含有IBVS1基因的昆虫杆状病毒表达载体的构建

以含有鸡传染性支气管炎病毒Ｈｏｌｔｅ株Ｓ１基因的重组质粒ｐＵＣ１８Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ和ｐＵＣ１８Ｓ′１．Ｈｏｌｔｅ为材料，分别构建了可表达ＩＢＶＳ１基因的昆虫杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ（含ＩＢＶ先导序列）、ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３／４Ｓ１．Ｈｏｌｔｅ（ＩＢＶ先导序列作为融合短肽）、ｐＡｃＧＨＬＣＳ１．

IBVS1基因RT－PCR产物的分子克隆

报道了在两条引物的５′端加有不同酶切位点的ＩＢＶＤ４１株Ｓ１基因ＰＣＲ产物与ｐＵＣ１８进行分子克隆的研究情况。采用自己改进的微量基因克隆的方法，经回收的插入片段的分子量大小及ＨａｅⅢ酶切分析。

摄像机视场约束下无人机视觉着舰导引方法

无人机基于计算机视觉技术进行着舰时,既需要关注自身的飞行轨迹是否合理,也需要注意所对应的视觉特征点在图像空间中的运动是否合理,即需要满足机载摄像机视场等约束。此外,由于海洋风浪等扰动作用,很难整定出合适的参数使视觉特征点以期望的轨迹运动,并使得图像误差以期望的动态过程收敛。针对这些问题,设计了一种将基于tau耦合策略的轨迹规划与IBVS相容的视觉导引方法,同时引入PPC理论以直接描述图像误差收敛的动态过程,并赋予参数整定工作明确直观的物理意义,从而降低参数整定的难度。最后仿真验证了所研究成果的可行性和有效性。

抗鸡传染性支气管炎病毒中药的筛选

【目的】对鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)进行抗病毒中药的筛选,并验证其治疗效果,为临床用药提供一定参考。【方法】采用鸡胚培养法,通过预防和治疗2个角度对24味单一中药、6种市售复方中药进行抗IBV的有效成分或方剂筛选试验,即在SPF鸡胚中先注射中药2 h后再接种病毒和先接种病毒2 h后再注射中药。使用SPSS 20.0软件对鸡胚重量进行方差分析,利用实时荧光定量PCR法辅助判定治疗效果。【结果】对鸡胚净重进行方差分析显示,桔梗组与阳性对照组差异显著(P<0.05),与阴性对照组差异不显著(P>0.05),表明预防和治疗均有效果。实时荧光定量PCR检测鸡胚尿囊液病毒滴度结果显示,桔梗、鱼腥草、宣肺败毒方、绞股蓝、蒲公英、甘草对IBV增殖均有抑制作用,其中桔梗抑制效果最佳。【结论】桔梗对IBV有显著的预防及抑制效果,结果为深入研究桔梗作用机理提供了依据。

山东部分地区禽传染性支气管炎流行病学调查

为了解近年来山东省流行的禽传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)S1基因遗传特性,试验于2020-2023年从山东14个地市的肉鸡养殖场及蛋鸡养殖场共收集462份病料(包含组织器官、泄殖腔拭子和咽拭子),采用RT-qPCR和RT-PCR对病料进行IBV检测。结果显示:山东省2020-2023年肉鸡和蛋鸡养殖场IBV阳性检出率为27%(125/462),并在3年试验期间IBV感染率呈现逐年上升趋势,在初春、秋末及冬季感染率较高,以济南(49%)、泰安(33%)和东营(28.9%)地区IBV阳性检出率最高,肉鸡的IBV感染率略高于蛋鸡。试验成功分离37株IBV分离株,其S1基因核苷酸同源性为74.8%~99.8%,分属GⅠ-22、GⅠ-13、GⅠ-7、GⅠ-1、GⅠ-28(LZ05型)和GⅠ-19(QX型)6种基因型,其中QX型为分离株优势基因型(83.7%,31/37)。31株QX型IBV分离株S1基因在第68、116、208、261、333和369位的碱基突变、替换最为频繁。研究提示:山东部分地区IBV感染率呈现逐年上升趋势,多发于寒冷季节且肉鸡发病较为严重,流行毒株仍以QX基因型为主,并且LZ05型首次在鲁中地区被检出。

