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Detection of ROS and translocation of ERP-57 in apoptotic induced human neuroblastoma(SH-SY5Y)cells
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作者 ATIF KAMIL MUBARAK ALI KHAN +6 位作者 MUHAMMAD AASIM NADIR ZAMAN KHAN RAHAM SHER KHAN MUHSIN JAMAL WAQAR AHMAD MIR AZAM KHAN FAZAL JALIL 《BIOCELL》 SCIE 2019年第3期167-174,共8页
Several toxic compounds are known to induce apoptosis in mammalian cell lines.The human neuroblastoma cells(SHSH-SY5Y)were exposed to the phosphatase inhibiting toxin okadaic acid(OA)or hydrogen peroxide(H2O2)to induc... Several toxic compounds are known to induce apoptosis in mammalian cell lines.The human neuroblastoma cells(SHSH-SY5Y)were exposed to the phosphatase inhibiting toxin okadaic acid(OA)or hydrogen peroxide(H2O2)to induce apoptosis as well as generate reactive oxygen species(ROS).Mitoxantrone(MXT)was used as a positive control for apoptosis.The SHSH-SY5Y cells were transfected with eukaryotic expression plasmid pHyPer-dMito encoding mitochondrial-targeted fluorescent or pHyPer-dCito encoding cytoplasmic-targeted fluorescent sensor for hydrogen peroxide(HyPer).The ERp57,also called GRP58(Glucose-regulated protein 58),is a stress protein induced in conditions like glucose starvation and viral infection.Recently ERp57 was shown to translocate from the endoplasmatic reticulum to the cell surface in anthracycline-induced apoptotic cells.ERp57 co-translocation together with calreticulin has been suggested to be crucial for recognizing tumor cells to induce immunogenic cell death.ERp57 translocation after exposure to okadaic acid was studied using immunofluorescence and confocal microscopy.These studies indicated that okadaic acid has induced the translocation of ERp57 to the cellular membrane. 展开更多
关键词 Apoptosis CYTOPLASM Endoplasmic recticulum(ER) ERP-57 human neuroblastoma cell(SHSH-SY5Y) IMMUNOFLUORESCENCE Mitochondria Reactive oxygen species(ROS) Transfection
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Transplantation of human placental chorionic plate-derived mesenchymal stem cells for repair of neurological damage in neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy
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作者 Lulu Xue Ruolan Du +8 位作者 Ning Bi Qiuxia Xiao Yifei Sun Ruize Niu Yaxin Tan Li Chen Jia Liu Tinghua Wang Liulin Xiong 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2024年第9期2027-2035,共9页
Neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy is often associated with permanent cerebral palsy,neurosensory impairments,and cognitive deficits,and there is no effective treatment for complications related to hypoxic-ische... Neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy is often associated with permanent cerebral palsy,neurosensory impairments,and cognitive deficits,and there is no effective treatment for complications related to hypoxic-ischemic encephalopathy.The therapeutic potential of human placental chorionic plate-derived mesenchymal stem cells for various diseases has been explored.However,the potential use of human placental chorionic plate-derived mesenchymal stem cells for the treatment of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy has not yet been investigated.In this study,we injected human