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Transplantation of human placental chorionic plate-derived mesenchymal stem cells for repair of neurological damage in neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy
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作者 Lulu Xue Ruolan Du +8 位作者 Ning Bi Qiuxia Xiao Yifei Sun Ruize Niu Yaxin Tan Li Chen Jia Liu Tinghua Wang Liulin Xiong 《Neural Regeneration Research》 SCIE CAS CSCD 2024年第9期2027-2035,共9页
Neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy is often associated with permanent cerebral palsy,neurosensory impairments,and cognitive deficits,and there is no effective treatment for complications related to hypoxic-ische... Neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy is often associated with permanent cerebral palsy,neurosensory impairments,and cognitive deficits,and there is no effective treatment for complications related to hypoxic-ischemic encephalopathy.The therapeutic potential of human placental chorionic plate-derived mesenchymal stem cells for various diseases has been explored.However,the potential use of human placental chorionic plate-derived mesenchymal stem cells for the treatment of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy has not yet been investigated.In this study,we injected human placental chorionic plate-derived mesenchymal stem cells into the lateral ventricle of a neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy rat model and observed significant improvements in both cognitive and motor function.Protein chip analysis showed that interleukin-3 expression was significantly elevated in neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy model rats.Following transplantation of human placental chorionic plate-derived mesenchymal stem cells,interleukin-3 expression was downregulated.To further investigate the role of interleukin-3 in neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy,we established an in vitro SH-SY5Y cell model of hypoxic-ischemic injury through oxygen-glucose deprivation and silenced interleukin-3 expression using small interfering RNA.We found that the activity and proliferation of SH-SY5Y cells subjected to oxygen-glucose deprivation were further suppressed by interleukin-3 knockdown.Furthermore,interleukin-3 knockout exacerbated neuronal damage and cognitive and motor function impairment in rat models of hypoxic-ischemic encephalopathy.The findings suggest that transplantation of hpcMSCs ameliorated behavioral impairments in a rat model of hypoxic-ischemic encephalopathy,and this effect was mediated by interleukin-3-dependent neurological function. 展开更多
关键词 behavioral evaluations gene knockout human neuroblastoma cells(SH-SY5Y) human placental chorionic derived mesenchymal stem cells INTERLEUKIN-3 neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy nerve injury oxygen-glucose deprivation protein chip small interfering RNA
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Detection of ROS and translocation of ERP-57 in apoptotic induced human neuroblastoma(SH-SY5Y)cells
