Individual detection significances of small breast epithelial mucin (SBEM) and human mammaglobin (hMAM) expressions in peripheral blood of breast cancer patients

Objective： The aim of the study was to explore the individual detection significances of small breast epithelial mucin （SBEM） and human mammaglobin （hMAM） in peripheral blood （PB） of breast cancer patients. Methods： SBEM and hMAM expressions in PB samples of 109 primary breast cancer patients were detected by flow cytometry （FCM） and RT- PCR. Relationship between the biomarkers＇ expression and prognostic parameters were analyzed. Results： SBEM and hMAM expressions in PB of breast cancer patients were much higher than those of healthy donors and other cancer patients. SBEM and hMAM expressed in 53.2% （50/94） and 39.4% （37/94） cases at stages I-III and expressed in 73.3% （11/15） and 46.7% （7/15） cases at stage IV respectively. SBEM and hMAM mRNA were only detected in PB samples of breast cancer patients, while no expression of them was found in that of healthy donors and other cancer patients. Conclusion： hMAM mRNA detection maybe helpful to predict hematogenous micrometastasis in ER-positive, well-differentiated breast cancers and SBEM mRNA detection maybe helpful to predict hematogenous micrometastasis in ER-negative, poody-differentiated breast cancers.

改良根治术联合他莫昔芬治疗早期乳腺癌的临床疗效

目的探究改良根治术联合他莫昔芬治疗早期乳腺癌的临床疗效。方法回顾性分析2016年1月至2018年12月本院收治并确诊的100例早期乳腺癌患者的临床资料,根据治疗方案的不同分为对照组与研究组,每组50例。对照组采用改良根治术治疗,研究组在对照组基础上给予他莫昔芬治疗,比较两组0~12、13~24个月生存率和复发率与治疗前后人乳腺珠蛋白、转化生长因子β_(1)水平及并发症发生情况。结果研究组0~12、13~24个月生存率均明显高于对照组,0~12、13~24个月复发率均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组人乳腺珠蛋白、转化生长因子β_(1)水平比较差异无统计学意义;治疗后,两组人乳腺珠蛋白、转化生长因子β_(1)水平均低于治疗前,且研究组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。研究组并发症发生率为10.00%,低于对照组的30.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论改良根治术联合他莫昔芬治疗早期乳腺癌效果显著,不仅可有效降低患者复发率及人乳腺珠蛋白和转化生长因子β_(1)水平,还有利于延长患者生存期,减少并发症的发生。

hMAM联合MMP-9和C-erbB2 mRNA表达检测在乳腺癌外周血微转移诊断中的应用

目的:探讨生物标记物人乳腺珠蛋白(hMAM)联合基质金属蛋白酶9(MMP-9)和人表皮生长因子受体2(C-erbB2)mRNA在乳腺癌外周血微转移患者中阳性表达情况,阐明其用于诊断乳腺癌外周血微转移的临床应用价值。方法:选择74例乳腺癌患者、21例乳腺纤维腺瘤患者和10名健康人作为研究对象,所有患者均行手术治疗,采集外周血,运用实时荧光定量PCR检测外周血hMAM、MMP-9和C-erbB2 mRAN表达水平,比较hMAM、MMP-9和C-erbB2联合检测阳性表达率,并分析不同临床病理特征患者之间hMAM、MMP-9和C-erbB2联合检测的差异。结果:MMP-9、C-erbB2 mRNA阳性表达率在有无淋巴结转移患者间比较差异有统计学意义(χ~2=6.450,P<0.05;χ~2=5.636,P<0.05),hMAM mRNA阳性表达率在HER-2阳性与阴性患者间比较差异有统计学意义(χ~2=5.804,P<0.05)。乳腺癌患者hMAM及联合MMP-9和C-erbB2 mRNA阳性表达率分别为37.84%(28/74)、59.46%(44/74)和48.65%(36/74),三者联合阳性表达率为64.86%(48/74),均高于健康对照组(χ~2=5.676,P<0.05;χ~2=3.102,P>0.05;χ~2=5.339,P<0.05;χ~2=2.310,P>0.05)、乳腺纤维腺瘤组(χ~2=8.438,P<0.01;χ~2=4.491,P<0.05;χ~2=7.982,P<0.01;χ~2=4.844,P<0.05)和非乳腺癌组(对照组+乳腺纤维腺瘤组)(χ~2=13.093,P<0.01;χ~2=6.471,P<0.05;χ~2=11.837,P<0.01;χ~2=6.103,P<0.05)。与Ⅰ+Ⅱ期比较,Ⅲ+Ⅳ期乳腺患者hMAM mRNA单独及联合阳性表达率均增加,其中hMAM mRNA单独及联合C-erbB2 mRNA阳性表达率比较差异有统计学意义(χ~2=5.157,P<0.05;χ~2=4.912,P<0.05)。结论:hMAM诊断乳腺癌微转移的阳性率较低,联合MMP-9和C-erbB2 mRNA检测可以提高诊断阳性率,对于早期乳腺癌微转移诊断具有一定临床应用价值。