QX型传染性支气管炎病毒病毒样颗粒的制备与初步评价

研究旨在制备一种针对QX型传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)疫苗并对其免疫保护效果进行初步评价。试验首先构建了分别表达QX型IBV S蛋白(QXLS)、M蛋白(QXLM)和E蛋白(QXLE)的三种重组杆状病毒rBacmid-QXLS、rBacmid-QXLM和rBacmid-QXLE,并通过间接免疫荧光试验(IFA)和West-ern blot鉴定目的蛋白的表达;进一步将3种重组杆状病毒通过适当比例共感染Sf9细胞获得VLP,经蔗糖密度梯度离心纯化后使用透射电子显微镜观察鉴定VLP的组装效果;最后将纯化的VLP与氢氧化铝佐剂混合制成疫苗免疫SPF鸡进行免疫保护效果评价。结果显示:S、M和E三种目的蛋白均能成功表达,透射电子显微镜观察可见组装形成的VLP呈现典型的椭圆形病毒样结构,直径为80~120 nm;单独VLP疫苗免疫具有一定的免疫保护效果,QXL87+VLP疫苗联合免疫保护效果较好,可有效减轻临床病变、降低气管和泄殖腔排毒量及组织器官载毒量。研究表明,试验已经成功制备出QX型IBV VLP,且具有良好的免疫原性,为后续进一步研制基于VLP技术的QX型IBV基因工程疫苗奠定了基础。

一例肉鸡传染性支气管炎与H9亚型禽流感混合感染的病例分析

2023年山东某鸡场部分肉鸡发生不同程度的呼吸困难,并伴有零星死亡,死鸡剖检可见气管出血、支气管栓塞、部分鸡有尿酸盐沉积。为探究其发病原因,采集病料进行了常见呼吸道病原的PCR检测。结果显示,此鸡场呼吸道传染病是由禽传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis virus,IBV)与H9亚型禽流感病毒(Avian Influenza virus,AIV)混合感染引起。病料经分离纯化后分别获得一株IBV分离株(SDDZ/202301简称DZ01)和一株H9亚型AIV分离株(SDDZ/202302简称DZ02)。分别对DZ01的S1基因和DZ02的HA基因扩增,测序结果发现,DZ01与参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为60.2%~96.7%和50.3%~95.6%,确定为GI-19基因型,与同型参考株相比有13个氨基酸发生点突变,裂解位点为HRRRR,并发现15个N-糖基化位点。AIV H9同源性分析显示DZ02与参考株核苷酸和氨基酸同源性为78.1%~95.1%和79.4%~94.2%,为H9.4.2.5分支,属于山东省内优势毒株。本研究明确了该养殖场中出现了IBV和H9亚型AIV的混合感染,这表明该养殖场仍需加强生物安全管理等方面的工作。

TFMT通过抑制RNA甲基转移酶抑制“抢帽”流感病毒的复制

“帽端抢夺”是包括甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)和乙型流感病毒(influenza,IBV)在内的一些病毒家族的核酸逃逸被宿主识别并降解的复制方式。哺乳动物的mRNA与snRNA5'末端分别有7-甲基鸟苷和3-甲基鸟苷结构,它们通过三磷酸桥与RNA连接,称为cap0,由2'-O-核糖甲基转移酶(2'-O-ribose methyltransferase 1,MTr1)催化甲基化,产生成熟的cap1。

鸡肾型传染性支气管炎病毒分离与鉴定

山东龙口地区某鸡场相继发生以白色水样痢疾、迅速消瘦、采水量增加为主要临床特征的疾病,通过采集病料接种鸡胚传代培养后分离到一株毒株,对该毒株进行血凝试验、NDV干扰试验、琼脂凝胶扩散试验及雏鸡回归试验研究。结果表明,经过持续的鸡胚传代,第3代开始形成蜷缩胚,第5代蜷缩的胚胎达到50%;第3代到第5代的尿囊液经过1%胰蛋白酶进行处理后具备了血凝性;该分离株在干扰实验中很大程度影响了NDV在鸡胚中的增殖;在雏鸡回归试验中,试验雏鸡感染了分离的病毒后,致死率为60%,发病率可以达到100%;感染鸡出现斑驳肾等病理变化,实验结果充分表明分离到的病毒为鸡肾型IBV。

鸡传染性支气管炎的诊断与防控

鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒引起的,在全球范围内广泛流行。该疾病对鸡的生产和养殖业造成了严重的危害,包括影响鸡的生长发育、降低产蛋量和质量,对养殖场的经济效益产生较大影响。因此,加强鸡传染性支气管炎的诊断和防控具有重要意义。本文从病原学特征、流行现状、临床症状及病理变化、诊断方法和防控措施等方面进行综述,以期为相关领域的研究和应用提供参考。1病原鸡传染性支气管炎是一种由鸡传染性支气管炎病毒(Avian Infectious Bronchitis virus,IBV)引起的禽类疾病。IBV是一种γ冠状病毒,基因组全长约27.6 Kb,具有感染性。IBV的基因组含有至少10个开放阅读框,其中包括编码小包膜糖蛋白M、膜糖蛋白E、核衣壳蛋白N和纤突糖蛋白S等结构蛋白。

