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Establishment of anti-thyrotropin monoclonal antibody hybridoma cell lines with extract of human pituitary gland
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作者 姬秋和 罗敏 +2 位作者 谢晓雁 许曼音 陈家伦 《Journal of Medical Colleges of PLA(China)》 CAS 1997年第3期210-213,共4页
To get the hybridoma cell lines secreting anti-thyrotropin monoclonal antibodies with high affinity and specificity. Methods: BALB/c mice were immunized with extract of human pituitaries. The spleen cells of one immun... To get the hybridoma cell lines secreting anti-thyrotropin monoclonal antibodies with high affinity and specificity. Methods: BALB/c mice were immunized with extract of human pituitaries. The spleen cells of one immunized mouse were fused with mouse myeloma cells in polyethylene glycol and the positive clones were subcloned 3 times. Results: Two hybridoma cell lines which secrete anti-thyrotropin monoclonal antibodies with high affinity and specificity have been collected. The antibodies were of the IgG1 subclass and their maximum binding with thyrotropin was 60% and 45. 1% respectively. Using competitive binding assay,the antibodies were found to direct against different epitopes of human thyrotropin. Conclusion: The extract of human pituitaries could be used to produce monoclonal anti-pituitary hormone antibodies. The two anti-thyrotropin monoclonal antibodies produced in this study could be used in the establishment of a sensitive measurement of human thyrotropin. 展开更多
关键词 MONOCLONAL ANTIBODY THYROTROPIN hybridoma cell lines
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杂交瘤细胞在CelliGen培养器中大量连续培养 被引量:1
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作者 陈贻锴 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期243-248,共6页
鼠-鼠杂交瘤细胞DA4-4(ATCC,HB57)分泌抗人IgM的单克隆抗体IgGl,该细胞被培养在1.5L CelliGen-中空纤维柱连续灌注系统中,CelliGen细胞培养器显示很低的机械剪切力,提高搅拌速度到150rpm增加了氧的传递,但不对杂交瘤细胞造成损害。在连... 鼠-鼠杂交瘤细胞DA4-4(ATCC,HB57)分泌抗人IgM的单克隆抗体IgGl,该细胞被培养在1.5L CelliGen-中空纤维柱连续灌注系统中,CelliGen细胞培养器显示很低的机械剪切力,提高搅拌速度到150rpm增加了氧的传递,但不对杂交瘤细胞造成损害。在连续培养时,DA4-4细胞密度可达20×10~6/ml以上,单克隆抗体浓度高达4.75mg/ml,该培养系统每日可收获抗体1.0g左右。 展开更多
关键词 杂交瘤细胞 单克隆抗体 细胞培养
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血清4型禽腺病毒penton蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
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作者 罗思思 邓显文 +7 位作者 谢芝勋 张艳芳 张民秀 谢志勤 谢丽基 李孟 王盛 李小凤 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期3092-3099,共8页