腋淋巴结阴性乳腺癌外周血hMAM检测意义

目的:应用乳腺癌特异性标志物乳腺珠蛋白(hMAM)检测腋淋巴结阴性乳腺癌(axillarylymphnodeneg鄄ativebreastcancer,ALNNBC)外周血中微转移,并探讨其与临床病理因素的关系。方法:采用巢式RT-PCR方法,分别检测62例ALNNBC、6例乳腺良性疾患和6例健康成人女性外周血中hMAMmRNA的表达,并以MDA-MB415细胞为阳性参考检测该方法的灵敏度。结果:ALNNBC外周血hMAM表达阳性率为32.3%(20/62),乳腺良性疾患组和健康成人女性组全部阴性表达;该方法检测外周血微转移的灵敏度达1/106;C-erbB2基因阳性表达者微转移发生率高(P<0.01),月经状态、肿瘤大小、组织学类型、ER状态、p53表达等与微转移无关(P>0.05);复发转移组较无瘤生存组外周血中微转移率高(P<0.01)。结论:hMAM可作为乳腺癌外周血微转移的标志物;ALNNBC微转移与C-erbB2密切相关;外周血微转移可以作为ALNNBC预后指标。

血清乳腺珠蛋白与乳腺癌的相关性及临床意义探讨

目的探讨血清人乳腺珠蛋白（hMAM）水平与乳腺癌早期诊断和癌微转移的相关性及其临床意义。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测68例乳腺癌患者、40例其他癌症患者（前列腺癌、胃癌、卵巢癌、直肠癌各10例）、35例良性乳腺疾病患者以及40名体检正常女性（正常对照组）血清hMAM水平并做比较。将68例乳腺癌患者按临床TNM分期、是否存在雌激素受体（ER）表达、是否有腋窝淋巴结转移以及是否绝经分别分组并做比较。通过受试者工作特征（ROC）曲线确定乳腺癌血清hMAM的Cut—off值。结果血清hMAM的ROC曲线下面积为0．825，即诊断乳腺癌的可信度为82．5％[95％可信区间（C，）：72．6％～92．4％]；当hMAM的Cut—off值为8．43ng／mL时，敏感性和特异性分别为76．5％、82．9％。乳腺癌组血清hMAM水平及阳性率明显高于良性乳腺疾病组、其他癌症组和正常对照组（P〈0．05），而良性乳腺疾病组、其他癌症组和正常对照组之间差异均无统计学意义（P〉0．05）。11I和Ⅳ期乳腺癌患者的血清hMAM阳性率（55％、75％）明显高于I和Ⅱ期患者（25％、40％，P〈0．05），但hMAM水平无差异（P〉0．05）。有腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者血清hMAM阳性率（88％）明显高于无转移的患者（30％，P〈0．05），但hMAM水平无差异（P〉0．05）。不管乳腺癌患者血清中是否存在ER、原癌基因C—erb-2表达及是否绝经，其hMAM水平及阳性率均无差异（P〉0．05）。结论hMAM的表达与乳腺癌临床分期和是否有腋窝淋巴结转移相关；检测乳腺癌高危人群血清hMAM水平有助于提高乳腺癌的早期诊断和癌微转移的早期发现。