黄芩苷通过促进Ⅰ型干扰素表达抑制鸡传染性支气管炎病毒复制

本研究旨在探讨黄芩苷对鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IBV)的抑制作用及其作用机制。采用H1299和Vero细胞系作为供试细胞,分别在IBV感染前及感染后在细胞培养体系中加入黄芩苷(125μg·mL^(-1)),分析黄芩苷对IBV的抑制作用。进一步,将黄芩苷倍比稀释成不同浓度,观察不同浓度黄芩苷对IBV的抑制作用。将试验分为空白组、IBV组、病毒感染前加药组、病毒感染后加药组,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot技术检测各组干扰素(interferon,IFN)通路相关信号分子的mRNA和蛋白表达情况。用重组人IFN-α处理IBV组和加药组后分析各组IBV对IFN-α治疗的敏感性。以间接免疫荧光技术检测IBV组和加药组磷酸化STAT1(p-STAT1)的核移位。采用基因沉默试验分析IBV组和加药组沉默STAT1对病毒复制的影响。结果显示,黄芩苷对IBV的复制具有一定的抑制作用,并呈剂量依赖性。与对照组相比,黄芩苷处理促进干扰素通路信号分子p-IRF3、IFN-β、p-STAT1的表达水平(P<0.05),下调JAK-STAT信号通路负调控因子SOCS3和SOCS3刺激因子IL-6的表达水平(P<0.05),增加p-STAT1核移位,并增强IBV对IFN-α治疗的敏感性。进一步,沉默STAT1减弱了黄芩苷对IBV的抑制作用。综上所述,黄芩苷可通过诱导Ⅰ型干扰素产生来抑制IBV的复制,减轻病毒感染对宿主细胞造成的细胞病变效应。

传染性支气管炎病毒对鸡免疫反应及重组禽β-防御素11和12抗病毒作用的研究

【目的】探究呼吸型传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)对蛋鸡免疫反应的影响及重组禽β-防御素(avianβ-defensins,AvBDs)的抗病毒作用。【方法】试验将70只7日龄SPF白来航鸡随机分为2组,每组35只。攻毒组通过滴鼻点眼途径接种呼吸型IBV强毒(CK/CH/LSD/05I),对照组以相同途径接种等剂量灭菌PBS。定时观察临床症状14 d并记录,在攻毒后12 h、36 h、3 d、7 d和14 d 2组各随机选取5只鸡心脏采血处死,检测血清抗体水平并收集部分气管和肾脏进行组织病理学检测。采集法氏囊、脾脏、肾脏和气管,提取RNA,运用实时荧光定量PCR方法检测组织中IBV的病毒载量、Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)及信号转导分子、AvBDs基因表达量变化。将重组AvBD11和AvBD12转染鸡胚肾细胞(chicken embryo kidney,CEK)并在病毒感染细胞后6、12、24、36和48 h收取细胞上清和细胞用于提取RNA,通过实时荧光定量PCR方法检测病毒载量。【结果】感染呼吸型IBV强毒后,鸡出现轻微呼吸道症状,剖检无明显病理变化。在感染14 d后,鸡血清抗体水平转阳且阳性率为100%。实时荧光定量PCR结果显示,对照组均未检测到病毒,攻毒组仅在感染14 d后的气管中检测到病毒且病毒载量低。与对照组相比,攻毒组脾脏中TLR1、TLR5、AvBD9和AvBD12基因表达量在感染后7 d均显著升高(P<0.05),攻毒组法氏囊中TLR1、TLR2、TLR3、AvBD5和AvBD9基因表达量及气管中核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、NF-κB c-Rel、AvBD5、AvBD9、AvBD11和AvBD13基因表达量在感染14 d后均显著升高(P<0.05)。体外抗病毒结果显示,与转染空载体组相比,转染AvBD11的CEK细胞在感染24和48 h后病毒载量显著下调(P<0.05),细胞上清的病毒载量在感染48 h后显著下调(P<0.05);转染AvBD12的CEK细胞在感染12和24 h后病毒载量显著下调(P<0.05),细胞上清的病毒载量在感染12和48 h后显著下调(P<0.05),说明重组AvBD11和AvBD12在CEK细胞中具有抗IBV活性。【结论】呼吸型IBV强毒感染机体后增强了相关受体的基因表达和信号转导,上调了AvBDs基因表达,加强了机体免疫反应。重组AvBD11和AvBD12具有抗病毒作用,为无抗饲料的配制及研究提供了新思路。