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作者 ATIF KAMIL MUBARAK ALI KHAN +6 位作者 MUHAMMAD AASIM NADIR ZAMAN KHAN RAHAM SHER KHAN MUHSIN JAMAL WAQAR AHMAD MIR AZAM KHAN FAZAL JALIL 《BIOCELL》 SCIE 2019年第3期167-174,共8页
Several toxic compounds are known to induce apoptosis in mammalian cell lines.The human neuroblastoma cells(SHSH-SY5Y)were exposed to the phosphatase inhibiting toxin okadaic acid(OA)or hydrogen peroxide(H2O2)to induc... Several toxic compounds are known to induce apoptosis in mammalian cell lines.The human neuroblastoma cells(SHSH-SY5Y)were exposed to the phosphatase inhibiting toxin okadaic acid(OA)or hydrogen peroxide(H2O2)to induce apoptosis as well as generate reactive oxygen species(ROS).Mitoxantrone(MXT)was used as a positive control for apoptosis.The SHSH-SY5Y cells were transfected with eukaryotic expression plasmid pHyPer-dMito encoding mitochondrial-targeted fluorescent or pHyPer-dCito encoding cytoplasmic-targeted fluorescent sensor for hydrogen peroxide(HyPer).The ERp57,also called GRP58(Glucose-regulated protein 58),is a stress protein induced in conditions like glucose starvation and viral infection.Recently ERp57 was shown to translocate from the endoplasmatic reticulum to the cell surface in anthracycline-induced apoptotic cells.ERp57 co-translocation together with calreticulin has been suggested to be crucial for recognizing tumor cells to induce immunogenic cell death.ERp57 translocation after exposure to okadaic acid was studied using immunofluorescence and confocal microscopy.These studies indicated that okadaic acid has induced the translocation of ERp57 to the cellular membrane. 展开更多
关键词 Apoptosis CYTOPLASM Endoplasmic recticulum(ER) ERP-57 human neuroblastoma cell(SHSH-SY5Y) IMMUNOFLUORESCENCE Mitochondria Reactive oxygen species(ROS) Transfection
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Biological Analysis of HSV-1 Immediate-early Proteins ICP0, ICP22, and ICP27 in Neuroblastoma Cells
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作者 Long-ding LIU Qi-han LI 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2008年第4期272-278,共7页
The three immediate-early proteins of HSV-1, ICP0, ICP22, and ICP27, have specific and pivotal functions in transcriptional activation and inhibition, multiple regulatory and control processes of viral genes. In this ... The three immediate-early proteins of HSV-1, ICP0, ICP22, and ICP27, have specific and pivotal functions in transcriptional activation and inhibition, multiple regulatory and control processes of viral genes. In this paper, the expression and localization of these three proteins were studied in neuroblastoma cells using biochemical assays, and their possible and potential interactive functions are discussed. The data show that the three proteins are localized in different structures, specifically in the PML-NB-associated structure, which is a specific nuclear structure composed of many protein molecules and bound tightly to the nuclear matrix in neuroblastoma cells. The results suggest that the activating and suppressive functions of ICPs are mostly dependent on their transcriptional and regulatory roles, including the PML-NB-associated structure. 展开更多
关键词 Herpes simplex virus type 1 (HSV-1) Immediate-early proteins human neuroblastoma cells PEGFP Liposome transfection