乳腺癌患者外周血中hMAM、SBEM和CEACAM19 mRNA联合检测及其临床意义

目的:探讨外周血中人乳腺珠蛋白(hMAM)、乳腺小黏蛋白(SBEM)和癌胚抗原相关黏附因子19(CEACAM19)mRNA联合检测在乳腺癌诊断中的作用,阐明其临床意义。方法:收集104例乳腺癌患者(乳腺癌组)、52例乳腺良性病变患者(良性乳腺病组)和50名健康人(健康对照组)的外周血,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测受试者外周血有核细胞中hMAM、SBEM和CEACAM19 mRAN表达水平并计算其阳性表达率,分析其与乳腺癌患者临床病理特征的关系。结果:乳腺癌组患者外周血中SBEM和CEACAM19 mRNA阳性表达率与淋巴结转移有关联(P<0.05),CEACAM19 mRNA阳性表达率与雌激素受体(ER)表达有关(P<0.05),hMAM mRNA阳性表达率与人表皮生长因子受体2(HER-2)表达有关(P<0.05)。与健康对照组和良性乳腺病组比较,乳腺癌组患者外周血中hMAM单独或联合SBEM和CEACAM19 mRNA检测阳性表达率均明显升高(P<0.05)。三者联合检测,hMAMmRNA阳性表达率从39.4%升高至66.3%。TNM分期Ⅲ+Ⅳ期乳腺癌患者外周血中hMAM单独或联合SBEM和(或)CEACAM19 mRNA检测阳性表达率均高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ期乳腺癌患者(P<0.01);三者联合检测,TNM分期Ⅰ+Ⅱ期乳腺癌患者外周血中hMAMmRNA阳性表达率从20.40%升高至48.98%,TNM分期Ⅲ+Ⅳ期乳腺癌患者外周血中hMAMmRNA阳性表达率从56.40%升高至81.82%。结论:乳腺癌患者外周血hMAMmRNA阳性表达率不高,联合SBEM和CEACAM19 mRNA检测可以提高其阳性表达率,对于乳腺癌诊断具有一定的临床意义。

hMAM水平与乳腺癌早期诊断和癌微转移的相关性及临床意义研究

目的探讨血清人乳腺珠蛋白(hMAM)水平与乳腺癌早期诊断和癌微转移的相关性及其临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测64例乳腺癌患者、32例其他癌患者(直肠癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌患者各8例)、34例良性乳腺相关疾病肿瘤患者和36例体检正常的女性(正常对照组)的血清人乳腺珠蛋白水平并做比较。将64例乳腺癌患者分别按临床TNM分期、雌激素受体(ER)表达程度、腋窝淋巴结的转移程度及绝经与否分组并做比较。通过受试者的工作特征曲线(即ROC曲线)确定乳腺癌患者的hMAM的Cut-off值。结果血清hMAM的ROC曲线面积为0.855,即乳腺癌诊断结果的可信度为85.5%;血清hMAM的Cut-off值为8.54 ng/ml,其特异性和敏感度分别为83.2%和75.9%。在血清hMAM水平和阳性率的比较中,乳腺癌组明显高于其他三组(P<0.05),且其他三组间差异无显著性(P>0.05)。Ⅲ和Ⅳ期乳腺癌患者的血清hMAM阳性率(62.50%、75.00%)明显高于Ⅰ和Ⅱ期患者(31.25%、37.50%,P<0.05),但hMAM水平无显著性差异(P>0.05)。存在腋窝淋巴结转移的乳腺癌患者的血清hMAM的阳性率(90.91%)明显高于无转移的患者(25.00%)(P<0.05),但hMAM水平无显著性差异(P>0.05)。乳腺癌患者的血清中是否存在ER以及是否绝经对hMAM及阳性率均无显著性差异(P>0.05)。结论乳腺癌临床TNM分期及腋窝淋巴结转移程度与hMAM的表达存在相关性;在乳腺癌高危人群的血清检验中,hMAM的检测有助于提高乳腺癌早期诊断的临床意义,在诊断乳腺癌早期微转移与治疗中具有关键性作用。

