白藜芦醇上调人肺泡上皮细胞SIRT1表达抑制高氧诱导的细胞凋亡

目的探讨去乙酰化酶SIRT1激动剂白黎芦醇(Res)对高氧诱导人肺泡上皮细胞(HPAEC)凋亡的保护作用。方法体外培养HPAEC,随机分为对照组、高氧组、Res组。培养24 h,采用免疫细胞化学SP法检测caspase-9、X联锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、SIRT1蛋白的表达,采用Mito SOXTM、JC-1标记结合激光共聚焦显微镜分别检测HPAEC线粒体内活性氧(ROS)及其膜电位的变化,Western blot法检测SIRT1蛋白的表达,annexin V-FITC/碘化丙啶(PI)双标记结合流式细胞术检测HPAEC细胞凋亡率的变化。结果对照组相比,高氧组HPAEC中caspase-9蛋白表达增强、线粒体内ROS增加、细胞凋亡率增加,而XIAP、SIRT1蛋白的表达减少、膜电位降低;与高氧组相比,Res组HPAEC中caspase-9的表达减弱、线粒体内ROS产生减少、细胞凋亡率降低,XIAP、SIRT1蛋白表达增强、膜电位增高。结论 Res通过上调HPAEC中SIRT1的表达,减少ROS的产生从而维持细胞膜电位抑制肺泡上皮细胞凋亡,减轻高氧所致肺损伤。

高氧恢复对低氧运动大鼠身体成分、血清生长激素及睾酮的影响

目的探讨高氧恢复对低氧运动大鼠体成分、血清生长激素及睾酮的影响。方法雄性8周龄SD大鼠28只,随机分为常氧运动组(n=9)、低氧运动组(n=10)、低氧运动高氧恢复组(n=9)。常氧运动组每天以25 m/min进行1 h跑台运动,低氧运动组大鼠进行低氧环境暴露(O2含量为15.4%)约为23±1 h/d。低氧运动干预为每天20 m/min的跑台运动1 h,高氧恢复组大鼠经相同低氧训练后即刻进高氧舱吸高浓度氧(O2含量最高为97.2%)0.5 h;每周6天,持续4周。结果:实验后高氧恢复组与低氧运动组之间体成分、血清GH、T差异均不显著(脂肪重P=0.9,腓肠肌重P=0.89,生长激素P=0.865,睾酮P=0.814>0.05),其中高氧恢复组大鼠体重高于低氧运动组大鼠;而高氧恢复组血清GH含量高于低氧运动组,但低于常氧运动组;高氧恢复组血清T含量最低。结论:低氧运动后高氧恢复30 min对体成分、血清生长激素及睾酮的含量影响并不显著。

肺泡Ⅱ型上皮细胞原代培养及高体积分数氧-停氧对其细胞内钙离子水平的影响

目的原代培养肺泡Ⅱ型上皮细胞（AEⅡ），并动态观察高体积分数氧（高氧）-停氧对其细胞内钙离子（[Ca^2＋]i）的影响，为体外研究AECⅡ及阐明高氧肺损伤发病机制提供实验基础。方法孕19d SD大鼠麻醉消毒后超净台内剖腹取出所有胎鼠。用胎鼠肺组织进行AECⅡ分离、纯化及原代培养，倒置相差显微镜下观察其细胞的形态及生长状况。通过激光共聚焦显微镜观察其肺表面活性蛋白C（SP—C）免疫荧光的阳性表达鉴定AECⅡ。鉴定为AECⅡ的细胞通以高氧（氧流量为3mL／min，测氧仪检测氧体积分数为930—970mL／L），持续约5min后立即停氧，用激光共聚焦显微镜动态观察[Ca^2＋]i的变化情况，记录其随时间改变的动态变化曲线，同时观察钙离子荧光强度的变化并连续拍摄照片。结果例置相差显微镜观察AECⅡ呈岛状分布，铺路石状，细胞核及核仁明显，胞核圆形，胞浆内较多颗粒。激光共聚焦显微镜下可见AECⅡ胞浆中呈现绿色荧光的SP—C阳性表达。予AECⅡ高氧刺激时，[Ca^2＋]i出现短暂下降后持续上升，上升至一定程度后又缓慢下降，甚至出现[Ca^2＋]i耗竭现象，并维持该水平。予停氧刺激，[Ca^2＋]i出现短暂下降后迅速上升，然后逐渐趋于平稳。随着[Ca^2＋]i水平的增减，Ca^2＋荧光强度相应的增强或减弱。结论高氧及给氧后停氧均可使[Ca^2＋]i产生明显变化，可能是高氧导致AECⅡ损伤的重要途径之一。

