IA-2及IA-2β与1型糖尿病

IA 2和IA 2 β是近年来发现的两种重要胰岛细胞自身抗原 ,是引发 1型糖尿病胰岛自身免疫反应的重要因素。针对两者的自身抗体存在于半数以上的新诊 1型糖尿病患者血清中。IA 2、IA 2 β及其抗体检测在 1型糖尿病的发病机制研究、诊断、预测和早期防治中具有重要作用。

糖尿病患者血清ICA、IAA、GAD-Ab、IA-2-Ab的检测及临床意义

目的 探讨 ICA、IAA、GAD- Ab、IA- 2 - Ab对糖尿病患者的检测及临床意义。方法 用 ELISA法测定 1 5 5例 1型糖尿病患者和 44例 2型糖尿病患者以及 32例正常人血清中的 ICA、IAA、GAD- Ab、IA-2抗体。结果 1型糖尿病组和 2型糖尿病组 ICA的阳性率分别为 36.8%和 1 1 .4% ,IAA的阳性率分别为 2 3.2 %和 1 6.0 % ,GAD- Ab的阳性率分别为 5 8.7%和 1 6.0 % ,IA- 2 - Ab的阳性率分别为 2 0 .0 %和6.8%。结论 ICA、IAA、GAD- Ab、IA- 2抗体对 1型糖尿病的早期诊断及预测有重要的临床意义 ,且联合测定以上抗体能提高检出率 ,避免漏诊。

ICA512/IA-2抗体及GAD抗体联合检测筛查自身免疫中介1型糖尿病

目的 应用ICA5 12 /IA 2抗体与谷氨酸脱羧酶 (GAD)抗体联合筛查中国人糖尿病患者中的自身免疫中介 1型糖尿病。方法 487例中国人 ,按原WHO 1985标准诊断为非糖尿病 10 9例、IDDM 35例及NID DM 34 3例。对象血清ICA5 12 /IA 2抗体及GAD抗体的检测采用放射配体法 ,以人重组ICA5 12 /IA 2及GAD6 5为抗原 (英国RSR公司 )。结果 (1)非糖尿病、IDDM组及NIDDM组ICA5 12 /IA 2抗体阳性率分别为0 .9%、14.3%及 2 .3% (IDDM组比非糖尿病组及NIDDM组P均 <0 .0 0 1) ,GAD抗体阳性率分别为 0 .9%、40 .0 %及 10 .2 % (IDDM组比非糖尿病组及NIDDM组P均 <0 .0 0 1,NIDDM组与非糖尿病组P <0 .0 1)。 (2 )非糖尿病、IDDM组及NIDDM组ICA5 12 /IA 2及 /或GAD抗体阳性率分别为 1.8%、42 .9%及 11.7% (IDDM组比非糖尿病组及NIDDM组P均 <0 .0 0 1,NIDDM组比非糖尿病组P <0 .0 1)。 (3)NIDDM组中的自身抗体阳性者年龄、诊断年龄及病程均小于阴性组 (P <0 .0 5 ) ,应用胰岛素者显著多于阴性组 (P <0 .0 5 )。 75 %阳性者BMI<2 5。 (4)NIDDM组中抗体阳性者在病程≤ 1年、～ 5年及 >5年者中分别占 5 2 .0 %、30 .0 %及 17.5 % (P <0 .0 5 )。结论 在中国人临床表现为NIDDM患者中 ,至少有 12 .0 %为自身免疫中介 1型糖尿病。

1型糖尿病一级亲属GADA、IA-2A与IAA联合检测的价值

目的 采用放射配体法检测118 例1 型糖尿病一级亲属的谷氨酸脱羧酶抗体(GA-DA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)、胰岛素自身抗体(IAA),发现三种抗体单独检出率与欧美高加索人接近,联合检测阳性率优于单一抗体检测。

