甘草干姜汤对人肾癌细胞及人尿源性干细胞的作用

目的:探讨甘草干姜汤(LDGD)对体外培养的人肾癌769-P细胞和人尿源性干细胞(hUSCs)活力和凋亡的作用。方法:常温离心法从人的新鲜尿液中分离培养hUSCs,观察hUSCs的生长状态并采用MTT法测定其活力;流式细胞术鉴定hUSCs表面标志物的表达。MTT法检测2.5~40 mg/mL LDGD作用769-P细胞和hUSCs 24~72 h后的活力,观察其细胞形态的变化;流式细胞术检测10 mg/mL LDGD诱导769-P细胞和hUSCs凋亡的情况,计算其凋亡率。结果:通过常温离心法获得细胞形态良好、生长活性较高的hUSCs,hUSCs表达间充质干细胞表面标志物CD44和CD90,不表达内皮细胞表面标志物CD31和造血干细胞表面标志物CD34。5~10 mg/mL LDGD作用24~72 h可抑制769-P细胞活力并呈时间和剂量-效应关系,而对hUSCs活力有促进作用。10 mg/mL LDGD作用48 h后,倒置显微镜下可见769-P细胞发生明显皱缩,体积缩小,细胞折光率下降,而hUSCs形态无明显变化。10 mg/mL LDGD作用769-P细胞48 h后的凋亡率为(11.93±0.51)%,相较对照组显著升高(P<0.01),而作用hUSCs后的凋亡率为(0.01±0.10)%,与对照组比较差异无统计学意义(P<0.05)。结论:在本实验条件下,LDGD可抑制体外培养的人肾癌细胞活力,诱导其凋亡;可促进hUSCs的细胞活力,且无明显诱导细胞凋亡作用。LDGD对两种细胞的作用存在明显差异。

小檗碱通过下调METTL3表达抑制肾癌细胞侵袭和迁移的机制

目的 探讨小檗碱(BER)对人肾癌细胞侵袭、迁移的抑制作用及可能机制。方法 以人肾癌OSRC-2细胞为对象进行实验。采用alamarBlue法测定0(对照组)、25、50、75、100、125、150、175、200μmol/L BER作用24、48 h后对OSRC-2细胞增殖的抑制作用。用0(对照组)、50、100μmol/L BER作用于细胞48 h后,通过流式细胞术分析BER对细胞周期的影响;通过细胞划痕实验观察24、36 h时各组细胞的迁移能力;通过Transwell实验观察作用24 h时各组细胞的侵袭能力;并通过Western blot法检测上述药物作用48 h后细胞中甲基转移酶样蛋白3(METTL3)的蛋白表达,通过RNA甲基化定量试剂盒检测各组细胞内RNA的N6-甲基腺嘌呤(m6A)水平。结果 与对照组比较,不同浓度BER均可显著升高OSRC-2细胞的增殖抑制率(P<0.01),并呈时间和浓度依赖性趋势;50、100μmol/L BER作用48 h后可将细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.01);50、100μmol/L BER组细胞的迁移、侵袭能力均显著降低(P<0.05或P<0.01),细胞中METTL3蛋白的表达水平和RNA的m6A水平均显著降低(P<0.01)。结论 BER可通过下调METTL3的表达,进而抑制m6A水平,从而抑制人肾癌细胞的侵袭、迁移。

下调HIF-1α/PLOD2信号通路对缺氧肾透明细胞癌786-0和ACHN细胞株增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨缺氧条件下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)影响肾透明细胞癌(ccRCC)细胞迁移、侵袭和增殖的机制。方法 体外培养人ccRCC细胞,分为正常对照组(NG组)、缺氧组(Hypoxia组,1%O2)和缺氧+HIF-1α抑制剂组(Hypoxia+PX-478组,55μmol·L-1/45μmol·L-1)。用CCK-8法检测细胞活力;用Western blot实验检测各组ccRCC细胞中HIF-1α、2-酮戊二酸5-双加氧酶2(PLOD2)蛋白表达量;用细胞划痕实验检测ccRCC细胞迁移能力;用Transwell实验检测ccRCC细胞迁移、侵袭能力;用克隆形成实验检测ccRCC细胞增殖能力。结果 HIF-1α抑制剂加入后的细胞活力降低,且随着药物浓度升高而降低;与NG组相比,Hypoxia组HIF-1α、PLOD2蛋白表达量均增加(P均<0.05),与Hypoxia组相比,Hypoxia+PX-478组HIF-1α、PLOD2蛋白表达量发均降低(P均<0.05);与NG组相比,Hypoxia组ccRCC细胞786-0的迁移、侵袭和增殖能力均提高(P均<0.01),与Hypoxia组相比,Hypoxia+PX-478组细胞的迁移、侵袭和增殖能力均降低(P均<0.01)。结论 缺氧条件下,下调HIF-1α/PLOD2通路可抑制786-0和ACHN细胞的迁移、侵袭和增殖。