【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白... 【目的】制备和鉴定血清4型禽腺病毒(FAdV-4)五邻体(penton)蛋白单克隆抗体,为深入探究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用及为抗原检测试剂研发提供抗体材料。【方法】以原核表达的FAdV-4 penton重组蛋白免疫6~8周雌性BALB/c小白鼠,加强免疫3次后,取鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,通过penton-酶联免疫吸附剂测定(ELISA)和FAdV4 virus-ELISA方法分别筛选阳性杂交瘤细胞株,对筛选出的单克隆抗体杂交瘤细胞株进行亚类鉴定、特异性和广谱性鉴定及间接免疫荧光和稳定性试验。【结果】亚类鉴定结果表明,筛选获得7株能稳定分泌抗FAdV-4 penton蛋白的杂交瘤细胞株(1D11、2B3、2C4、2C9、6B3、8F12和8G11),其轻链均为Kappa链,重链3株为IgG1,4株为IgG2b;特异性检测结果表明,7株单克隆抗体只与FAdV-4反应,不与其他11种血清型FAdV及NDV、ARV、EDSV和IBV等常见禽病病原体发生交叉反应;广谱性鉴定结果表明,7株单克隆抗体均可与19株FAdV-4分离株结合,广谱性好;间接免疫荧光试验结果表明,7株单克隆抗体均与感染FAdV-4的鸡胚肝细胞(CEL)结合,出现明亮的绿色荧光。对筛选出的3株单克隆抗体(6B3、8F12和8G11)进行稳定性检测,发现其稳定性良好。【结论】通过单克隆抗体制备和鉴定获得3株与FAdV-4蛋白结合效果较好并具有特异性和广谱性的FAdV-4 penton蛋白杂交瘤细胞株(6B3、8F12和8G11),能稳定分泌penton蛋白单克隆抗体,为深入研究penton蛋白在FAdV-4感染致病机制中的作用提供单抗,为FAdV-4抗原检测试剂的研发打下基础。 展开更多
关键词 血清4型禽腺病毒 penton蛋白 单克隆抗体 杂交瘤细胞株
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无血清培养杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器的工艺研究
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作者 王蓓 姚慧丽 +5 位作者 庞晓晨 李宜波 周珊 屈浩 刘红芹 廖晓龙 《中国医学装备》 2023年第6期166-171,共6页
目的:在WAVE-25生物反应器上,探讨抗人CD52杂交瘤细胞无血清流加培养方式的工艺条件,通过多种抗体质量检测加以验证,建立规模化的生产工艺,为后期的工艺放大提供参考。方法:探索无血清培养CD52杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器的工艺参数... 目的:在WAVE-25生物反应器上,探讨抗人CD52杂交瘤细胞无血清流加培养方式的工艺条件,通过多种抗体质量检测加以验证,建立规模化的生产工艺,为后期的工艺放大提供参考。方法:探索无血清培养CD52杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器的工艺参数,在反应过程中依据活细胞密度、活率、pH值、溶氧以及免疫球蛋白G(IgG)含量、葡萄糖(Gluc)、谷氨酰胺(L-Gln)、乳酸(Lac)、铵根离子(NH_(4)^(+))等生长代谢参数进行过程监测和调控;通过蛋白纯化,利用流式细胞术,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)对CD52单克隆抗体纯品(简称CD52纯抗)进行特异性和纯度的检测和鉴定。结果:无血清培养CD52杂交瘤细胞通过流加培养方式在WAVE-252L生物反应器可稳定大规模培养,蛋白纯化后获得的CD52纯抗产率和质量得到显著提高,产率从100 mg/L提高至350 mg/L,提高了3.5倍;纯度从92%提高至100%;相同浓度下荧光强度提高了69%。结论:CD52杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器可大规模培养,通过工艺参数和反应过程中生化指标的调控获得的CD52纯抗产率和质量都有显著的提高,可为后续的大规模化生产提供参考。 展开更多
关键词 无血清培养杂交瘤细胞 WAVE-25生物反应器 工艺探索
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抑制EB病毒阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤增殖的抗TMD5单克隆抗体的筛选和效果评价
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作者 涂小云 熊玉红 +3 位作者 邓爱花 孙春枝 刘阳 陈宇 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第9期1480-1486,共7页
