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Poly I:C对结肠炎小鼠肠黏膜通透性的影响 被引量:1
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作者 赵红伟 赵芳霞 +1 位作者 韩华 岳月红 《国际消化病杂志》 CAS 2017年第1期45-48,共4页
目的探索Poly I:C对结肠炎模型小鼠肠黏膜通透性的影响。方法 30只小鼠随机分为正常组、模型组和Poly I:C组各10只,建立结肠炎小鼠模型;观察各组的一般情况、体质量变化及结肠病理学表现,应用偶氮基质显色法测定血清脂多糖(LPS)含量,采... 目的探索Poly I:C对结肠炎模型小鼠肠黏膜通透性的影响。方法 30只小鼠随机分为正常组、模型组和Poly I:C组各10只,建立结肠炎小鼠模型;观察各组的一般情况、体质量变化及结肠病理学表现,应用偶氮基质显色法测定血清脂多糖(LPS)含量,采用异硫氰酸荧光素标记的右旋葡聚糖(FITC-D,MW:4000)及细菌移位方法来检测肠黏膜通透性,免疫组织化学染色测定结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、claudin-1的变化。结果实验期间,与正常组相比较,模型组小鼠体质量出现下降,饮水和进食明显减少且结肠黏膜缺损,腺体破坏或消失,可见黏膜、黏膜下层甚至肌层大量炎性细胞浸润;给予Poly I:C治疗后,小鼠的体质量回升明显,且结肠组织炎性细胞浸润较少,症状明显减轻。相较于模型组,Poly I:C组血清中LPS的含量、细菌移位率及FITC-D渗透率均降低。相较于正常组,ZO-1、claudin-1细胞在模型组中表达明显降低且染色强度减弱。但给予Poly I:C治疗后,ZO-1和claudin-1细胞的染色强度显著升高。结论 Poly I:C可降低急性期溃疡性结肠炎模型小鼠结肠黏膜的通透性。 展开更多
关键词 POLY i:c 溃疡性结肠炎 急性结肠炎模型 肠黏膜通透性
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低氧环境下poly I:C刺激对淇河鲫肝胰脏抗氧化防护的影响 被引量:7
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作者 赵燕静 狄桂兰 +4 位作者 孔祥会 张杰 李莉 聂国兴 李学军 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1830-1841,共12页
明确低氧环境下poly I:C刺激对淇河鲫抗氧化水平的影响,对于理解低氧环境下鱼类对病原类似物的应激反应及免疫能力具有重要的意义。本实验选择体质量为(23±2)g,体长为(11±1)cm的健康淇河鲫,不同溶解氧含量[(1.0±0.2)、(2... 明确低氧环境下poly I:C刺激对淇河鲫抗氧化水平的影响,对于理解低氧环境下鱼类对病原类似物的应激反应及免疫能力具有重要的意义。本实验选择体质量为(23±2)g,体长为(11±1)cm的健康淇河鲫,不同溶解氧含量[(1.0±0.2)、(2.0±0.2)、(4.0±0.2)和(6.0±0.2)mg/L)]下饲养7 d后,实验组每尾鱼腹腔注射2 mg/m L poly I:C 100μL,对照组每尾注射0.75%Na Cl溶液100μL,分别在注射后12、24、48、96和168 h时测定肝胰脏超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活性;分析Cu/ZnSOD、Mn-SOD、CAT和GPx基因的m RNA表达变化,同时检测丙二醛(MDA)含量。结果显示,低氧暴露7 d后,亚低氧水平(DO 4 mg/L)时淇河鲫肝胰脏抗氧化酶活性和m RNA表达量均显著高于正常溶氧组6 mg/L,说明在亚低氧条件下,淇河鲫通过抗氧化酶活性增加,在一定程度上降低了低氧的不利影响。低氧(DO 1和2 mg/L)时,抗氧化酶活性和m RNA表达量均显著低于6 mg/L,显示低氧条件下淇河鲫肝胰脏抗氧化防护能力降低,脂质过氧化产物MDA含量随着溶解氧含量的降低而升高。低氧环境下利用poly I:C刺激鱼体,抗氧化酶活性和m RNA表达量在48、96和168 h时显著低于对照组,显示低氧环境下病原类似物poly I:C刺激进一步加剧了鱼体抗氧化防护能力的下降,从而导致严重的氧化应激胁迫。注射poly I:C后MDA的含量显著高于对照组,说明低氧条件下注射poly I:C加剧了淇河鲫肝胰脏氧化应激程度。研究表明,低氧环境下鱼类抗氧化防护能力下降,产生氧化应激胁迫;低氧环境下病原类似物poly I:C刺激可加剧鱼体抗氧化防护水平的下降,从而减弱对外界病原的防御能力。 展开更多
关键词 淇河鲫 低氧 POLY I:c 氧化应激 抗氧化防护
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热休克、Poly I:C上调草鱼GRP78基因表达 被引量:4
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作者 吴初新 刘毅 +2 位作者 马梅生 王丽坤 胡成钰 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期814-818,共5页
