人早幼粒白血病细胞HL-60胞内pH的^(31)P核磁共振研究

建立了无损伤性测定HL 60细胞胞内pH的31 P NMR方法。细胞内无机磷 (Pi)的化学位移对pH非常敏感 ,随pH变化而变化 ,通过测定其化学位移进而能间接确定细胞内的pH。HL 60细胞的31 P核磁共振谱由Pi、ATP等的共振峰组成。根据Pi 峰的化学位移对HL 60细胞内pH进行了测定。HL 60细胞内Pi 峰的化学位移为 5 .78± 0 .0 1 ,计算得到细胞内pH值为 6.1 6±0 .0 1。31 P核磁共振能在测定细胞胞内pH的同时 ,观测到细胞内多种含磷小分子代谢物 。

对映-贝壳杉烷型二萜化合物Wangzaozin A对人早幼粒白血病HL-60细胞生长抑制和凋亡诱导的作用

目的研究对映-贝壳杉烷型二萜Wangzaozin A对人早幼粒白血病细胞HL-60生长抑制、周期阻滞、凋亡诱导作用以及相关的机制。方法利用倒置显微镜观察和台盼蓝排染法检测了Wangzaozin A对HL-60细胞生长的影响;采用流式细胞术和吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)双染法检测化合物对细胞周期分布的影响以及诱导HL-60细胞凋亡的能力;进一步利用单细胞凝胶电泳法测试化合物对细胞DNA的损伤。结果 1～4μmol/L的Wangzaozin A对HL-60细胞具有较强的生长抑制作用,较高浓度(3μmol/L和4μmol/L)和较长处理时间(48～72 h)有较强的致死效应;1～2.5μmol/L药物处理细胞24 h或48 h条件下细胞周期分布主要表现为G1期阻滞;4μmol/L药物处理12～60 h条件下细胞周期分布主要表现为很强的S期阻滞;2～4μmol/L药物作用24 h或48 h可诱导凋亡产生,其凋亡率呈显著水平(P<0.01),相同条件下,药物对细胞DNA的损伤与对照相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论该化合物对HL-60细胞DNA的损伤作用极可能是引起细胞生长抑制、周期阻滞及凋亡的直接原因。

中国鲎鲎素T-1抗人早幼粒白血病HL-60细胞活性研究

利用从中国鲎血细胞中提取的鲎素Ｔ－１作抗肿瘤活性实验．结果表明，鲎素Ｔ－１在体外对人早幼粒白血病ＨＬ－６０细胞的增殖有明显抑制作用．急性毒理实验显示，鲎素Ｔ－１对正常活体毒性较小，可用于活体实验．荷瘤裸鼠实验统计，鲎素Ｔ－１对肿瘤抑制率达４２．３％．

44种生物碱类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果:西萝芙木碱、伊波加因、骆驼蓬碱、哈尔明碱、黄连碱、延胡索碱、白屈菜碱、小檗胺、吐根碱、4-甲氧基-1-甲基-2-喹诺酮、贝母碱N-氧化物、去氢贝母碱N-氧化物、倒千里光碱、9-去甲基小檗碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱、金鸡宁、罂粟碱、喜树碱和酒石酸麦角胺对人鼻咽癌细胞株KB细胞的增殖有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱、番茄碱苷和喜树碱,其次为黄连碱、白屈菜碱、哈尔明碱、澳洲茄次碱和延胡索碱。西萝芙木碱、白屈菜碱、哈尔明碱、小檗胺、吐根碱、贝母碱N-氧化物、番茄碱苷、罂粟碱、利血胺和喜树碱对人白血病细胞株HL-60细胞的增殖亦有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;最强者为吐根碱,其次为西萝芙木碱、小檗胺、番茄碱苷和喜树碱。结论:上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱的、有抗肿瘤活性中药的有效成分,亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。

40种香豆素类化合物对人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60细胞生长抑制活性的筛选

目的:从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法:应用人鼻咽癌细胞株KB和人白血病细胞株HL-60筛选40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:马栗树皮苷、去甲基呋喃皮纳灵、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人鼻咽癌细胞株KB细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、牛防风素和考迈斯托醇对人白血病细胞株HL-60细胞的生长有一定程度的抑制作用。结论:马栗树皮苷、去甲基呋喃皮纳灵、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人鼻咽癌细胞株KB细胞的生长有抑制作用;伞形花内酯刘寄奴酸酯、牛防风素和考迈斯托醇对人白血病细胞株HL-60细胞的生长有抑制作用。

