美国白蛾核型多角体病毒传播途径及对寄主的持续作用

用不同浓度的美国白蛾核型多角体病毒亚致死剂量感染美国白蛾4龄和5龄幼虫,并分别收集不同处理的残余带毒试虫进行室内传代饲养。结果表明:病毒对寄主昆虫不仅具有直接致死作用,而且对蛹重和雌虫产卵量均有明显影响,尤其是对亲代、子一代和子二代寄主昆虫。对病毒传播途径的研究证实HcNPV可通过多种途径传播到寄主种群中。

美国白蛾核型多角体病毒几丁质酶基因核苷酸序列研究

美国白蛾核型多角体病毒（ Ｈｃ Ｎ Ｐ Ｖ） 编码的几丁质酶 Ａ（ Ｃｈｉｔｉｎａｓｅ Ａ， Ｃｈｉ Ａ） 基因定位在 Ｈｉｎｄ Ⅲ－ ３５ｋｂ 片段上。 Ｄ Ｎ Ａ 测序表明，半胱氨酸蛋白酶（ Ｃ Ｐ） 基因的５＇上游反向存在 Ｃｈｉ Ａ基因， Ｃｈｉ Ａ 基因的 Ｏ Ｒ Ｆ 为１ ６６２ 个核苷酸，编码５５３ 个氨基酸，５＇、３＇非编码区分别具有 Ｔ Ａ Ａ Ｇ 基序和 Ａ Ａ Ｔ Ａ Ａ Ａｐｏｌｙ（ Ａ＋ ） 信号序列。同源性分析表明， Ｈｃ Ｎ Ｐ Ｖ 的 Ｃｈｉ Ａ 与苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒、家蚕核型多角体病毒的 Ｃｈｉ Ａ ，在 Ｄ Ｎ Ａ 水平上的同源性分别为７５３ ％ 、７５７ ％ ，在氨基酸水平上的同源性分别为７５０ ％ 、７８７ ％ ，与来自灵菌的 Ｃｈｉ Ａ 比较，一致性氨基酸达５１ ％ ，推测杆状病毒几丁质酶基因与细菌几丁质酶基因可能具有共同的祖先。

美国白蛾核型多角体病毒超氧化物歧化酶基因的序列分析和表达

根据测序结果 ,HcNPVsod的核苷酸序列与BmNPVsod的完全一致 ,与AcNPVsod的核苷酸序列相比 ,同源性达到 97 2 % ;推测HcNPVsod编码 1 51个氨基酸 ,与BmNPVsod的完全一致 ,与AcNPVsod编码的氨基酸相比 ,有三个氨基酸的差别。按基酸序列分析表明 ,HcNPVSOD蛋白中含有对SOD结构和活性必需的氨基酸残基 ,在HcNPVsod中均是保守的。SOD活性测定表明酶活为 1 47 0

美国白蛾核型多角体病毒ORF72原核表达载体的构建、表达及纯化

[目的]根据Ikdea对Hycu NPV全基因组序列的分析,筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因。[方法]将ORF72基因构建到原核表达载体p GEX-4T-1上,对其进行诱导表达,优化表达的条件,并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。[结果]重组质粒p GEX-4T-1-ORF72的酶切检测以及测序结果均正确,证明重组质粒载体构建成功。通过SDS-PAGE凝胶电泳显示,ORF72蛋白能够与p GEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达,诱导表达后的融合蛋白大小约为38. 2 k Da。优化后的表达条件为:异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度为1. 0 mmol·L-1,最佳诱导温度为25℃,最佳诱导时间为4 h,并且该蛋白在大肠杆菌BL21和Rosetta表达菌株中均能很好的表达,但在Rosetta菌株中表达量更高。[结论]成功构建了p GEX-4T-1-ORF72原核表达载体,确定出ORF72融合蛋白最佳诱导表达条件,诱导表达并纯化出ORF72融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定基础。