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^1H-indole-2,3-dione inhibits migration and invasion of SH-SY5Y neuroblastoma cells
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作者 Wang Yan-hui Hou Lin +1 位作者 Xu Ping-ping Zou Yao-wu 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2016年第B05期19-23,共5页
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PTCSC3对谷氨酸诱导SH-SY5Y神经细胞凋亡的影响
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作者 苗峥 胡雨 +6 位作者 米山 焦明丽 韩明明 王轶博 胡勇 黄锋 詹合琴 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2024年第9期1222-1235,共14页
目的探讨乳头状甲状腺癌易感性候选基因3(papillary thyroid carcinoma susceptibility candidate 3,PTCSC3)对谷氨酸(glutamicacid,Glu)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响及其机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,谷氨酸损伤SH-SY5... 目的探讨乳头状甲状腺癌易感性候选基因3(papillary thyroid carcinoma susceptibility candidate 3,PTCSC3)对谷氨酸(glutamicacid,Glu)诱导人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)凋亡的影响及其机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,谷氨酸损伤SH-SY5Y细胞24 h,转染技术对PTCSC3进行抑制及过表达,采用Hoechst 33258染色法、流式细胞技术、AO/EB染色及四甲基偶氮唑盐比色(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测抑制或过表达PTCSC3后对各组细胞凋亡、生存的影响;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)技术检测各组细胞中PTCSC3、CCAAT/增强子结合蛋白β(CAAT/enhancer binding protein beta,C/EBP-β)及Cbp/p300结合转化激活因子4(Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 4,CITED4)的基因表达情况;Western blot检测各组细胞中C/EBP-β、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)及CITED4、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、原癌基因n-Myc的蛋白表达水平。结果2000μmol·L^(-1)Glu处理24 h对PTCSC3细胞有明显的损伤作用;与模型组比较,PTCSC3抑制剂可有效改善Glu诱导SH-SY5Y细胞凋亡率的增加和细胞存活率的下降;明显降低C/EBP-β基因及蛋白、Bax蛋白的表达,促进BDNF、p-Akt、Bcl-2蛋白的表达;增加CITED4、Cyclin D1和n-Myc的表达水平。反之,过表达PTCSC3则出现与上述结果相反的结果。结论PTCSC3可能通过调控C/EBP-β,进而调控下游信号通路BDNF/Akt和CITED4/Cyclin D1信号通路,改善Glu诱导SH-SY5Y神经细胞的凋亡和生存状态。 展开更多
关键词 乳头状甲状腺癌易感性候选基因3 人神经母细胞瘤细胞 细胞凋亡 作用 分子机制
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脂多糖调节SH-SY5Y细胞线粒体融合在阿尔茨海默病中的作用
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作者 王睿 尹亚萍 +3 位作者 李国平 马焜 靖雪妍 陈丽丽 《中国实用医药》 2024年第9期172-177,共6页
目的 探讨脂多糖(LPS)调节人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)线粒体融合在阿尔茨海默病(AD)中的作用。方法 选取SH-SY5Y细胞株进行常规培养,于细胞对数生长期以25、50、100μg/ml的LPS处理SH-SY5Y细胞48 h,分别设置为25μg/ml组、50μg/m... 目的 探讨脂多糖(LPS)调节人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)线粒体融合在阿尔茨海默病(AD)中的作用。方法 选取SH-SY5Y细胞株进行常规培养,于细胞对数生长期以25、50、100μg/ml的LPS处理SH-SY5Y细胞48 h,分别设置为25μg/ml组、50μg/ml组、75μg/ml组,同时设置空白对照组。采用细胞计数试剂(CCK-8)法检测细胞存活率;光镜检测细胞内线粒体损伤情况;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)变化;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测动力相关蛋白1 (Drp1)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)和视神经萎缩因子1(Opa1)微小核糖核酸(mRNA)表达和蛋白表达水平。分析LPS对SH-SY5Y细胞存活率和β-淀粉样蛋白(Aβ)含量, SH-SY5Y细胞线粒体形态, SH-SY5Y细胞内SOD、MDA、NO和TNF-α, SH-SY5Y细胞内mRNA表达的影响。结果 CCK-8法检测结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞存活率明显下降, Aβ含量显著升高;随着LPS剂量的增加, SH-SY5Y细胞存活率呈剂量依赖性降低, Aβ含量呈剂量依赖性增长,差异具有统计学意义(P<0.05)。光镜结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞内线粒体出现明显变大变圆,体积增大,线粒体出现肿胀和线粒体空泡化等改变,并伴有线粒体自噬的发生。ELISA结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞内SOD表达分别显著降低24.16%、69.08%和123.78%, MDA表达分别显著增加37.65%、52.13%和101.85%, NO表达分别显著增加54.34%、119.08%和167.78%, TNF-α表达分别显著增加54.34%、119.08%和167.78%,随着LPS剂量的增加, SOD含量变化具有剂量依赖性降低, NO、MDA、TNF-α含量变化呈剂量依赖性增长,差异具有统计学意义(P<0.05)。Real-Time PCR结果显示,与空白对照组相比,在48 h给药时间下, 25、50、100μg/ml组中SH-SY5Y细胞内Drp1、Mnf1和Mnf2 mRNA含量随着LPS剂量的增加而显著增加, SH-SY5Y细胞内Opa1 mRNA含量随着LPS剂量的增加而显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LPS可明显加速SH-SY5Y细胞线粒体融合分裂,降低细胞的存活率,在阿尔茨海默病的发病机制中具有重要作用。 展开更多