葡萄糖调节蛋白78(GRP78)是细胞内一种应急蛋白,它通过对细胞内、外胁迫因子产生强烈的应答而调节内质网稳态.草鱼(Ctenopharyngodon idellus)GRP78克隆于草鱼肝肾cDNA文库,全长2490bp.其中,5'非编码区为155bp,含有7个热休克元件,3&... 葡萄糖调节蛋白78(GRP78)是细胞内一种应急蛋白,它通过对细胞内、外胁迫因子产生强烈的应答而调节内质网稳态.草鱼(Ctenopharyngodon idellus)GRP78克隆于草鱼肝肾cDNA文库,全长2490bp.其中,5'非编码区为155bp,含有7个热休克元件,3'非编码区为373bp,最大开放阅读框为1962bp,编码653个氨基酸.序列分析表明,草鱼GRP78的N端包含3个HSP70家族的签名序列,C末端为内质网蛋白滞留信号KDEL,草鱼GRP78与人及其它动物的同源性很高.适应性进化分析也显示GRP78非常保守,受到强烈的功能约束,说明该蛋白质在进化中非常重要.RT-PCR分析表明,相对于本底水平,34℃热激和Poly I:C诱导后,草鱼GRP78在肝、肾等组织中的表达明显上调. 展开更多
关键词 热休克 POLY I:c 表达 GRP78 草鱼 胁迫
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Poly I:C母体免疫刺激诱导的子代精神分裂症神经发育动物模型 被引量:4
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作者 王佳 许燕 +3 位作者 李国海 常宪鲁 周莹 张维宁 《心理科学》 CSSCI CSCD 北大核心 2015年第1期229-236,共8页
精神分裂症是一组病因未明的重性精神障碍,其病理生理学机制极其复杂,建立能够确切模拟精神分裂症的动物模型对于其发病机制的研究及抗精神分裂症药物的研发具有十分重要的意义。本文意在介绍产前母体免疫刺激(聚肌胞苷酸聚肌苷酸-聚胞... 精神分裂症是一组病因未明的重性精神障碍,其病理生理学机制极其复杂,建立能够确切模拟精神分裂症的动物模型对于其发病机制的研究及抗精神分裂症药物的研发具有十分重要的意义。本文意在介绍产前母体免疫刺激(聚肌胞苷酸聚肌苷酸-聚胞苷酸,Poly I:C)诱导子代出现精神分裂症样的神经发育动物模型,以及该模型对精神分裂症的病因研究、生物学机制及其治疗和药物研发的重要意义。 展开更多
关键词 精神分裂症 动物模型 产前免疫刺激 Poly I:c
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PolyI:C介导气道平滑肌细胞TLR3和IL-8、Eotaxin的表达 被引量:7
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作者 闫明华 朱述阳 +1 位作者 段存玲 嵇桂娟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期966-968,972,共4页
目的:观察PolyI:C对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)Toll样受体3(TLR3)及炎性细胞因子表达的影响,探讨ASMCs内TLR3表达与气道炎症间的关系。方法:体外培养大鼠ASMCs,传代培养后分为正常对照组和PolyI:C刺激组,PolyI:C刺激组又分为不同的时间... 目的:观察PolyI:C对大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)Toll样受体3(TLR3)及炎性细胞因子表达的影响,探讨ASMCs内TLR3表达与气道炎症间的关系。方法:体外培养大鼠ASMCs,传代培养后分为正常对照组和PolyI:C刺激组,PolyI:C刺激组又分为不同的时间点。用RT-PCR法检测细胞TLR3mRNA的表达;Western blot法检测ASMCs中核因子κB(NF-κB)的蛋白含量;ELISA法检测细胞培养上清Eotaxin和IL-8的浓度。结果:与正常对照组相比较,PolyI:C刺激组ASMCs内TLR3mRNA和NF-κB蛋白表达增加(P<0.05);ASMCs培养上清液中IL-8和Eotaxin浓度增加(P<0.05),并存在时间依赖性。结论:PolyI:C可以上调ASMCs内TLR3的表达,活化NF-κB,增加趋化因子Eotaxin和IL-8的浓度,参与哮喘的气道炎症反应。 展开更多
关键词 气道平滑肌细胞 PolyI:c TOLL样受体3 NF-ΚB
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Al(OH)_3、ISA206及Poly(I:C)免疫佐剂对灭活口蹄疫140S抗原免疫效果的影响 被引量:3
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作者 周春雪 魏巍 +3 位作者 李冬 韩成昊 李艳丽 刘在新 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期927-932,共6页
目的选取Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂,分别与灭活口蹄疫病毒(FMDV)配制成疫苗,并通过小鼠实验比较和评价3种佐剂的免疫效力。方法以口蹄疫O型病毒为毒种,经细胞培养传代,获得较高滴度的病毒培养物,并经化学方法灭活制成140S口蹄... 目的选取Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂,分别与灭活口蹄疫病毒(FMDV)配制成疫苗,并通过小鼠实验比较和评价3种佐剂的免疫效力。方法以口蹄疫O型病毒为毒种,经细胞培养传代,获得较高滴度的病毒培养物,并经化学方法灭活制成140S口蹄疫完整病毒粒子抗原。在蔗糖密度梯度定量后分别与Al(OH)3、ISA206及Poly(I:C)3种佐剂配合制作口蹄疫灭活疫苗。疫苗经肌肉注射免疫Balb/c小鼠,通过检测抗体效价评价机体产生的体液免疫反应。通过检测体外刺激免疫小鼠脾淋巴细胞后产生的细胞因子以及淋巴细胞增殖实验评价机体产生的细胞免疫反应。结果 ISA206口蹄疫灭活苗和Poly(I:C)口蹄疫灭活苗诱导小鼠产生的抗体效价较高;通过体外刺激实验发现,ISA206口蹄疫灭活苗免疫组小鼠脾淋巴细胞在抗原刺激后,产生的IFN-γ和IL-4含量最高;通过淋巴细胞增殖实验发现,ISA206口蹄疫灭活苗免疫组小鼠脾淋巴细胞的增殖能力最强(P<0.05)。结论ISA206佐剂在配合灭活口蹄疫140S完整病毒粒子进行免疫时所表现的免疫效力最高。 展开更多