高氧诱导小鼠视网膜新生血管模型中肾素(原)受体表达及意义的研究

目的探讨高氧诱导小鼠视网膜新生血管形成过程中肾素(原)受体[(pro)renin receptor,PRR]的表达和意义。方法将新生C57BL/6J小鼠随机分为2组:(1)对照组:正常氧环境中饲养;(2)实验组:高氧诱导小鼠缺氧性视网膜新生血管动物模型。待出生后第12天、第13天、第17天、第21天、第30天分别处死小鼠,通过视网膜血管灌注造影、铺片和HE染色观察视网膜新生血管的发生、发展及转归,通过RT-PCR和免疫印迹法检测不同时间点视网膜PRR mRNA和蛋白表达水平,并应用免疫组织化学染色检测小鼠视网膜中PRR的表达部位。结果 RT-PCR及免疫印迹法检测结果显示不同组别的PRR mRNA及蛋白表达水平差异均有显著统计学意义(F=43.324,P=0.000;F=20.235,P=0.000),不同时间点间PRR mRNA和蛋白表达差异也均有显著统计学意义(F=14.071,P=0.000;F=12.236,P=0.000)。实验组小鼠视网膜PRR的表达水平呈先升高后下降的趋势,于新生血管生长最多的第17天达高峰,第13天、第17天、第21天的PRR mRNA灰度比值分别为1.08±0.18、1.14±0.19、0.97±0.27,显著高于对照组的0.64±0.10、0.65±0.09、0.65±0.09(P=0.000、0.000、0.008);第17天、第21天、第30天的PRR蛋白灰度比值分别为1.25±0.17、1.02±0.11、0.92±0.15,显著高于对照组的0.73±0.12、0.76±0.10、0.73±0.16(P=0.000、0.003、0.031),其表达变化与视网膜新生血管的发生、发展及严重程度关系密切。免疫组织化学染色结果显示2组PRR均表达于视网膜微血管壁,实验组较对照组表达增多。结论在小鼠视网膜新生血管形成过程中,PRR发挥着重要作用,靶向抑制PRR的上调,可能是治疗威胁视力的增殖性视网膜病变的新方法。

骨髓间充质干细胞改善高氧致肺纤维化的研究

目的:探讨骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs)移植对高氧致新生大鼠肺纤维化的影响。方法:将SD雄性大鼠来源的BM-MSCs移植入受体大鼠体内。将受体大鼠分为正常对照组、正常BM-MSCs移植组、高氧对照组、高氧BM-MSCs移植组4组。实验第14天取各组大鼠肺组织行病理学检查和羟脯氨酸含量测定;提取雌性大鼠肺组织DNA,PCR检测性别决定基因Sry基因表达。结果:高氧对照组肺组织结构紊乱,纤维化明显,羟脯氨酸含量较正常对照组明显升高,高氧BM-MSCs移植组病理改变较高氧对照组减轻,羟脯氨酸含量亦明显降低;PCR结果显示,正常BM-MSCs移植组和高氧BM-MSCs移植组均可检测到Sry基因,高氧BM-MSCs移植组较正常BM-MSCs移植组表达增高。结论:体内移植BM-MSCs可减轻高氧致新生大鼠肺纤维化。

高氧环境对新生未成熟大鼠视网膜超微结构的影响

目的通过研究高氧环境对未成熟大鼠视网膜线粒体超微结构的影响,为临床安全应用高氧,预防早产儿视网膜病变提供理论依据。方法将60只新生孕21d(足月为22～23d)SD大鼠随机分为空气组、高氧组,每组30只,每组又随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ亚组各10只。空气组在空气中饲养;高氧组置于同一室的高浓度氧(>95%)箱中饲养。Ⅰ亚组出生当天取眼球,Ⅱ亚组出生7d取眼球,Ⅲ亚组出生14d取眼球。用电镜观察各亚组视网膜的结构,并对各亚组未成熟大鼠视网膜线粒体进行体视学研究。结果(1)高氧组在7d、14d视网膜线粒体出现显著肿胀的超微结构变化;(2)Ⅰ亚组间未成熟大鼠视网膜线粒体体积密度、表面积密度各参数均数间两两比较,差别无统计学意义(P>0.05);Ⅱ、Ⅲ亚组间未成熟大鼠视网膜线粒体各参数均数间两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论高氧环境对未成熟大鼠视网膜线粒体超微结构有损伤作用。

