不可分型流感嗜血杆菌重组Hap蛋白的表达及其生物学活性分析

目的在原核系统中表达并纯化不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)的重要粘附因子Hap蛋白,并对其免疫原性和粘附活性进行初步研究。方法 IPTG诱导重组质粒pET32a(+)-Hap在E.coliBL21中高效表达,Ni2+亲和层析柱纯化表达产物。用纯化的Hap重组蛋白进行体外竞争黏附实验,SEM观察及菌落形成单位计数法分析该重组蛋白的黏附活性。纯化蛋白与黏膜免疫佐剂CT-B联合鼻腔免疫BALB/C小鼠,ELISA检测小鼠抗Hap的IgA及IgG抗体水平。结果纯化产物的SDS-PAGE分析显示获得单一的目的蛋白条带,Gelanalysis软件分析蛋白纯度可达85%,纯化产物超滤浓缩后,测得其蛋白浓度为3.2g/L。体外竞争黏附实验观察到Hap重组蛋白的加入可明显抑制NTHi对胞外基质的黏附,且细菌黏附量的减少与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.01)。该重组蛋白与免疫佐剂CT-B联合免疫小鼠,可刺激机体产生较高水平的IgG或IgA抗体,与重组抗原单独免疫组相比,差异具有显著性(P<0.05)。结论 Hap蛋白在原核系统中获得较高浓度和纯度的表达,纯化Hap重组蛋白具有良好的免疫原性和粘附活性。

非分型流感嗜血杆菌Hap_s蛋白的分离纯化

目的优化非分型流感嗜血杆菌Haps蛋白质片段的分离纯化方法。方法采用盐析、透析脱盐、超滤浓缩、弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化Haps蛋白,优化Haps蛋白质片段的洗脱条件,包括pH值和离子强度,测定各洗脱液样品在280nm波长处的光吸收值(D280),用折线图显示,SDS-PAGE电泳检测分布图中处于峰值的样品,观察目的蛋白条带的出现。结果弱阳离子交换柱Hitrap CM Sepharose Fast Flow层析纯化HapS蛋白,缓冲液1洗脱液的D280分布为基线,缓冲液2洗脱液的D280分布折线图中有峰值出现,但峰有拖尾,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰主要为低分子量的蛋白条带;五种不同离子强度的缓冲液3洗脱液在100mmol/LNaCl离子强度时,D280的分布折线图显示有较高洗脱峰出现,SDS-PAGE电泳检测该洗脱峰有较明显的110000D的目的条带,其余离子强度下均未见明显洗脱峰出现。结论Sepharose CM FF层析柱分离纯化HapS蛋白质片段时,不同pH值的缓冲液对目的蛋白的洗脱没有明显影响,而主要影响杂蛋白的洗脱;100mmol/LNaCl离子强度的缓冲液3洗脱液获得较好的洗脱效果。

慢性复合应激对大鼠胰腺HAP1表达的影响

目的探讨慢性复合应激大鼠胰腺内胰岛内分泌细胞HAP1表达的变化及其意义。方法36只大鼠随机分为两组:慢性复合应激组和正常对照组。应激组动物无规律交替暴露于垂直旋转、睡眠剥夺、捆绑(6h/d)和夜间光照等慢性复合性应激,共6周;实验结束后,采用免疫组织化学和Western-blot等方法检测两组大鼠胰腺胰岛内分泌细胞内HAP1蛋白表达的变化。结果HAP1在大鼠胰腺内选择性表达于胰岛内分泌细胞中。与对照组相比,慢性复合应激组大鼠胰腺HAP1的表达明显增强(P<0.05)。结论6周慢性复合性应激可使大鼠胰腺中胰岛内分泌细胞的HAP1表达加强,提示HAP-1在慢性复合应激促进胰腺内分泌功能中可能发挥一定作用。