目的:筛选抗爱泼斯坦—巴尔病毒(EBV)潜伏期膜蛋白-1中跨膜结构域5(TMD5)单克隆抗体并评价其抑制EB病毒阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的效果。方法:人工合成TMD5肽段,用此TMD5肽段免疫BALB/c小鼠;PEG法制备杂交瘤;ELISA法筛选阳性杂... 目的:筛选抗爱泼斯坦—巴尔病毒(EBV)潜伏期膜蛋白-1中跨膜结构域5(TMD5)单克隆抗体并评价其抑制EB病毒阳性弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的效果。方法:人工合成TMD5肽段,用此TMD5肽段免疫BALB/c小鼠;PEG法制备杂交瘤;ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞;有限稀释法制备单克隆;使用阳性孔单克隆细胞免疫小鼠制备腹水;western blotting法和ELISA法分别对腹水中的单克隆抗体进行鉴定和效价测定;体外CCK-8法测定腹水对Sp2/0细胞存活能力的影响;Annexin VFITC/PI双标记流式细胞术测定腹水对Sp2/0细胞凋亡率的影响;在体内裸鼠荷瘤实验测定腹水对裸鼠荷瘤生长的影响。结果:成功备制13个杂交瘤,其中3个为阳性杂交瘤,分别为2B11、5D07和6F04,阳性率为23%。以5D07孔单克隆细胞制备的腹水以1∶105稀释后,阳性/阴性腹水单克隆抗体抗TMD5效价比为6.763,阳性/Sp2/0的效价比为5.952,效价最高。与PBS组相比,2B11组和5D07组DB细胞48 h和72 h增殖能力降低,凋亡率升高,裸鼠荷瘤较小(P<0.05),6F04组上述测定指标无明显差异(P>0.05)。与2B11组相比,5D07组DB细胞48 h和72 h增殖能力降低,凋亡率升高,裸鼠荷瘤较小(P<0.05)。结论:通过杂交瘤法筛选出的5D07单克隆抗体抗TMD5效价高,在体外和在体裸鼠荷瘤实验抗EBV+DLBCL淋巴瘤活性良好。 展开更多
关键词 弥漫性大B细胞淋巴瘤 EB病毒 跨膜结构域5 杂交瘤 单克隆抗体
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氟喹诺酮类药物多残留酶联免疫检测方法的建立 被引量:23
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作者 李新朋 姜金庆 +5 位作者 钱爱东 王自良 范国英 单晓峰 康元环 李艺 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第23期4726-4735,共10页
【目的】氟喹诺酮类药物(FQs)在畜牧业中广泛用于预防和治疗细菌性疾病,不合理使用导致在动物性食品中残留,严重危害消费者健康,其检测受到世界各国重视。制备抗多种FQs单克隆抗体(m Abs),建立间接竞争ELISA(ic ELISA)检测方法,为动物... 【目的】氟喹诺酮类药物(FQs)在畜牧业中广泛用于预防和治疗细菌性疾病,不合理使用导致在动物性食品中残留,严重危害消费者健康,其检测受到世界各国重视。制备抗多种FQs单克隆抗体(m Abs),建立间接竞争ELISA(ic ELISA)检测方法,为动物性食品中FQs多残留检测奠定基础。【方法】环丙沙星(CPFX)羧基上引入氨基丁酸后为半抗原(CPFX-A),质谱鉴定;分别用碳二亚胺法(DDC)和混合酸干法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原(CPFX-A-BSA)和包被原(CPFX-A-OVA),紫外和红外光谱鉴定是否偶联成功;CPFX-A-BSA免疫Balb/c小鼠,间接ELISA和ic ELISA方法测定多抗血清效价和敏感性,选取抗血清效价高和敏感性好的鼠用于细胞融合;NS0细胞和脾细胞按1﹕5比例在PEG-1500作用下融合,筛选抗FQs杂交瘤细胞株,并进行效价、亚型、敏感性和交叉反应率鉴定;体内诱生腹水法制备m Ab,液体石蜡作为诱导剂,每只鼠注射108个杂交瘤细胞;选敏感性和广谱特异性好的腹水m Ab,建立ic ELISA标准曲线,对ic ELISA检测方法优化,在鸡肉中添加10种FQs进行测定,将测定结果与HPLC法比较,用SPSS 17.0软件进行显著差异性分析。【结果】半抗原改造和人工抗原合成成功;3只鼠血清效价均达到1﹕1.28×104以上,2号鼠血清效价最高(1﹕2.56×104),且IC50值最低(12.92 ng·m L-1),选择2号鼠作为细胞融合用鼠;4次亚克隆筛选并鉴定后获得3株敏感广谱特异的杂交瘤细胞,分别命名为2H5、3D11、4F4,细胞上清效价分别为1﹕1 600、1﹕1 600和1﹕800,腹水效价分别为1﹕1.6×106、1﹕8.2×105和1﹕8.2×105;ic ELISA方法的包被原浓度为1μg·m L-1,5%猪阴性血清4℃包被过夜,单抗1﹕40 000稀释,山羊抗鼠酶标二抗(Ga MIg G-HRP)1﹕8 000稀释;反应温度均为37℃,标准品与单抗同时加入反应15 min,洗板后加二抗反应25 min;显色10 min,2H5细胞株腹水敏感性和广谱特异性最好,2H5的线性回归方程为y=-28.022x+56.219,R2=0.9 782,对10种FQs的IC50值分别为环丙沙星(CPFX)1.67ng·m L-1、诺氟沙星(NOR)1.82 ng·m L-1、培氟沙星(PEF)1.97 ng·m L-1、恩诺沙星(ENR)1.54 ng·m L-1、单诺沙星(DAN)2.79 ng·m L-1、洛美沙星(LOM)3.38 ng·m L-1、氧氟沙星(OFL)5.50 ng·m L-1、麻保沙星(MAR)4.40 ng·m L-1、沙拉沙星(SAR)11.76 ng·m L-1、二氟沙星(DIF)13.60 ng·m L-1,与10种FQs的交叉反应率为12.3%—108.4%,与非FQs交叉反应率均低于0.01%,对10种FQs的检测限(LODs)为0.09 ng·m L-1—0.64 ng·m L-1。ic ELISA法鸡肉中10种FQs的回收率为80.5%—91.8%,HPLC法的回收率为85.1%—95.7%,二者变异系数均低于10.0%;两种检测方法差异不显著(P>0.05)。【结论】该试验获得了高效价、敏感、广谱特异性的m Abs,建立的ic ELISA方法可用于同时检测鸡肉中10种FQs。 展开更多