关键词 脂多糖 人神经母细胞瘤细胞 线粒体 阿尔茨海默病
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SARS-CoV-2刺突糖蛋白对神经细胞的损伤效应及机制
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作者 王娇 李佳佳 +3 位作者 肖文一 韦冬晖 蒋宁 周文霞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第5期375-383,共9页
目的探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突糖蛋白(S蛋白)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的损伤效应及其机制。方法用S蛋白0(细胞对照组),25,50,75和100 mg·L^(-1)处理SH-SY5Y 24 h,CCK-8法检测细胞活力;比色法检测乳... 目的探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)刺突糖蛋白(S蛋白)对人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的损伤效应及其机制。方法用S蛋白0(细胞对照组),25,50,75和100 mg·L^(-1)处理SH-SY5Y 24 h,CCK-8法检测细胞活力;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;EdU试剂盒检测细胞增殖;荧光素酶发光法检测细胞内ATP含量;JC-1荧光探针法检测细胞线粒体膜电位(MMP);Seahorse XF检测细胞糖酵解及线粒体氧化磷酸化水平。结果与细胞对照组相比,S蛋白25,50,75和100 mg·L^(-1)组细胞活力显著降低(P<0.01),半数抑制浓度(IC_(50))为65.05 mg·L^(-1);LDH释放率显著增加(P<0.01);EdU阳性细胞比例显著降低(P<0.01);S蛋白75和100 mg·L^(-1)组细胞内ATP含量显著降低(P<0.01);S蛋白50和75 mg·L^(-1)组细胞内MMP显著降低(P<0.05,P<0.01);S蛋白50 mg·L^(-1)组基础糖酵解水平和糖酵解能力的最大值显著升高(P<0.05,P<0.01),S蛋白25和50 mg·L^(-1)组呼吸能力最大值显著升高(P<0.05,P<0.01)。SH-SY5Y细胞活力与细胞内ATP含量和MMP均呈正相关(r^(2)=0.9209,P=0.001;r^(2)=0.6170,P=0.0025);与反映细胞糖酵解水平的细胞基础糖酵解水平和糖酵解能力最大值呈负相关(r^(2)=0.5194,P=0.0285;r^(2)=0.6664,P=0.0073),与反映线粒体氧化磷酸化水平的ATP生成能力呈负相关(r^(2)=0.8204,P=0.0008)。结论S蛋白使SH-SY5Y细胞活力下降,抑制细胞增殖,其机制可能与干扰神经细胞内能量代谢密切相关。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2) 刺突糖蛋白 人神经母细胞瘤细胞 神经损伤 糖酵解 能量代谢
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自噬在葡萄籽原花青素改善氟致SH-SY5Y细胞毒性中的作用
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作者 龚泽林 王本杰 +1 位作者 赵文欣 杨露 《现代医药卫生》 2024年第20期3440-3446,共7页
目的探究自噬过程在葡萄籽原花青素提取物(GSPE)缓解氟致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞毒性中的作用。方法用氟化钠(60 mg/L)处理SH-SY5Y细胞24 h构建氟染毒细胞模型,随机分为对照组、氟化钠组、氟化钠+低剂量GSPE组、氟化钠+中剂量GSPE组... 目的探究自噬过程在葡萄籽原花青素提取物(GSPE)缓解氟致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞毒性中的作用。方法用氟化钠(60 mg/L)处理SH-SY5Y细胞24 h构建氟染毒细胞模型,随机分为对照组、氟化钠组、氟化钠+低剂量GSPE组、氟化钠+中剂量GSPE组、氟化钠+高剂量GSPE组;采用细胞计数试剂-8法(CCK-8法)检测各组细胞活力值变化;采用Hoechst33342染色分析各组细胞凋亡水平变化;采用免疫荧光方法分析各组细胞LC3表达情况;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测cleaved-caspase 3、cleaved-PARP、LC3、p62等蛋白表达情况。随后纳入雷帕霉素重新分组,检测各组cleaved-PARP、LC3、p62等蛋白表达情况,并采用Hoechst33342染色分析各组细胞凋亡水平变化。结果与对照组比较,氟化钠组SH-SY5Y细胞凋亡水平显著提高(P<0.05),经GSPE干预后细胞活力上升且细胞自噬水平上升(P<0.05)。与氟化钠组比较,雷帕霉素干预可以有效抑制细胞凋亡,且雷帕霉素与原花青素联合后细胞自噬水平进一步提升(P<0.05)。结论GSPE能够抑制氟化钠诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用可能与激活自噬有关。 展开更多
关键词 葡萄籽原花青素 氟化钠 人神经母细胞瘤细胞 自噬
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CXCL10基因对SH-SY5Y细胞氧化损伤、钙稳态及Nrf2/BNIP3的影响
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作者 刘琳 马倩 +1 位作者 万光宇 田玲 《解剖学研究》 CAS 2023年第6期511-517,522,共8页