placental chorionic plate-derived mesenchymal stem cells into the lateral ventricle of a neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy rat model and observed significant improvements in both cognitive and motor function.Protein chip analysis showed that interleukin-3 expression was significantly elevated in neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy model rats.Following transplantation of human placental chorionic plate-derived mesenchymal stem cells,interleukin-3 expression was downregulated.To further investigate the role of interleukin-3 in neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy,we established an in vitro SH-SY5Y cell model of hypoxic-ischemic injury through oxygen-glucose deprivation and silenced interleukin-3 expression using small interfering RNA.We found that the activity and proliferation of SH-SY5Y cells subjected to oxygen-glucose deprivation were further suppressed by interleukin-3 knockdown.Furthermore,interleukin-3 knockout exacerbated neuronal damage and cognitive and motor function impairment in rat models of hypoxic-ischemic encephalopathy.The findings suggest that transplantation of hpcMSCs ameliorated behavioral impairments in a rat model of hypoxic-ischemic encephalopathy,and this effect was mediated by interleukin-3-dependent neurological function. 展开更多
关键词 behavioral evaluations gene knockout human neuroblastoma cells(SH-SY5Y) human placental chorionic derived mesenchymal stem cells INTERLEUKIN-3 neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy nerve injury oxygen-glucose deprivation protein chip small interfering RNA
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PTCSC3对谷氨酸诱导SH-SY5Y神经细胞凋亡的影响
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作者 苗峥 胡雨 +6 位作者 米山 焦明丽 韩明明 王轶博 胡勇 黄锋 詹合琴 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2024年第9期1222-1235,共14页
目的探讨乳头状甲状腺癌易感性候选基因3(papillary thyroid carcinoma susceptibility candidate 3,PTCSC3)对谷氨酸(glutamicacid,Glu)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响及其机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,谷氨酸损伤SH-SY5... 目的探讨乳头状甲状腺癌易感性候选基因3(papillary thyroid carcinoma susceptibility candidate 3,PTCSC3)对谷氨酸(glutamicacid,Glu)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响及其机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,谷氨酸损伤SH-SY5Y细胞24 h,转染技术对PTCSC3进行抑制及过表达,采用Hoechst 33258染色法、流式细胞技术、AO/EB染色及四甲基偶氮唑盐比色(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测抑制或过表达PTCSC3后对各组细胞凋亡、生存的影响;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术检测各组细胞中PTCSC3、CCAAT/增强子结合蛋白β(CAAT/enhancer binding protein beta,C/EBP-β)及Cbp/p300结合转化激活因子4(Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 4,CITED4)的基因表达情况;Western blot检测各组细胞中C/EBP-β、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)及CITED4、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、原癌基因n-Myc的蛋白表达水平。结果2000μmol·L^(-1)Glu处理24 h对PTCSC3细胞有明显的损伤作用;与模型组比较,PTCSC3抑制剂可有效改善Glu诱导SH-SY5Y细胞凋亡率的增加和细胞存活率的下降;明显降低C/EBP-β基因及蛋白、Bax蛋白的表达,促进BDNF、p-Akt、Bcl-2蛋白的表达;增加CITED4、Cyclin D1和n-Myc的表达水平。反之,过表达PTCSC3则出现与上述结果相反的结果。结论PTCSC3可能通过调控C/EBP-β,进而调控下游信号通路BDNF/Akt和CITED4/Cyclin D1信号通路,改善Glu诱导SH-SY5Y神经细胞的凋亡和生存状态。 展开更多
关键词 乳头状甲状腺癌易感性候选基因3 人神经母细胞瘤细胞 细胞凋亡 作用 分子机制
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脂多糖调节SH-SY5Y细胞线粒体融合在阿尔茨海默病中的作用
