠腹腔以产腹水抗体,采用硫酸-辛酸法纯化腹水抗体;采用秋水仙素处理,计数细胞染色体数以进行杂交瘤细胞鉴定;采用免疫荧光染色法和Western blot法初步鉴定抗体与细胞表面或细胞总蛋白中TfR的结合。结果提取纯化的人TfR蛋白免疫小鼠获得成功,其1∶5 000稀释的血清抗体光吸收值(A_(490))是对照小鼠血清(1∶200稀释)的16倍以上;细胞融合率为42.22%,其中TfR抗体阳性孔20个,抗体阳性率为13.16%;抗体阳性孔B6和孔E8中杂交瘤细胞经克隆和亚克隆后建立起稳定分泌抗体的细胞株;B6杂交瘤细胞染色体数量位于56~60条之间,应为B细胞和SP2/0细胞融合而来;腹水抗体染色使HepG2细胞表面出现明亮荧光,并且能使HepG2细胞提取的总蛋白电泳图谱在95 000处出现清晰条带,表明该杂交瘤细胞分泌的抗体能特异性结合TfR蛋白。结论分泌抗人TfR抗体的小鼠杂交瘤细胞株已被筛选和建立;其分泌的抗体能与HepG2细胞的TfR特异性结合。 展开更多
关键词 人转铁蛋白受体(TfR) 小鼠杂交瘤细胞 单克隆抗体
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人巨细胞病毒包膜糖蛋白B主要中和表位单克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 何赛 廖旻晶 +8 位作者 靳晓瑞 邱义兰 李晓丹 郑姣 唐娜 罗焕 梁湘辉 郭向荣 刘如石 《生命科学研究》 CAS CSCD 2017年第1期16-22,共7页
人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)分布广泛,能够引发多种疾病,人群感染率极高,严重威胁到人类健康。现根据标准毒AD169基因序列,人工合成包膜糖蛋白B(glycoprotein B,g B)AD13区段的主要中和抗原表位AD-1、AD-2、AD-3,并将其... 人巨细胞病毒(Human Cytomegalovirus,HCMV)分布广泛,能够引发多种疾病,人群感染率极高,严重威胁到人类健康。现根据标准毒AD169基因序列,人工合成包膜糖蛋白B(glycoprotein B,g B)AD13区段的主要中和抗原表位AD-1、AD-2、AD-3,并将其与表达载体pET-32a连接,构建重组表达质粒;用IPTG诱导表达重组蛋白,采用Western-blot进行特异性鉴定;将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞和SP2/0细胞融合,然后筛选制备AD13单克隆抗体(monoclonal antibody,m Ab)。12%SDS-PAGE电泳鉴定表明重组蛋白表达成功,其相对分子质量约为35 kD;Western-blot和间接ELISA结果说明,重组AD13蛋白作为抗原具有良好的免疫反应性;克隆化后筛选到5个AD13单克隆抗体细胞株,经间接ELISA鉴定,与AD13抗原有良好的特异性反应。上述研究为研发HCMV快速诊断试剂盒提供了原料,也为研究HCMV亚单位疫苗提供了相关的基础。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒(HCMV) 包膜糖蛋白B(g B) 中和表位 单克隆抗体(m Ab) 酶联免疫吸附反应(ELISA) 免疫反应性
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重组人源化兔抗VEGF单克隆抗体质控方法与质量标准研究 被引量:7
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作者 毕华 范文红 +7 位作者 韩春梅 李响 王兰 丁有学 陶磊 裴德宁 高凯 饶春明 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1054-1058,1075,共6页
目的:建立重组人源化兔抗VEGF单抗的质控方法和质量标准。方法:利用HUVEC细胞增殖抑制试验测定重组人源化兔抗VEGF单抗的生物学活性;SDS-PAGE和SEC-HPLC测定纯度;胰酶酶切,HPLC测定其肽图;实时定量PCR检测CHO宿主DNA残留量;采用ELISA法... 目的:建立重组人源化兔抗VEGF单抗的质控方法和质量标准。方法:利用HUVEC细胞增殖抑制试验测定重组人源化兔抗VEGF单抗的生物学活性;SDS-PAGE和SEC-HPLC测定纯度;胰酶酶切,HPLC测定其肽图;实时定量PCR检测CHO宿主DNA残留量;采用ELISA法分别测定VEGF结合力、残留ProA含量和残留菌体蛋白含量;水平等电聚焦电泳法测定等电点;其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行。结果:用建立的方法对重组人源化兔抗VEGF单抗的原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》、《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。 展开更多
关键词 重组人源化兔抗VEGF单抗 质量控制 生物学活性 结合活性 肽图 纯度分析
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