1型糖尿病患者血清中抗IA-2与抗GAD_(65)抗体的比较

目的:研究成人1型糖尿病患者血清中抗IA-2抗体和抗GAD65抗体的水平并进行分析。方法:用ELISA法检测了48例20～45岁,病程小于2年的1型糖尿病患者组血清中的IgG型抗IA-2抗体和抗GAD65抗体,并以110例正常人血清作对照组。结果:患者组血清中抗IA-2抗体和抗GAD65抗体的水平与对照组差别均有统计学意义,而且患者组血清中抗IA-2抗体较抗GAD65抗体有更高的阳性率。结论:成人新发1型糖尿病患者血清中IgG型抗IA-2抗体和抗GAD65抗体均有不同程度明显升高,而且对两者进行联合检测会更有助于临床上1型糖尿病的早期诊断。

联合检测GADA、ZnT8A和IA-2A对1型糖尿病的诊断价值

目的评价胰岛细胞GADA、Zn T8A、IA-2A三种自身抗体在1型糖尿病患者中的诊断价值。方法 1型糖尿病患者78例,其中男性50例,女性28例,发病年龄20~41岁;2型糖尿病患者80例,其中男性51例,女性29例,平均年龄40~70岁;105例健康者血清,采用免疫印迹法检测血清GADA、Zn T8A、IA-2A三种自身抗体。结果 1型糖尿病患者中,GADA、Zn T8A、IA-2A三种自身抗体阳性率分别为53.1%、24.1%、23.7%。1型糖尿病患者中,三种抗体阳性率均高于2型糖尿病患者和健康对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。三种抗体之间在1型糖尿病患者中阳性率有差异,提示1型糖尿病患者不同自身抗体出现在病程的不同阶段。结论 GADA、Zn T8A、IA-2A的检测对1型糖尿病的诊断具有一定价值,联合检测三种抗体具有互补性,可提高1型糖尿病诊断的灵敏度。

人血清IA-2抗体检测方法的建立及应用

目的建立糖尿病患者血清中IA-2自身抗体的检测方法。方法以原核表达的人IA-2融合蛋白作为抗原建立人血清IA-2抗体的固相酶联免疫吸附检测方法（ELISA），该方法经优化后用于糖尿病患者血清中IA-2抗体的检测。结果该文所建立方法的平均批内和批间变异系数分别为6．8％和7．7％；回收率为99．2％～105％。所测定的1型和2型糖尿病患者血清中IA-2抗体的阳性率分别为49％和3．6％。结论应用原核表达的人IA-2蛋白为抗原所建立的ELISA方法简单且可靠，为糖尿病患者血清中IA-2抗体的检测提供了条件。

胰岛β细胞自身抗体IA-2Ab的ELISA方法建立——附110例正常人测定值

目的以本实验室研制的重组人自身抗原IA-2作为抗原,建立血清中抗IA-2的自身抗体的ELISA测定方法,并对正常人群进行检测。方法在间接ELISA法建立过程中对封闭剂、血清稀释度及二抗稀释度及其他测试条件进行了选择,方法建立之后,对110名正常人血清中的IgG型抗IA-2抗体进行了检测,用国外已成型的试剂盒进行了对照性实验,并进行统计学分析。结果确立了血清中抗IA-2自身抗体的间接ELISA法,以本方法对110例正常人血清中抗IA-2自身抗体进行检测的平均滴度为0·31±20·07,与用进口试剂盒进行检测的结果进行配对t检验,无显著性差异。结论建立了血清中抗IA-2自身抗体的检测方法及正常值为糖尿病的初筛、早期诊断的开展,做了准备。

继发性磺脲类药物失效患者IA-2抗体与胰岛β细胞功能关系分析

目的:探讨IA-2抗体对继发性磺脲类药物失效的患者早期诊断和干预的作用。方法:测定173例继发性磺脲类药物失效的2型糖尿病患者的酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2抗体),测定空腹及餐后胰岛素和C肽水平,评估胰岛β细胞功能。结果:体质指数、谷氨酸脱羧酶抗体(GAD抗体)浓度,胰岛素抵抗指数及糖负荷后30min胰岛素曲线下面积等指标在IA-2抗体阳性组与阴性组之间差异有统计学意义。结论:在糖尿病患者中早期测定IA-2、GAD等相关抗体对诊断分型,早期采用保护残存胰岛β细胞功能的治疗方法和对其预后的判定有重要意义。