关键词 Poly(I c) AL(OH)3 ISA206 口蹄疫
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Poly I:C对氧糖剥夺损伤星形胶质细胞TLR3信号通路的影响 被引量:3
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作者 潘琳娜 涂秀英 +2 位作者 李昌俊 郭莲军 吕青 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期292-295,共4页
目的观察聚肌胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid,Poly I:C)对氧糖剥夺损伤(oxygen-glucose deprivation,OGD)星形胶质细胞TLR3信号转导通路的影响,探讨Poly I:C保护神经细胞的作用机制。方法通过缺血缺糖培养12h建立星形胶质细胞... 目的观察聚肌胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid,Poly I:C)对氧糖剥夺损伤(oxygen-glucose deprivation,OGD)星形胶质细胞TLR3信号转导通路的影响,探讨Poly I:C保护神经细胞的作用机制。方法通过缺血缺糖培养12h建立星形胶质细胞氧糖剥夺损伤模型,观察10μg/mL和20μg/mL Poly I:C预孵育对氧糖剥夺损伤星形胶质细胞Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3)、磷酸化干扰素调节因子3(phospho-interferon regulatory factor 3,pIRF3)、磷酸化核因子-κB(phospho-nuclear factor-κB,pNF-κB)蛋白表达的影响。结果①与空白对照组相比,星形胶质细胞氧糖剥夺12h后细胞TLR3、pNF-κB蛋白表达升高,而pIRF3蛋白表达无明显变化。②与OGD组相比,Poly I:C预处理组能促进细胞中pIRF3表达,而对细胞TLR3表达无明显影响,pNF-κB表达有下降趋势,但差异无统计学意义。结论 Poly I:C保护神经细胞作用可能与提高氧糖剥夺损伤星形胶质细胞pIRF3蛋白的表达,进而增加下游抗炎因子干扰素-β(IFN-β)的表达有关。 展开更多
关键词 聚肌胞苷酸 星形胶质细胞 氧糖剥夺损伤 TOLL样受体3 干扰素调节因子 核因子-ΚB
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Rab7 GTPase负向调节巨噬细胞中poly I:C诱导的细胞因子的表达 被引量:2
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作者 王玉珍 谢基明 +1 位作者 王宁飞 刘帅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期867-870,共4页
目的:通过构建Rab7的失活突变载体tRab7(Rab7T22N),研究Rab7失活突变后对poly I:C诱导的RAW264.7巨噬细胞中细胞因子的影响。方法:利用PCR定点突变法构建Rab7的失活突变载体Rab7T22N,将Rab7的真核表达载体及其突变体tRab7通过脂质体法... 目的:通过构建Rab7的失活突变载体tRab7(Rab7T22N),研究Rab7失活突变后对poly I:C诱导的RAW264.7巨噬细胞中细胞因子的影响。方法:利用PCR定点突变法构建Rab7的失活突变载体Rab7T22N,将Rab7的真核表达载体及其突变体tRab7通过脂质体法瞬时转染RAW264.7细胞,通过Western blot方法检测Rab7的表达情况。poly I:C刺激转染细胞不同时间后检测细胞因子IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达变化。结果:Western blot检测结果显示,与转染空质粒的对照细胞相比,转染Rab7和tRab7的细胞中Rab7的蛋白水平显著增高。Rab7过表达后,抑制了巨噬细胞RAW264.7中poly I:C刺激后IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的产生,而Rab7失活突变体tRab7(Rab7T22N)过表达后显著促进了IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达。结论:Rab7抑制了poly I:C刺激的巨噬细胞中IFN-β、IP10、TNF-α和IL-1β的表达,该抑制作用依赖于其GTP结合活性。本研究为进一步阐明Rab7在TLR3信号转导通路中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 polyI:c Rab7 IFN-Β TNF-Α TLR3