关键词 环丙沙星 氟喹诺酮类药物 杂交瘤细胞株 广谱特异性单克隆抗体 间接竞争ELISA
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囊素和法氏囊超滤物对杂交瘤细胞抗体分泌的影响 被引量:12
7
作者 缪德年 陈溥言 +4 位作者 缪德年 张秀根 姚惠娟 樊生超 张德明 《上海农业学报》 CSCD 2002年第3期92-95,共4页
以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞为对象,通过间接ELISA法测定抗体的OD490值。结果表明,随着囊素和法氏囊超滤物浓度的增加,细胞抗体分泌逐渐增加,当囊素浓度为50μg/mL、超滤物浓度为2.5mg/mL时,OD490值达到最高,分别比对照组增加8.83%和... 以分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞为对象,通过间接ELISA法测定抗体的OD490值。结果表明,随着囊素和法氏囊超滤物浓度的增加,细胞抗体分泌逐渐增加,当囊素浓度为50μg/mL、超滤物浓度为2.5mg/mL时,OD490值达到最高,分别比对照组增加8.83%和5.72%(P<0.01);随着浓度的继续增加,OD490值开始下降。同时观察到,处理48h后,500μg/mL囊素组和5mg/mL法氏囊超滤物组有部分细胞死亡,1000μg/mL囊素组及40,20,10mg/mL法氏囊超滤物组细胞全部死亡,其它组细胞正常。动态试验表明,加入50μg/mL囊素后3h,OD490值增加最高,达24.93%(P<0.01)。因此,囊素和法氏囊超滤物能直接与杂交瘤细胞作用,并提高其抗体分泌水平。 展开更多
关键词 囊素 法氏囊超滤物 杂交瘤细胞 单克隆抗体 分泌
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分泌抗鼠疫耶尔森菌F1抗原单克隆抗体杂交瘤株的建立 被引量:9
8
作者 尹家祥 陈平 +2 位作者 杜春红 董兴齐 于国林 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期566-568,共3页
目的应用杂交瘤技术,制备分泌抗鼠疫F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法用鼠疫菌F1抗原免疫雌性BALB/c小鼠,检测小鼠血清中的F1抗体,选抗体滴度最高的小鼠用于细胞融合,融合前3天F1抗原经腹腔注射加强免疫1次,然后取其脾脏细胞与处... 目的应用杂交瘤技术,制备分泌抗鼠疫F1抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法用鼠疫菌F1抗原免疫雌性BALB/c小鼠,检测小鼠血清中的F1抗体,选抗体滴度最高的小鼠用于细胞融合,融合前3天F1抗原经腹腔注射加强免疫1次,然后取其脾脏细胞与处于对数生长期的SP2/0骨髓瘤细胞混合,50%的PEG作为细胞融合剂,HAT培养液选择培养融合后的细胞,间接ELISA法检测细胞培养上清中的F1抗体,阳性杂交瘤细胞用有限稀释法进行克隆及再克隆。结果获得共计100余株分泌F1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,3株进行了4次克隆化,经8个月保存后抗体分泌稳定。结论应用杂交瘤技术,在云南首次成功制备了3株能稳定分泌抗鼠疫杆菌F1抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株,建立了杂交瘤技术的实验程序。 展开更多
关键词 耶尔森菌 鼠疫 F1抗原 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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谷氨酰胺限制对杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生产的影响 被引量:8
9
作者 张淑香 李东晓 +2 位作者 朱明龙 谭文松 张嗣良 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第1期77-82,共6页