人着丝粒蛋白E在人肾透明细胞癌中的表达及对细胞增殖的影响

目的:探讨人着丝粒蛋白E(CENPE)在人肾透明细胞癌组织中的表达、临床意义及对细胞增殖的影响。方法:生物信息学分析GEPIA数据库中CENPE在肾透明细胞癌组织及癌旁组织中的mRNA水平,并分析其表达与患者预后之间的关系。回顾性分析来自新乡市中心医院2014年9月—2021年8月接受手术治疗的77例肾透明细胞癌患者的临床病理资料。采用免疫组化法检测肾透明细胞癌组织和癌旁组织中CENPE蛋白表达水平,分析其与患者临床病理特征的关系。培养HTB-47和CRL-1932细胞,通过CENPE的shRNA质粒转染降低其表达,通过集落形成实验及CCK-8实验检测对肾透明细胞癌细胞增殖的影响。结果:生物信息学分析显示肾透明细胞癌患者CENPE显著高表达,并与无病生存期显著相关。免疫组化结果显示CENPE在肾透明细胞癌组织中显著高表达,而在癌旁组织中则为阴性或低表达,表达水平与肿瘤直径显著相关(P=0.021),而与患者的年龄、性别、肿瘤分化无关(均P>0.05)。集落形成实验(P=0.013 5、0.015 4)及CCK-8实验(P=0.009 1、0.013 3)证实CENPE在细胞表达下调并可以抑制肾透明细胞癌细胞的增殖。结论:肾透明细胞癌组织中CENPE显著高表达,且与患者临床病理特征及预后相关,CENPE蛋白促进肾透明细胞癌细胞的增殖。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂通过激活p-JNK信号通路诱导肾癌细胞凋亡(英文)

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(trichostatinA,TSA)和帕比司他(panobinostat,LBH589)在体外对人肾癌细胞株增殖、细胞周期分布及凋亡的影响,并进一步探讨其可能的分子机制。方法 LBH589或TSA作用于经或未经SP600125预处理的人肾癌细胞株OS-RC-2,在设定的时间点用四甲基偶氮唑蓝方法(MTT)检测细胞生长抑制率并检测出最佳刺激浓度和时间;用流式细胞术检测药物作用后肾癌细胞周期变化情况及凋亡情况;用Western blotting分析药物作用后肾癌细胞内c-Jun、磷酸化c-Jun(p-c-Jun)、Bcl-2、Bax蛋白的表达变化。用JNK抑制剂SP600125阻断JNK信号通路后,观察SP600125预处理+TSA组较TSA单独处理肾癌细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白的变化情况。结果 TSA和LBH589在体外均可抑制肾癌细胞生长,且具有浓度与时间依赖性;与对照组相比,TSA或LBH589可使肾癌细胞发生G2/M期周期阻滞,并均可诱导肾癌细胞发生明显凋亡。Western blotting显示TSA和LBH589均能明显促进p-c-jun蛋白的表达,同时TSA也能诱导Bax蛋白表达而抑制Bcl2蛋白表达,与对照组相比有显著统计学意义(P<0.05);与TSA单独处理相比,JNK抑制剂SP600125预处理+TSA能部分减弱TSA对肾癌细胞的抑制效应并逆转TSA诱导的肾癌细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂在体外可抑制OS-RC-2细胞增殖,阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡;TSA可通过JNK信号通路诱导OSRC-2细胞G2/M期阻滞,调节凋亡蛋白的表达从而诱导细胞凋亡。