胰岛细胞自身抗原IA-2及其自身抗体在1型糖尿病研究中的意义

IA-2是近年来发现的1型糖尿病的一种主要自身抗原,它不仅是体液性自身免疫反应的靶蛋白,而且可能也是细胞免疫反应的靶分子。对IA-2及其自身抗体的研究,在1型糖尿病发病机制、预测及防治等方面均具有重要的意义。

GADA、ICA、IAA及IA-2测定在糖尿病诊断分型中的意义

目的探讨胰岛β细胞自身抗体检测在糖尿病分型及诊断中的意义。方法对30例1型糖尿病、168例2型糖尿病及100例健康对照者进行GADA、ICA、IAA及IA-2检测。结果GADA、ICA、IAA及IA-2在1型糖尿病组中检出率分别为60%、40%、40%、6·67%,在2型糖尿病组分别为21·18%、14·29%、1·19%、0·60%,以及健康人群中分别为1·00%、1·00%、0·00%、0·00%。1型糖尿病阳性率明显高于2型糖尿病阳性率。GADA最易检出,IA-2只在T1DM中检出率高。联合抗体检测较单一抗体检测检出率高。结论GADA是糖尿病最有价值免疫学指标,IA-2是急性1型糖尿病免疫学诊断指标。

人IA-2基因的部分区段克隆表达及其在1型糖尿病诊断中的应用价值评估

目的:构建人IA-2基因不同区段原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,并初步验证其在1型糖尿病蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体检测中的价值。方法:用RT-PCR方法调取目的基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠杆菌HB101,诱导表达获得纯化重组蛋白;以重组蛋白为包被抗原,初步建立检测蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体的ELISA方法,评价各片段在1型糖尿病诊断中的价值。结果:获得了2种可被1型糖尿病患者血清识别的重组人蛋白酪氨酸磷酸酶抗原区段IA-2(601～979)和IA-2(683～979),检测敏感性和特异性相当,但IA-2(683～979)检测的阳性D450nm值明显高于IA-2(601～979),成为首选的抗原区段。结论:所选重组人IA-2(683～979)抗原区段具有良好的抗原性,可作为1型糖尿病患者辅助诊断试剂的候选抗原。

初发1型糖尿病患儿血清GADA抗体和IA-2A抗体的阳性率及其与糖脂代谢紊乱的关系

目的探讨初发1型糖尿病(T1DM)患儿血清谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)和蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)阳性率及其与糖脂代谢紊乱的相关性。方法选取2018年1月-2022年1月在南京市高淳人民医院内分泌科住院治疗的初发1型糖尿病患儿95例为T1DM组,另选取同期体检的95例健康儿童作为对照组,对比两组GADA抗体和IA-2A抗体阳性率及糖脂代谢指标的水平,同时分析T1DM组中GADA抗体和IA-2A抗体阳性率与糖脂代谢指标的相关性。结果T1DM组血清糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h-PG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平高于对照组,血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。对照组血清GADA抗体阳性率为2.11%,IA-2A阳性率为1.05%;T1DM组血清GADA抗体阳性率为46.32%,IA-2A阳性率为22.11%;T1DM组2种抗体的阳性率显著高于对照组,差异具有统计学意义(P均<0.05)。T1DM组中血清GADA抗体阳性者和IA-2A抗体阳性者有较高的HbA1c、FPG、2 h-PG、TC、TG及LDL-C水平,同时有较低的血清HDL-C水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。T1DM组患儿血清GADA和IA-2A抗体水平与HbA1c、FPG、2 h-PG、TC、TG及LDL-C水平呈显著正相关(P<0.05),与HDL-C水平呈显著负相关(P<0.05)。结论T1DM患儿血清GADA抗体及IA-2A抗体有较高的阳性率,同时与糖脂代谢呈显著的相关性,T1DM患儿的发病及糖脂代谢紊乱可能与GADA和IA-2A抗体的阳性率升高有关。