不可分型流感嗜血杆菌重组Hap蛋白免疫抗小鼠急性感染的实验研究

目的：观察重组Hap蛋白免疫抗不可分型流感嗜血杆菌（NHTi）感染的免疫保护效果，初步探讨其保护机制。方法：用纯化的Hap重组蛋白与黏膜免疫佐剂霍乱肠毒素B亚单位（CT-B）联合鼻腔免疫C57BL／6小鼠。NHTi琼脂珠悬液对免疫小鼠进行气管内注射，建立小鼠NHTi急性肺部感染模型。NHTi攻击5d后，收集实验小鼠的支气管肺泡灌洗液（BALF）进行白细胞计数，并取其肺组织进行肺部荷菌数检测及肺组织的病理检测。结果：Hap重组蛋白与CT—B的联合免疫能显著降低小鼠BALF中的白细胞总数、中性粒细胞渗出（P〈0．05）及感染小鼠肺组织内NTHi的荷菌数，并减轻感染小鼠支气管、细支气管周围及肺泡内的炎性浸润程度，明显改善其肺组织的病变。结论：鼻腔免疫的Hap重组蛋白在动物体内能发挥良好抗NTHi感染的免疫保护作用，为NTHi新型疫苗的研发提供了理论基础和实验依据。

HAP蛋白疏水区的聚合功能及其与细胞凋亡的关系

asy和hap是一对新的细胞凋亡诱发基因 .二者单独转染细胞均能诱发细胞凋亡 ,能在酵母和哺乳动物细胞中形成同源二聚体 ,二者共转染酵母和哺乳动物细胞能形成异源二聚体 .同源二聚体诱发细胞凋亡 ,异源二聚体降低同源二聚体诱发细胞凋亡的活性 .氨基酸序列表明 ,HAP(homologousofASYprotein)含有内质网挽回模体 (KKKAE)、第一疏水区和第二疏水区 .对 3个功能区的缺失突变体研究显示 ,缺失内质网定位信号的HAPΔERS蛋白保留着同源聚合和与ASY异源聚合的能力 ,而分别缺失第一、第二疏水区的突变体HAPΔ4 8 139、HAPΔ15 7 2 18则丧失以上功能 ;通过流式计数法计算 3个缺失突变体诱发细胞凋亡比率 ,用生物统计学方法说明不同的比率与HAP诱发细胞凋亡的比率相比都有显著差异 .说明内质网定位信号、疏水区在HAP蛋白的诱发细胞凋亡过程中起重要作用 ,进一步揭示了HAP诱发细胞凋亡的机制 .

血清CRP、PCT及WBC在HAP细菌性感染者早期诊断中的临床诊断价值

目的：探析血清C反应蛋白（CRP）、降钙素原（PCT）、白细胞计数（WBC）在医院获得性肺炎（HAP）P细菌性感染者早期诊断中的临床诊断价值。方法i选取2016年3月～2018年3月在我院确诊后接受治疗的80例细菌性感染HAP患者和72例非细菌性感染患者作为本次研究的观察者和对照组。比较两组患者不同时刻的血清CRP、PCT、WBC及痰液PCT水平及其阳性检出率，比较革兰阴性菌患者与革兰阳性菌患者的血清CRP、PCT、WBC及痰液PCT水平。分析血清CRP、PCT、WBC在HAP细菌性感染者中的诊断效能。结果：T2时刻观察组患者的CRP水平明显高于对照组，T1时刻观察组患者的PCT水平明显高于对照组，T3时刻观察组患者的WBC值明显低于对照组（P〈0．05）。观察组患者的血清PCT及WBC阳性检出率均明显高于对照组（P〈0．05）。阴性组患者的血清CRP及PCT水平明显高于阳性组（P〈0．05）。血清PCT与WBC对HAP患者诊断的特异性明显高于血清CRP，血清PCT与WBC对HAP患者诊断的敏感性明显高于血清CRP（P〈0．05）。结论：血清CRP、PCT及WBC在HAP患者细菌性感染早期诊断中均具有一定的诊断效能．其中血清PCT水平的诊断价值最高。

酶法提取烤鳗下脚料中水解动物蛋白的研究

酶解提取烤鳗下脚料的水解动物蛋白是可行的,实验发现:在枯草杆菌蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶这三种水解中,枯草杆菌蛋白酶的水解效率最高。通过正交试验,确定用枯草杆菌蛋白酶在50℃、pH7.5、固液比5∶8,添加酶量为下脚料中蛋白质含量的2.0%,反应时间为5h时,其水解度达82.6%。

酶法提取烤鳗下脚料水解动物蛋白的研究

以烤鳗下脚料为原料 ,经蛋白酶水解后 ,提取水解动物蛋白 ,使废弃物得到充分利用 .通过正交实验 ,确定了木瓜蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、胃蛋白酶的最佳水解条件 ,选择了木瓜蛋白酶为最佳水解酶 .