目的 探讨CXC趋化因子配体10(CXCL10)基因对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y氧化损伤、钙稳态失衡及核因子E2相关因子2(Nrf2)、BCL2相互作用蛋白3(BNIP3)表达的影响。方法 采用H2O2损伤SH-SY5Y细胞,分为对照组(未经H2O2损伤的SH-SY5Y细胞)、... 目的 探讨CXC趋化因子配体10(CXCL10)基因对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y氧化损伤、钙稳态失衡及核因子E2相关因子2(Nrf2)、BCL2相互作用蛋白3(BNIP3)表达的影响。方法 采用H2O2损伤SH-SY5Y细胞,分为对照组(未经H2O2损伤的SH-SY5Y细胞)、模型组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞)、NC-siRNA组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染NC-siRNA)及CXCL10-siRNA组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染CXCL10-siRNA),peDNA3.1.D组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染空载体)及CXCLl0/peDNA3.1组(H2O2干预的SH-SY5Y细胞转染CXCL10/peDNA3.1)。采用实时荧光定量(qRT-PCR)检测各组细胞CXCL10 mRNA、MTT检测各组细胞活性、相关试剂盒检测氧化应激指标、流式细胞仪检测各组细胞Ca2+荧光强度和免疫印迹检测各组细胞Nrf2、BNIP3表达。结果 对照组、模型组、NC-siRNA组、CXCL10-siRNA组、peDNA3.1.D组和CXCLl0/peDNA3.1组中CXCL10 mRNA水平分别为1.02±0.08、1.44±0.14、1.40±0.17、0.73±0.05、1.49±0.18和2.20±0.16,差异有统计学意义(F=77.400,P<0.05);与对照组相比,模型组细胞活性、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、Nrf2、BNIP3降低,丙二醛(MDA)、Ca2+荧光强度升高(P<0.05);模型组、NC-siRNA组、peDNA3.1.D组上述指标比较无意义(P>0.05),与模型组相比,CXCL10-siRNA组细胞活性、GSH、SOD、CAT、Nrf2、BNIP3升高(P<0.05),MDA、Ca2+荧光强度升降低(P<0.05),CXCL10/peDNA3.1组细胞活性、GSH、SOD、CAT、Nrf2、BNIP3降低(P<0.05),MDA、Ca2+荧光强度升高(P<0.05)。结论 下调CX-CL10基因可提高H2O2损伤后SH-SY5Y细胞活性,并可抗氧化应激,降低细胞内游离Ca2+水平,这可能与激活Nrf2/BNIP3信号通路相关。 展开更多
关键词 帕金森病 人神经母细胞瘤细胞 CXC趋化因子配体10 氧化损伤 钙稳态失衡
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富硒蛹虫草子实体多肽对SH-SY5Y细胞及脑缺血/再灌注损伤大鼠保护作用的机制研究
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作者 陈克成 郑毅男 +1 位作者 杨力 李庆杰 《中国现代中药》 CAS 2023年第10期2128-2134,共7页
目的:探讨富硒蛹虫草子实体多肽(SECM)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠的保护作用机制。方法:以SECM含药血清为样品,通过噻唑蓝(MTT)法检测含药血清对SH-SY5Y细胞在半数抑制浓度(IC50)冈田酸和过氧化氢作用下... 目的:探讨富硒蛹虫草子实体多肽(SECM)对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和脑缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠的保护作用机制。方法:以SECM含药血清为样品,通过噻唑蓝(MTT)法检测含药血清对SH-SY5Y细胞在半数抑制浓度(IC50)冈田酸和过氧化氢作用下对细胞增殖的影响,以观察SECM对SH-SY5Y细胞的保护修复作用;使用改进的推注线技术制备大鼠I/R损伤模型,24 h后进行神经功能评分,检测各组大鼠脑组织丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活性,核转录因子(NF)-κB、血管内皮生长因子(VEGF)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)表达水平。结果:过氧化氢和冈田酸对SH-SY5Y细胞的IC50分别为420、35 nmol·L^(-1),而SECM在IC50过氧化氢和冈田酸作用下对SH-SY5Y细胞具有很好的保护和修复作用;与假手术组比较,模型组大鼠神经功能损伤严重,脑组织中MDA含量和NF-κB、VEGF、PAI-1、ICAM-1表达水平均升高,GSH-Px及SOD活性均下降。与模型组比较,SECM高、中剂量组大鼠神经功能评分有所改善;SECM高、中、低剂量组大鼠脑组织中GSH-Px和SOD活性均上升,MDA含量和NF-κB、VEGF、PAI-1、ICAM-1表达水平均降低。结论:SECM对预先暴露于损伤因子过氧化氢及冈田酸的SH-SY5Y细胞均具有很好的保护和修复作用,同时对I/R损伤大鼠具有脑保护作用。 展开更多
关键词 富硒蛹虫草子实体多肽 人神经母细胞瘤细胞 细胞增殖 脑缺血/再灌注 作用机制
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硫芥对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的毒效应及机制
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作者 张赔 徐斌 +1 位作者 蒋宁 周文霞 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第4期263-273,共11页