美国白蛾核型多角体病毒青岛分离株的生物活性测定

采用生物测定法测定了美国白蛾核型多角体病毒(HcNPV)青岛分离株对美国白蛾4龄、5龄和6龄幼虫的杀虫活性。结果表明,HcNPV对4龄、5龄和6龄美国白蛾幼虫的致死中浓度(LC50)分别为1.99×105OBs/ml、1.69×106OBs/ml和8.04×106 OBs/ml;以1.48×107OBs/ml病毒处理时,4龄、5龄和6龄幼虫的致死中时间(LT50)分别为6.14d、8.63d和10.31d,以1.48×108OBs/ml病毒处理时,4龄、5龄和6龄幼虫的LT50分别为5.30d、5.92d和7.12d。在相同病毒浓度下,LT50随着虫龄的增加而增加;4龄美国白蛾幼虫在1.48×106OBs/ml、1.48×107OBs/ml和1.48×108OBs/ml等3个病毒浓度处理下的LT50分别为7.65d、6.14d和5.30d,在相同虫龄条件下,LT50随病毒浓度的增加而降低。以上结果为应用该病毒分离株防治美国白蛾提供理论依据。

用美国白蛾核型多角体病毒表达家蚕促前胸腺激素基因

携带有家蚕促前胸腺激素PTTH基因的重组转移载体pHcMU1PTTH(含有麻蝇毒素IA信号序列 )与美国白蛾核型多角体病毒 (HcNPV)基因组DNA共转染SPIM细胞 ,经 2轮空斑纯化 ,筛选出重组病毒HcNPVPTTH+ ,SDSPAGE和Westernblot分析表明 :在细胞培养上清中可检测到PTTH的存在 ,说明麻蝇毒素IA信号序列可被SPIM细胞识别。用抗PTTH的兔血清进行Westernblot分析可显示分子量为2 0ku左右的 2条带 ,但当培养液内加入衣霉素时 ,仅出现 1条分子量小于 1 8ku的信号带 ,推测

四种限制性内切酶对美国白蛾核型多角体病毒DNA酶解分析

从HcNPV中直接分离提纯的DNA证明具有典型的紫外吸收光谱。经琼脂糖电泳后呈一条带谱。用限制性内切酶EcoRⅠ、PstⅠ,BglⅡ,PVUⅡ酶解，经琼脂糖平板电泳分别产生19、22、18、22条核酸片段。加λDNA－EcoRⅠ和λDNA－HindⅢ片段作参考，计算出各片段分子量大小，积加得平均值为94．0445×10^6。

温度对美国白蛾核型多角体病毒活性的影响

本文研究了不同温度、不同处理时间对美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus,Hc NPV)水剂和干粉活性的影响,研究结果表明:随着温度升高和持续时间增长,Hc NPV活性降低,LT50变长;病毒干粉比病毒水剂对温度的耐受性强,但其LT50会显著延长。55℃水浴处理Hc NPV水剂60 min,其活性仍有67%。在水浴100℃条件下处理15 min,其致病率仅有17.41%,病毒干粉在烘箱120℃条件下处理15 min,致病率为47.91%。

美国白蛾核型多角体病毒的研究进展

美国白蛾(Hyphantria cunea(Drury))属鳞翅目(Lepidoptera)灯蛾科(Arctiidae),是一种重要的国际性检疫害虫,从1979年入侵以来,对我国林业和园林绿化造成重大危害。美国白蛾核型多角体病毒(Hyphantria cunea Nucleopolyhedrovirus,HcNPV)生物杀虫剂能有效控制寄主美国白蛾种群的数量,在生物防治中起到了重要的控害作用,具有重要的经济、生态和环保价值,应用前景十分广阔。从侵染特点、致病性、流行病毒学、基因组特点及应用前景等方面综述了美国白蛾核型多角体病毒的研究进展。

甘蓝夜蛾核型多角体病毒防治美国白蛾试验

为研究甘蓝夜蛾核型多角体病毒对美国白蛾的防治效果,开展甘蓝夜蛾核型多角体病毒(Mb NPV)防治美国白蛾试验。分别用甘蓝夜蛾核型多角体病毒10亿PIB·mL^(-1)悬浮剂、10亿PIB·g^(-1)可湿性粉剂、25%灭幼脲悬浮剂3种药剂对美国白蛾一代和二代幼虫进行喷雾防治。结果表明:在防治一代美国白蛾的试验中,10亿PIB·mL^(-1)MbNPV悬浮剂250倍液对美国白蛾的防效最好,虫口减退率最高,11 d时均达到100%。在防治二代美国白蛾的试验中,25%灭幼脲悬浮剂2 000倍液的虫口减退率和防治效果明显高于其他两种试验药剂MbNPV,而两种试验药剂MbNPV的虫口减退率和防治效果差异不明显。