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Poly I:C刺激下原发性干燥综合征患者单核细胞分泌Ⅰ型干扰素能力增强
9
作者 孙懿 胡志德 +4 位作者 谷明莉 黄元兰 薛苗 郭方宇 邓安梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期548-551,共4页
目的:研究在Poly I:C刺激下原发性干燥综合征(pSS)患者单核细胞分泌Ⅰ型干扰素的能力。方法:分别以50μg/ml和100μg/ml的Poly I:C刺激pSS和健康个体的单核细胞,于刺激后第6和第12小时采用ELISA法检测培养基内IFN-α和IFN-β水平。分别... 目的:研究在Poly I:C刺激下原发性干燥综合征(pSS)患者单核细胞分泌Ⅰ型干扰素的能力。方法:分别以50μg/ml和100μg/ml的Poly I:C刺激pSS和健康个体的单核细胞,于刺激后第6和第12小时采用ELISA法检测培养基内IFN-α和IFN-β水平。分别用pSS患者和健康个体的血清培养来自二者的单核细胞,并用50μg/ml的Poly I:C刺激12小时后ELISA法检测培养基内IFN-α和IFN-β水平。结果:Poly I:C能够诱导pSS患者和健康个体的单核细胞呈时间和计量依赖性地释放IFN-α和IFN-β,pSS患者释放IFN-α和IFN-β的能力强于健康个体。pSS血清可以增强Poly I:C诱导单核细胞释放IFN-α和IFN-β的能力。结论:pSS患者单核细胞Poly I:C刺激下分泌Ⅰ型干扰素能力增强,而患者血清可以进一步增强其反应性。天然免疫应答异常可能在pSS发病机制中发挥重要作用。 展开更多
关键词 干燥综合征 天然免疫 Poly I:c Ⅰ型干扰素
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半滑舌鳎IRF-7基因的全长cDNA克隆及表达分析
10
作者 刘万建 史成银 +3 位作者 宋展 耿伟光 李赟 黄倢 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2012年第5期39-47,共9页
本研究克隆了半滑舌鳎干扰素调节因子7(CsIRF-7)cDNA的全长序列,并对该基因进行了结构特征分析,同时还完成了该基因在半滑舌鳎各组织中表达水平的定量分析。结果表明,CsIRF-7基因cDNA全长为1957bp,其中包含48bp的5′-UTR、1302bp的ORF和... 本研究克隆了半滑舌鳎干扰素调节因子7(CsIRF-7)cDNA的全长序列,并对该基因进行了结构特征分析,同时还完成了该基因在半滑舌鳎各组织中表达水平的定量分析。结果表明,CsIRF-7基因cDNA全长为1957bp,其中包含48bp的5′-UTR、1302bp的ORF和607bp的3′-UTR。CsIRF-7 cDNA编码一个由433个氨基酸残基组成的多肽。氨基酸序列比对结果表明,CsIRF-7多肽与脊椎动物IRF-7相似,存在高度保守的3个结构域:DNA结合域(DNA binding domain,DBD)、干扰素相关区(IRF associated domain,IAD)和丝氨酸富含区(Serine-rich domain,SRD)。全长氨基酸序列同源性分析发现,CsIRF-7与硬骨鱼类的IRF-7同源性较高,与4种硬骨鱼类的同一性和相似性分别介于48.5%~73.6%和65.4%~83.8%之间;其中与牙鲆的同一性和相似性最高,分别为73.6%和83.8%;而与哺乳类和鸟类IRF-7的同源性较低,其同一性和相似性分别仅为30.3%~32.2%和46.5%~52.5%。系统进化分析表明,CsIRF-7与硬骨鱼类的IRF-7聚为一类,并与其他脊椎动物的IRF-7和IRF-3共同组成了脊椎动物IRF-3亚家族。实时荧光定量PCR检测结果显示,CsIRF-7基因在半滑舌鳎的肝、肾、脾、血细胞、鳃、肠和心脏等7种检测的组织中均有表达,在肠中表达量最高,而在肝、鳃和血细胞中表达量相对较少。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 干扰素调节因子7 POLY I:c 基因克隆 表达分析
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稳定沉默TIPE2后削弱PolyI:C诱导的人单核/巨噬细胞凋亡
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作者 江洁曙 王珊珊 +2 位作者 方晶晶 徐意 叶小磊 《中国现代医生》 2016年第16期1-5,F0003,共6页
目的观察TIPE2稳定沉默后对TLR激动剂Poly I:C诱导THP-1凋亡的影响。方法以THP-1细胞为研究对象,使用不同TLR激活剂与THP-1细胞孵育后,采用荧光定量PCR检测TIPE2 m RNA表达。应用慢病毒技术稳定沉默TIPE2表达后,MTT法检测细胞增殖,Annex... 目的观察TIPE2稳定沉默后对TLR激动剂Poly I:C诱导THP-1凋亡的影响。方法以THP-1细胞为研究对象,使用不同TLR激活剂与THP-1细胞孵育后,采用荧光定量PCR检测TIPE2 m RNA表达。应用慢病毒技术稳定沉默TIPE2表达后,MTT法检测细胞增殖,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,免疫印迹分析TIPE2沉默后Caspase-8表达水平变化。结果 TLRs激活剂中TLR3特异性激活剂Poly I:C可以显著上调TIPE2的表达(P<0.05),随作用时间延长,可显著抑制THP-1细胞增殖,并可诱导细胞凋亡。利用慢病毒技术稳定沉默THP-1细胞中TIPE2表达以后,可显著削弱Poly I:C诱导的TIPE2表达(P<0.05),TIPE2沉默后,Poly I:C抑制THP-1增殖和诱导细胞凋亡的效应显著削弱,随后免疫印迹的结果显示,Caspase-8的活化形式,p41/42表达下调。结论Poly I:C通过上调TIPE2表达可抑制THP-1细胞增殖,并可诱导细胞凋亡,稳定沉默TIPE2后可一定程度削弱上述效应,可能与下调Caspase-8的活性形式表达有关。 展开更多