IGFBP-3在真核细胞中的分泌表达及功能分析

将人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的cDNA片段亚克隆入pSectagA载体,构建真核分泌型表达载体pSectag-IGFBP3。采用脂质体转染的方法将真核表达载体转染人肾癌786-O细胞,转染48 h后用免疫印迹法检测IGFBP-3的表达状况;同时以Annexin V-EGFP/PI染色,流式细胞仪检测细胞凋亡率,观察分泌表达的IGFBP-3对宿主细胞的促凋亡作用。转染48h后,经Western blotting检测,在细胞培养上清中有分泌表达的IGFBP-3蛋白。流式细胞技术检测结果表明,表达产物可直接作用于宿主细胞,发挥促肿瘤细胞凋亡的作用。由此表明所构建的重组表达质粒pSectag-IGFBP3能在真核细胞水平正常表达并发挥生物学功能,为进一步探索IGFBP-3的作用机制奠定了基础。

红景天苷对人肾癌细胞生长、侵袭和迁移的调节作用

目的探究红景天苷(SD)对人肾癌细胞生长、侵袭和迁移的作用。方法以0、2、5、10μmol/L SD作用于体外培养的人肾癌细胞Ketr-3,利用CCK-8法检测培养不同时间(0、1、2、3、4 d)细胞的增殖情况,用Transwell实验检测细胞侵袭能力,用划痕实验检测细胞迁移能力,用Western blot检测Ki67、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属酶蛋白-9 (MMP-9)蛋白表达水平。结果 SD浓度达到20μmol/L及以上时,Ketr-3细胞活性降低;SD (2、5、10μmol/L)作用4 d后,与Control组比较,SD (2、5、10μmol/L)组Ketr-3和Caki-1细胞增殖倍数显著降低(P<0.01),Ki67的表达水平显著降低(P<0.01);SD(2、5、10μmol/L)作用24 h后,Ketr-3和Caki-1细胞侵袭能力明显减弱(P<0.01),与Control组相比,SD(5、10μmol/L)组迁移能力均显著减弱(P<0.01),VEGF和MMP-9的表达水平显著降低(P<0.01)。结论 SD能够抑制人肾癌细胞Ketr-3和Caki-1的生长、侵袭和迁移。

慢病毒介导的Clusterin基因沉默抑制肾癌786-O细胞增殖并促进细胞凋亡

【目的】应用慢病毒介导的RNA干扰技术,检测clusterin(CLU)基因沉默在人肾癌786-O细胞的干扰效果及其对人肾癌786-O细胞增殖、迁移和凋亡的影响。【方法】构建靶向CLU基因的慢病毒干扰载体,利用包装细胞293T获得重组慢病毒,感染人肾癌786-O细胞株。实验分5组:CLU-RNAi-LV1(KD1)、CLU-RNAi-LV2(KD2)、CLU-RNAi-LV3(KD3)为加入靶向CLU基因的慢病毒感染的肾癌细胞组,未处理的慢病毒感染的肾癌细胞组(NC组),肾癌786-O细胞为空白对照组(CON组)。应用Real time-PCR及Western blot检测不同组别干扰前后CLU mRNA及蛋白表达的变化。用细胞划痕实验、MST-1、流式细胞仪等方法检测CLU沉默后肾癌786-O细胞在增殖、迁移、凋亡等生物学行为的改变。【结果】成功构建CLU shRNA慢病毒载体clu-RNAi-LV并获得相应慢病毒。Real time-PCR显示不同感染复数CLU-RNAi-LV处理的KD1、KD2、KD3组CLU mRNA表达水平与对照组相比分别下调69.4%～96.5%和0。Western blot结果显示KD1、KD2、KD3组CLU蛋白表达水平与CON组相比分别下降35.24%、46.26%和58.91%,KD3能显著抑制786-O细胞中CLU基因的表达。划痕实验显示24 h时KD3(si-CLU)组细胞迁移相对距离(408.43±25.92)小于NC组(101.35±6.05)和CON组(68.13±6.64,P<0.05)。WST-1法检测转染后72 h KD3(si-CLU)组细胞生长速度较NC组及CON组明显下降(P<0.05),各组间差异(P<0.05),均有统计学意义。流式细胞仪检测KD3(si-CLU)组与NC组、CON组细胞凋亡率分别为(6.23±2.51)%、(1.05±0.30)%和(1.17±0.29)%,KD3(si-CLU)组与NC组、CON组相比凋亡率增加(P<0.05),差异有统计学意义。肾癌786-O细胞的增殖、迁移受到抑制,而凋亡率增加。【结论】筛选出能稳定干扰CLU基因表达的siRNA序列和肾癌786-O细胞株。CLU慢病毒干扰载体可有效沉默肾癌786-O细胞的内源性CLU基因,抑制肾癌786-O细胞的增殖、迁移并促进细胞凋亡。