利用批培养和流加培养方式以及不同的流加培养成分,考察了谷氨酰胺限制对杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成的影响。谷氨酰胺限制降低了最大细胞密度和单抗比生产速率,说明谷氨酰胺限制阻碍了细胞生长和单抗生产。谷氨酰胺限制流加培养的Y... 利用批培养和流加培养方式以及不同的流加培养成分,考察了谷氨酰胺限制对杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成的影响。谷氨酰胺限制降低了最大细胞密度和单抗比生产速率,说明谷氨酰胺限制阻碍了细胞生长和单抗生产。谷氨酰胺限制流加培养的YLac/Gluc和YLac/Cells高于批培养和谷氨酰胺非限制流加培养的,说明谷氨酰胺限制促进了葡萄糖向乳酸的生成,增强了葡萄糖的溢流代谢。与批培养和谷氨酰胺非限制流加培养相比,谷氨酰胺限制流加培养的氨和丙氨酸浓度及其比生成速率较低,而且YAmm/Gln高,YAla/Gln和YAla/Cells低,说明谷氨酰胺限制使得较多的谷氨酰胺参与脱氢反应,提高了谷氨酰胺的利用率,降低了细胞对氨和丙氨酸的生成,从而削弱了氨对细胞生长和单抗生产的毒害。在流加培养中应严格控制谷氨酰胺的流加浓度及与葡萄糖的配比,要避免谷氨酰胺过分限制导致的葡萄糖溢流代谢和对细胞生长和单抗产率的不利效应。 展开更多
关键词 谷氨酰胺限制 流加培养 杂交瘤细胞 葡萄糖
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重金属镉单克隆抗体的制备与性质分析 被引量:10
10
作者 易翠平 苏芳 +2 位作者 陈永发 彭新凯 朱向荣 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第21期248-253,共6页
通过双功能螯合剂iEDTA螯合Cd2+并偶联卵白蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA),合成免疫抗原Cd-iEDTAOVA和筛选抗原Cd-iEDTA-BSA;以Cd-iEDTA-OVA注射BALB/c小鼠,制备Cd2+单克隆抗体,以Cd-iEDTA-BSA通过酶联免疫吸附法(ELISA)进行筛选,并分析... 通过双功能螯合剂iEDTA螯合Cd2+并偶联卵白蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA),合成免疫抗原Cd-iEDTAOVA和筛选抗原Cd-iEDTA-BSA;以Cd-iEDTA-OVA注射BALB/c小鼠,制备Cd2+单克隆抗体,以Cd-iEDTA-BSA通过酶联免疫吸附法(ELISA)进行筛选,并分析抗体性质。结果表明:以Cd2+和OVA含量分别为174.6230μg/L、1.7892mg/mL的Cd-iEDTA-OVA抗原免疫小鼠,Cd2+和BSA含量分别为48.1881μg/L、1.8065mg/mL的Cd-iEDTA-BSA抗原筛选,可获得7F4和7E8两株特异性较好的杂交瘤细胞;7E8E5、7E8G9、7F4B8、7F4D6和7F4H8共5株高纯度单抗,均属IgG1型,其中7E8E5效价最高,达1:512000,亲和常数也最高,达4.55×108L/mol。建立了Cd2+间接竞争ELISA法,IC50为1150ng/mL,检测限为260ng/mL(R2=0.9916);与Hg2+有较强交叉,与Zn2+、Cu2+、Ca2+交叉较弱,与Mg2+、Ni2+、Al3+、Pb2+、Ba2+几乎无交叉。 展开更多
关键词 抗原 杂交瘤细胞 单克隆抗体 酶联免疫吸附法
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信号转导抑制剂对囊素刺激杂交瘤细胞抗体分泌及其mRNA表达的影响 被引量:5
11
作者 缪德年 苏小运 +2 位作者 姚惠娟 樊生超 陈溥言 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期73-77,共5页
以杂交瘤细胞为模型 ,在培养液中加入不同的信号转导抑制剂和囊素 ,用间接ELISA法测定抗体分泌水平 ,用定量RT PCR法检测抗体mRNA的表达水平。结果表明 ,加入Gα 蛋白选择性抑制剂NF 0 2 3、蛋白激酶C抑制剂GF10 92 0 3X、磷脂酰肌醇 ... 以杂交瘤细胞为模型 ,在培养液中加入不同的信号转导抑制剂和囊素 ,用间接ELISA法测定抗体分泌水平 ,用定量RT PCR法检测抗体mRNA的表达水平。结果表明 ,加入Gα 蛋白选择性抑制剂NF 0 2 3、蛋白激酶C抑制剂GF10 92 0 3X、磷脂酰肌醇 3激酶抑制剂heparin、Ca2 + /calmodulin依赖蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN 6 2、磷脂酶C抑制剂U 7312 2和蛋白激酶G抑制剂后 ,囊素对杂交瘤细胞抗体分泌速度的影响明显 (P <0 0 1)。而加入蛋白激酶A抑制剂 4 Cyano 3 M thylisoquinoline、酪氨酸蛋白激酶抑制剂 genistein和丝裂原活化的蛋白激酶抑制剂PD 980 5 9后 ,囊素对杂交瘤细胞抗体分泌速度的影响不明显 (P >0 0 5 ) ,这 3种抑制剂对杂交瘤细胞抗体分泌速度的抑制率分别为 74 5 5 % ,91 13%和80 6 9%。加入 4 Cyano 3 M thylisoquinoline、genistein和PD 980 5 9后 ,囊素处理组与对照组γ1mRNA的表达水平差异不显著 (P >0 0 5 ) ,说明这 3种抑制剂阻断了囊素刺激的杂交瘤细胞抗体mRNA的表达。以上结果表明 ,蛋白激酶A、酪氨酸蛋白激酶和丝裂原活化的蛋白激酶参与了囊素在杂交瘤细胞中的信号转导。 展开更多
关键词 信号转导抑制剂 杂交瘤细胞 囊素 间接ELISA法 抗体分泌 MRNA表达 生物活性因子
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副溶血弧菌TDH单克隆抗体的研制与性质鉴定 被引量:7