酶法制取罗非鱼水解动物蛋白的工艺研究

利用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶、碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶对罗非鱼肉进行水解制备水解动物蛋白,以水解度(DH)为指标对水解过程进行分析,选取中性蛋白酶作为适宜的单酶并研究其酶法水解最适宜的工艺条件。为进一步提高水解度,进行了中性蛋白酶与酸性蛋白酶复合酶解的研究,并对双酶法水解的工艺条件进行了优化。酶解液分别采用酵母发酵、风味酶处理、粉末活性炭吸附、海藻糖处理进行初步脱色脱苦除腥研究。结果表明,海藻糖和粉末活性炭脱色脱苦除腥总体效果最佳,但两者各有侧重,活性炭在脱色方面优于海藻糖,海藻糖则在脱苦除腥方面优于活性炭。

罗非鱼加工废弃物酶法水解的研究

优选了自制酱油曲对罗非鱼下脚料蛋白质的水解条件,分析了不同酶解时间、固液比、酶解温度和加曲量对废弃物水解度的影响,利用单因素对比实验的同时,又考虑产品的风味和生产成本,从而确定了最适宜的酶解条件:时间8h,固液比1:3,料液温度50℃,加30%曲料。

羟基磷灰石-SOD纳米复合物的合成与性能

以乙酸钙和磷酸二氢铵为原料,采用原位合成法一步合成羟基磷灰石(HAP)-超氧化物歧化酶(SOD)纳米复合物(HAP-SOP),采用傅里叶变换红外光谱、X射线衍射和扫描电镜对复合物进行了表征,并考察了SOD的活性,还对各复合物的体外释放行为进行了研究.结果表明,合成的HAP-SOD纳米复合物粒径均匀,粒径在100nm以下,包裹后的SOD活性可达84.7%,且缓释作用明显,24h累计释放率为81.2%.

扇贝边蛋白资源酶法水解条件的优化

以扇贝边为原料,首先分析了其营养成分,结果表明,扇贝边干物质中蛋白质的含量为67.6％。然后用ASI,398枯草杆菌中性蛋白酶通过液体发酵对扇贝边蛋白资源进行了酶解条件优化,实验了酶解温度、酶的用量、酶水解时间和底物浓度等4因素对酶解效率的影响,确定了扇贝边的最佳水解条件:即酶解温度为50℃,蛋白酶的加入量为0.5％,即250U·ml^(-1),底物浓度为6％,酶解时间为3h。

酶法制备肉味香精及其风味调配的研究

研究用酶水解牛肉和大豆蛋白粉制成牛肉水解蛋白和大豆水解蛋白,再添加葡萄糖和半胱氨酸等辅料,利用美拉德反应制备牛肉味香精的主香体,再对其进行调香,确定能产生逼真、浓郁牛肉香味的最佳配方。

C-反应蛋白测定用于医院获得性肺炎诊疗与预后的评价

目的测定C-反应蛋白(CRP)水平并与体温、白细胞计数进行比较,观察其用于医院获得性肺炎(HAP)诊疗及预后的价值。方法每天测定患者的体温、白细胞计数和CRP浓度,择日进行继发器官衰竭评分(SOFA);观察患者治愈、病情稳定转出重症监护病房(ICU)或死亡;根据预后分为存活组和死亡组进行回顾性分析。结果抗菌治疗后CRP比率有4种反应模式:快反应、慢反应、无反应、双相反应;快反应和大部分慢反应的患者存活,无反应和双相反应的患者全部死亡;差异有统计学意义。结论CRP比率的变化与HAP病情的变化相关,CRP比率快速下降预示病情改善;CRP比率无反应或双相反应时,提示预后不良。

