胎盘绒毛跨膜蛋白CD81、Ang与复发性流产女性早孕期复发流产的关系

目的:探究胎盘绒毛跨膜蛋白CD81、血管生成素(Ang)与复发性流产(RSA)女性早孕期复发流产的关系。方法:选择126例RSA患者为研究对象(RSA组),另选取94例正常早孕行人工流产术者为对照组。采用RT-qPCR、Western blot法检测胎盘绒毛组织CD81、Ang-1、Ang-2 mRNA及蛋白表达水平,采用电化学发光法检测血清人绒毛膜促性腺激素(HCG)水平,计算Ang-1/Ang-2 mRNA及蛋白比值,比较两组患者检测结果。结果:RSA组CD81、Ang-1、Ang-2的mRNA及蛋白表达和Ang-1/Ang-2 mRNA及蛋白表达比值均高于对照组,血清HCG水平低于对照组(P<0.05)。RSA组CD81 mRNA与Ang-1、Ang-2 mRNA呈正相关(P<0.05);RSA组CD81蛋白表达量与Ang-1、Ang-2蛋白表达量呈正相关(P<0.05),血清HCG水平与其他指标无相关性(P>0.05)。CD81、Ang-1/Ang-2的mRNA及蛋白和血清HCG均可用于预测RSA女性早孕期复发流产。结论:RSA女性早孕期复发流产与胎盘绒毛CD81、Ang-1、Ang-2 mRNA及蛋白表达量异常高表达有关,CD81、Ang-1、Ang-2可能影响胎盘血管形成而致流产。

人早孕期绒毛组织和滋养细胞趋化因子受体转录水平

目的:研究早孕期绒毛组织及滋养细胞18种趋化因子受体的转录水平,以揭示趋化因子受体在母-胎界面生理性调节作用。方法:提取人早孕期绒毛组织及滋养细胞总RNA,半定量RT-PCR检测绒毛组织和滋养细胞18种趋化因子受体mRNA的表达水平。结果:CXCR4及CXCR6在绒毛组织中普遍高表达;CCR6、CCR7、XCR1及CX3CR1呈普遍中等表达;CCR1-CCR5、CCR8-CCR10、CXCR1-CXCR3在部分绒毛组织中表达,部分绒毛组织不表达或表达量很低;早孕人绒毛组织不表达CXCR5。早孕期滋养细胞表达CCR1、CCR3-CCR5、CCR8-CCR9、CXCR1-CXCR4、CXCR6、XCR1、CX3CR1;不表达CCR2、CCR6、CCR7、CCR10及CXCR5。结论:早孕期绒毛组织及滋养细胞表达多种趋化因子受体,它们在正常妊娠中具有重要的生理学意义。

人早孕母胎界面SOCS1、SOCS2、SOCS3表达

目的:研究正常早孕绒毛及蜕膜组织细胞因子信号转导负调控因子(Suppressors of cytok ine signaling,SOCS)基因和蛋白水平表达,以揭示SOCS在母胎界面生理性调节作用。方法:半定量RT-PCR检测早孕绒毛组织、蜕膜组织及原代培养早孕滋养细胞、蜕膜基质细胞SOCS1、SOCS2、SOCS3mRNA水平;W estern b lot检测早孕绒毛组织及蜕膜组织SOCS1、SOCS2、SOCS3蛋白表达;免疫组化定位SOCS1、SOCS2、SOCS3在早孕绒毛组织、蜕膜组织表达;ELISA检测滋养细胞、蜕膜基质细胞分泌IL-10、IFNγ-。结果:正常母胎界面见SOCS1、SOCS2、SOCS3基因表达,其中SOCS3绒毛/蜕膜阳性率73.7%/71.1%;SOCS2绒毛/蜕膜阳性率50.0%/39.5%,SOCS1最少,绒毛/蜕膜阳性率34.2%/31.6%;SOCS1、SOCS2、SOCS3蛋白表达与转录水平基本一致;正常母胎界面SOCS1、SOCS2、SOCS3表达主要定位于绒毛滋养细胞和蜕膜间质;体外无血清培养滋养细胞和蜕膜基质细胞SOCS2、SOCS3低表达,SOCS1未见表达,其分泌的IL-10随时间而增高(P<0.05)。结论:正常早孕母胎界面表达SOCS1、SOCS2、SOCS3,无刺激条件下滋养细胞和蜕膜基质细胞低表达SOCS2、SOCS3,SOCS在正常妊娠Th平衡中具有重要意义。