对映-贝壳杉烷型二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病HL-60细胞分化的诱导作用

目的：研究对映-贝壳杉烷型二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病HL-60细胞分化的诱导作用。方法：采用台盼蓝染色法、吉姆萨染色法、NBT还原力测定法、荧光颗粒吞噬法及流式细胞术分别检测0（空白对照）、0.3、0.6、0.9、1.2μmol/L的Leukamenin E及1.2μmol/L全反式维甲酸（ATRA）作用于HL-60细胞24、48、72、96 h后对细胞数目的影响,以及作用72 h后细胞核形态、NBT还原能力（以NBT阳性细胞率计）、细胞吞噬能力（以荧光探针P的荧光强度计）以及细胞表面抗原CD11b表达的改变情况。结果：与空白对照比较,0.3-1.2μmol/L的Leukamenin E及1.2μmol/L的ATRA作用48、72、96 h后HL-60细胞数目减少,且作用72 h后带状核细胞和分叶状核细胞数目增加（P〈0.01）,细胞NBT阳性细胞率和细胞表面CD11b表达水平增加（P〈0.01）,P荧光强度增强。结论：Leukamenin E可诱导HL-60向成熟粒细胞分化,与白血病分化治疗剂ATRA具有相似的分化诱导特点。

对映-贝壳杉烷二萜Leukamenin E对人早幼粒白血病细胞HL-60生长抑制及凋亡诱导的影响

利用台盼蓝排染法检测Leukamenin E对HL-60细胞生长的抑制作用；在倒置显微镜及荧光显微镜下分别检测细胞和细胞核形态变化；进一步采用流式细胞术和AO/EB荧光双染法检测Leukamenin E对 HL-60细胞周期分布的影响及诱导细胞凋亡的作用．结果表明，化合物Leukamenin E对HL-60细胞生长有很强的抑制作用，在低浓度和短时间条件下抑制 HL-60细胞的生长，高浓度（2.1～2.7μmol·L -1）及长时间（＞36 h）条件下对细胞具有致死作用，呈时间-剂量依赖性；1.5～2.7μmol·L -1 Leukamenin E处理24 h和48 h均引起了HL-60细胞显著的S期阻滞，同时产生显著的细胞凋亡（P＜0.01），且存在时间-剂量效应；与对照组相比， Leukamenin E处理组产生肾形核，并伴随有多核的产生．

柔红霉素对人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞及干扰素调节因子1、8、9表达的影响

目的研究柔红霉素(Daunorubicin,DNR)对人急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60细胞中干扰素调节因子1(IRF1)-mRNA、干扰素调节因子8(IRF8)-mRNA、干扰素调节因子9(IRF9)-mRNA表达的影响。方法将HL-60细胞株设为HL-60组、HL-60+DNR组,同时取3例正常人外周血白细胞为NC组。HL-60组为未加药处理组,HL-60+DNR组为小剂量DNR持续作用HL-60细胞10 d。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IRF1-mRNA、IRF8-mRNA、IRF9-mRNA转录水平,每组实验重复3次。结果与NC组相比,IRF1-mRNA、IRF8-mRNA转录水平在HL-60组显著下调(P<0.05),而HL-60+DNR组显著上调(P<0.05);与NC组相比,IRF9-mRNA转录水平在HL-60+DNR显著上调(P<0.05),在HL-60组则表现为下调,但无统计学差异(P>0.05)。结论 DNR可上调HL-60细胞中的IRF1、IRF8、IRF9表达水平。APL经DNR治疗后,可能通过上调IRF1、IRF8、IRF9的表达诱导白血病细胞的凋亡,促进其成熟,促进病情的缓解。