关键词 Voly I c TIPE2 免疫 TLR 凋亡
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Poly IC对急性期溃疡性结肠炎小鼠免疫机制的影响
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作者 赵红伟 赵芳霞 +2 位作者 张璟 韩华 岳月红 《安徽卫生职业技术学院学报》 2016年第2期69-70,共2页
目的:研究Poly I:C(Polyinosinic-polycytidylic acid)对急性期溃疡性结肠炎模型小鼠免疫机制调节作用。方法:30只小鼠随机分为正常组(control)、模型组(model)、Poly I:C组(Poly I:C),建立急性溃疡性结肠炎动物模型;观察小鼠疾病活动指... 目的:研究Poly I:C(Polyinosinic-polycytidylic acid)对急性期溃疡性结肠炎模型小鼠免疫机制调节作用。方法:30只小鼠随机分为正常组(control)、模型组(model)、Poly I:C组(Poly I:C),建立急性溃疡性结肠炎动物模型;观察小鼠疾病活动指数(DAI)、结肠病理学变化、流式细胞术检测T淋巴细胞亚群变化、免疫比浊法检测血清免疫球蛋白变化、免疫组织化学染色测定结肠组织ICAM-1变化;结果:经Poly I:C治疗后模型小鼠的疾病活动指数及病理组织评分明显下降;与model组比较,Poly I:C组免疫细胞反应明显减轻弱,结肠组织ICAM-1蛋白表达明显降低。结论:可见Poly I:C对急性溃疡性结肠炎模型小鼠有免疫调节作用。 展开更多
关键词 Voly I:c 溃疡性结肠炎 急性动物模型 免疫细胞 免疫机制
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原发性胆汁性胆管炎小鼠模型肝内趋化因子CXCL13的表达 被引量:2
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作者 刘锦红 何选秋 +4 位作者 王卫彬 周扬 郑新春 唐利波 侯金林 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2017年第4期355-359,共5页
目的原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者肝内趋化因子CXCL13表达显著增加,但其来源和机制尚不明确。文章旨在通过建立PBC小鼠模型,探索PBC小鼠肝内趋化因子CXCL13的表达及其主要来源细胞。方法采用随机数字表法将C57BL/6小鼠分为实验组[n=20,... 目的原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者肝内趋化因子CXCL13表达显著增加,但其来源和机制尚不明确。文章旨在通过建立PBC小鼠模型,探索PBC小鼠肝内趋化因子CXCL13的表达及其主要来源细胞。方法采用随机数字表法将C57BL/6小鼠分为实验组[n=20,腹腔注射聚肌苷酸-聚胞苷酸(Poly I:C,2次/周,共12周)]和对照组(n=10,腹腔注射,系同实验组等体积磷酸盐缓冲液)。酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清AMA水平,HE染色观察肝组织炎症细胞浸润情况。原位灌注酶消化结合磁珠分选法分离小鼠肝内Kupffer细胞、肝血窦内皮细胞以及肝内淋巴细胞,荧光定量PCR检测肝组织以及上述细胞亚群CXCL13 mRNA表达水平。结果实验组小鼠血清AMA水平随建模时间延长逐渐上升,首次注射Poly I:C后第4、8、12周阳性率分别为5.9%、52.9%以及76.5%,而对照组小鼠血清AMA水平在整个建模过程中均呈现较低水平,仅在第12周时有2只小鼠AMA水平略高于阳性界值。实验组和对照组小鼠肝组织HE染色结果表明,实验组小鼠肝内汇管区大量炎症细胞浸润,而对照组小鼠肝内未见炎症细胞浸润。流式细胞术检测实验组小鼠Kupffer细胞、肝血窦内皮细胞的分离纯度分别为76%~80%、68%~72%。与Kupffer细胞CXCL13 mRNA表达[2.34(0.22-8.64)]比较,肝血窦内皮细胞、肝内淋巴细胞表达下降[0.27(0.03-1.64)、0.05(0-0.22),P<0.05]。结论 Poly I:C诱导建立的PBC小鼠模型中肝内升高的趋化因子CXCL13主要来源于Kupffer细胞。 展开更多
关键词 原发性胆汁性胆管炎 Poly Ⅰ:c KUPFFER细胞 cXcL13
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青蛤(Cyclina sinensis)TRAF6基因克隆及其在PolyI:C胁迫下的免疫应答 被引量:5
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作者 高玮玮 潘宝平 闫春财 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1040-1046,共7页