IL-10在反复自然流产人绒毛组织的表达及意义

目的:通过研究白细胞介素-10(IL-10)在反复自然流产和正常流产人绒毛组织和血清中的表达比较来探讨IL-10与不明原因反复自然流产的相关性及其临床意义。方法:采用免疫组织化学技术和逆转录-聚合酶链反应技术检测35例反复自然流产者(实验组)和35例正常流产者(对照组)人绒毛组织中IL-10的细胞学定位以及在mRNA水平的表达;ELISA法定量分析IL-10在两组血清中的表达。结果:免疫组织化学检测结果显示两组组织中均有IL-10阳性表达,实验组IL-10在人绒毛组织中的阳性表达率低于对照组(P<0.05)。RT-PCR结果显示实验组和对照组均有IL-10表达,对比显示实验组IL-10表达低于对照组。ELISA测定结果显示IL-10在实验组的表达低于对照组。结论:IL-10的表达在实验组早孕绒毛组织细胞学定位及mRNA水平检测均较对照组降低,在血清中的表达量也是实验组低于对照组,提示自然流产妊娠妇女存在IL-10细胞因子表达异常,IL-10可能在维持正常妊娠过程中起到重要作用。

RU486对人早孕绒毛中纤维蛋白溶酶原激活与抑制系统的影响

目的：探讨ＲＵ４８６对离体培养人早孕绒毛滋养细胞分泌ＰＡｓ及ＰＡＩ┐１、ＰＡＩ┐２的影响，比较药物流产与正常绒毛中ｔＰＡ、ｕＰＡ、ＰＡＩ┐１及ｕＰＡ┐Ｒ表达的差异。方法：应用纤维蛋白琼脂糖铺盖及反向铺盖技术分别检测细胞培养液中ＰＡ与ＰＡＩ┐１的活性，采用琼脂糖指示胶直接点样法测定ＰＡＩ┐２活性。分别应用免疫组织化学与原位杂交技术检测绒毛组织细胞中ｔＰＡ、ｕＰＡ、ＰＡＩ┐１与ｕＰＡ┐Ｒ的抗原及ｍＲＮＡ的存在与分布。结果：受ＲＵ４８６刺激，离体培养绒毛滋养细胞分泌的ＰＡ┐ＰＡＩ复合物的水解活性增加，而ＰＡＩ┐１与ＰＡＩ┐２的活性则受抑制。口服米非司酮药流绒毛滋养细胞中ＰＡＩ┐１及ｕＰＡ抗原含量低，而ｕＰＡ┐Ｒ的ｍＲＮＡ含量显著增加。结论：ＲＵ４８６增加早孕绒毛中纤溶活性，从而使细胞外基质蛋白水解作用加强，绒毛的固着性可能因此松动。

抗雌激素药三苯氧胺对早孕妇女胎盘绒毛hCG和孕酮分泌的作用

早孕妇女人流绒毛体外培养4日,加入或不加入抗雌激素药物三苯氧胺,每日收集培养液并用RIA测定孕酮和hCG,以观察三苯氧胺对绒毛hCG和孕酮分泌的作用及其时间过程。结果表明,用药组d3,4收集的培养液内孕酮和hCG量明显低于对照组,提示三苯氧胺对早孕妇女胎盘绒毛的分泌有直接抑制作用。其抑制作用出现缓慢,与临床用药4～5d增强前列腺素制剂终止早孕的事实相符。三苯氧胺抑制早孕妇女胎盘绒毛分泌功能的作用可能与其降低胎盘绒毛对GnRH的反应性有关。

RT-PCR检测超声辐照后人早孕绒毛组织中Caspase-3mRNA的表达

目的:探讨诊断性超声对早孕胚胎组织安全性问题。方法:选取健康早孕而自愿要求终止妊娠的妇女66例,随机分组,不同的超声辐照方式和不同辐照时间后12-24h行人工流产取绒毛组织,用半定量RT-PCR方法分析绒毛组织中Caspase-3mRNA的表达。结果:绒毛组织Caspase-3mRNA表达,腹部超声5min组与对照组(未行超声辐射组)相比无统计学差异(P>0.05),而10min组、15min组与对照组比较有统计学意义(P<0.05),但此两组间无统计学差异(P>0.05);阴道超声5min、10min、15min组与对照组比较均有显著的统计学意义(P<0.01),且各组间比较也有差异(P<0.01);同一时间组内阴道超声与腹部超声比较均有统计学差异(P<0.05)。结论:诊断性超声经腹部5min以内可以认为是安全的,从近期的生物学效应角度看,经阴道超声在5min时就可能存在损伤效应。