长期传代后HL-60细胞内脱氧胞苷激酶与阿糖胞苷耐药性的关系

目的通过观察人早幼粒白血病细胞系(HL-60)及其耐药细胞株(HL-60/R)经过长期传代后细胞内脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,dck)mRNA表达及其酶活性的变化规律,探讨dck与阿糖胞苷(Ara-C)疗效及耐药现象发生的相关性。方法分别采用实时PCR方法和核素液闪法测定HL-60和HL-60/R细胞内dck的mRNA表达水平及其酶活性水平。通过体外培养传代,观察2种细胞株经长期传代(5、10、20、30、40、50代)后细胞内dck的mRNA表达及酶活性的变化规律。结果传代初期结果显示,HL-60和HL-60/R两组细胞株之间的mRNA表达水平分别为0.37±0.03和0.17±0.03,活性值分别为0.069±0.006nmol.min-1.mg-1 protein和0.019±0.007nmol.min-1.mg-1 protein,HL-60的dck mRNA表达水平和酶活性均明显高于HL-60/R(P<0.01)。并且两组细胞株之间的显著性差异(P<0.01)持续存在于各传代过程中。HL-60和HL-60/R两组各传代节点(10、20、30、40和50代)的dck mRNA表达水平与酶活性与本组第5代细胞相比,则无明显变化(P>0.05)。结论 HL-60及HL-60/R两组细胞株间的dck mRNA表达和酶活性在传代初期存在显著差异,且两组间的差异持续存在。但与各自的初期传代相比,长期传代后的dck mRNA表达和酶活性变化并不明显,提示dck仅与Ara-C的初期疗效明显相关,而与Ara-C耐药现象的发生可能无关。

亚硒酸钠和维甲酸联合对HL-60细胞c-myc和c-fos基因表达的影响

以HL－60细胞为实验对象，利用Slot－blot技术，观察了亚硒酸钠和维甲酸（RA）联合对其原癌基因c－myc和c－fos表达的影响。结果表明：硒和RA在第一和第二天都可使c－myc基因表达下降，以后逐渐上升到对照组或稍高水平。联合可使c－myc表达显著下降，强于两单独作用。硒和pA在第三至第四天均可使c－fos表达明显升高，第四天5．8ｕmol／LNa2SeO3和0．1ｕmol／LRA以及联合组c－fos表达水平分别为对照组的2．8，3．7和5．4倍。

全反式维甲酸和亚硒酸钠对HL-60细胞Rb基因的RNA表达及其产物磷酸化的影响

目的：观察全反式维甲酸（ＲＡ）和亚硒酸钠对ＨＬ６０的Ｒｂ基因的ＲＮＡ及其产物磷酸化的联合效应。方法：以ＨＬ６０细胞为实验对象，利用狭线杂交、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ和流式细胞仪进行研究。结果：狭线杂交实验表明ＲＡ和硒单独或联合都对Ｒｂ基因的ＲＮＡ无明显影响。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ结果显示：ＲＡ和硒可影响该细胞ＲＢ蛋白磷酸化与去磷酸化状态。在第４天０．１μｍｏｌ／ＬＲＡ可使去磷酸化ＲＢ蛋白增加４７％；５．８μｍｏｌ／ＬＮａ２ＳｅＯ３可使磷酸化ＲＢ蛋白减少４９％，对去磷酸化ＲＢ蛋白仅轻度增加。联合后去磷酸化ＲＢ蛋白明显增加，较对照组增加了１２７％，明显高于两单独组。实验中ＲＢ蛋白磷酸化状态与细胞分化和细胞周期关系与文献报道一致。结论：ＲＡ和硒联用对ＨＬ６０细胞的ＲＢ蛋白产物去磷酸化作用比单独作用更强。

紫外辐射对白血病HL-60细胞增殖的影响

目的探讨不同方案紫外线（UV）照射对白血病HL-60细胞增殖的影响,寻找合适的UV照射方法和照射量。方法以HL-60细胞株为研究对象,并设置对照组和UV照射组（简称UV组）,对照组为不接受UV照射的HL-60细胞,UV组细胞用波长为254 nm的UV照射,照射量分别为2 m Joules（m J）、6 m J、10 m J和15 m J;将UV组和HL-60对照组细胞置于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,用台盼蓝染色法测定各组细胞的死亡率。结果未接受照射的对照组HL-60细胞增殖未受影响,未出现明显凋亡;用2~10 m J UV照射1次,可对HL-60细胞的增殖产生抑制,细胞部分凋亡;经15m JUV照射1次或2~10 m J照射2次（每次间隔5 d）,多数HL-60细胞出现裂解或细胞完全死亡,不能再恢复增殖;10 m J组细胞UV照射1次后第1天开始出现死亡,细胞死亡率在照射后第3天达最高值,随着培养的继续,细胞死亡率逐渐降低,照射后第3天细胞死亡率与其他时间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 UV照射对HL-60细胞具有显著的杀伤效果,与高剂量UV照射治疗相比,较低UV照射剂量的重复照射也能杀伤HL-60细胞,诱导HL-60细胞的死亡。