人肾透明细胞癌中细胞凋亡相关因子Caspase-3和Caspase-9的表达

目的研究人肾透明细胞癌组织中细胞凋亡相关重要因子Caspase-3、Caspase-9表达的变化与肾癌的关系。方法标本离体后分成肾透明细胞癌组、癌旁组织组、正常肾组织组,均用10%的甲醛溶液固定48h,常规石蜡包埋、切片5μm,应用免疫组织化学方法进行观察研究。结果 Caspase-3与Caspase-9均在正常肾组织中可见少量弱阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少,两两比较结果显示,3组之间差异均有统计学意义(P<0.01)。肾癌4个期之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。Caspase-3与Caspase-9蛋白表达呈正相关(r=0.988,P<0.05)。结论癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制。

量子点荧光技术标记肿瘤细胞中HSP的应用研究

目的探讨量子点荧光技术对人肾癌细胞株(ACHN)中不同HSP进行标记的可行性应用。方法利用量子点的荧光特性,免疫细胞化学方法检测体外培养的ACHN细胞中量子点特异性标记的HSP70、HSP90、HSPgp96的表达情况。结果共聚焦荧光显微镜下可见ACHN细胞中HSP70、HSP90、HSPgp96均有明显表达,呈现均匀分布的橙红色强荧光,且量子点在持续激发30分钟后无荧光淬灭发生。结论量子点荧光标记技术能够对不同HSP进行标记,且与传统的标记方法相比具有显著优点,可作为一种新型的检测技术应用于科研及临床标记检测中。

人肾透明细胞癌组织中增殖细胞核抗原表达与肾癌的关系

目的通过检测人肾透明细胞癌组织中增殖细胞核抗原(PCNA)表达的变化,研究其表达与肾癌的关系。方法标本离体后分成肾透明细胞癌组、癌旁组织组、正常肾组织组,均用10%的甲醛固定48h,常规石蜡包埋、切片5μm,同时应用免疫组织化学方法进行观察研究。结果 PCNA免疫组化染色:正常肾组织内的细胞核有弱阳性表达,癌旁阳性表达增加,高于正常肾组织,肾癌组织阳性表达明显增强,明显高于癌旁组织,两两比较差异均有统计学意义(P<0.01)。肾癌4个期之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PCNA在正常组、癌旁组、癌组织组的表达呈明显加强趋势,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制。

人肾透明细胞癌组织中细胞增殖与凋亡及凋亡相关因子的表达

目的:本课题旨在通过检测人肾透明细胞癌组织中细胞增殖(PCNA)与凋亡(TUNEL法)及凋亡相关因子Caspase-3、 Caspgse-9表达的变化,研究这些因子的表达与肾癌的关系。方法:标本离体后分成三组,(1)肾透明细胞癌组;(2)癌旁组织组;(3)正常肾组织组,应用HE染色法、TUNEL法及免疫组织化学方法进行观察研究。结果:(1)HE染色结果:肾透明细胞癌组织镜下可见肿瘤细胞体积较大,圆形或多边形,胞质染色浅,透明或颗粒状,核固缩,间质富有毛细血管和血窦。(2) TUNEL检测结果:在肾癌组织、癌旁组织及正常肾组织组均有凋亡发生。凋亡肾组织细胞表现为染色质凝集、边集,核固缩。正常肾组织组细胞核有弱的阳性表达,癌旁组织表达明显增多,肾癌组织阳性表达最少。(3) PCNA免疫组化染色结果:正常肾组织内的细胞核有弱的阳性表达,癌旁阳性表达增加,肾癌组织阳性表达明显增多。(4) Caspase-3、 Caspase-9免疫组化结果:Caspase-3 Caspase-9在正常肾组织中可见少量弱的阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少。结论:癌旁细胞组织Caspase-3和Caspase-9的蛋白表达明显高于正常肾组织及癌组织,癌组织表达最少;而PCNA则相反,癌组织高于癌旁组织和正常肾组织,正常肾组织表达最少。癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,PCNA表达升高说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制。Caspase-3、 Caspase-9、 PCNA于肾透明细胞癌的表达在肿瘤分期间无明显差异性。