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作者 杨靖亚 陆晓帆 +3 位作者 张建 孙晓红 晁若瑜 钱媛华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期235-239,共5页
目的:制备副溶血弧菌耐热直接溶血毒素TDH单克隆抗体,并分析其免疫学特性。方法:用纯化的TDH毒素蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法进行阳性细胞筛选,有限稀释法进行亚克隆。并对该单克... 目的:制备副溶血弧菌耐热直接溶血毒素TDH单克隆抗体,并分析其免疫学特性。方法:用纯化的TDH毒素蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合,用间接ELISA方法进行阳性细胞筛选,有限稀释法进行亚克隆。并对该单克隆抗体进行了分子量大小、效价、亚类、特异性和亲和力分析。结果:筛选出一株能够稳定分泌TDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株命名为T9H4,其免疫球蛋白亚型鉴定为IgG1,亲和力常数可达2.19×109L/mol,并表现出较强的特异性。抗体纯化后效价达1∶1 024 000,SDS-PAGE电泳结果显示单抗蛋白重链分子量约为50 kD和轻链23 kD。结论:成功获得一株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞,为开发免疫学快速检测方法提供重要实验基础。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 单克隆抗体 杂交瘤细胞 亲和力常数
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两株抗人CD40配体单克隆抗体的制备及生物学特性的研究 被引量:8
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作者 樊一笋 张学光 +2 位作者 邱玉华 朱华亭 於葛华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期388-391,共4页
目的 :研制功能性抗CD4 0L单克隆抗体 ,探讨其生物学特性及其运用价值。方法 :采用B淋巴细胞融合、免疫荧光、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人CD4 0LmAb ,通过Daudi细胞生长抑制试验、混合淋巴细胞反应观察抗CD4 0LmAb的生物学功能... 目的 :研制功能性抗CD4 0L单克隆抗体 ,探讨其生物学特性及其运用价值。方法 :采用B淋巴细胞融合、免疫荧光、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人CD4 0LmAb ,通过Daudi细胞生长抑制试验、混合淋巴细胞反应观察抗CD4 0LmAb的生物学功能。结果 :经表型分析、Westernblot和竞争抑制试验 ,证实mAbB1、mAb4F1是识别人CD4 0L分子的特异性单抗 ,且识别的位点不同 ;mAbB1、mAb4F1均能不同程度地拮抗CD4 0L TC介导的Daudi细胞生长抑制和抑制混合淋巴细胞反应。结论 :成功地获得两株能稳定分泌特异性抗人CD4 0L单克隆抗体的杂交瘤 (1B1、4F1) ,这两株单抗对CD4 0L的生物学功能具有明显的阻断作用 。 展开更多
关键词 生物学特性 CD40L 杂交瘤 单克隆抗体 DAUDI细胞 混合淋巴细胞反应
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猪繁殖与呼吸道综合征病毒(PRRSV)单克隆抗体的研制 被引量:7
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作者 韩庆安 姜平 +5 位作者 董永毅 郝勤宗 裘孝良 班进林 陈溥言 蔡宝祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期145-147,共3页
利用猪繁殖与呼吸道综合征病毒 ( PRRSV)国内分离株 J1 ,采用反复差速离心法制备免疫抗原 ,长程免疫法免疫 BALB/ c小鼠 ,用间接 ELISA方法检测抗体 ,通过细胞融合技术 ,并经 3次亚克隆获得了 1 0株能稳定分泌抗 PRRSV单抗的杂交瘤细胞... 利用猪繁殖与呼吸道综合征病毒 ( PRRSV)国内分离株 J1 ,采用反复差速离心法制备免疫抗原 ,长程免疫法免疫 BALB/ c小鼠 ,用间接 ELISA方法检测抗体 ,通过细胞融合技术 ,并经 3次亚克隆获得了 1 0株能稳定分泌抗 PRRSV单抗的杂交瘤细胞克隆株 ( A1 D7H1 0 ,A1 D7H1 1 ,A1 E7H9,A1 E7D9,A2 D8E7,A2 D8B1 1 ,B3D1 1 D6 ,B3D1 1 E6 ,B2 G9A9,B2 G9F2 )。这些细胞经体外连续传代 1个月和冻存 2个月复苏后 ,均能稳定分泌高效价的抗 PRRSV抗体 ,并能在小鼠体内形成肿瘤 ,有效诱导产生高效价 PRRSV抗体腹水 ( ELISA效价为1 0 - 3~ 1 0 - 4 )。其中有 7株能与美洲弱毒株 展开更多
关键词 PRRSV 单克隆抗体 杂交瘤细胞株 腹水效价
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阪崎肠杆菌单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立 被引量:8