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作者 王睿 尹亚萍 +3 位作者 李国平 马焜 靖雪妍 陈丽丽 《中国实用医药》 2024年第9期172-177,共6页
目的 探讨脂多糖(LPS)调节人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)线粒体融合在阿尔茨海默病(AD)中的作用。方法 选取SH-SY5Y细胞株进行常规培养,于细胞对数生长期以25、50、100μg/ml的LPS处理SH-SY5Y细胞48 h,分别设置为25μg/ml组、50μg/m... 目的 探讨脂多糖(LPS)调节人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)线粒体融合在阿尔茨海默病(AD)中的作用。方法 选取SH-SY5Y细胞株进行常规培养,于细胞对数生长期以25、50、100μg/ml的LPS处理SH-SY5Y细胞48 h,分别设置为25μg/ml组、50μg/ml组、75μg/ml组,同时设置空白对照组。采用细胞计数试剂(CCK-8)法检测细胞存活率;光镜检测细胞内线粒体损伤情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)变化;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测动力相关蛋白1 (Drp1)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)和视神经萎缩因子1(Opa1)微小核糖核酸(mRNA)表达和蛋白表达水平。分析LPS对SH-SY5Y细胞存活率和β-淀粉样蛋白(Aβ)含量, SH-SY5Y细胞线粒体形态, SH-SY5Y细胞内SOD、MDA、NO和TNF-α, SH-SY5Y细胞内mRNA表达的影响。结果 CCK-8法检测结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞存活率明显下降, Aβ含量显著升高;随着LPS剂量的增加, SH-SY5Y细胞存活率呈剂量依赖性降低, Aβ含量呈剂量依赖性增长,差异具有统计学意义(P<0.05)。光镜结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞内线粒体出现明显变大变圆,体积增大,线粒体出现肿胀和线粒体空泡化等改变,并伴有线粒体自噬的发生。ELISA结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞内SOD表达分别显著降低24.16%、69.08%和123.78%, MDA表达分别显著增加37.65%、52.13%和101.85%, NO表达分别显著增加54.34%、119.08%和167.78%, TNF-α表达分别显著增加54.34%、119.08%和167.78%,随着LPS剂量的增加, SOD含量变化具有剂量依赖性降低, NO、MDA、TNF-α含量变化呈剂量依赖性增长,差异具有统计学意义(P<0.05)。Real-Time PCR结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞内Drp1、Mnf1和Mnf2 mRNA含量随着LPS剂量的增加而显著增加, SH-SY5Y细胞内Opa1 mRNA含量随着LPS剂量的增加而显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LPS可明显加速SH-SY5Y细胞线粒体融合分裂,降低细胞的存活率,在阿尔茨海默病的发病机制中具有重要作用。 展开更多
关键词 脂多糖 人神经母细胞瘤细胞 线粒体 阿尔茨海默病
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SARS-CoV-2刺突糖蛋白对神经细胞的损伤效应及机制
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作者 王娇 李佳佳 +3 位作者 肖文一 韦冬晖 蒋宁 周文霞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期375-383,共9页
目的探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突糖蛋白(S蛋白)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的损伤效应及其机制。方法用S蛋白0(细胞对照组),25,50,75和100 mg·L^(-1)处理SH-SY5Y 24 h,CCK-8法检测细胞活力;比色法检测乳... 目的探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突糖蛋白(S蛋白)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的损伤效应及其机制。方法用S蛋白0(细胞对照组),25,50,75和100 mg·L^(-1)处理SH-SY5Y 24 h,CCK-8法检测细胞活力;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;EdU试剂盒检测细胞增殖;荧光素酶发光法检测细胞内ATP含量;JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位(MMP);Seahorse XF检测细胞糖酵解及线粒体氧化磷酸化水平。结果与细胞对照组相比,S蛋白25,50,75和100 mg·L^(-1)组细胞活力显著降低(P<0.01),半数抑制浓度(IC_(50))为65.05 mg·L^(-1);LDH释放率显著增加(P<0.01);EdU阳性细胞比例显著降低(P<0.01);S蛋白75和100 mg·L^(-1)组细胞内ATP含量显著降低(P<0.01);S蛋白50和75 mg·L^(-1)组细胞内MMP显著降低(P<0.05,P<0.01);S蛋白50 mg·L^(-1)组基础糖酵解水平和糖酵解能力的最大值显著升高(P<0.05,P<0.01),S蛋白25和50 mg·L^(-1)组呼吸能力最大值显著升高(P<0.05,P<0.01)。SH-SY5Y细胞活力与细胞内ATP含量和MMP均呈正相关(r^(2)=0.9209,P=0.001;r^(2)=0.6170,P=0.0025);与反映细胞糖酵解水平的细胞基础糖酵解水平和糖酵解能力最大值呈负相关(r^(2)=0.5194,P=0.0285;r^(2)=0.6664,P=0.0073),与反映线粒体氧化磷酸化水平的ATP生成能力呈负相关(r^(2)=0.8204,P=0.0008)。结论S蛋白使SH-SY5Y细胞活力下降,抑制细胞增殖,其机制可能与干扰神经细胞内能量代谢密切相关。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2) 刺突糖蛋白 人神经母细胞瘤细胞 神经损伤 糖酵解 能量代谢
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Biological Analysis of HSV-1 Immediate-early Proteins ICP0, ICP22, and ICP27 in Neuroblastoma Cells
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作者 Long-ding LIU Qi-han LI 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2008年第4期272-278,共7页