IA-2A与GADA检测对1型糖尿病的诊断价值

目的 了解蛋白酪氨酸磷酸酶抗体 (IA 2A )与谷氨酸脱羧酶抗体 (GADA)在 1型糖尿病(DM )中的检出率及其诊断价值。方法 采用放射配体法检测 114例 1型DM患者及 188名正常对照者IA 2A与GADA水平 ,并以放免法检测 1型DM患者空腹C肽 (FCP)、甲状腺球蛋白抗体 (TGAb)与甲状腺过氧化物酶抗体 (TPOAb)水平。结果 (1) 1型DM患者中GADA、IA 2A检出率分别为 49.1% (5 6/114 )和 2 4.6% (2 8/114 ) ,高于正常对照 1.1%与 0 .6% (均P <0 .0 1)。 15岁以下、病程≤ 0 .5年的 1型DM患者GADA、IA 2A检出率分别为 66.7% (8/12 )和 5 8.3 % (7/12 ) ,与白种人 (5 6.0 %～ 82 .0 %与 5 6.4%～74.4% )比较 ,GADA差异无显著性 ;而IA 2A仅低于检出率最高的国家芬兰 (85 .7% ,P <0 .0 1) ;(2 ) 15岁以下与 15岁以上 1型DM组GADA阳性率分别为 61.8% (2 1/3 4)和 43 .8% (3 5 /80 ,P >0 .0 5 ) ;而IA 2A阳性率分别为 41.2 % (14 /3 4)和 17.5 % (14 /80 ,P <0 .0 1)。病程 1年以内与病程 1年以上 1型DM患者GADA阳性率分别为 5 6.4% (3 1/5 5 )与 42 .4% (2 5 /5 9,P >0 .0 5 ) ;而IA 2A阳性率分别为 3 4.5 % (19/5 5 )对 15 .2 % (9/5 9,P <0 .0 5 ) ;(3 ) 1型DM中GADA和IA 2A阳性患者与GADA和IA 2A阴性患者比较 ,FCP水平较?

IA-2基因的克隆及原核表达研究

目的 应用基因工程技术获取足量且具有免疫活性的IA 2重组蛋白 ,为建立IA 2抗体检测方法奠定基础。方法 通过逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法从小鼠脑组织RNA中扩增编码IA 2胞内结构域的cDNA ,构建表达型重组质粒 ,经DNA序列分析确证后 ,在大肠杆菌中表达 ,用亲和层析纯化融合目的蛋白 ,并以斑点印迹技术 (Dotblot)鉴定其免疫原性。结果 所获特异PCR产物正确重组至PinpointXa 1表达载体中。经异丙基硫代半乳糖苷诱导的原核表达及亲和层析得到了纯度较高、相对分子质量约 5 6 0 0 0的融合目的蛋白 ,表达量约 1mg蛋白 /升菌液 ,且表达产物与谷氨酸脱羧酶抗体阳性的糖尿病患者血清及健康对照血清发生的显色反应差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 原核表达的IA 2融合蛋白具有免疫学活性 ,可用于糖尿病患者血清中相关抗体的检测。

Expression and identification of type 1 diabetes associated autoantigen IA-2

s To obtain prokaryotic expressed IA-2 recombinant protein and to identify its immunological activity Methods The complimentary DNA (cDNA) coding for the intracytoplasmic part of IA-2 (IA-2ic) was amplified from human fetal brain RNA, and was subcloned into the PinPoint Xa-1 T vector to construct recombinant expression plasmid, and was then expressed in E coli JM109 cells as a fusion protein with a biotinylated peptide sequence at the aminoterminus The biotinylated fusion protein was then purified by affinity chromatography and was subsequently dialyzed Finally, its immunogenicity was evaluated by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) Results The purified IA-2ic fusion protein resolved on sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) as a single Coomassie brilliant blue stained band with a molecular weight of 59 kDa and its immunogenicity was confirmed by ELISA Conclusions E coli expressed IA-2ic fusion protein has immunological activity It can be used for detection of IA-2 autoantibodies (IA-2A) and for further studies on type 1 diabetes in future