二烯丙基二硫对人白血病细胞HL-60增殖、细胞周期及p21表达的影响

目的观察二烯丙基二硫(DADS)作用于人白血病细胞系HL-60后,细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21表达的变化,探讨DADS抑制HL-60增殖、诱导G2/M阻滞的作用机制。方法不同浓度DADS作用HL-60后,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期,Westernblot检测p21蛋白水平。结果在一定浓度范围之内,DADS能抑制HL-60细胞增殖,细胞周期发生G2/M期阻滞,并上调p21蛋白水平。结论DADS能通过上调p21的表达而抑制HL-60增殖,诱导其G2/M期阻滞。

维甲酸诱导HL-60细胞分化与细胞周期的关系

研究全反式维甲酸 (RA)在体外诱导人髓系白血病细胞系 (HL 60 )分化过程中细胞周期的改变。利用流式细胞术动态测定RA在体外诱导HL 60细胞分化过程中细胞周期的改变。结果发现 :①在RA与HL 60细胞共培养 4 8小时内 ,S +G2 /M期比例无明显变化 ,但S期细胞的比例改变与RA的浓度有关 ,在 10 - 6 mol/LRA浓度S期细胞比例先出现一过性升高 ,继而持续下降 ,在 10 - 5mol/L浓度S期细胞比例表现为持续性下降 ;②重培养试验证明 :S +G2 /M和S期细胞比例的下降与成熟分化细胞的增加相一致 ;③RA诱导HL 60细胞成熟分化并不是在一个时间点上同时进入分化状态 ,而一旦细胞开始进入成熟分化 ,即使在无RA存在的情况下 ,细胞仍能分化至成熟。结论提示 :RA与HL 60细胞必须相互作用一定时间后才能触发细胞成熟分化 ,S期细胞的比例改变与RA药物浓度有关 ,一旦细胞开始进入成熟分化 ,即使在无RA存在的情况下 。

HL-60细胞产生的肿瘤免疫抑制因子对T细胞的作用及其生物学特性

白血病细胞培养上清液和白血病人血清能抑制PHA—P诱导的人外周血T淋巴细胞的增殖;抑制白细胞介素2(IL—2)的产生和反应性。以正常2BS人胚肺细胞培养上清液和正常人血清作对照则无抑制作用。白血病细胞培养上清液无细胞毒作用。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)结果表明,来源HL—60人早幼粒白血病细胞的肿瘤免疫抑制因子(tumor-derived immunosuppressive factor,TDSF)的分子量约为87KD,其化学本质为蛋白质。抗急非淋白血病药物对这种TDSF的分泌有部分抑制作用。

裸鼠人早幼粒白血病突变株细胞(HL-60-AR)异种移植模型的建立

将HGPRT~-的人早幼粒白血病突变株细胞(HL-60-AR)接种于裸鼠皮下,能形成实体性白血病肉瘤。肿瘤组织经光镜形态学、细胞超微结构、细胞化学、LDH同工酶谱、染色体分析、细胞遗传标记、以及分化性状的检测等多项指标鉴定,均类似于原来体外长期培养的细胞株。移植瘤细胞能在裸鼠体内连续传代,迄今已传至第12代。这个裸鼠人白血病细胞异种移植模型的建立,将为研究人类白血病细胞在体内的增殖、分化以及对抗白血病药物治疗的反应,提供一个有价值的实验系统。