血清SBEM、hMAM和CEACAM19水平在乳腺癌早期诊断中的临床意义

目的:检测乳腺癌患者血清乳腺上皮小黏蛋白(SBEM)、人乳腺珠蛋白(hMAM)和癌胚抗原相关细胞黏附分子19(CEACAM19)水平,阐明各指标在乳腺癌早期诊断中的意义及其与患者临床病理参数的关系。方法:选取80例乳腺癌患者作为乳腺癌组、58例乳腺良性病变患者作为乳腺良性病变组和54名健康女性作为健康对照组。采用ELISA法检测3组研究对象血清SBEM、hMAM和CEACAM19水平,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析各指标诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)、cut-off值、灵敏度和特异度。结果:乳腺癌组患者血清SBEM、hMAM和CEACAM19水平均明显高于乳腺良性病变组和健康对照组(P<0.05)。与TNM分期Ⅰ-Ⅱ期比较,TNM分期Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌患者血清SBEM、hMAM和CEACAM19水平均明显升高(P<0.05);与淋巴结转移阴性组比较,淋巴结转移阳性组乳腺癌患者血清SBEM、hMAM和CEACAM19水平均明显升高(P<0.05)。SBEM、hMAM、CEACAM19单独及联合检测诊断乳腺癌的AUC、灵敏度和特异度分别为0.868、80.0%和88.4%;0.809、70.0%和80.4%;0.756、97.5%和50.9%;0.913、82.5%和90.2%,联合检测的诊断效能最佳。结论:血清SBEM、hMAM和CEACAM19联合检测筛查乳腺癌具有较高的灵敏度和特异度,可提高乳腺癌患者的早期诊断效能。

原发性乳腺癌组织中人乳腺珠蛋白的表达及意义

目的研究人乳腺珠蛋白(hMAM)在乳腺组织中表达的特异性,hMAM的表达与各临床病理特征以及与乳腺癌预后的关系。方法运用免疫组织化学的方法分析142例原发性乳腺癌组织,103例其他肿瘤组织,30例正常乳腺组织,30例乳腺良性肿瘤中的hMAM表达情况,并结合乳腺癌患者的临床病理资料和生存情况进行分析。结果 hMAM只在乳腺组织中表达,在原发性乳腺癌中有70.4%的阳性表达。hMAM的表达与年龄、临床分级分期、肿块大小、腋淋巴结状态、病理类型、PR、HER2状态均无相关性,与ER呈正相关。生存分析显示,hMAM阳性患者预后明显好于hMAM阴性患者,Cox回归示年龄、临床分期、ER、hMAM状态均对乳腺癌的术后生存时间有影响。结论 hMAM具有理想的乳腺组织表达特异性,在原发性乳腺癌组织中有较高的表达率同时具备较高的敏感度和特异性。生存分析显示hMAM可以作为评估原发性乳腺癌患者预后的重要参考指标。