目的建立硫芥(SM)染毒的神经细胞损伤模型,研究SM的神经细胞毒性效应及潜在机制。方法采用SM 0(溶剂,0.2%乙醇),0.1,1.0,10,50,100,200,400和800μmol·L^(-1)孵育人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞30 min,而后去除药物,换用正常培养基孵育... 目的建立硫芥(SM)染毒的神经细胞损伤模型,研究SM的神经细胞毒性效应及潜在机制。方法采用SM 0(溶剂,0.2%乙醇),0.1,1.0,10,50,100,200,400和800μmol·L^(-1)孵育人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞30 min,而后去除药物,换用正常培养基孵育24 h。应用IncuCyte ZOOM长时间动态活细胞成像及数据分析系统观察细胞融合率和细胞形态;CCK-8法检测细胞活力;SM 0,1.0,10,25,50,100和400μmol·L^(-1)以同样方式处理细胞,calcein-AM/PI荧光染色检测活细胞比例和死细胞比例;试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率;5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)-488细胞增殖试剂盒检测细胞增殖;免疫荧光法测定细胞DNA双链断裂标志物γ-H2AX。SM 0,1.0,10和100μmol·L^(-1)以同样方式处理细胞后,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)相对含量;试剂盒检测细胞内NAD+/NADH和ATP含量;SM 10μmol·L^(-1)处理细胞后,超高效液相色谱-串联质谱法检测细胞内SM-DNA加合物种类。结果与溶剂组相比,SM染毒后2 h时,SM 800μmol·L^(-1)组细胞融合率降至<5%且不再增加;SM染毒6~8 h后,SM 10~400μmol·L^(-1)组细胞融合率曲线逐渐降低。SM染毒后24 h时,细胞活力呈浓度依赖性降低(P<0.05,P<0.01,r=-0.6681),半数抑制浓度(IC50)为15.92μmol·L^(-1)。SM 25~400μmol·L^(-1)显著增加死细胞比例(P<0.01),浓度依赖性显著增加LDH释放率(P<0.01,r=0.9401);SM 400μmol·L^(-1)显著降低EdU阳性细胞比例(P<0.01)。SM 1.0~100μmol·L^(-1)均可显著增加细胞内ROS含量(P<0.01),且显著降低细胞内NAD+/NADH和ATP含量(P<0.01),均呈浓度依赖性(r分别为0.8074,-0.8885和-0.9514);SM 25~400μmol·L^(-1)可浓度依赖性增加γ-H2AX阳性细胞比例(P<0.01,r=0.8550)。在SM 10μmol·L^(-1)染毒细胞中检测到2种SM与DNA加合物——单加合物N7-HETEG和双加合物Bis-G。结论SM对SH-SY5Y细胞具有明显的细胞毒性作用,可破坏细胞膜结构,阻碍细胞增殖,降低细胞存活率,其机制可能与引起神经细胞内DNA加合物形成、DNA损伤、能量代谢紊乱和氧化应激反应密切相关。 展开更多
关键词 硫芥 人神经母细胞瘤细胞 DNA损伤 氧化应激 能量代谢
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2,2’,4,4’-四溴联苯醚对SH-SY5Y细胞氧化应激与DNA损伤的影响 被引量:9
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作者 何平 何卫红 +3 位作者 王爱国 张明 夏涛 陈学敏 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期266-268,共3页
目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)氧化应激的影响和DNA损伤作用。方法用含10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO2条件下培养SH-SY5Y细胞。当培养细胞处于对数生长期时,用1、2、4、6、8和10μg/m... 目的探讨2,2’,4,4’-四溴联苯醚(PBDE-47)对人神经母细胞瘤细胞株(SH-SY5Y)氧化应激的影响和DNA损伤作用。方法用含10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5%CO2条件下培养SH-SY5Y细胞。当培养细胞处于对数生长期时,用1、2、4、6、8和10μg/mlPBDE-47进行染毒,24h后检测细胞存活率、细胞外乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量,以及DNA损伤情况。结果与对照组相比,1μg/ml和2μg/ml剂量组细胞存活率略有上升(P<0.05),4、6、8和10μg/ml剂量组细胞存活率显著降低(P<0.05);各染毒剂量组GSH含量显著下降(P<0.05)、尾矩显著上升(P<0.05);4、8和10μg/ml剂量组MDA含量明显高于对照组(P<0.05);4、6、8和10μg/ml剂量组LDH漏出率显著高于对照组(P<0.05)、SOD活力明显低于对照组(P<0.05);6、8和10μg/ml剂量组尾部DNA百分率与对照组比较存在差异的显著性(P<0.05)。结论PBDE-47可引起SH-SY5Y细胞氧化应激和DNA损伤,氧化应激可能在PBDE-47致DNA损伤中起重要作用。 展开更多
关键词 2 2’4 4’-四溴联苯醚 神经母细胞瘤细胞株 氧化应激 DNA损伤
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Caspase-3和Caspase-8在氟化钠致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡中的作用 被引量:8
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作者 何卫红 徐八一 +4 位作者 徐志霞 夏涛 何平 高萍 王爱国 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期381-384,共4页
目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-... 目的探讨半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase)家族中的Caspase-3和Caspase-8对氟化钠(NaF)致人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法先用不同浓度NaF(20、40、80μg/ml)对SH-SY5Y细胞进行染毒,24h后检测细胞存活率、凋亡率、Caspase-3活性以及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平;再选择适宜的40μg/mlNaF染毒剂量组,观察在Fas受体激动剂CH11或拮抗剂ZB4作用下其细胞凋亡率、Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平的改变。结果与对照组比较,40、80μg/ml染毒组细胞存活率降低,差异有统计学意义(P<0.01);细胞凋亡率随染毒剂量的升高呈上升趋势,且40、80μg/ml染毒组细胞凋亡率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);40、80μg/ml染毒组Caspase-3活性及Caspase-3和Caspase-8 mRNA表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);激动剂CH11与NaF共培养对细胞凋亡显示出协同效应,拮抗剂ZB4可部分阻断NaF致SH-SY5Y细胞的凋亡。结论NaF可通过上调死亡受体Fas途径的关键酶Caspase-3和Caspase-8的表达,促进SH-SY5Y细胞凋亡。 展开更多