高氧对新生小鼠视网膜谷氨酸释放的影响

为研究新生小鼠高氧状态下视网膜谷氨酸摩尔质量浓度的变化及其机制,探讨谷氨酸在高氧视网膜损伤中的作用,实验组将新生小鼠置于体积分数为95%的高氧环境中造成视网膜损伤,对照组将新生小鼠置于正常空气中,HE染色观察视网膜损伤情况,多功能酶标仪检测视网膜谷氨酸(Glu)摩尔质量浓度变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测视网膜谷氨酸转运体(GLAST)与谷氨酰胺合成酶(GS)mRNA表达情况.结果发现,与空气对照组比较,高氧处理组视网膜受损,视网膜Glu摩尔质量浓度增加,GLAST和GS mRNA表达下降(P<0.05).高氧可导致新生小鼠视网膜的谷氨酸增高,其机制与GLAST和GS mRNA表达下降有关.谷氨酸增加可能是高氧导致视网膜损伤的原因之一.

神经肽P物质对早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的调控作用

目的探讨高氧对离体培养的早产大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)的影响及感觉神经肽P物质(SP)的保护作用及其与p38蛋白激酶(p38MAPK)信号转导机制的关系。方法分离纯化原代早产鼠AECⅡ,随机分为空气暴露组、高氧暴露组、SP干预空气暴露组及SP干预高氧暴露组。空气暴露组氧体积分数为0.21(21%),高氧暴露组氧体积分数为0.95(95%),SP干预组于暴露前加入SP1×10-6mol/L,在置于氧体积分数为0.21(21%)和0.95(95%)中各组分别暴露12、24、和48h,电镜观察AECⅡ的形态变化;MTT法及流式细胞仪测定其增殖率和凋亡率;蛋白质免疫印迹法(Westernblot)检测磷酸p38MAPK的动态变化。结果与空气暴露组比较,高氧组暴露12、24、48h后AECⅡ增殖率明显降低,凋亡率明显增加,而SP干预后其增殖率明显增加,凋亡率明显下降,形态学的损伤也有明显的改善。高氧刺激可导致p38的磷酸化激活,磷酸化p38在高氧损伤的AECⅡ表达明显增加,SP干预后,磷酸化p38表达明显降低。结论 P物质可促进高氧暴露AECⅡ的增殖并抑制AECⅡ的凋亡,SP通过抑制p38MAPK信号激活对氧化应激状态下的AECⅡ细胞可起到保护作用。

神经肽P物质促进高氧诱导的胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化

目的探讨感觉神经肽P物质(substance P,SP)对高氧诱导的胎鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(type II alveolar epithelialcells,AECⅡ)转分化的影响。方法剖宫取出孕2l d(足月为22d)SD胎鼠,分离纯化原代培养AECⅡ,采用随机分组法分为:空气暴露组(氧体积分数为0.21)、高氧暴露组(氧体积分数为0.95)、SP干预组,SP干预组于暴露前加入SP1×10-6mol/L,在置于氧体积分数为0.21和0.95中分别暴露12、24、和48h,电镜观察AECⅡ的形态变化;免疫细胞化学染色法和流式细胞仪检测AECII特异性肺泡表而活性蛋白-C(surfactant protein C,SP-C)及I型肺泡上皮细胞(type I alveolar epithelial cells,AECI)特异性水通道蛋5(aquaporin5,AQP5)的表达。结果与空气组比较,高氧暴露后,AECⅡSP-C的表达、SP-C细胞的表达率及荧光指数(flu-orescence index,FI)明显降低,AQP5表达明显增加;而SP干预后,SP-C、AQP5表达都明显增加,形态学的损伤也有明显的改善。结论SP可促进高氧诱导的胎鼠AECⅡ的转分化,在肺损伤修复中可能起重要作用。