细胞角蛋白19和人乳腺球蛋白在乳腺癌阴性前哨淋巴结中的表达及临床意义

目的研究乳腺癌常规病理检查阴性的前哨淋巴结中细胞角蛋白19(cytokerantin-19,CK19)和人乳腺球蛋白(human mammaglobin,hMAM)的表达及临床意义。方法采用免疫组化SP法检测60例乳腺癌阴性前哨淋巴结中CK19和hMAM的表达,并分析两者表达差异及与临床病理因素的关系。结果 60例乳腺癌阴性前哨淋巴结经免疫组化SP法检测hMAM表达2例,阳性检出率为3.3%。CK19除了hMAM阳性2例外,另外检出6例,阳性检出率为13.3%。CK19表达与肿瘤T分期有关(P<0.05),与患者的年龄、月经状况、定位方法、肿瘤位置、病理类型、雌激素受体表达、孕激素受体表达、CerbB-2表达、Ki-67表达和肿瘤分子分型均无相关(P>0.05);hMAM表达与以上临床病理因素均无相关(P>0.05)。结论 CK19和hMAM均可作为检测乳腺癌阴性前哨淋巴结微转移的指标,但CK19是检测乳腺癌阴性前哨淋巴结微转移的敏感指标。

乳腺癌患者血清中hMAM和CD147水平检测及其临床意义

目的:探讨乳腺癌患者血清中人乳腺珠蛋白(hMAM)和基质金属蛋白酶诱惑因子(CD147)水平及阳性表达率,阐明其在乳腺癌诊断中的临床意义。方法:选择122例乳腺癌患者(乳腺癌组)、21例乳腺纤维腺瘤患者(乳腺纤维腺瘤组)和16名健康对照者(健康对照组)作为研究对象。收集各组研究对象的血清,采用ELISA法检测各组研究对象血清中hMAM和CD147水平及阳性表达率,分析不同临床病理特征患者血清hMAM和CD147水平及阳性表达率。采用受试者工作特征(ROC)曲线确定乳腺癌患者血清中hMAM和CD147的cut-off值,确定其诊断乳腺癌的敏感度和特异度。结果:乳腺癌组患者血清中hMAM和CD147水平均高于健康对照组和乳腺纤维腺瘤组(P<0.05)。乳腺癌组患者血清中hMAM和CD147阳性表达率均高于健康对照组和乳腺纤维腺瘤组(P<0.01);乳腺癌组患者血清中hMAM联合CD147的阳性表达率高于健康对照组和乳腺纤维腺瘤组(P<0.01)。是否有淋巴结转移乳腺癌患者血清中hMAM和CD147阳性表达率比较差异有统计学意义(χ~2=10.375,P<0.01;χ~2=15.556,P<0.01)。不同TNM分期、雌激素受体(ER)和人表皮生长因子受体2 (Her-2)乳腺癌患者血清中CD147阳性表达率比较差异有统计学意义(χ~2=8157,P<0.05;χ~2=6.035,P<0.05;χ~2=5.385,P<0.05)。随着TNM分期增加,乳腺癌患者血清中hMAM和CD147阳性表达率均呈递增趋势。hMAM的ROC曲线下面积(AUC)为0.809,95%CI:0.703~0.916;CD147的AUC为0.721,95%CI:0.582~0.861。hMAM的cut-off值为6.51μg·L^(-1),诊断乳腺癌的敏感度和特异度分别为61.1%和87.5%;CD147的cut-off值为144.92ng·L^(-1),诊断乳腺癌的敏感度和特异度分别为73.6%和68.7%;二者联合检测时AUC为0.880,95%CI:0.798~0.962,诊断乳腺癌敏感度和特异度分别为80.6%和81.2%。结论:血清中hMAM水平诊断乳腺癌具有较高的敏感度和特异度,hMAM与CD147联合检测可以提高诊断阳性率。