The three immediate-early proteins of HSV-1, ICP0, ICP22, and ICP27, have specific and pivotal functions in transcriptional activation and inhibition, multiple regulatory and control processes of viral genes. In this ... The three immediate-early proteins of HSV-1, ICP0, ICP22, and ICP27, have specific and pivotal functions in transcriptional activation and inhibition, multiple regulatory and control processes of viral genes. In this paper, the expression and localization of these three proteins were studied in neuroblastoma cells using biochemical assays, and their possible and potential interactive functions are discussed. The data show that the three proteins are localized in different structures, specifically in the PML-NB-associated structure, which is a specific nuclear structure composed of many protein molecules and bound tightly to the nuclear matrix in neuroblastoma cells. The results suggest that the activating and suppressive functions of ICPs are mostly dependent on their transcriptional and regulatory roles, including the PML-NB-associated structure. 展开更多
关键词 Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) Immediate-early proteins human neuroblastoma cells PEGFP Liposome transfection
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儿童神经母细胞瘤化疗后严重感染的影响因素及重组人粒细胞刺激因子预防的应用效果
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作者 杨兰 高林林 雷婉婷 《黑龙江医学》 2024年第1期24-26,共3页
目的:分析并探究儿童神经母细胞瘤(NB)化疗后严重感染的影响因素及重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)预防的应用效果,为临床提供依据。方法:回顾性分析2020年3月—2021年12月南阳市中心医院收治的100例NB患儿的一般资料,统计所有患儿在化... 目的:分析并探究儿童神经母细胞瘤(NB)化疗后严重感染的影响因素及重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)预防的应用效果,为临床提供依据。方法:回顾性分析2020年3月—2021年12月南阳市中心医院收治的100例NB患儿的一般资料,统计所有患儿在化疗治疗后严重感染的发生率,并统计临床上可能诱发感染的影响因素。将停止化疗24 h后立即接受rhG-CSF预防干预的患儿为观察组(n=57);将出现粒细胞缺乏现象后再接受rhG-CSF预防干预的患儿为对照组(n=43)。观察两组患者严重感染发生情况并分析其影响因素,比较rhG-CSF预防的应用效果。结果:100例患儿中严重感染发生率为27.00%(27/100)。NB患儿化疗后严重感染发生率单因素分析结果显示,不同患儿年龄、病情分期、远处转移、血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)、手术切除、化疗药物、化疗持续时间等都会影响到患儿化疗后严重感染发生率,差异有统计学意义(χ2=5.372、6.222、6.322、5.983、4.785、10.079、7.193,P<0.05)。应用rhG-CSF干预治疗后,对照组严重感染发生率高于观察组,持续时间长于对照组,差异有统计学意义(χ^(2)=6.515;t=10.218,P<0.05)。结论:影响儿童NB化疗后严重感染的主要因素为患儿年龄、临床分期、血清NSE水平、选用的化疗药物、化疗的持续时间等,若能够在患儿化疗24 h后及时给予rhG-CSF干预治疗,则能显著降低患儿群体出现严重感染的概率,有利于更好地改善患儿的预后。 展开更多
关键词 儿童神经母细胞瘤 化疗治疗 严重感染 影响因素 重组人粒细胞 刺激因子 预防应用
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芹菜素对SH-SY5Y细胞内质网应激诱导凋亡的影响 被引量:2
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作者 杨全伟 黄文涛 +1 位作者 陈一璇 胡松 《医药导报》 CAS 北大核心 2023年第11期1600-1605,共6页
目的探讨芹菜素逆转毒胡萝卜素(TG)所致人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞内质网应激诱导凋亡的分子机制。方法采用细胞计数试剂-8(CCK-8)检测不同浓度TG和不同处理时间对SH-SY5Y细胞活力的影响,观察芹菜素对SH-SY5Y细胞的保护作用;蛋白免疫... 目的探讨芹菜素逆转毒胡萝卜素(TG)所致人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞内质网应激诱导凋亡的分子机制。方法采用细胞计数试剂-8(CCK-8)检测不同浓度TG和不同处理时间对SH-SY5Y细胞活力的影响,观察芹菜素对SH-SY5Y细胞的保护作用;蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测SH-SY5Y细胞内质网应激球蛋白结合蛋白(BIP)、C/EBP同源蛋白(CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶12(CASPASE-12)及细胞凋亡Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)表达变化。结果与对照组(CON组)比较,TG可浓度和时间依耐性降低SH-SY5Y细胞活力(P<0.01);10、20及30μmol·L^(-1)芹菜素处理SH-SY5Y细胞1 h,与1.0μmol·L^(-1)TG比较,10μmol·L^(-1)芹菜素能逆转细胞活力(P<0.01),效果优于20、30μmol·L^(-1)芹菜素;芹菜素预处理能降低BIP、CHOP表达(P<0.05),增强Bcl-2表达(P<0.05),升高Bcl-2/Bax值(P<0.05)。结论芹菜素能够逆转TG诱导的SH-SY5Y内质网应激,增强细胞活力,抑制内质网应激所致细胞凋亡。 展开更多