对青蛤(Cyclina sinensis)转录组文库筛选并克隆得到青蛤TRAF6(Cs TRAF6)基因的c DNA序列,其开放阅读框为2337bp,编码778个氨基酸,分子量为86.59k Da。Cs TRAF6蛋白包含RING型锌指结构,两个TRAF型锌指结构,coiled-coil结构域以及MATH结... 对青蛤(Cyclina sinensis)转录组文库筛选并克隆得到青蛤TRAF6(Cs TRAF6)基因的c DNA序列,其开放阅读框为2337bp,编码778个氨基酸,分子量为86.59k Da。Cs TRAF6蛋白包含RING型锌指结构,两个TRAF型锌指结构,coiled-coil结构域以及MATH结构域。经生物信息学及分子系统学分析表明Cs TRAF6属于TRAF6家族的一员。利用实时荧光定量PCR方法检测了Cs TRAF6基因在青蛤各个组织以及在Poly I:C侵染下在血淋巴中的时序性表达情况。结果表明,Cs TRAF6基因在青蛤血淋巴、闭壳肌、鳃、性腺、外套膜和肝脏中普遍表达,其中在血淋巴中的表达水平最高。在Poly I:C刺激后的3h,青蛤血淋巴中Cs TRAF6的表达量迅速升高,在6h达到最大值,说明青蛤的Cs TRAF6基因参与了病毒类似物侵染下的免疫应答反应。 展开更多
关键词 青蛤 csTRAF6 POLY I:c 荧光定量PcR
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TLR3在poly(I:C)-LMW预处理后缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元的表达意义 被引量:4
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作者 宋璞 崔桂云 +3 位作者 陈伟 赵秋宸 花放 沈霞 《中国实用神经疾病杂志》 2012年第8期1-5,共5页
目的观察TRL3激动剂poly(I:C)-LMW预处理对原代皮质神经元Toll样受体3(TLR3)表达的影响,探讨TLR3在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元损伤中的作用。方法取体外培养7d的大鼠原代皮质神经元细胞,对细胞分别予以正常条件下培养(空白对照组);... 目的观察TRL3激动剂poly(I:C)-LMW预处理对原代皮质神经元Toll样受体3(TLR3)表达的影响,探讨TLR3在缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元损伤中的作用。方法取体外培养7d的大鼠原代皮质神经元细胞,对细胞分别予以正常条件下培养(空白对照组);缺糖缺氧2h,复糖复氧24h(OGD组);TRL3激动剂预处理12h(激动剂组);TRL3激动剂预处理12h后缺糖缺氧2h,复糖复氧24h(激动剂+OGD组)。免疫荧光法观察各组细胞生长状态,分别以Western blot法、RT-PCR法测定TLR3蛋白及TLR3mRNA的表达情况。结果 与空白对照组相比,激动剂及缺氧复氧处理方法均诱导原代皮质神经元TLR3、TLR3mRNA表达增强(P<0.05);激动剂预处理后,与OGD组相比,激动剂+OGD组神经元细胞状态较好,数目较多(P<0.05)。结论 TLR3参与缺糖缺氧诱导的原代皮质神经元的损伤过程,激动剂可减轻神经元缺糖缺氧后损伤。 展开更多
关键词 Toll样受体3(TRL3) poly(I:c)-LMW 激动剂 原代皮质神经元 缺糖缺氧
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Poly(I:C)对人MMP-9基因启动子活性影响 被引量:1
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作者 钟鸣 骆建民 王俐 《齐齐哈尔医学院学报》 2016年第9期1127-1129,共3页
目的通过脂质体瞬时转染含MMP-9启动子荧光素报告基因质粒于人皮肤成纤维细胞,研究聚肌胞[poly(I:C)]对基质金属蛋白酶9(MMP-9)启动子活性影响。方法 PCR扩增克隆人MMP-9基因5'侧翼序列(-1169~0),经限制性内切酶Kpn I和Sma I酶... 目的通过脂质体瞬时转染含MMP-9启动子荧光素报告基因质粒于人皮肤成纤维细胞,研究聚肌胞[poly(I:C)]对基质金属蛋白酶9(MMP-9)启动子活性影响。方法 PCR扩增克隆人MMP-9基因5'侧翼序列(-1169~0),经限制性内切酶Kpn I和Sma I酶切后,插入p GL3-Basic载体质粒中。重组质粒酶切、PCR和测序鉴定后,脂质体瞬时共转染p GL3-Basic-MMP-9-promoter重组质粒和pRL-TK内参质粒到原代人皮肤成纤维细胞中,给予不同浓度(0.1~10μg/ml)的poly(I:C)分别处理24 h,48h后,进行双荧光素酶检测。结果成功构建p GL3-Basic-MMP-9-promoter荧光素酶重组质粒。用poly(I:C)处理24 h,48 h后,明显抑制MMP-9启动子的活性(P〈0.01或0.001)。结论 Poly(I:C)可抑制人皮肤成纤维细胞中MMP-9基因启动子的活性,在转录水平下调MMP-9的表达。 展开更多
关键词 人真皮成纤维细胞 MMP-9 荧光素酶报告基因 聚肌胞
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Gene cloning and induced expression pattern of IRF4 and IRF10 in the Asian swamp eel(Monopterus albus) 被引量:3