持续阴道超声辐射后人胚早孕绒毛细胞超微结构的变化研究

目的探究持续阴道超声辐射后人胚早孕绒毛细胞超微结构的变化。方法选取我院2010年9月至2012年3月期间进行人流的早孕患者80例，将其均分为两组，试验组患者阴道超声照射10min，而对照组患者则照射5min，然后在照射后24-30h进行人流并取绒毛组织进行检测，比较两组患者照射后绒毛组织DNA及其超微结构的变化情况。结果经过检测得到，试验组患者的绒毛组织单链DNA量为（0．19±0．06）μg／μl，双链DNA量为（0．15±0．09）μg／μl，明显低于对照组患者的（0．23±0．07）μg／μl和（0．19±0．07）μg／μl，差异均具有统计学意义（P〈0．05），试验组患者的绒毛组织超微结构发生异常者40．00％，对照组为10．00％，差异也具有统计学意义（P〈0．05）。结论降低患者进行阴道超声辐射的时间可以减少患者绒毛细胞超微结构的改变。

Bcl-2和Bax蛋白在人早孕胎盘绒毛和蜕膜组织中的表达

目的探讨Bcl-2和Bax蛋白在人早孕绒毛和蜕膜组织中的表达及其意义。方法应用免疫组织化学ABC法检测Bcl-2和Bax蛋白在孕5～7周绒毛和蜕膜组织细胞中的表达,用真彩色病理图像分析系统4.0图像分析软件测定Bcl-2和Bax蛋白表达的积分吸光度值。结果Bc1-2蛋白主要分布于孕5～7周绒毛合体滋养层细胞、蜕膜细胞的细胞质和细胞核中,蛋白表达积分吸光度值依次降低,其差异无统计学意义（P〉0.05）。Bax蛋白在孕5～7周绒毛细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞中均未见表达;孕6周,Bax蛋白表达于极少部分蜕膜细胞的细胞质中。结论Bc1-2和Bax蛋白在人早孕过程中参与了绒毛滋养层细胞增殖和分化、子宫内膜蜕膜化的过程,在绒毛的发生、发育、胎盘形成和组织结构改建及功能完善等方面发挥着重要作用。

产前诊断先天性人巨细胞病毒感染安全性和可靠性分析

目的:探究宫内取材进行先天性人巨细胞病毒(HCMV)感染产前诊断的安全性和可靠性。方法:联合应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、巢式PCR(N-PCR)和逆转录PCR(RT-PCR)分析武汉、上海和沈阳三地6723例育龄妇女和孕妇HCMV感染状况及妊娠结局。结果:育龄妇女活动性HCMVIgM检出率为6·11%,其中孕妇和非孕妇间无显著性差异。活动性感染孕妇绒毛、脐血HCMV感染率分别为51·52%、66·18%,明显高于对照组。先天性感染儿发生异常妊娠结局的危险性明显高于非感染儿。宫内取材所致妊娠丢失率均无显著增加,其检查结果与出生后的诊断一致。结论:宫内采集绒毛、羊水、脐血进行产前诊断,安全性和可靠性良好,可为胎儿的取舍提供依据。

早孕期超声声像学特征与胎儿染色体异常关系的研究

目的:探讨早孕期超声声像学特征与胎儿染色体异常的关系。方法:经阴道超声测量4042例早孕妇女的妊娠囊及囊内结构,将超声异常者设为研究组,正常者设为对照组,测量2组卵黄囊径(YSD)、头臀径(CRL)、平均妊娠囊径(MSD)及羊膜囊径与头臀径的差值(AS-CRL)超声指标,并对其进行统计学分析;直接法制备绒毛染色体标本,进行核型分析。结果:共发现异常染色体核型54例。研究组染色体异常的发生率高于对照组,差异均有统计学意义。卵黄囊作为筛查染色体异常的指标,其灵敏度、特异度、阳性(阴性)预测值及正确诊断指数最高。结论:早孕期超声声像异常伴随胎儿染色体异常的发生率增高。

