补脾益气方药对脾虚哮喘大鼠肺组织IκB/NF-κB信号途径的影响

目的探讨脾虚型哮喘大鼠气道炎症,血液和支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞百分比,肺组织核因子-κB抑制蛋白α(IκBα)表达和核因子-κB(NF-κB)活性的变化及补脾益气方药对其的影响。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组(A组)、脾虚型哮喘组(B组)、补脾益气方药组(C组),采用HE染色检测肺组织病理变化,采用免疫组织化学方法检测肺组织IκBα表达水平和NF-κB p65的活性变化。结果B组与A组比较,肺组织IκBα表达显著降低,而NF-κB p65的活性显著增高(P<0.01);C组与B组比较,肺组织IκBα表达显著增高,而NF-κB p65的活性显著降低(P<0.01)。结论补脾益气方药能有效增加脾虚型哮喘大鼠肺组织IκBα的表达,抑制其肺组织NF-κBp65的活性,减轻哮喘时的气道炎症变化,从而对脾虚型哮喘起到治疗作用。

急性肺损伤核因子-κB的活性变化及糖皮质激素的干预研究

目的 观察急性肺损伤 (ALI)肺组织核因子 (NF) -κB、肿瘤坏死因子 (TNF) -α的活性变化及地塞米松 (Dex)的干预作用。方法 采用ALI大鼠模型 ,实验动物随机分为ALI模型组 (8只 )、Dex治疗组 (8只 )、正常对照组 (8只 ) ,用免疫组织化学法结合原位定量分析检测肺组织NF -κB、IκB -a、TNF -α蛋白表达及相对含量 ,并进行肺组织的病理学光镜检查。结果 ALI大鼠肺组织NF -κB、TNF -α的蛋白表达明显升高 ,I-κB表达显著降低。Dex能明显下调NF -κB、TNF -α的蛋白表达 ,上调I-κB表达 ,并能减轻肺组织的损伤程度。结论 NF -κB活化在ALI的发生、发展过程中起着重要作用。Dex发挥抗炎作用 ,减少肺组织损害 ,与其对NF -κB的活性和细胞因子的调节作用密切相关。

脉复生通过核因子-κB通路对脂多糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

【目的】观察脉复生(主要由牛大力、熟地黄、白花蛇舌草等组成)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(ECV304)内核因子-κB(NF-κB)信号通路蛋白表达的影响。【方法】体外培养ECV304细胞,实验分为正常对照组,LPS诱导组(终浓度为1μg/m L),LPS诱导+脉复生高、中、低剂量组(终浓度分别为10、1、0.1μg/m L),采用Western-blot法检测各组细胞中NF-κB p65、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮合酶(i NOS)、环加氧酶-2(COX-2)、血管细胞黏附因子-1(ICAM-1)及细胞间黏附分子-1(VCAM-1)的蛋白表达水平。【结果】与正常对照组比较,LPS诱导组细胞上清液中NF-κB p65、TNF-α、i NOS、COX-2、ICAM-1、VCAM-1蛋白表达均显著增加(P<0.01);脉复生各剂量组能不同程度地减少LPS诱导细胞中NF-κB p65、TNF-α、i NOS、COX-2、ICAM-1、VCAM-1蛋白表达水平,其中中、高剂量组作用显著(P<0.05或P<0.01)。【结论】脉复生可通过抑制LPS诱导的ECV304细胞中NF-κB、TNF-α、i NOS、COX-2、ICAM-1、VCAM-1的蛋白表达,调节NF-κB信号通路,从而发挥保护血管内皮细胞的作用。

失血性休克肝枯否氏细胞I-κB激酶的表达及意义

目的 探讨IκB激酶 - β(IKK - β)在失血性休克继发肝脏损伤中的作用。 方法 采用失血性休克家兔模型 ;分离培养肝脏枯否氏细胞 (KC) ,用原位杂交方法 (ISH)、凝胶电泳迁移率改变分析法 (EMSA)和酶联免疫吸附实验 (ELISA)分别检测KC中IKK - βmRNA表达、核因子 (NF) -κB活性和KC培养液上清中TNF -α含量。并进行肝脏组织的病理学光镜检查。结果 模型组KC中IKK - β的mRNA表达 (0 1 7± 0 0 4 )、NF -κB活性 (1 72± 0 36 )和培养液上清中TNF -α含量 (30 0 0 5± 30 86 )ng/L较对照组 [IKK - β(0 0 2± 0 0 1 )、NF -κB(0 31± 0 1 0 )、TNF -α(1 34 85± 1 2 0 9)ng/L]明显增高 (P均 <0 0 1 )。模型组肝脏组织病理损伤严重。结论 IKK - β介导NF