关键词 芹菜素 人神经母细胞瘤 内质网应激 凋亡
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^1H-indole-2,3-dione inhibits migration and invasion of SH-SY5Y neuroblastoma cells
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作者 Wang Yan-hui Hou Lin +1 位作者 Xu Ping-ping Zou Yao-wu 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第B05期19-23,共5页
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CXCL10基因对SH-SY5Y细胞氧化损伤、钙稳态及Nrf2/BNIP3的影响
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作者 刘琳 马倩 +1 位作者 万光宇 田玲 《解剖学研究》 CAS 2023年第6期511-517,522,共8页
目的 探讨CXC趋化因子配体10(CXCL10)基因对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y氧化损伤、钙稳态失衡及核因子E2相关因子2(Nrf2)、BCL2相互作用蛋白3(BNIP3)表达的影响。方法 采用H2O2损伤SH-SY5Y细胞,分为对照组(未经H2O2损伤的SH-SY5Y细胞)、... 目的 探讨CXC趋化因子配体10(CXCL10)基因对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y氧化损伤、钙稳态失衡及核因子E2相关因子2(Nrf2)、BCL2相互作用蛋白3(BNIP3)表达的影响。方法 采用H2O2损伤SH-SY5Y细胞,分为对照组(未经H2O2损伤的SH-SY5Y细胞)、模型组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞)、NC-siRNA组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染NC-siRNA)及CXCL10-siRNA组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染CXCL10-siRNA),peDNA3.1.D组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染空载体)及CXCLl0/peDNA3.1组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染CXCL10/peDNA3.1)。采用实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞CXCL10 mRNA、MTT检测各组细胞活性、相关试剂盒检测氧化应激指标、流式细胞仪检测各组细胞Ca2+荧光强度和免疫印迹检测各组细胞Nrf2、BNIP3表达。结果 对照组、模型组、NC-siRNA组、CXCL10-siRNA组、peDNA3.1.D组和CXCLl0/peDNA3.1组中CXCL10 mRNA水平分别为1.02±0.08、1.44±0.14、1.40±0.17、0.73±0.05、1.49±0.18和2.20±0.16,差异有统计学意义(F=77.400,P<0.05);与对照组相比,模型组细胞活性、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、Nrf2、BNIP3降低,丙二醛(MDA)、Ca2+荧光强度升高(P<0.05);模型组、NC-siRNA组、peDNA3.1.D组上述指标比较无意义(P>0.05),与模型组相比,CXCL10-siRNA组细胞活性、GSH、SOD、CAT、Nrf2、BNIP3升高(P<0.05),MDA、Ca2+荧光强度升降低(P<0.05),CXCL10/peDNA3.1组细胞活性、GSH、SOD、CAT、Nrf2、BNIP3降低(P<0.05),MDA、Ca2+荧光强度升高(P<0.05)。结论 下调CX-CL10基因可提高H2O2损伤后SH-SY5Y细胞活性,并可抗氧化应激,降低细胞内游离Ca2+水平,这可能与激活Nrf2/BNIP3信号通路相关。 展开更多
关键词 帕金森病 人神经母细胞瘤细胞 CXC趋化因子配体10 氧化损伤 钙稳态失衡
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莪术醇对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长、增殖的影响及机制研究 被引量:1
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作者 谭雪瑛 田仁富 潘轲 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2023年第6期375-381,共7页
目的观察莪术醇对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长、增殖的影响,并初步探讨其机制。方法对数期人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,噻唑兰(MTT)法检测不同莪术醇干预浓度下细胞生长曲线;另分为对照组、A组、B组、C组、P组,每组3个复孔,A、B、C组... 目的观察莪术醇对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长、增殖的影响,并初步探讨其机制。方法对数期人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,噻唑兰(MTT)法检测不同莪术醇干预浓度下细胞生长曲线;另分为对照组、A组、B组、C组、P组,每组3个复孔,A、B、C组分别用终浓度分别为2.5、5、10mg·mL^(-1)的莪术醇干预;P组给予5μmol·L^(-1)顺铂。观察干预48 h后细胞形态学变化;采用台盼蓝染色法检测干预48 h后细胞计数及细胞群体倍增时间(TD);采用MTT法检测并对比A、B、C组及P组干预24、48、72 h时细胞增殖抑制率,平皿克隆形成实验观察各组细胞生长情况;分别采用实时荧光定量聚合酶链反应法和蛋白印迹法检测并对比干预48 h时增殖细胞抗原(PCNA)和细胞周期蛋白激酶抑制因子(p27)mRNA和蛋白表达情况。结果2.5~10mg·mL^(-1)的莪术醇干预下细胞增殖抑制率呈升高改变,但20~80mg·mL^(-1)的莪术醇干预下细胞增殖抑制率无明显变化;倒置相差显微镜下观察,对照组细胞形态、贴壁生长状况均正常,A、B、C组及P组细胞明显团缩,细胞间隙增大,贴壁细胞不同程度脱落,C组脱落最为明显;A、B、C组及P组细胞内空泡增多,部分可见细胞质染色加深,细胞核浓缩深染呈凋亡形态,C组最严重。