高氧恢复对低氧训练SD大鼠红细胞参数的影响

目的:探讨高氧恢复对低氧训练红细胞参数的影响及其机制。方法:雄性SD大鼠53只,随机分为常氧安静组、常氧训练组、低氧安静组、低氧训练组、常氧训练高氧恢复组、低氧训练高氧恢复组6组。接受不同的处理,4周后测定各组大鼠的Hb、RBC和HCT。结果:常氧运动高氧恢复组血红蛋白的值为各组中最低;低氧运动高氧恢复组血红蛋白值,只与低氧安静组有显著性差异(P<0.05),与其它各组没有明显差异(P>0.05)。各组大鼠的红细胞总数的变化与血红蛋白的变化基本呈现同一规律。而各组大鼠的红细胞压积以低氧安静组最高、常氧安静组最低,但各组间没有显著性差异(P>0.05)。结论:低氧训练后进行高氧恢复在一定程度上降低了SD大鼠的红细胞参数,其机制可能跟高血氧分压抑制机体EPO的分泌等有关。

神经肽P物质对高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响及其对信号分子Gli1的调控

目的探讨神经肽P物质(SP)对高氧暴露下早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的影响及其对SHH信号通路下游信号分子Gli1的调控作用。方法分离纯化原代早产鼠AECⅡ,随机分为空气组、高氧组、高氧+SP组。空气组和高氧组分别在21%和95%氧浓度中暴露24h,高氧+SP组于高氧暴露前加入SP 1×10-8 mol/L。电子显微镜下观察AECⅡ的形态变化,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR和Western blot法检测Gli1信号分子基因和蛋白表达水平。结果与空气组比较,高氧暴露24hAECⅡ出现明显的损伤和凋亡改变,凋亡率明显增加,细胞存活率明显降低。神经肽SP干预后可明显降低AECⅡ凋亡,细胞存活率明显升高。高氧刺激可促进SHH信号通路激活Gli1基因和蛋白表达在高氧损伤的AECⅡ表达增加,SP干预后,进一步促进Gli1的表达,其基因和蛋白表达明显增加。结论 SP是一个保护性的调控因子,可以降低高氧诱导细胞损伤和凋亡,促进细胞的存活,可能与激活SHH信号通路有关。

低氧生理反应的“类推拉效应”实验观察

目的模拟低氧生理反应的"类推拉效应",即从高氧分压环境快速切换至低氧分压环境时的人体生理反应。方法实验对象为6位青年男性,分别经历由常压常氧和常压50%高氧分压环境阶跃式切换到低氧分压(12.9%,模拟4 km海拔)环境,静坐30 min。整个过程连续测量其血氧饱和度、心率、呼吸波等生理参数。结果 (1)比较由常氧至低氧环境,受试者经历高氧到低氧环境时,SpO2的下降幅度均更显著;(2)氧分压变化时间约2 min;(3)受试者的生理参数反应模式和趋势呈现明显的个体差异。结论证实了自主设计的常压低氧舱的可行性,初步模拟了低氧生理反应的"类推拉效应",观察到一些有价值的现象,为进一步研究以及减轻此类效应对于飞行人员可能造成的不利影响提供了基础数据。

高氧吸入对剖宫产母婴8-异前列腺素F 2 α含量的影响

目的：探讨高浓度氧气吸入对剖宫产母婴8-异前列腺素F2α含量及新生儿的影响。方法：44例择期剖宫产患者随机分入空气（A）组和氧气（O）组，吸氧前、吸氧后10min、胎儿娩出时分别抽取母动脉血和脐动静脉血测定血气和血浆8-异前列腺素F2α、丙二醛（MDA），同时进行新生儿Apgar评分和NBNA评分。结果：O组病人吸氧10min、胎儿娩出时母动脉血PO2和脐动静脉血PO2显著升高于A组（P〈0．05～0．001），血浆8-异前列腺素F2α、MDA浓度亦显著高于A组（P〈0．05～0．001）。两组新生儿Apgar评分和NBNA评分无显著性差别，但新生儿第5天NBNA评分行为能力和主动肌张力两项均显著高于同组新生儿第1天的评分。结论：短时间高氧吸入使剖宫产母婴脂质过氧化产物8-异前列腺素F2α浓度显著增加，但对新生儿近期的神经行为发展未产生显著影响。