关键词 氟化物 氟化钠 人神经母细胞瘤细胞株 细胞凋亡 CASPASE-3 CASPASE-8
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2,3-吲哚醌对血管内皮细胞生长因子的影响及作用机制研究 被引量:8
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作者 鞠传霞 侯琳 +2 位作者 孙福生 张硕 岳旺 《中国药房》 CAS CSCD 北大核心 2006年第24期1851-1853,共3页
目的:研究2,3-吲哚醌在体外对人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,探讨其作用机制。方法:采用酶联免疫吸附测定法检测VEGF蛋白分泌水平;反转录-聚合酶链反应测定VEGF信使核糖核酸(mRNA)的相对表达水平;Wester... 目的:研究2,3-吲哚醌在体外对人神经母瘤细胞(SH-SY5Y)分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响,探讨其作用机制。方法:采用酶联免疫吸附测定法检测VEGF蛋白分泌水平;反转录-聚合酶链反应测定VEGF信使核糖核酸(mRNA)的相对表达水平;Western-blot测定磷酸化的有丝分裂原激活的蛋白激酶(pp42/pp44)的相对表达量。结果:2,3-吲哚醌作用细胞24h后,VEGF分泌量明显降低,mRNA相对表达水平下降,pp42/pp44的相对表达量降低。结论:2,3-吲哚醌能抑制SH-SY5Y细胞分泌VEGF蛋白和mRNA的表达,其作用可能与改变有丝分裂原激活的蛋白激酶磷酸化水平有关。 展开更多
关键词 2 3-吲哚醌 人神经母瘤细胞 血管内皮细胞生长因子 作用机制
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叠氮钠对SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞线粒体跨膜电位的影响 被引量:12
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作者 张兰 李林 +5 位作者 班立勤 安文林 刘树森 李晓明 薛冰 徐艳玲 《中国医学科学院学报》 CSCD 北大核心 2000年第5期436-439,共4页
目的 观察线粒体呼吸链复合体 IV(即细胞色素 C氧化酶)抑制剂叠氮钠 (NaN3)对人神经母细胞瘤细胞能量代谢的影响,探讨线粒体缺陷在神经退行性疾病发病中的作用。方法 将叠氮钠与培养的人神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5Y细胞共同孵育,用... 目的 观察线粒体呼吸链复合体 IV(即细胞色素 C氧化酶)抑制剂叠氮钠 (NaN3)对人神经母细胞瘤细胞能量代谢的影响,探讨线粒体缺陷在神经退行性疾病发病中的作用。方法 将叠氮钠与培养的人神经母细胞瘤细胞系 SH-SY5Y细胞共同孵育,用微测量法测定线粒体复合体 IV活性,噻唑兰( MTT)法测定细胞存活率,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测线粒体跨膜电位变化。 结果 16~ 64 mmol/L叠氮钠与培养的 SH-SY5Y细胞共孵育 1 h,细胞线粒体细胞色素 C氧化酶活性下降; 16~ 128 mmol/L叠氮钠作用 1~ 8 h,细胞存活率下降,呈时间及剂量依赖性;叠氮钠使细胞线粒体跨膜电位的荧光强度值下降,尤以细胞突起内降低最为显著,门控内正常细胞数减少。结论 叠氮钠与培养的 SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞共孵育导致细胞损伤,其机制是使细胞线粒体跨膜电位下降,能量合成障碍,最终导致细胞死亡。 展开更多
关键词 叠氮钠 线粒体跨膜电位 人神经母细胞瘤细胞
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白藜芦醇对体外培养的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响 被引量:4
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作者 郑敏 张黎 +1 位作者 刘靖 李勇 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期25-29,共5页
目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响。方法:通过不同浓度0.5~150μmol/L Res作用于体外培养的SH-SY5Y,72 h后用流式细胞术检测细胞周期构成比和细胞凋亡率,用Hochest染色观察... 目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对体外培养的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞周期与凋亡的影响。方法:通过不同浓度0.5~150μmol/L Res作用于体外培养的SH-SY5Y,72 h后用流式细胞术检测细胞周期构成比和细胞凋亡率,用Hochest染色观察细胞凋亡情况。结果:0.5~5μmol/L各组,进入G2/M期细胞所占活细胞比率逐渐升高;5~150μmol/L各组,随浓度升高,凋亡率呈现逐渐上升的趋势,而且显著高于对照组(P<0.01),其中150μmol/L组凋亡率为51.80±1.72%,进入G0/G1期间细胞为78.54±0.60%,显著高于对照组(P<0.01),而进入G2/M期细胞为0.48±0.50%,即大多细胞停留于DNA复制前期。结论:Res在0.5~150μmol/L浓度范围内对SH-SY5Y具有双向浓度依赖性,即在0.5~5μmol/L浓度范围内,Res促进SH-SY5Y细胞增殖,而在15~150μmol/L浓度范围内Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进其凋亡;其中Res抑制SH-SY5Y细胞增殖并促进凋亡主要表现为阻止G1期细胞进入S期。 展开更多
关键词 白藜芦醇 神经母细胞瘤 细胞周期 凋亡 体外培养
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叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞的保护作用 被引量:5
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作者 张景燕 陈娟 +2 位作者 王蓉 赵静姝 吴燕川 《首都医科大学学报》 CAS 2012年第6期776-778,共3页