48 h细胞计数及TD比较差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,A、B、C组及P组48 h细胞计数均较少,TD均延长(P<0.05);与A组相比,B、C组及P组48 h细胞计数均较少,TD均延长(P<0.05);与B组相比,C组48 h细胞计数较少(P<0.05),TD延长(P<0.05),P组与B组差异均无统计学意义(P>0.05)。24 h细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义(P>0.05),48h、72h组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且C组>B组/P组>A组,各组细胞增殖抑制率均随着时间的延长呈增高趋势(P<0.05);平皿克隆形成实验显示C组细胞克隆数目明显少于其余各组(P<0.05),且莪术醇对细胞的半数抑制浓度(IC50)值为9.85mg·mL^(-1);PCNA、p27 mRNA和蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,A、B、C组及P组PCNA mRNA和蛋白相对表达量较低(P<0.05),p27 mRNA和蛋白相对表达量较高(P<0.05);与A组相比,B、C组及P组PCNA mRNA和蛋白相对表达量较低(P<0.05),p27 mRNA和蛋白相对表达量较高(P<0.05);与B组相比,C组PCNA mRNA和蛋白相对表达量较低(P<0.05),p27 mRNA和蛋白相对表达量较高(P<0.05),P组与B组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论莪术醇可抑制人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长、增殖,可能与下调PCNA mRNA和蛋白表达、上调p27 mRNA和蛋白表达有关。 展开更多
关键词 莪术醇 人神经母细胞瘤 生长 增殖 机制
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富硒蛹虫草子实体多肽对SH-SY5Y细胞及脑缺血/再灌注损伤大鼠保护作用的机制研究
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作者 陈克成 郑毅男 +1 位作者 杨力 李庆杰 《中国现代中药》 CAS 2023年第10期2128-2134,共7页
目的:探讨富硒蛹虫草子实体多肽(SECM)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠的保护作用机制。方法:以SECM含药血清为样品,通过噻唑蓝(MTT)法检测含药血清对SH-SY5Y细胞在半数抑制浓度(IC50)冈田酸和过氧化氢作用下... 目的:探讨富硒蛹虫草子实体多肽(SECM)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠的保护作用机制。方法:以SECM含药血清为样品,通过噻唑蓝(MTT)法检测含药血清对SH-SY5Y细胞在半数抑制浓度(IC50)冈田酸和过氧化氢作用下对细胞增殖的影响,以观察SECM对SH-SY5Y细胞的保护修复作用;使用改进的推注线技术制备大鼠I/R损伤模型,24 h后进行神经功能评分,检测各组大鼠脑组织丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活性,核转录因子(NF)-κB、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达水平。结果:过氧化氢和冈田酸对SH-SY5Y细胞的IC50分别为420、35 nmol·L^(-1),而SECM在IC50过氧化氢和冈田酸作用下对SH-SY5Y细胞具有很好的保护和修复作用;与假手术组比较,模型组大鼠神经功能损伤严重,脑组织中MDA含量和NF-κB、VEGF、PAI-1、ICAM-1表达水平均升高,GSH-Px及SOD活性均下降。与模型组比较,SECM高、中剂量组大鼠神经功能评分有所改善;SECM高、中、低剂量组大鼠脑组织中GSH-Px和SOD活性均上升,MDA含量和NF-κB、VEGF、PAI-1、ICAM-1表达水平均降低。结论:SECM对预先暴露于损伤因子过氧化氢及冈田酸的SH-SY5Y细胞均具有很好的保护和修复作用,同时对I/R损伤大鼠具有脑保护作用。 展开更多
关键词 富硒蛹虫草子实体多肽 人神经母细胞瘤细胞 细胞增殖 脑缺血/再灌注 作用机制
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硫芥对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的毒效应及机制
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作者 张赔 徐斌 +1 位作者 蒋宁 周文霞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期263-273,共11页
目的建立硫芥(SM)染毒的神经细胞损伤模型,研究SM的神经细胞毒性效应及潜在机制。方法采用SM 0(溶剂,0.2%乙醇),0.1,1.0,10,50,100,200,400和800μmol·L^(-1)孵育人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞30 min,而后去除药物,换用正常培养基孵育... 目的建立硫芥(SM)染毒的神经细胞损伤模型,研究SM的神经细胞毒性效应及潜在机制。方法采用SM 0(溶剂,0.2%乙醇),0.1,1.0,10,50,100,200,400和800μmol·L^(-1)孵育人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞30 min,而后去除药物,换用正常培养基孵育24 h。应用IncuCyte ZOOM长时间动态活细胞成像及数据分析系统观察细胞融合率和细胞形态;CCK-8法检测细胞活力;SM 0,1.0,10,25,50,100和400μmol·L^(-1)以同样方式处理细胞,calcein-AM/PI荧光染色检测活细胞比例和死细胞比例;试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率;5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)-488细胞增殖试剂盒检测细胞增殖;免疫荧光法测定细胞DNA双链断裂标志物γ-H2AX。SM 0,1.0,10和100μmol·L^(-1)以同样方式处理细胞后,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)相对含量;试剂盒检测细胞内NAD+/NADH和ATP含量;SM 10μmol·L^(-1)处理细胞后,超高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内SM-DNA加合物种类。结果与溶剂组相比,SM染毒后2 h时,SM 800μmol·L^(-1)组细胞融合率降至<5%且不再增加;SM染毒6~8 h后,SM 10~400μmol·L^(-1)组细胞融合率曲线逐渐降低。SM染毒后24 h时,细胞活力呈浓度依赖性降低(P<0.05,P<0.01,r=-0.6681),半数抑制浓度(IC50)为15.92μmol·L^(-1)。SM 25~400μmol·L^(-1)显著增加死细胞比例(P<0.01),浓度依赖性显著增加LDH释放率(P<0.01,r=0.9401);SM 400μmol·L^(-1)显著降低EdU阳性细胞比例(P<0.01)。SM 1.0~100μmol·L^(-1)均可显著增加细胞内ROS含量(P<0.01),且显著降低细胞内NAD+/NADH和ATP含量(P<0.01),均呈浓度依赖性(r分别为0.8074,-0.8885和-0.9514);SM 25~400μmol·L^(-1)可浓度依赖性增加γ-H2AX阳性细胞比例(P<0.01,r=0.8550)。在SM 10μmol·L^(-1)染毒细胞中检测到2种SM与DNA加合物——单加合物N7-HETEG和双加合物Bis-G。结论SM对SH-SY5Y细胞具有明显的细胞毒性作用,可破坏细胞膜结构,阻碍细胞增殖,降低细胞存活率,其机制可能与引起神经细胞内DNA加合物形成、DNA损伤、能量代谢紊乱和氧化应激反应密切相关。 展开更多