肿瘤坏死因子-α对原代大鼠肾近端小管上皮细胞Toll样受体2表达的调控及机制

目的探讨肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）对原代大鼠肾近端小管上皮细胞Toll样受体2（tolllike receptor2,TLR2）表达的调控以及核因子-κB（nuclearfactor-κB,NF-κB）在其中的作用。方法体外分离与培养原代大鼠肾近端小管上皮细胞,以TNF-α按不同时间给予刺激,Western blot检测TLR2,I-κBα,磷酸化I-κBα（pI-κBα）,GAPDH蛋白水平。分别以TNF-α、NF-κB特异性抑制剂Bay11-7082处理25h、Bay11-7082预处理1h后加入TNF-α刺激24h,检测TLR2表达的变化。结果TNF-α刺激6~24h,TLR2高于基线水平;Bay11-7082处理组和Bay11-7082＋TNF-α处理组的TLR2蛋白表达水平高于对照组。Bay11-7082＋TNF-α处理组与单独TNF-α处理组TLR2蛋白表达水平无差异。TNF-α刺激后5~120min,pI-κBα蛋白水平升高。结论TNF-α促进原代大鼠肾近端小管上皮细胞TLR2蛋白表达,NF-κB对TLR2的表达可能起负调节作用。

β1受体阻滞剂对脓毒症大鼠心肌损伤的影响

目的探讨β1受体阻滞剂对脓毒症大鼠心肌损伤的影响和机制。方法将健康雄性大鼠72只随机分为对照组、脓毒症组、治疗组，每组24只。脓毒症组采用盲肠结扎穿孔法（CLP）建立脓毒症模型，对照组仅剖腹而不进行CLP。脓毒症组和对照组在关腹后皮下注射生理盐水3mL／100g；治疗组除皮下补液外，经尾静脉注射艾司洛尔15mg／（kg·h）持续静脉泵入，分别于3、6、12、24h采集标本，在每个时间点每组大鼠均为6只，观察三组血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、心肌组织核转录因子-κBp65（NF—κBp65）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）的变化。结果与对照组比较，脓毒症组在各时间点血清TNF-α浓度、cTnI浓度及心肌组织NF—κBp65表达均显著升高（P〈0．05）；与脓毒症组比较，治疗组在各时间点血清TNF—α浓度、cTnI浓度及心肌组织NF—κBp65表达均降低（P〈0．05）。结论β1受体阻滞剂艾司洛尔可减轻脓毒症大鼠心肌损伤，其机制可能与抑制心肌NF—κBp65的表达，降低血清促炎介质的产生有关。β1受体阻滞剂能改善脓毒症失控的炎症反应以及保护心肌功能。

NF-κB信号通路在金黄色葡萄球菌诱导奶牛乳腺成纤维细胞转分化中的作用

用热灭活金黄色葡萄球菌(0,104,105,106,107和108 CFU/mL)刺激奶牛乳腺成纤维细胞,24h后采用Real time-PCR方法检测TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β1mRNA的表达量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-I及pNF-κB p65蛋白的表达量。使用NF-κB通路抑制剂PDTC预处理细胞,再用105 CFU/mL热灭活金黄色葡萄球菌刺激细胞,24h后采用Real time-PCR方法检测TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β1 mRNA的表达量,Western blot方法检测α-SMA、collagen-I及p-NF-κB p65蛋白的表达量,免疫荧光法检测α-SMA及collagen-I蛋白的表达量。结果显示,不同浓度热灭活金黄色葡萄球菌处理细胞的TGF-β1mRNA的表达量显著升高(P<0.05),其中以105 CFU/mL刺激组的TGF-β1mRNA的表达量最高。随着热灭活金黄色葡萄球菌浓度的升高,p-NF-κB p65蛋白的表达量逐渐升高(P<0.01),TNF-α、IL-1β、IL-6mRNA的表达量也逐渐升高(P<0.01)。不同浓度灭活的金黄色葡萄球菌处理细胞的α-SMA及collagen-I蛋白的表达量均能显著升高(P<0.05),其中以105 CFU/mL刺激组的α-SMA及collagen-I蛋白的表达量最高。抑制剂PDTC能够显著抑制TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β1 mRNA的表达量(P<0.05),PDTC能够显著抑制α-SMA、collagen-I及p-NF-κB p65蛋白的表达量(P<0.05)。结果提示,NF-κB信号通路在金黄色葡萄球菌诱导奶牛乳腺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞过程中发挥重要作用,本研究为揭示金黄色葡萄球菌性乳腺炎发生硬化的机制奠定基础。