SBEM、hMAM及CK19预测乳腺癌外周血微转移的临床价值

目的探讨生物学标志物乳腺上皮小黏蛋白(SBEM)、乳腺珠蛋白(hMAM)和细胞角蛋白19(CK19)在乳腺癌患者外周血循环中的表达及其作为乳腺癌外周血微转移预测指标的价值。方法采用巢式PCR技术,检测47例乳腺癌患者和45例乳腺良性瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的表达;采用半定量PCR技术10例乳腺癌及对应的癌旁组织以及10例乳腺良性肿瘤组织中SBEM、hMAM和CK19的表达。结果 SBEM和hMAM在乳腺癌组患者外周血中表达率高于乳腺良性肿瘤组患者(P<0.05),而两组外周血CK19表达率差异无统计学意义(P>0.05)。SBEM、hMAM和CK19在乳腺癌组织、癌旁组织及乳腺良性肿瘤组组织中均呈高表达,3组患者hMAM和CK19表达量没有差异(P>0.05),SBEM在癌组组织中表达量低于癌旁组织及乳腺良性肿瘤组织组(P<0.05)。结论 SBEM、hMAM、CK19在乳腺组织中呈稳定高表达,作为乳腺癌外周血微转移生物学标志物灵敏性高,但缺乏特异性,联合检测可提高特异性。

人乳腺球蛋白、血管内皮生长因子-C和血管内皮生长因子受体-3在乳腺癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨人乳腺球蛋白(hMAM)、血管内皮生长因子-C(VEGF-C)及其受体-3(VEGFR-3)在乳腺癌组织中表达,分析其表达与乳腺癌生物学特性及预后的关系。方法采用组织微阵列技术,通过免疫组化法检测116例乳腺癌组织、44例癌旁正常组织中hMAM、VEGF-C及VEGFR-3的表达。结果 (1)乳腺癌组织中hMAM、VEGF-C及VEGFR-3的表达率分别为59.48%(69/116),50.86%(59/116)及61.20%(71/116),均高于癌旁正常组织中的表达率(分别为0.00%、9.09%及18.18%,P均<0.01)。(2)hMAM、VEGF-C及VEGFR-3的表达与腋淋巴结转移呈正相关(P均<0.05),hMAM和VEGFR-3的表达与组织学分级呈正相关(P均<0.05)。(3)采用Spearman等级相关分析结果显示,hMAM、VEGF-C及VEGFR-3在乳腺癌中的表达两两之间均呈正相关,相关系数分别为0.278、0.280及0.244(P均<0.01)。(4)Kaplan-Meier生存分析结果表明:hMAM、VEGF-C及VEGFR-3阴性表达者无病生存率及5年总生存率均高于三者阳性表达(Log-rank,P均<0.01)。结论 hMAM、VEGF-C及VEGFR-3在乳腺癌组织中存在高表达,其高表达与乳腺癌的发生、侵袭转移和预后有关,且hMAM可能与乳腺癌微淋巴管生成有关。

人乳腺癌外周血中hMAM mRNA表达及临床意义

目的:研究人乳腺癌外周血珠蛋白(hMAM)mRNA表达及临床意义。方法:应用nested-RT-PCR技术检测50例乳腺癌外周血hMAM mRNA的表达和化疗前后外周血hMAM mRNA的变化,并取20例乳腺纤维腺瘤、10例健康志愿者作阴性对照。结果:50例乳腺癌外周血hMAM mRNA的阳性表达率为34.0%;20例乳腺纤维腺瘤及10例健康志愿者外周血中均未检出hMAM mRNA的表达。hMAM mRNA的阳性与淋巴结转移状况、肿瘤TNM分期之间差异有统计学意义;50例乳腺癌化疗前检测17例hMAM mRNA阳性,化疗2～3周期后13例hMAM mRNA转为阴性,转阴率76.5%(13/17),化疗前后差异非常显著(P=0.001)。结论:乳腺癌外周血中hMAM mRNA表达可以反映术后化疗对乳腺癌血液微转移的影响,有望成为乳腺癌血道微转移标志物和一个重要的预后指标。

乳腺癌患者血中hMAM的表达及临床意义

目的研究乳腺癌患者外周血人乳腺珠蛋白(hMAM)的表达及临床意义。方法用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测58例乳腺癌患者外周血hMAM mRNA表达,健康志愿者及乳腺良性肿瘤患者各10例作为对照。结果78例标本全部确认转录为cDNA,hMAM mRNA在乳腺癌患者外周血的阳性表达率为34.5%,乳腺良性肿瘤和正常对照均无阳性表达;乳腺癌中hMAM mRNA的阳性表达与患者的腋淋巴结状况及TNM临床分期有关(P<0.05)。结论hMAM mRNA特异性表达于乳腺癌外周血,可作为标志物检测乳腺癌外周血微转移,并有可能成为诊断乳腺癌和判断预后的一个独立指标。