柔红霉素对HL-60细胞细胞因子信号转导抑制蛋白1、3mRNA表达的影响

目的探讨柔红霉素(Daunorubicin,DNR)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60细胞中细胞因子信号转导抑制蛋白1(SOCS1)-mRNA、细胞因子信号转导抑制蛋白3(SOCS3)-mRNA表达的影响。方法取HL-60细胞株,设HL-60组、HL-60+DNR组,同时取3例正常人外周血白细胞设为NC组。NC及HL-60组未给予干预,HL-60+DNR组为小剂量DNR持续作用HL-60细胞10 d。提取总RNA进行,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测SOCS1-mRNA、SOCS3-mRNA转录水平,每组实验重复3次。结果与NC组相比,HL-60组及HL-60+DNR组SOCS1-mRNA转录水平均显著下调(P<0.05),HL-60组下调更明显(P<0.05)。与NC组相比,HL-60组SOCS3-mRNA转录水平显著上调(P<0.05),而HL-60+DNR组上调不明显(P>0.05)。结论 DNR可能通过上调HL-60细胞珠SOCS1及下调其SOCS3的表达,诱导APL细胞的凋亡及促进其成熟,促进急性早幼粒细胞白血病患者病情缓解。

蝌蚪提取液对HL-60细胞相关癌基因表达的影响

目的 研究蝌蚪提取液 (T871 3)对白血病细胞的作用机制。 方法 利用细胞形态学观察、细胞化学、TUNEL法等技术 ,并采用原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术 ,观察T871 3诱导HL 6 0细胞分化和凋亡过程中c myc、c myb、bcl 2癌基因表达的变化。 结果 1 T871 3能抑制HL 6 0细胞分裂增殖。 2 T871 3在低浓度时诱导HL 6 0细胞向单核 /巨噬样细胞方向分化 ,高浓度时诱导细胞凋亡。 3 T871 3诱导HL 6 0细胞分化的过程伴随着c myc、c myb癌基因表达的下调 ,诱导HL 6 0细胞凋亡的过程伴随着c myc、bcl 2癌基因表达的下调。 结论 T871 3可能通过调节癌基因的表达发挥其诱导HL 6 0细胞分化和凋亡的作用。

冻干狂犬病疫苗热原检测在HL-60单核细胞激活实验中的方法转移和验证研究

目的研究人早幼粒白血病HL-60单核细胞激活实验在人狂犬疫苗冻干人用狂犬病疫苗热原检测中的可行性。方法将已建立的HL-60单核细胞激活实验进行实验室间方法转移,并进行方法验证;参照《中国药典》细菌内毒素检查法中光度测定法中的干扰试验,用HL-60-IL-6单核细胞激活实验检测13批冻干人用狂犬病疫苗中的回收率及其热原含量。结果以不同浓度内毒素标准品刺激HL-60细胞导致细胞分泌IL-6的量计算与内毒素浓度的线性,R^(2)均为0.95以上;计算最低检测限不超过0.125 EU·mL^(-1);以内毒素含量为0.5、1.0 EU·mL^(-1)的溶液做回收实验,考察方法的准确度;通过HL-60-IL-6检测13批冻干人用狂犬病疫苗,内毒素的回收率均在50%~200%;对4批热原检查、内毒素含量测定不合格的冻干人用狂犬病疫苗和附带的3批注射用水,该方法检测结果与家兔热原检查法和内毒素测定法的结果一致。结论以IL-6为检测指标的HL-60单核细胞激活实验适用于冻干人用狂犬病疫苗的热原物质检测。

几种药物对HL-60细胞的诱导分化作用及其过程中蛋白激酶C活力分布的变化

本文就HHT、RA、WB_(852)对HL-60细胞的诱导分化作用及此过程中PKC活力在细胞胞浆部分及膜溶脱部分的变化进行研究。结果表明,在适当的用药浓度下,从细胞生长抑制情况、形态学观察及NBT还原能力测定判断,三种药物对HL-60细胞有明显的诱导分化作用。PKC活力分布变化的研究结果表明,用药组细胞胞浆部分酶活力有不同程度的下降,尤在用药早期(约6h以前)下降显著;而膜部分PKC活力则表现上升、或下降,或活力相差不大的结果。暗示在信息传递过程中起核心作用的PKC对不同的胞外刺激可能采取不同的应答方式。PKC的作用可能主要发生在信息传递的早期。