2019年冬季江苏部分地区鸡传染性支气管炎病毒S1基因遗传进化分析

为了解2019年冬季江苏省部分地区鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的流行情况,本试验对江苏省内3个地区分离的23株IBV的S 1基因进行了遗传进化分析,首先对采集的病料进行毒株分离并进行病毒核酸测序,然后采用MEGA 5.2、Simplot、Megalign、RDP 4等分析软件对IBV的S 1基因序列进行分析。结果显示:23株分离毒株中有7株为HN08型(占30.4%),另外16株为QX型(占69.6%),其中分离毒株CKCHJSCZ1912-5的S 1基因发生了重组,其假定亲本分别为QX型QXL87毒株与HN08型SAIBK毒株,说明连云港地区减毒活疫苗的使用是IBV发生重组的关键因素,但因重组片段不大,所以该毒株没有单独形成进化分支。通过Megalign软件分析分离毒株之间的一致性,得出23株IBV分离毒株间核苷酸序列和氨基酸序列一致性分别为82.9%~99.9%和79.2%~99.8%。通过对江苏省IBV分离毒株与参考株进行遗传进化分析,发现23株分离毒株S 1基因发生较大程度变异,分离毒株与参考株间的一致性差异大,推测S 1基因的多样性可能是目前导致免疫失败的一个重要原因。毒株变异为鸡传染性支气管炎的防控工作带来了难题,也为研制新型疫苗提供指导。

传染性支气管炎病毒S_1基因DNA免疫质粒的构建及其免疫原性

为探讨ＤＮＡ免疫防制传染性支气管炎（ＩＢ）的可能性，以克隆的Ｍａｓｓｃｈｕｓｅｔｅ型类Ｍ４１地方分离ＱＤ株Ｓ１基因为免疫原基因，引入终止密码后插入ＳＶ４０启动子、增强子下游和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号上游，构建了Ｓ１基因ＤＮＡ免疫表达质粒ｐＳＶＱＤＳ１。将大量扩增并经聚乙二醇纯化的ｐＳＶＱＤＳ１溶于ＰＢＳ，以３００μｇ／只的剂量肌肉注射免疫小鼠，于４周后采集分离免疫小鼠血清进行鸡胚病毒中和试验。结果表明，ｐＳＶＱＤＳ１能够诱导产生针对传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）Ｍ４１株的中和抗体，具有良好的免疫原性。

百日咳杆菌毒素S_1亚单位与谷胱甘肽S-转移酶融合基因在大肠杆菌中表达及其一步纯化

研究了百日咳杆菌毒素Ｓ１亚单位与谷胱甘肽Ｓ－转移酶融合蛋白（ＧＳＴ－Ｓ１）在大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中的表达，并一步纯化了重组ＧＳＴ－Ｓ１。首先用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增出长度为５６０ｂｐ的编码百日咳毒素Ｓ１亚单位的ＤＮＡ片段。该片段比原编码Ｓ１蛋白的ＤＮＡ片段在其３′端缺失了１３８个碱基，将其按正确的阅读框克隆入质粒ｐＧＥＸ中ＧＳＴ基因的３′端，构成ＧＳＴ－Ｓ１融合基因表达载体ｐＧＥＸ－Ｓ１。经异丙基硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导表达和十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ），可见所表达的ＧＳＴ－Ｓ１融合蛋白存在于细菌上清，为可溶性蛋白。分子量为４９ｋｕ处有明显的蛋白表达带。用谷胱甘肽（ＧＳＨ）亲和层析系统，一步纯化出ＧＳＴ－Ｓ１融合蛋白。最后经凝血酶的消化，得到２３ｋｕ的重组百日咳杆菌毒素Ｓ１亚单位蛋白。