基于近红外光谱定量分析牛奶中掺假的动物水解蛋白含量

动物水解蛋白含有大量重金属离子,摄入人体危害人体健康,因其蛋白质含量高,被不法商贩作为廉价蛋白质添加在牛奶中以提高蛋白质含量。本研究自行配制不同浓度的动物水解蛋白掺假牛奶,应用近红外光谱仪浸入式光纤扫描样品,考察建模方法、预处理方法、建模范围、主成分数及样品的异常点分析对定量分析模型的影响。结果表明:使用SG平滑处理、主成分数4、在10000~5000 cm^(-1)使用PLS法建立了最优动物水解蛋白定量分析模型。该模型的校正均方差(RMSEC)、预测均方差(RMSEP)、相关系数(r)分别为0.115、0.305、0.983,平均回收率为104.44%。该分析模型可以用于牛奶中动物水解蛋白的快速定量分析,为牛奶的品质控制和快速定量提供参考。

以鱼类下脚料制备风味蛋白粉的研究

以鱼类下脚料为原料,经生物酶解、酸解制备了风味水解蛋白粉。文中介绍了制作方法和生产工艺,以及产品的相关技术特征。

应用生长因子-支架构建方式的组织工程方法再生牙周组织的实验研究

目的:观察评价生长因子-支架构建方式的组织工程方法对牙周组织再生修复的影响和意义,探讨纳米羟基磷灰石材料(nHAC)和重组人骨形成蛋白 -2 (rhBMP-2 )用于牙周组织工程的可行性。方法:将rhBMP-2与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜,以空白对照组和单纯GTR组作为对照。术后 8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:rhBMP-2-nHAC-膜复合植入组较空白对照组和单纯GTR组有更多的新生牙槽骨、新生牙周膜和新生牙骨质生成,且未见上皮长入。结论:应用生长因子-支架构建方式的牙周组织工程方法能更有效地促进牙周组织再生和重建,而rhBMP-2和nHAC有望用作牙周组织工程的生长因子和支架材料。

动物蛋白酶解研究(I)

本文主要目的是以美拉德(Maillard)反应产物(MRPs)的风味为判断依据，以水解度(DH)为动物蛋白酶解液——Maillard 反应底物之一的特征性指标。

利用氨基酸水解液制备螯合态肥料技术研究

利用氨基酸水解液(Hydrolyzed Animal Proteins;HAP)对Fe、Zn、Mn、Cu等微量元素进行了螯合试验。试验结果表明,微量金属元素与氨基酸螯合率达97%以上,螯合物在180 d的时间内基本保持其稳定性。螯合物的一些主要技术指标达到了国家农业部所颁布的氨基酸叶面肥标准。

富亮氨酸牙釉蛋白在羟基磷灰石(010)晶面选择性吸附的分子动力学研究(英文)

蛋白质可以影响晶体的成核及生长速率,从而改变晶体的形貌和习性,因此了解牙釉蛋白在羟基磷灰石(HAP)表面的相互作用对于了解牙齿的生长机理具有重要意义.采用分子动力学(MD)和操控式分子动力学(SMD)相结合的方法研究了六个不同取向的富亮氨酸牙釉蛋白(LRAP)在HAP(010)晶面的吸附-脱附行为.在MD模拟中筛选出关键的吸附残基,并通过SMD模拟中的脱附时间对其进行分类.研究发现Glu56和Asp58是两个出现概率较高的吸附残基,其中Asp58在六个体系中都发挥了主要的吸附作用.我们进一步对吸附位点的作用基团和作用形式进行分析,发现酸性氨基酸侧链上的羧基基团与HAP表面钙离子的静电相互作用是最主要的作用形式.羧基上的两个氧原子可以钳住"钙离子,从而将LRAP锚定在HAP表面.因此,富含羧基基团的氨基酸是HAP晶型控制的首选残基.