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作者 Qiao-Qing XU Dai-Qin YANG +3 位作者 Rui TUO Jing WAN Ming-Xian CHANG Pin NIE 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期380-388,共9页
The Asian swamp eel(Monopterus albus) is one of the most economically important freshwater fish in East Asia,but data on the immune genes of M.albus are scarce compared to other commercially important fish.A better un... The Asian swamp eel(Monopterus albus) is one of the most economically important freshwater fish in East Asia,but data on the immune genes of M.albus are scarce compared to other commercially important fish.A better understanding of the eel's immune responses may help in developing strategies for disease management,potentially improving yields and mitigating losses.In mammals,interferon regulatory factors(IRFs) play a vital role in both the innate and adaptive immune system; though among teleosts IRF4 and IRF10 have seldom been studied.In this study,we characterized IRF4 and IRF10 from M.albus(maIRF4 and maIRF10) and found that maIRF4 cDNA consists of 1 716 nucleotides encoding a 451 amino acid(aa) protein,while maIRF10 consists of 1 744 nucleotides including an open reading frame(ORF) of 1 236 nt encoding 411 aa.The maIRF10 gene was constitutively expressed at high levels in a variety of tissues,while maIRF4 showed a very limited expression pattern.Expression of maIRF4 and maIRF10 in head kidney,and spleen tissues was significantly up-regulated from 12 h to 48 h post-stimulation with polyinosinic: polycytidylic acid(poly I:C),lipopolysaccharide(LPS) and a common pathogenic bacteria Aeromonas hydrophila.These results suggest that IRF4 and IRF10 play roles in immune responses to both viral and bacterial infections in M.albus. 展开更多
关键词 表达模式 基因克隆 黄鳝 诱导 免疫反应 脉冲响应函数 淡水鱼类 开放阅读框
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TLR3激动剂poly(I:C)对胃癌BGC-823细胞生物学特征的影响
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作者 屈静 张建 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期792-796,806,共6页
目的:poly(I:C)是双链RNA(dsRNA)的结构类似物,可被模式识别受体TLR3、RLRs识别,具有抗肿瘤作用。本文旨在研究poly(I:C)对胃癌BGC-823细胞生物学特征的影响并进行机制探讨。方法:以胃腺癌细胞系BGC-823细胞为模型,采用半定量RT-PCR检测... 目的:poly(I:C)是双链RNA(dsRNA)的结构类似物,可被模式识别受体TLR3、RLRs识别,具有抗肿瘤作用。本文旨在研究poly(I:C)对胃癌BGC-823细胞生物学特征的影响并进行机制探讨。方法:以胃腺癌细胞系BGC-823细胞为模型,采用半定量RT-PCR检测TLR1-TLR10 mRNA基础表达水平,然后用MTT法、CCK-8法、EdU掺入法检测poly(I:C)对BGC-823细胞的增殖能力的影响;MTT法、CFSE-7-AAD法评价NK细胞对poly(I:C)处理后的BGC-823细胞杀伤能力的影响;实时定量PCR法检测细胞因子mRNA水平的变化;流式细胞术分析BGC-823细胞中TLR3、Cyclin D1表达水平以及NKL细胞中CD107a、Perforin和TNF-α的表达水平。结果:TLR3在BGC-823细胞有明显表达。poly(I:C)可抑制BGC-823细胞的增殖,这一过程的主要分子特征是DNA合成减弱、Cyclin D1的表达水平降低、炎症因子的mRNA表达水平下降;同时NK细胞对于poly(I:C)处理后的BGC-823细胞的杀伤功能增强,NK细胞表达CD107a、Perforin、TNF-α的能力提高。结论:poly(I:C)可直接抑制肿瘤的生长并提高BGC-823细胞对NK细胞杀伤的敏感性,为设计和利用基于TLR的抗肿瘤治疗药物提供有益的启示。 展开更多