人乳腺珠蛋白基因亚型的原核表达及纯化

目的:克隆人乳珠蛋白(hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础。方法:自乳腺癌组织及乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAM cD-NA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(N i-NTA-H is)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果:乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAM cDNA亚型,即hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270 bp,两者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白。结论:获得hMAM cDNA并发现一个新的hMAM突变体;融合蛋白的表达及纯化成功。

乳腺珠蛋白基因在大肠杆菌中的诱导表达及纯化研究

目的克隆乳腺珠蛋白(hum an m amm aglob in,hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。方法自乳腺癌组织提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAM cDNA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(N i-NTA-H is)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白。结论成功地纯化出hMAM重组蛋白。

抗重组人乳腺珠蛋白单克隆抗体的制备及其特异性鉴定

目的通过杂交瘤技术获得特异性抗hMAM单克隆抗体,为进一步研制基于hMAM的乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础。方法以纯化的重组蛋白为抗原免疫Balb/c小鼠,运用杂交瘤技术制备、间接ELISA法及免疫组化法筛选出能稳定分泌特异性抗hMAM的单克隆抗体细胞株。结果通过杂交瘤技术获得了2株能分泌特异性抗hMAM单克隆抗体的杂交瘤细胞株hMAM-A2及hMAM-B7,其分泌的单克隆抗体亚类均属于IgG1,Western blotting结果显示2株细胞分泌的单克隆抗体特异性强能与34kDa处的hMAM抗原形成单一的蛋白质显色条带,免疫组化结果显示其仅与乳腺癌组织呈阳性反应,与其他肿瘤组织不发生交叉反应。结论利用鼠-鼠杂交瘤技术成功的制备了2株稳定分泌高效价、高特异性抗hMAM的杂交瘤细胞株。

两种人乳腺珠蛋白基因亚型cDNA的克隆及其原核表达

目的克隆hMAM编码全长cDNA,建立hMAM蛋白原核表达系统及其纯化方法,为进一步研究hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定工作基础。方法自乳腺癌组织和乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAMcDNA,构建pGEX-KG-hMAM表达质粒,在大肠杆菌BL21中表达,鉴定表达产物的形式后建立目的蛋白的纯化方法。结果乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAMcDNA亚型:hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270bp,二者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;GST-hMAM蛋白在本原核表达系统中以不溶性包涵体形式存在,通过改良的纯化方案可以获得纯化的复性蛋白。结论获得hMAMcDNA并发现一个新的hMAM突变体;hMAM可在pGEX-KG中与GST融合,实现高效表达;通过本法建立的改良的纯化流程,可获得纯度达96.5%的hMAM的两种融合蛋白,为进一步研究两种亚型hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定了工作基础。

乳腺癌外周血SBEM和hMAM联合检测的临床意义

目的探讨乳腺癌患者外周血乳腺小粘蛋白(SBEM)及人乳腺珠蛋白(hMAM)的表达及临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测68例乳腺癌患者及20例乳腺纤维腺瘤患者及20例健康志愿者术前血清SBEM和hMAM的水平。结果乳腺癌组术前血清SBEM和hMAM水平均高于纤维腺瘤组和健康对照组(P均<0.01)。有淋巴结转移的乳腺癌患者血清中SBEM和hMAM水平明显高于无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Ⅲ期患者血清SBEM和hMAM水平显著高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P均小于0.01)。结论 SBEM及hMAM特异性表达于乳腺癌外周血,有可能作为检测乳腺癌外周血微转移的标志物,有望成为判断乳腺癌患者病情发展和预后的新指标。