高氧医用液体治疗椎-基底动脉供血不足的效果及护理

[目的 ]观察高氧医用液体治疗椎 -基底动脉供血不足的临床疗效。 [方法 ]选取椎 -基底动脉供血不足病人 12 0例 ,随机分为实验组和对照组 ,实验组加用高氧医用液体治疗 ,其余治疗方法两组相同 ,观察临床疗效及血液流变学指标变化。 [结果 ]实验组和对照组临床治愈率、总有效率分别为 5 0 .0 %、97.5 %和2 5 .0 %、85 .0 % ,具有统计学意义 (P <0 .0 1) ;实验组治疗后血液流变学指标比治疗前及对照组有明显改善 (P <0 .0 1)。 [结论 ]高氧医用液体治疗椎 -基底动脉供血不足优于单纯液体治疗。

高氧恢复对低氧训练大鼠糖储备的影响

目的:探讨在低氧运动训练应激作用下,进行吸高浓度氧恢复对大鼠肝糖原和肌糖原含量的影响.方法:本研究以雄性SD大鼠53只,随机分为6组,分别进行低氧暴露、运动干预和吸高浓度氧恢复.在实验第4周末采样,测试大鼠肝糖原和肌糖原的含量.结果:经过4周的实验,低氧运动组肝糖原显著低于其他各组(P<0.05).而其肌糖原显著低于常氧运动组(P<0.05),高于常氧安静组和低氧安静组,但没有显著性差异(P>0.05);低氧运动高氧恢复组肝糖原含量低于常氧运动高氧恢复组,没有显著性差异(P>0.05),而显著高于其它各组(P<0.05).对于肌糖原,低氧运动高氧恢复组显著高于常氧安静组、低氧安静组、低氧运动组(P<0.05).结论:低氧环境不利于大鼠糖储备的恢复,如果低氧训练后进行吸高浓度氧恢复,则有利于大鼠糖储备的恢复.

经颅多普勒监测高氧液对脑外伤后脑血管痉挛的作用

目的 分析脑外伤后脑血管痉挛 (CVS)的发生规律及经颅多普勒 (TCD)检测CVS的作用 ,并评价高氧液对脑外伤后CVS的治疗价值。方法 将 74例脑外伤后CVS患者分为治疗组 (高氧液治疗组 )3 2例和对照组 42例 ,分别于第 1天、3d、1周、2周通过TCD对双侧大脑中动脉 (MCA)及颈内动脉 (ICA)颅外段进行脑血流速度检测 ,分析比较CVS、动脉血氧分压 (PaO2 )、血氧饱和度 (SaO2 )、格拉斯哥昏迷评分(GCS)等生理及神经功能指标变化情况及最后治疗效果。结果 伤后 1～ 3d已开始出现血管痉挛 ,3～ 7d达峰值 ,14d已明显减轻 ;治疗组血氧分压及氧饱和度明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;并且其血管痉挛的程度明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ;意识情况和预后均明显好于对照组 (P <0 .0 5 ) ;血管痉挛程度越重 ,病情越重 ,预后越差。结论 TCD是检测外伤后早期脑血管痉挛的有效方法 ,高氧液对纠正外伤后脑血管痉挛有显著疗效。

神经肽P物质对高体积分数氧暴露下大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的调控作用

目的探讨神经肽P物质(SP)在高体积分数氧(高氧)肺损伤中的调控机制及其与c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路的关系。方法分离纯化原代早产鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ),随机分为空气暴露组(空气组)、高氧暴露组(高氧组)、SP干预空气暴露组(空气加SP组)及SP干预高氧暴露组(高氧加SP组)。空气组和高氧组分别置于氧体积分数为210 mL/L和950 mL/L密闭氧仓暴露48 h;空气加SP组及高氧加SP组于暴露前加入1×10-6mol/LSP,再分别置于氧体积分数为210 mL/L和950 mL/L密闭氧仓中暴露48 h。各组分别于12、24、48 h取样,常规脱水、包埋、切片,电镜下观察AECⅡ的形态变化;3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑法及流式细胞仪测定其增殖率和凋亡率;蛋白质免疫印迹法检测磷酸化JNK的动态变化。结果与空气组比较,高氧组暴露12、24、48 h后AECⅡ增殖率均明显降低(Pa<0.05),凋亡率均明显升高(Pa<0.05),高氧加SP组AECⅡ在暴露12、24、48 h后增殖率均明显升高(Pa<0.05),凋亡率明显下降(Pa<0.05),形态学损伤明显改善。高氧刺激可导致JNK的磷酸化激活,磷酸化JNK在高氧损伤的AECⅡ表达均明显增加(Pa<0.05),SP干预后,磷酸化JNK表达明显降低(Pa<0.05)。结论SP可促进高氧暴露下AECⅡ的增殖,并通过抑制JNK信号激活从而抑制AECⅡ的凋亡,对氧化应激状态下的AECⅡ细胞有保护作用。