关键词 硫芥 人神经母细胞瘤细胞 DNA损伤 氧化应激 能量代谢
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预防性使用重组人粒细胞刺激因子对神经母细胞瘤患儿化疗后骨髓抑制的影响
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作者 袁晓芳 刘一鸣 赵茜 《东南国防医药》 2023年第3期247-250,共4页
目的探究预防性使用重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)对神经母细胞瘤(NB)患儿化疗后骨髓抑制的影响。方法选取2020年6月-2022年7月在南京医科大学附属儿童医院确诊的66例NB患儿,采用随机数表法将NB患儿分为预防组(33例)和对照组(33例)。2... 目的探究预防性使用重组人粒细胞刺激因子(rhG-CSF)对神经母细胞瘤(NB)患儿化疗后骨髓抑制的影响。方法选取2020年6月-2022年7月在南京医科大学附属儿童医院确诊的66例NB患儿,采用随机数表法将NB患儿分为预防组(33例)和对照组(33例)。2组患儿第一化疗周期均采用环磷酰胺+托泊替康的化疗方案,预防组在化疗开始24~48 h后立即预防性使用rhG-CSF,对照组在出现粒细胞缺乏后再给予rhG-CSF进行治疗。比较预防组和对照组患儿白细胞计数(WBC)、中性粒细胞绝对计数(ANC)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和WBC、ANC恢复正常的时间,观察2组患儿继发感染发生率和不良反应发生率。结果治疗后,预防组WBC、ANC水平分别为(5.65±2.41)×10^(9)/L、(6.22±2.34)×10^(9)/L,均高于对照组的(3.91±2.32)×10^(9)/L、(4.45±1.12)×10^(9)/L,差异有统计学意义(P<0.05);预防组IFN-γ、TNF-α水平分别为(6.91±1.41)μg/L、(12.22±2.34)ng/L,低于对照组的(10.42±2.12)μg/L、(19.45±1.62)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05);预防组WBC、ANC恢复正常时间分别为(5.56±0.86)d、(5.52±0.82)d,均短于对照组的(7.21±1.21)d、(7.43±1.25)d,差异有统计学意义(P<0.05);预防组继发感染发生率(21.21%)低于对照组(46.88%),差异有统计学意义(P<0.05)。2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论rhG-CSF能改善NB患儿化疗后引起的骨髓抑制,预防性使用更能明显减轻NB化疗后骨髓抑制,减少继发性感染,具有一定的临床预后改善价值。 展开更多
关键词 重组人粒细胞刺激因子 神经母细胞瘤 骨髓抑制 化疗
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没食子酸抑制人神经母细胞瘤增殖作用的实验研究 被引量:17
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作者 何文飞 何大维 +3 位作者 马超 赵丹 张永波 卞则栋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期107-110,共4页
目的研究没食子酸抑制小鼠模型中人神经母细胞瘤增殖的作用以及对化疗药物的协同作用。方法建立人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株免疫活性C57BL/6j小鼠移植瘤模型,随机分配成4组,每组10只:①PBS荷瘤对照组,按PBS0.5ml/只,腹腔注射,作为阴性... 目的研究没食子酸抑制小鼠模型中人神经母细胞瘤增殖的作用以及对化疗药物的协同作用。方法建立人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株免疫活性C57BL/6j小鼠移植瘤模型,随机分配成4组,每组10只:①PBS荷瘤对照组,按PBS0.5ml/只,腹腔注射,作为阴性对照;②没食子酸组,按250mg/kg,1次/2d给药,连续2周;③环磷酰胺组,按75mg/kg给药,每周2次,连续2周,作为阳性对照;④没食子酸+环磷酰胺组,没食子酸在环磷酰胺给药前24h给药,没食子酸与环磷酰胺独立给药,剂量和时间同前。药物均9:00腹腔注射给药,每周监测相对肿瘤体积(RTV),治疗时间共2周,次日处死小鼠,称体质量和瘤质量(Wt)、计算抑瘤率(IR),BrdU标记检测移植瘤细胞增殖。结果没食子酸组、环磷酰胺组、没食子酸+环磷酰胺组在2周的移植瘤瘤质量分别为(4559.0±677.7)、(2117.0±749.6)、(637.7±319.6)mg,平均抑瘤率分别为36.94%、70.72%、91.18%,与PBS组比较差异有显著性(P<0.01),没食子酸+环磷酰胺组瘤质量与环磷酰胺组比较差异有显著性(P<0.01)。各给药组肿瘤增殖指数分别为0.1229±0.0219、0.1076±0.0156、0.0413±0.0130,与PBS组肿瘤增殖指数(0.2308±0.0759)比较差异有显著性(P<0.01),同时没食子酸+环磷酰胺组与没食子酸组或环磷酰胺组比较差异有显著性(P<0.01)。结论没食子酸具有抑制人神经母细胞移植瘤增殖、协同环磷酰胺抗肿瘤生长的作用。 展开更多
关键词 没食子酸 人神经母细胞瘤 肿瘤增殖指数 环磷酰胺
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2,2’,4,4’-四溴联苯醚对SH-SY5Y细胞氧化应激与DNA损伤的影响 被引量:9
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作者 何平 何卫红 +3 位作者 王爱国 张明 夏涛 陈学敏 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期266-268,共3页