关键词 poly(I:c) BGc-823细胞 TLR3 NK细胞
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鹅模式受体MDA5基因克隆及功能分析 被引量:6
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作者 丁娜 孙英杰 +3 位作者 张石磊 仇旭升 谭磊 丁铲 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第3期1-6,共6页
黑素瘤差异化相关基因5(melanoma differentiation associated gene 5,MDA5)为一类胞内模式识别受体,能够识别入侵病毒的RNA链,在先天性免疫中发挥重要的抗病毒作用。本研究根据已发表的人和鸡MDA5基因序列设计引物,用overlapPCR技术从... 黑素瘤差异化相关基因5(melanoma differentiation associated gene 5,MDA5)为一类胞内模式识别受体,能够识别入侵病毒的RNA链,在先天性免疫中发挥重要的抗病毒作用。本研究根据已发表的人和鸡MDA5基因序列设计引物,用overlapPCR技术从鹅成纤维细胞(goose embryo fibroblast cells,GEF)中扩增出鹅的MDA5基因,经序列测定发现它与鸡的MDA5序列有很高的同源性。将鹅MDA5真核表达质粒转染HEK-293T细胞,并用Poly(I:C)进行刺激,发现IFN-β的表达出现上调。同时,用新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)感染GEF,发现MDA5 mRNA表达也出现了上调。本研究获得的gMDA5为国内首次报道证实的鹅MDA5基因,为进一步研究其在抗病毒中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 鹅MDA5 克隆 序列测定 Poly(I c)
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聚肌苷酸胞苷酸对人肝癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用 被引量:2
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作者 申鹏 蒋廷旺 +3 位作者 陆慧琦 张玲珍 韩焕兴 罗荣城 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期525-527,537,共4页
目的探讨聚肌苷酸胞苷酸(PolyI:C)对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721生长的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其作用机制。方法肝癌SMMC-7721细胞经不同剂量PolyI:C作用后,CCK-8法检测细胞增殖抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化,SY... 目的探讨聚肌苷酸胞苷酸(PolyI:C)对体外培养的人肝癌细胞SMMC-7721生长的增殖抑制和凋亡诱导作用,并探讨其作用机制。方法肝癌SMMC-7721细胞经不同剂量PolyI:C作用后,CCK-8法检测细胞增殖抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期变化,SYBR-Green荧光定量PCR检测TLR3、TRIF、IFN-βmRNA的表达。结果PolyI:C高剂量组的生长抑制率最高,高、中、低三个剂量组间比较差异有显著性(P<0.05)。PolyI:C同一剂量组生长抑制率72h最高,48h次之,24h时最低,每组不同时间点比较差异有显著性(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示PolyI:C可诱导SMMC-7721细胞凋亡,随浓度增加和时间的延长凋亡率逐渐升高(P<0.05)。PolyI:C组细胞处于G1期的百分率明显高于对照组。TLR3、TRIF、IFN-βmRNA的表达均增高,三组间比较差异有显著性(P<0.05)。结论PolyI:C对体外培养的SMMC-7721有显著的增殖抑制作用,呈剂量依赖性和时间依赖性,其机制可能与细胞周期阻滞,TLR3通路激活,诱导产生IFN-β,诱导细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 聚肌苷酸胞苷酸 肝癌 增殖抑制 细胞凋亡 细胞周期
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