肾透明细胞癌发病机制中细胞凋亡的初步研究

目的:研究肾透明细胞癌发病机制与组织细胞凋亡的关系。方法:将标本离体后分成三组,(1)肾透明细胞癌组(根据肿瘤分期再分四组);(2)癌旁组织组;(3)正常肾组织组。用TUNEL法对标本检测。结果:在肾癌组织、癌旁组织及正常肾组织组均有凋亡发生。正常肾组织组细胞核有弱的阳性表达,癌旁组织表达明显增多,肾癌组织阳性表达最少。结论:细胞凋亡减少是肾透明细胞癌发生的重要机制之一。

姜黄素通过Erk1/2信号通路抑制人肾癌细胞786-O在裸鼠体内增殖

目的:探讨姜黄素对786-O细胞在体内增殖的抑制效果及其可能机制。方法:将人肾癌细胞786-O接种裸鼠,成瘤后将裸鼠随机分为2组,干预组给予姜黄素干预治疗,对照组则采用PBS对照治疗。测定干预组肿瘤的抑制率,并采用Westernblot和免疫组织化学方法检测p-Erk1/2和p-Akt表达。结果:经过连续20d给药治疗,干预组裸鼠的瘤体平均质量为(1.03±0.17)g,对照组裸鼠的瘤体平均质量为(2.46±0.48)g,2组差异有统计学意义(P=0.02)。采用姜黄素干预后小鼠的肿瘤抑制率达58.13%。Westernblot及免疫组织化学染色结果均证实干预组裸鼠瘤内Erk1/2的磷酸化水平显著低于对照组(P<0.01),而2组Erk1/2、Akt及p-Akt表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:姜黄素具有较好的抑制肿瘤生长的效果,通过抑制Erk1/2的磷酸化,进而抑制人肾癌细胞786-O在裸鼠体内增殖。

Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡的相关性研究

目的研究Survivin基因及蛋白表达与人786-0肾透明癌细胞增殖和凋亡的相关性。方法人肾癌细胞系786-0作为Survivin转染组,肾小管上皮细胞系HK-2作为阴性对照组,分别用Survivin模拟物转染;转染72 h后测定Survivin基因及蛋白表达;对比两组细胞吸光值、细胞数及凋亡细胞比值;对Survivin基因和蛋白表达水平与细胞吸光值、细胞数和凋亡细胞比值进行Pearson相关性分析。结果转染后,Survivin转染组Survivin mRNA、Survivin蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P<0.05);吸光值从第1 d开始显著低于阴性对照组(P<0.05);细胞数从第2d开始显著少于阴性对照组(P<0.05)。786-0细胞的凋亡比例从第1d开始显著低于阴性对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,Survivin基因和蛋白表达水平与吸光值和细胞数呈负相关,与凋亡细胞比值呈正相关。结论 Survivin基因和蛋白表达可以抑制786-0肾透明癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

hTERT在肾癌中的表达及临床意义

目的检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)在肾癌中的表达及其临床意义。方法采用RT-PCR及Western blot方法检测45例肾癌组织、45例配对的癌旁肾组织及786-0细胞系中hTERT mRNA及蛋白的表达情况,观察其表达与肿瘤大小、临床分期、病理组织分型、分级之间的关系。结果hTERT mRNA及蛋白在肾癌组织中呈高表达(P=0.000),其表达与肾癌的肿瘤大小、临床分期、病理组织分型、分级之间无关(P>0.05)。结论肾癌组织中hTERT表达较高,可尝试用于肾癌的诊断和预测,并为基因治疗提供了思路。

氟尿嘧啶联合重组人生长激素对肾癌细胞株作用的研究

目的 研究氟尿嘧啶 ( 5 -Fu)联合重组人生长激素 (rhGH)对肾癌细胞株的作用 ,探讨提高肾癌化疗效果的方法。方法 取对数生长期的人肾癌细胞株 (GRC -1) ,分为空白对照、rhGH、5 -Fu、rhGH +5 -Fu四组进行体外培养 ,2 4小时后测定各增殖周期的细胞比例值等指标。结果 在空白对照组 ,G0 -G1 期的细胞数占 5 3 .4%,S期细胞数占 42 .1%。在rhGH组 ,G0 -G1 期细胞数降低 ( 4 1.1%) ,S期细胞增高 ( 5 2 .7%)。在 5 -Fu组 ,G0 -G1 期细胞数增高( 62 .3 %) ,S期细胞数降低 ( 3 7.5 %) ;在rhGH +5 -Fu组 ,G0 -G1 期细胞数进一步增加 ( 67.4%) ,S期细胞数进一步降低( 3 2 .5 %) ,与 5 -Fu组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 重组人生长激素在体外能增强氟尿嘧啶抗肾癌细胞增殖作用。