目的通过观察叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响,探讨叶酸和维生素B12对神经细胞的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、叶酸组(1.875 mg/L)、维生素B12组(800μg/L)、叶酸(1.875 mg/L)+维生素B12(800... 目的通过观察叶酸和维生素B12对人神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞生长的影响,探讨叶酸和维生素B12对神经细胞的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,分为对照组、叶酸组(1.875 mg/L)、维生素B12组(800μg/L)、叶酸(1.875 mg/L)+维生素B12(800μg/L)组,进行细胞形态观察、细胞计数分析以及测定各组细胞的噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)代谢率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率。结果与对照组相比,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组的细胞计数和MTT代谢率升高(P<0.05),LDH漏出率降低(P<0.05),在细胞形态上,叶酸组、维生素B12组、叶酸+维生素B12组明显好于对照组,表现为细胞胞体饱满、存活细胞数目增多、贴壁良好、突起延长。结论叶酸、维生素B12能促进神经细胞生长,降低神经细胞死亡率,从而达到保护神经元的作用。 展开更多
关键词 叶酸 维生素B12 人神经母细胞瘤株SH-SY5Y
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黄芩黄酮对H_(2)O_(2)导致的神经细胞损伤的保护作用 被引量:25
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作者 高中洪 黄开勋 徐辉碧 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期589-590,共2页
关键词 黄芩 黄酮 人成神经瘤细胞 过氧化氢
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微波辐射诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的可能机制 被引量:2
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作者 王程 李琴 +5 位作者 刘微 闫岗林 徐冶 于洋 刘师兵 潘文干 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期422-426,I0002,共6页
目的:观察微波辐射对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:采用10、30和50 mW.cm-2辐射强度的微波辐射SH-SY5Y细胞5 min,以假辐射组(0 mW.cm-2)为对照,光镜下观察细胞形态变化;荧光显微镜下观察DAPI染色细胞核的形... 目的:观察微波辐射对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法:采用10、30和50 mW.cm-2辐射强度的微波辐射SH-SY5Y细胞5 min,以假辐射组(0 mW.cm-2)为对照,光镜下观察细胞形态变化;荧光显微镜下观察DAPI染色细胞核的形态;CTAB法提取细胞基因组DNA,电泳观察DNAladder;台盼蓝拒染法检测细胞存活率;AnnexinV-FITC和PI双染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率;MTT法检测细胞相对活性;蛋白质印迹检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:微波辐射后SH-SY5Y细胞形态即刻改变,胞核、胞质结构欠清,细胞皱缩甚至脱壁;细胞核内的染色质出现不规则凝集,碎裂成2~5个微核;细胞DNA出现明显的梯状条带;细胞存活率随微波辐射强度增大逐渐降低,10 mW.cm-2辐射组与假辐射组比较,细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05),但30、50 mW.cm-2辐射组细胞存活率明显低于假辐射组(P<0.05);微波辐射后6 h的细胞凋亡率随辐射强度的增加逐渐升高,各辐射组细胞凋亡率均明显高于假辐射组(P<0.05);微波辐射后24和48 h,细胞相对活力随辐射强度的增加明显降低,各辐射组的细胞相对活力均明显低于假辐射组(P<0.05)。微波辐射后,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、survivin表达水平逐渐下降,Bax、caspase-3和caspase-7表达水平逐渐升高,caspase-8和-9表达水平无明显变化。结论:微波辐射可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与survivin、Bcl-2蛋白表达水平下调、Bax蛋白表达水平上调及caspase-3和caspase-7的作用有关,而与caspase-8和caspase-9介导的caspase-3活化这一作用无密切关系。 展开更多
关键词 微波辐射 人神经母细胞瘤 SH-SY5Y细胞 细胞凋亡
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短暂激活c-jun N-terminal激酶抑制胆红素诱导的SH-SY5Y细胞凋亡 被引量:2
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作者 韩张 胡萍 倪道凤 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2002年第5期473-476,共4页
探讨c junN terminal激酶 (JNK)在胆红素诱导人神经母细胞瘤SH SY5Y细胞凋亡信号转导中的作用。我们用 30 0 μmol LH2 O2 预处理SH SY5Y细胞 1h以激活JNK ,与经PBS预处理的对照组比较 ,流式细胞仪结果显示凋亡细胞百分比由 (37 4±... 探讨c junN terminal激酶 (JNK)在胆红素诱导人神经母细胞瘤SH SY5Y细胞凋亡信号转导中的作用。我们用 30 0 μmol LH2 O2 预处理SH SY5Y细胞 1h以激活JNK ,与经PBS预处理的对照组比较 ,流式细胞仪结果显示凋亡细胞百分比由 (37 4± 3 2 ) %降低到 (12 6± 2 6 ) %。为了进一步证实JNK的作用 ,在SH SY5Y细胞经H2 O2 预处理前 ,先经 2 0 μmol LJNK c jun AP1抑制剂curcumin作用 12h以抑制H2 O2 对JNK的激活 ,流式细胞仪结果显示凋亡细胞增高到 (42 8± 4 4 ) % ,curcumin完全抑制了短暂激活JNK所提供的保护作用。结果表明短暂激活JNK可能在胆红素诱导的SH SY5Y细胞凋亡中提供抗凋亡信号 。 展开更多
关键词 细胞凋亡 胆红素 JNK 人神经母细胞瘤细胞
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