复方七芍降压片对自发性高血压大鼠P2Y6/PLC/I-κB/NF-κB轴的影响

目的:研究复方七芍降压片对自发性高血压(SHR)大鼠肾动脉中G蛋白偶联受体P2Y6、磷酯酶C(PLC)、核因子κB抑制蛋白(I-κB)、核因子κB(NF-κB)蛋白表达的影响,探讨复方七芍降压片干预血管重塑的作用机制。方法:SPF级雄性SHR大鼠30只随机分为模型组、阳性药组(13.5mg/kg厄贝沙坦片)、复方七芍降压片组(8.73g/kg复方七芍降压片),另设10只WKY大鼠为正常对照组。各组分别给予相应处理6周后取材,HE染色法观察血管形态;ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;免疫组化法检测肾动脉中P2Y6、PLC、I-κB、NF-κB的蛋白表达水平。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠动脉内膜粗糙不平,甚至有内膜脱落情况,平滑肌细胞数量增加,分布不均匀,排列紊乱,血清TNF-α水平及肾动脉中P2Y6、PLC、I-κB、NF-κB蛋白表达水平显著升高(P<0.01,P<0.05)。药物干预后,与模型组比较,复方七芍降压片组内膜平整,无脱落情况,平滑肌细胞数量无明显增加,分布均匀,排列大致整齐,血清TNF-α水平及肾动脉中P2Y6、PLC、I-κB、NF-κB蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。结论:复方七芍降压片能够显著改善血管重塑;其机制与抑制TNF-α的分泌、调控肾动脉中P2Y6/PLC/I-κB/NF-κB轴有关。

山莨菪碱对多器官功能障碍综合征保护机制的实验研究

目的 探讨山莨菪碱 ( 65 4-2 )对多器官功能障碍综合征 (MODS)可能的治疗机制。方法 采用失血性休克合并内毒素刺激诱发MODS家兔模型 ,2 4只大耳白兔随机分为正常对照组 (C组 )、模型组 (M组 )、65 4-2治疗组 (T组 )。用原位杂交 (ISN)技术、凝胶电泳迁移率改变 (EMSA)及酶联免疫吸附试验 (ELISA)法分别检测肺泡巨噬细胞 (PAM )及肝枯否细胞 (KC)中I -кB激酶(IKK -β)mRNA表达、NF -кB的活性和细胞培养上清液中TNF -α的含量。并进行动脉血气、生化和内脏组织病理学光镜检查。 结果 M组和C组比较PAM和KC中IKK -βmRNA表达 [( 0 15± 0 0 3 ) ;( 0 17± 0 0 4) ] ,NF -кB活性 [( 1 49± 0 3 0 ) ;( 1 72± 0 3 6) ]和上清液TNF -α的含量 [( 2 79 74± 2 5 91) ;( 3 0 0 0 5± 3 0 86)ng/L]明显增高 ( P 均 <0 0 1)。肝肺肾小肠等脏器功能发生不同程度损害 ;65 4-2治疗组能显著抑制M组PAM和KC中IKK -βmRNA表达 [( 0 10± 0 0 2 ) ;( 0 11± 0 0 2 ) ]、NF -кB活性 [( 0 65±0 10 ) ;( 0 88± 0 2 0 ) ]和TNF -α[( 180 61± 13 0 1) ;( 2 10 2 8± 18 0 1)ng/L]的分泌 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。明显缓解MODS动物内脏组织的功能损害。结论 65 4-2通过抑制IKK -β/NF