冷冻消融联合索拉非尼和IL-2对晚期转移性肾癌患者外周血细胞因子的影响

目的观察冷冻消融联合索拉非尼和IL-2对晚期转移性肾癌患者外周血细胞因子的影响。方法选取晚期转移性肾癌患者90例,随机分为对照组和观察组,每组45例。对照组给予口服索拉非尼和静脉滴注IL-2治疗。治疗组先行局麻下冷冻消融治疗,2周后给予索拉菲尼和IL-2治疗。疗程均为4周。采用Real time-PCR和Western-blot观察2组治疗前后外周血γ-干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)mRNA和蛋白表达水平。采用酶联免疫吸附实验(ELISA)观察2组治疗前后外周血IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6水平及IFN-γ/IL-4比值变化。结果对照组治疗前后IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6 mRNA和蛋白表达及IFN-γ/IL-4比值比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后IFN-γ、TNF-αmRNA和蛋白表达及IFN-γ/IL-4比值较治疗前显著升高,IL-6 mRNA和蛋白表达较治疗前显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05),IL-4 mRNA和蛋白表达与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论冷冻消融联合索拉非尼和IL-2治疗晚期转移性肾癌能够明显升高患者外周血IFN-γ、TNF-αmRNA和蛋白表达及IFN-γ/IL-4比值,降低IL-6 mRNA和蛋白表达,从而增强机体免疫功能。

HPV16相关宫颈癌细胞系和组织中E7和DRR1蛋白的表达

目的:研究人乳头瘤病毒16(HPV16)相关宫颈癌细胞系和组织中E7和肾细胞癌下调基因1(DRR1)表达的关系。方法:以HPV16 E7阳性的宫颈癌Ca Ski和Si Ha细胞、HPV16 E7阴性的宫颈癌C-33A细胞及184例宫颈鳞状细胞癌组织为研究对象,采用Western blot方法和免疫组化染色方法检测E7和DRR1蛋白的表达,分析E7与DRR1蛋白表达的关系。结果:Western blot结果显示,C-33A细胞中HPV16 E7无表达,DRR1蛋白的表达显著高于Ca Ski细胞和Si Ha细胞(F=454.982,P<0.001);Ca Ski细胞和Si Ha细胞表达HPV16 E7,二者DRR1蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化染色结果显示,HPV16 E7阳性宫颈鳞状细胞癌组织141例,其中DRR1蛋白阳性34例;HPV16 E7阴性宫颈鳞状细胞癌组织43例,其中DRR1蛋白阳性32例;HPV16 E7阳性组织中DRR1蛋白的表达显著低于HPV16 E7阴性组织(χ2=36.250,P<0.001)。结论:DRR1可能是HPV16 E7作用的潜在靶基因。

5-氮杂-2’-脱氧胞苷抑制肾癌细胞增殖及逆转γ-catenin基因甲基化作用

目的:研究甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对人肾癌OS-RC-2细胞生长的抑制作用及对γ-catenin基因甲基化状态的影响,初步探讨肾癌发病机制及临床治疗的可行性。方法:不同浓度5-Aza-CdR处理肾癌细胞OS-RC-2后,采用倒置显微镜观察5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株前后细胞形态学变化;四唑蓝(MTT)比色观察细胞经药物处理前后的生长活性;流式细胞仪检测5-Aza-CdR对OS-RC-2肾癌细胞株凋亡的影响;Western blot检测5-Aza-CdR处理OS-RC-2肾癌细胞株后γ-catenin蛋白表达的变化;甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测细胞处理前后γ-catenin基因的甲基化状态。结果:形态学观察显示,用药后癌细胞体积缩小,核固缩,染色质凝聚成块;5-Aza-CdR明显抑制肾癌细胞OS-RC-2的生长;细胞凋亡率增高;药物处理后γ-catenin蛋白表达恢复;未经5-Aza-CdR处理的OS-RC-2细胞中γ-catenin基因启动子区域高甲基化,经10-5mol/L5-Aza-CdR处理72h后,γ-catenin基因启动子区域高甲基化得到逆转。结论:5-Aza-CdR能有效逆转肾癌OS-RC-2细胞γ-catenin基因的异常甲基化,恢复γ-catenin蛋白表达,诱导肾癌细胞凋亡。