肺内上皮-间质转化机制在小鼠支气管肺发育不良中的作用

目的观察肺表面活性物质蛋白B(Surfactant protein B,SP-B)及成纤维细胞特异性蛋白1(Fibroblast-specificprotein 1,FSP1)在支气管肺发育不良(Bronchopulmonary dysplasia,BPD)模型小鼠中的表达情况,探讨肺内上皮-间质转化(Ep-ithelial-mesenchymal transformation,EMT)在BPD中的作用及机制。方法建立BPD小鼠模型;免疫组化法观察各组小鼠肺组织病理学改变;Masson染色法观察各组小鼠肺组织胶原含量;免疫荧光双标法对EMT进行动态监测;荧光定量PCR法检测SP-B和FSP1基因mRNA的表达水平;体积描述法检测小鼠肺功能改变。结果与对照组比较,BPD组中浓度氧暴露后,小鼠肺组织逐渐出现肺泡化发育障碍、间隔增厚、胶原沉积明显;给氧14、21 d时,BPD组小鼠肺组织出现SP-B和FSP1共表达,而对照组未见共表达;与对照组比较,给氧21 d时SP-B基因mRNA表达水平明显下降,FSP1明显升高(P均<0.05);与对照组比较,BPD组呼吸频率(F)及潮气量(TV)均明显降低(P<0.05)。结论通过EMT机制生成的成纤维细胞是BPD中肺纤维化的重要来源。

高迁移率族蛋白B1在高氧致支气管肺发育不良的表达

目的检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在高浓度氧(60%O2)暴露新生小鼠肺组织损伤模型中的表达水平,探讨HMGB1在支气管肺发育不良(BPD)发病机制中的作用。方法新生足月C57BL/6小鼠随机分为BPD组和对照组,制备高氧浓度致新生鼠BPD模型,应用苏木精-伊红染色、Masson染色、放射性肺泡计数(RAC)、免疫荧光和实时荧光定量PCR技术,观察氧暴露后3d、7d、14d肺组织病理改变及HMGB1的蛋白和mRNA表达水平。结果BPD组在氧暴露后随时间推移,出现肺泡上皮肿胀,肺泡壁增厚,间质水肿,炎症细胞浸润,胶原样物质产生,肺泡结构紊乱,数量减少,较空白对照组明显发育迟滞。在氧暴露后7d、14d,HMGB1及其mRNA表达均强于对照组(P<0.05)。结论高氧暴露所致BPD中,HMGB1表达增加。BPD的病理过程可能与HMGB1表达增加有关。

神经肽P物质对高氧暴露下Ⅱ型肺泡上皮细胞的影响及其与细胞外信号调节激酶信号转导通路关系研究

目的探讨感觉神经肽P物质(SP)对高氧暴露下Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)的影响及其与细胞外信号调节激酶(ERK)信号转导机制的关系。方法分离纯化原代早产鼠AECⅡ,随机分为空气暴露组、高氧暴露组、SP干预空气暴露组、SP干预高氧暴露组,空气暴露组氧体积分数为0.21(21%),高氧暴露组氧体积分数为0.95(95%),SP干预组于暴露前加入SP1×10-6mol/L,在置于氧体积分数为0.21(21%)和0.95(95%)中各组分别暴露12、24和48h,电镜观察AECⅡ的形态变化;MTT法及流式细胞仪测定其增殖率和凋亡率;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化ERK的动态变化。结果与空气暴露组比较,高氧组暴露12、24、48h后AECⅡ增殖率明显降低,凋亡率明显增加,而SP干预后其增殖率明显增加,凋亡率明显下降,形态学的损伤也有明显的改善。高氧刺激可导致ERK的磷酸化激活,磷酸化ERK在高氧损伤的AECⅡ表达明显增加,SP干预后,磷酸化ERK表达更明显。结论SP可促进高氧暴露AECⅡ的增殖并抑制其凋亡,其通过促进ERK信号激活对氧化应激状态下的AECⅡ细胞可起到保护作用。