用mRNA差异显示法寻找人绒毛膜上皮癌与孕早期绒毛组织间的差异基因

目的 寻找人绒毛膜上皮癌 (JAR)与孕早期绒毛组织间的差异基因。 方法 采用 m RNA差异显示法 (m RNA differential display PCR,DD- PCR) ,即分别提取正常孕早期绒毛及绒毛膜上皮癌的总 RNA ,在oligod T1 5 作用下分别合成相应的 c DNA ,并以其为模板利用试剂盒中的 2 0对引物组合和α- 32 Pd ATP,Taq酶等进行PCR,将两者的 PCR产物在 6 %变性聚丙烯酰胺凝胶 (PAG)上电泳 ,放射自显影后寻找两者间的差异片段 ,回收差异片段进行二次 PCR,对二次 PCR产物先采用反杂交法初步筛选后再用 Northern Blot鉴定。 结果 从 PAG上切下 32条差异条带 ,经反杂交初步筛选出 11个阳性片段 ,对 11个阳性片段分别做 Northern Blot鉴定 ,其中 1个片段(T2 6 )的基因长度约 1.2 kb,其在绒毛膜上皮癌中的表达远高于正常绒毛组织。 结论 T2

白细胞介素-8蛋白在反复自然流产患者绒毛及蜕膜组织中的表达

目的探讨反复自然流产患者绒毛及蜕膜组织中白细胞介素-8(IL-8)蛋白水平的表达。方法应用免疫组织化学染色和Western blotting技术,分别对30例反复自然流产患者(流产组)和30例正常妊娠者(对照组)绒毛、蜕膜组织中IL-8的蛋白表达进行定位及半定量分析。结果免疫组织化学染色结果显示,在绒毛组织中,流产组和对照组IL-8的蛋白表达主要定位于绒毛上皮细胞的细胞质内;在蜕膜组织中,流产组IL-8蛋白表达于蜕膜细胞的胞质内,对照组蜕膜细胞则为阴性,但两组腺上皮细胞均为阳性反应。Western blotting结果显示,在绒毛组织中,流产组IL-8的蛋白相对含量明显高于对照组(P﹤0.01);在蜕膜组织中,流产组IL-8的蛋白相对含量高于对照组(P﹤0.05)。结论流产组绒毛及蜕膜组织中IL-8蛋白表达增强与反复自然流产有关,IL-8可能参与反复自然流产的病理过程。

人早期胎盘绒毛运动神经诱向因子1及其受体的免疫组织化学定位

为了解人胎盘绒毛是否存在运动神经诱向因子１（ＭＮＴＦ１）及其可能的功能意义，本实验用ＭＮＴＦ１单克隆抗体及抗独特型单克隆抗体在人早期胎盘绒毛石蜡切片上进行免疫组织化学反应，对人早期胎盘绒毛的ＭＮＴＦ１及其受体进行定位。结果显示，胎盘绒毛的细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞和基质细胞均呈ＭＮＴＦ１强免疫反应，ＭＮＴＦ１样免疫反应物质分布在胞质内，胞核为阴性。在相邻切片上，以上３种细胞同样显示为ＭＮＴＦ１受体免疫反应，ＭＮＴＦ１受体样免疫反应物质也分布在细胞质内，胞核无免疫反应。以上结果显示，人胎盘绒毛可能会产生ＭＮＴＦ１，而且其产生的ＭＮＴＦ１可能通过自分泌和旁分泌方式对胎盘绒毛起局部调节作用。

人胎盘绒毛上皮滋养层运动神经诱向因子1及其受体的发育变化与计量研究

为了解运动神经诱向因子１（ＭＮＴＦ１）及其受体在人胎盘发育过程中可能的功能意义，用ＭＮＴＦ１单克隆抗体及抗独特型单克隆抗体在不同发育阶段人胎盘绒毛石蜡切片上进行免疫组织化学反应，并结合图像分析技术观察了ＭＮＴＦ１及其受体在不同发育阶段人胎盘绒毛上的变化。结果显示，在胎盘绒毛的发育过程中，ＭＮＴＦ１及其受体的相对含量呈周龄性变化，妊娠早期（孕６～９周），随周龄的增加而增加，于９周时达到峰值，此后于妊娠中期及妊娠晚期则随周龄的增加而降低。以上结果提示：（１）ＭＮＴＦ１对绒毛滋养层细胞ｈＣＧ的合成和分泌可能有促进作用，而且此作用是通过其受体介导而实现的；（２）ＭＮＴＦ１对胎儿的生长发育可能也有一定作用。