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作者 汪琳 李勐伟 +8 位作者 刑佑尚 柏亚铎 尹羿 蒲静 乔彩霞 高志强 魏学良 李朝明 李琴 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第12期52-55,共4页
试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞,扩大... 试验旨在制备抗阪崎肠杆菌的单克隆抗体,初步建立其ELISA检测方法。以灭活的阪崎肠杆菌全菌体为抗原免疫BALB/c小鼠,筛选血清效价高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,制备杂交瘤细胞,并用间接ELISA法选取阳性杂交瘤细胞,扩大培养后测定单克隆抗体的效价,进行特异性及抗体间的配对,使用mAb亚类检测试剂盒鉴定单克隆抗体的亚型,并利用得到的抗体建立双抗体夹心ELISA检测方法。本试验得到3株具有良好特异性能稳定分泌单克隆抗体的阳性细胞株5C10、2B6和Ab02,经两两配对,据阳性D450nm值及P/N值选择1∶20000稀释的5C10作为包被抗体,1∶40000稀释的Ab02作为酶标二抗,建立ELISA检测法,应用建立的方法与荧光定量PCR方法检测动物实验室保存的20份进出口送检奶粉样品,结果显示试验结果一致。本试验成功制备阪崎肠杆菌的单克隆抗体并建立其ELISA检测法,为大批量快速检测阪崎杆菌奠定了基础。 展开更多
关键词 阪崎肠杆菌 单克隆抗体 杂交瘤细胞 ELISA检测
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抗人μ链单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用 被引量:5
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作者 杨敬 丁天兵 +2 位作者 任君萍 宋建华 马文煜 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期325-327,共3页
目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株... 目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株。mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Westernblot法鉴定。以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测。结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5。mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgG1(κ),相对亲和力为1×10-5。Westernblot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000。以辛酸硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好。结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法。 展开更多
关键词 单克隆抗体 μ链 杂交瘤 ELISA
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气升式生物反应器在杂交瘤细胞培养中的应用 被引量:8
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作者 谭文松 陆健 张元兴 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期477-481,共5页
在前述研究工作基础上,设计开发了10L规模的动物细胞培养用气升式生物反应器。应用该生物反应器悬浮培养杂交瘤细胞,通过平行试验,考察了该反应器设计的合理性和可靠性。结果显示该反应器不存在限制细胞生长、代谢和产物生成的因素,而... 在前述研究工作基础上,设计开发了10L规模的动物细胞培养用气升式生物反应器。应用该生物反应器悬浮培养杂交瘤细胞,通过平行试验,考察了该反应器设计的合理性和可靠性。结果显示该反应器不存在限制细胞生长、代谢和产物生成的因素,而且细胞破损被彻底消除,表明该气升式生物反应器给细胞生长、代谢和产物生成提供了理想的培养环境,其设计是成功的。 展开更多
关键词 生物反应器 杂交瘤细胞 细胞培养 生物制品
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应用生物反应器大规模培养杂交瘤细胞生产体内治疗用WuT3单克隆抗体 被引量:5
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作者 邹昌勇 杜厚明 +10 位作者 冷武军 朱俊铭 喻远祥 雷继军 陈明洁 齐建新 杨明 詹骞 刘建 陈晓玲 董之昌 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期18-21,共4页