目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)氧化应激的影响和DNA损伤作用。方法用含10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO2条件下培养SH-SY5Y细胞。当培养细胞处于对数生长期时,用1、2、4、6、8和10μg/m... 目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)氧化应激的影响和DNA损伤作用。方法用含10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO2条件下培养SH-SY5Y细胞。当培养细胞处于对数生长期时,用1、2、4、6、8和10μg/mlPBDE-47进行染毒,24h后检测细胞存活率、细胞外乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,以及DNA损伤情况。结果与对照组相比,1μg/ml和2μg/ml剂量组细胞存活率略有上升(P<0.05),4、6、8和10μg/ml剂量组细胞存活率显著降低(P<0.05);各染毒剂量组GSH含量显著下降(P<0.05)、尾矩显著上升(P<0.05);4、8和10μg/ml剂量组MDA含量明显高于对照组(P<0.05);4、6、8和10μg/ml剂量组LDH漏出率显著高于对照组(P<0.05)、SOD活力明显低于对照组(P<0.05);6、8和10μg/ml剂量组尾部DNA百分率与对照组比较存在差异的显著性(P<0.05)。结论PBDE-47可引起SH-SY5Y细胞氧化应激和DNA损伤,氧化应激可能在PBDE-47致DNA损伤中起重要作用。 展开更多
关键词 2 2’4 4’-四溴联苯醚 神经母细胞瘤细胞株 氧化应激 DNA损伤
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Caspase-3和Caspase-8在氟化钠致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用 被引量:8
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作者 何卫红 徐八一 +4 位作者 徐志霞 夏涛 何平 高萍 王爱国 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期381-384,共4页
目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-... 目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-3活性以及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平;再选择适宜的40μg/mlNaF染毒剂量组,观察在Fas受体激动剂CH11或拮抗剂ZB4作用下其细胞凋亡率、Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平的改变。结果与对照组比较,40、80μg/ml染毒组细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率随染毒剂量的升高呈上升趋势,且40、80μg/ml染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);40、80μg/ml染毒组Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);激动剂CH11与NaF共培养对细胞凋亡显示出协同效应,拮抗剂ZB4可部分阻断NaF致SH-SY5Y细胞的凋亡。结论NaF可通过上调死亡受体Fas途径的关键酶Caspase-3和Caspase-8的表达,促进SH-SY5Y细胞凋亡。 展开更多
关键词 氟化物 氟化钠 人神经母细胞瘤细胞株 细胞凋亡 CASPASE-3 CASPASE-8
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2,3-吲哚醌对血管内皮细胞生长因子的影响及作用机制研究 被引量:8
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作者 鞠传霞 侯琳 +2 位作者 孙福生 张硕 岳旺 《中国药房》 CAS CSCD 北大核心 2006年第24期1851-1853,共3页
目的:研究2,3-吲哚醌在体外对人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,探讨其作用机制。方法:采用酶联免疫吸附测定法检测VEGF蛋白分泌水平;反转录-聚合酶链反应测定VEGF信使核糖核酸(mRNA)的相对表达水平;Wester... 目的:研究2,3-吲哚醌在体外对人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,探讨其作用机制。方法:采用酶联免疫吸附测定法检测VEGF蛋白分泌水平;反转录-聚合酶链反应测定VEGF信使核糖核酸(mRNA)的相对表达水平;Western-blot测定磷酸化的有丝分裂原激活的蛋白激酶(pp42/pp44)的相对表达量。结果:2,3-吲哚醌作用细胞24h后,VEGF分泌量明显降低,mRNA相对表达水平下降,pp42/pp44的相对表达量降低。结论:2,3-吲哚醌能抑制SH-SY5Y细胞分泌VEGF蛋白和mRNA的表达,其作用可能与改变有丝分裂原激活的蛋白激酶磷酸化水平有关。 展开更多
关键词 2 3-吲哚醌 人神经母瘤细胞 血管内皮细胞生长因子 作用机制
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黄芩黄酮对H_(2)O_(2)导致的神经细胞损伤的保护作用 被引量:25
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作者 高中洪 黄开勋 徐辉碧 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期589-590,共2页
关键词 黄芩 黄酮 人成神经瘤细胞 过氧化氢
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活性氧对神经母细胞株SH-SY5Y细胞L型钙通道电流的影响 被引量:6
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作者 杜怡峰 孙兆林 +2 位作者 李泱 韩仲岩 盛树力 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期73-75,共3页
目的 探讨氧自由基导致神经元钙超载的发生机制。方法 在神经母细胞株 SH- SY5 Y细胞体外培养的基础上 ,采用全细胞膜片钳技术 ,观察 H2 O2 对 SH- SY5 Y细胞 L 型钙电流 (ICa,L)的影响。结果  (1) H2 O2 能够明显增加峰值 ICa,L,且... 目的 探讨氧自由基导致神经元钙超载的发生机制。方法 在神经母细胞株 SH- SY5 Y细胞体外培养的基础上 ,采用全细胞膜片钳技术 ,观察 H2 O2 对 SH- SY5 Y细胞 L 型钙电流 (ICa,L)的影响。结果  (1) H2 O2 能够明显增加峰值 ICa,L,且该作用具有浓度依赖性。 (2 ) H2 O2 使 ICa,L的 I- V相关曲线下移 ,但对其形状和最大激活电位无明显影响。结论  H2 O2 对 L 型钙通道有明显的增强作用 ,此可能是其导致神经元钙超载的机制之一。 展开更多
关键词 H2O2 膜片钳 神经母细胞瘤细胞 钙通道 SH-SY5Y细胞 脑缺血
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