米非司酮对JAR细胞凋亡的诱导作用

米非司酮是一类抗孕激素和抗糖皮质激素药物，在临床被广泛用于早孕的终止．发现米非司酮能抑制人滋养层瘤细胞（ＪＡＲ）的生长．药物处理使细胞形态出现典型的凋亡特征．被处理细胞的ＤＮＡ经琼脂糖电泳呈凋亡细胞特有的云梯状条带．原位凋亡检测也证实了凋亡细胞的存在．临床样品分析证明，米非司酮药物流产的人绒毛组织也发生了明显的细胞凋亡．说明米非司酮诱导流产的机制除了对子宫蜕膜的作用外。

HLA—E在RSA人绒毛组织中的表达与临床意义

目的研究人类白细胞抗原E（HLA-E）在反复自然流产（RSA）和正常流产人绒毛组织中的蛋白和mRNA表达，探讨HLA-E与不明原因RSA的相关性及其临床意义。方法采用免疫组织化学技术和逆转录一聚合酶链反应技术检测35例RsA人绒毛组织和35例正常流产人绒毛组织中细胞学定位以及HLA-E在mRNA水平的表达。结果免疫组织化学检测结果显示两组中均有HLA-E阳性表达，RSA组的HLA-E在人绒毛组织中阳性表达率低于正常流产组（χ2=131．125，P〈0．05）。逆转录-聚合酶链反应结果显示RSA组和正常流产组均有HLA-E表达，对比显示RSA组的HLA-E表达低于正常流产组（t=1．937，P〈0．05）。结论RSA妊娠妇女早孕绒毛组织中HLA-E在组织细胞学蛋白和mRNA水平均较正常人工流产妊娠妇女早孕绒毛组织中降低，提示自然流产妊娠妇女存在HLA-E表达异常，HLA-E可能与RSA的发生关系密切。

染色体核型异常胎儿的超声检查分析

目的分析超声引导下经腹绒毛活检、脐静脉穿刺取血及羊膜腔穿刺诊断的染色体核型异常胎儿的超声图像特征。方法应用IU22彩色多普勒超声诊断仪对胎儿行超声检查,并结合血清学化验,在超声引导下,经腹绒毛活检、脐静脉穿刺取血及羊膜腔穿刺行胎儿染色体检查。结果47例染色体异常胎儿中,超声诊断胚胎停育者14例(29.8%),余33例超声检查发现畸形27例(81.82%),畸形数>2处者19例,合并心脏畸形11例。异常核型中三体型者27例(57.4%),其中18三体12例,21三体5例,13三体5例,16三体5例,其余为45X等。18三体占三体型的44.4%(12/27)。结论妊娠早、中期应行彩色多普勒超声检查,多数染色体核型异常的胎儿可发现声像图异常。在超声引导下绒毛活检,羊膜腔、脐静脉穿刺,行染色体核型分析可显著提高染色体核型异常胎儿的检出率和诊断率。

诊断级超声波对妊娠早期胚胎组织的影响

本文观察了诊断级超声波辐照人体宫内胚胎绒毛引起的脂质过氧化及绒毛组织结构变化。结果表明:诊断级超声辐照胎囊20分钟,24h 内人体绒毛细胞脂质过氧化明显变化(P_(?)<0.05);丙二醛(MDA)值随辐照时间增加而增高(P_(?)<0.05),而绒毛细胞超氧化物岐化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—Px)活性随幅照时间增加而下降(P_(?)<0.05)。上述改变在超声辐射后3天均恢复正常。光镜结果观察,Ⅴ组合体滋养层细胞固缩,全层染色加深,表面绒毛呈树枝状,胞质内空泡增加。Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ组仅见轻微改变。上述结果提示,诊断级超声引起的损伤是可以恢复的。

商陆对器官培养的早孕绒毛hCG分泌的影响

目的 :探讨中药商陆对早孕绒毛人绒毛膜促性腺激素 (h CG)分泌的影响。方法 :用γ—免疫计数器测定早孕绒毛培养液中 h CG含量的变化。结果 :实验组培养液中 h CG的含量为 (19.7± 2 .9)μg/L ,对照组培养液中 h CG的含量为 (2 2 .2± 1.8)μg/L ,两组差异非常显著 (P <0 .0 1)。结论 :中药商陆对早孕绒毛 h