用3.5L和14L生物反应器培养WUT3杂交瘤细胞,结果表明用人血清可以代替牛血清培养WuT3细胞,在1%人血清培养液中添加适当营养成分,可达到10%小牛血清浓度下的细胞浓度(1.5×106/ml)和单抗产量(大于50μg/ml)。放大到75L... 用3.5L和14L生物反应器培养WUT3杂交瘤细胞,结果表明用人血清可以代替牛血清培养WuT3细胞,在1%人血清培养液中添加适当营养成分,可达到10%小牛血清浓度下的细胞浓度(1.5×106/ml)和单抗产量(大于50μg/ml)。放大到75L生物反应器中采用半连续方式培养,建立了中试培养工艺流程和质控点,收获时细胞浓度为1.0×106~1.5×106/ml,单抗产量为40~70μg/ml,平均日产单抗达1g。在3.5L、14L、75L逐级放大培养过程中,细胞支原体为阴性,收获上清中单抗免疫活性合格,热原试验合格。 展开更多
关键词 杂交瘤细胞 单克隆抗体 生物反应器
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β_2糖蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:5
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作者 胥亚 许国莹 +4 位作者 周红 解鸿翔 夏龙飞 刘敬敬 张晓蕾 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期649-652,共4页
目的:制备β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)单克隆抗体(MAbs),并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的人血浆β2GPⅠ免疫BALB/c小鼠,采用PEG融合技术,间接ELISA法和有限稀释法,制备和筛选杂交瘤细胞。杂交瘤细胞继续扩大培养后注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水... 目的:制备β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)单克隆抗体(MAbs),并鉴定抗体的特性。方法:以纯化的人血浆β2GPⅠ免疫BALB/c小鼠,采用PEG融合技术,间接ELISA法和有限稀释法,制备和筛选杂交瘤细胞。杂交瘤细胞继续扩大培养后注入BALB/c小鼠腹腔制备腹水,经硫酸铵沉淀及Protein G纯化MAbs。秋水仙素阻抑法鉴定杂交瘤细胞株染色体数目,ELISA测定滴度,Ig亚类试剂盒鉴定Ig亚类,Western blot鉴定特异性。结果:获得1株稳定分泌MAbs的杂交瘤细胞株β2,该杂交瘤细胞株的染色体数为99~108。进一步研究发现,其培养液和腹水滴度为1∶29和1∶215,其MAbs分类为IgG1/κ,Western blot显示纯化的MAbs及标准anti-β2GPⅠ与β2GPⅠ均有反应条带,具有较好的特异性。结论:成功获得并纯化β2GPⅠ单克隆抗体,为进一步研究β2GPⅠ/anti-β2GPⅠ复合物在抗磷脂综合征中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 β2GPⅠ 杂交瘤细胞株 单克隆抗体 抗磷脂综合征
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恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性 被引量:5
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作者 赵银丽 滕蔓 +3 位作者 邓瑞广 柴书军 刘庆堂 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第10期121-124,共4页
将恩诺沙星(ENR)偶联于载体蛋白BSA,形成完全抗原(BSA-ENR)并免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术制备分泌抗恩诺沙星的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法生产ENR单克隆抗体。结果筛选出4G1-B3,4G1-G1和4G1-B9 3株敏感特异的杂交瘤。3株单抗对... 将恩诺沙星(ENR)偶联于载体蛋白BSA,形成完全抗原(BSA-ENR)并免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术制备分泌抗恩诺沙星的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法生产ENR单克隆抗体。结果筛选出4G1-B3,4G1-G1和4G1-B9 3株敏感特异的杂交瘤。3株单抗对ENR的半数抑制浓度(IC50)分别为1.04 ng/mL,2.44 ng/mL,4.24 ng/mL。4G1-B3与环丙沙星有0.02%的交叉反应,与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%;4G1-G1和4G1-B9与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%。 展开更多
关键词 恩诺沙星 杂交瘤 单克隆抗体 免疫学特性
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