禽传染性支气管炎病毒nsp4蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究

【目的】筛选出禽传染性支气管炎病毒(IBV)非结构蛋白4(nsp4)抗原性较好的氨基酸区域并制备多克隆抗体,为进一步研究nsp4蛋白在IBV复制过程中的功能提供物质基础,也为研发IBV新型诊断试剂盒与疫苗打下基础。【方法】对IBV Beaudette株nsp4蛋白进行原核表达,以融合蛋白nsp4作为免疫原免疫健康日本大耳白兔和健康阴性鸡,制备相应的兔多克隆抗体和鸡多克隆抗体,并通过间接ELISA检测、Western blotting检测及IFA验证等对制备获得的多克隆抗体进行生物学功能研究。【结果】选取nsp4蛋白第408~514位氨基酸作为原核表达序列,成功构建了nsp4蛋白原核表达载体pCZN-1-HIS-nsp4和nsp4蛋白真核表达载体pVAX1-nsp4-HA。原核表达的融合蛋白nsp4为13.6 kD,与预期结果相符,能与IBV GX-YL5株和M41株全病毒阳性血清反应。制备的兔、鸡多克隆抗体血清效价分别为1∶128000和1∶6400,均能与融合蛋白nsp4和IBV全病毒反应,且与IBV GX-YL5株、Beaudette株和M41株感染鸡胚肾细胞(CEK)表达的nsp4蛋白反应,还能与转染状态及感染IBV Beaudette株的非洲绿猴肾细胞(Vero)表达nsp4蛋白反应。实时荧光定量PCR检测结果表明,经nsp4蛋白真核表达载体pVAX1-nsp4-HA转染后,Vero细胞的病毒载量呈逐渐上升趋势,即体外过表达nsp4蛋白能促进IBV的复制。【结论】制备获得的2种IBV nsp4多克隆抗体效价高、反应性良好、特异性强,可作为细胞定位及表达时相分析等蛋白特性研究的工具,用于解析nsp4蛋白在IBV增殖过程中的作用机制,也为其他冠状病毒nsp4蛋白的研究提供参考。

警惕初开产鸡GⅥ型IBV的发生和流行

传染性支气管炎(IB)是鸡的一种急性、病毒性传染病,在世界范围内广泛流行,给养鸡业带来了严重的经济损失。传染性支气管炎病毒(IBV)属于冠状病毒,极易发生遗传变异,导致新的基因型和血清型不断出现。国内外学者根据IBVS1核苷酸基因序列差异,将IBV分为9个基因型(Ⅰ~Ⅸ型);2016年,VALASTRO等[1]提出了一种统一的IBV基因分型系统。

鸡传染性支气管炎的流行特点与防控方案

1鸡传染性支气管炎简介 鸡传染性支气管炎病毒(IBV)属于γ冠状病毒亚科(新冠属于β冠状病毒亚科),是已知RNA病毒中基因组最大的病毒,直径约80~120纳米,为线性单股正链的RNA病毒,由于IBV的RNA复制过程中具有不连续的转录机制以及RNA聚合酶的不完全校对机制,使得IBV容易发生基因重组和点的突变、缺失、插入等,出现新的基因型、血清型,从而给本病的防制带来很大的困扰。

鸡传染性支气管炎防治

鸡传染性支气管炎(IB)是由鸡传染性支气管炎病毒,即IBV引发的急性病毒性呼吸系统疾病。该病往往导致鸡的生产性能下降、死亡率升高,并影响产蛋率及蛋壳的品质。1流行病学,该病有明显的季节性,虽然全年都有暴发可能,但冬天发病较为频繁。病毒可感染所有日龄段的鸡,1~4、20~35、50~70、90~110日龄的鸡更易患病。一旦出现感染,该病会在鸡群中以惊人的速度传播,同一鸡舍的易感鸡常在48h内出现发病病症,并可能导致全部鸡只感染。

一例鸡传染性支气管炎的实验室诊断

鸡传染性支气管炎(Avian infectious bronchitis,IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)引起的一种急性、高度接触传染性、病毒性疾病。IBV感染病鸡的临床症状以咳嗽、喷嚏和气管发生啰音等呼吸道表现为主,即传统的呼吸型IB。自然条件下,IBV很容易发生变异,从而导致新的血清型/基因型不断出现,因此免疫失败的现象非常普遍。

基于2D重构特征的模型化视觉伺服方法研究

针对传统基于图像的视觉伺服在处理摄像机退化等方面存在的不足,研究了融合三维特征与二维特征的图像视觉伺服方法。通过在经典IBVS(Image based visual servoing)控制结构基础上,将二维图像特征重构为三维特征,建立了模型化的3D特征机器人视觉伺服控制模型,并通过Simulink等仿真工具,分析比较了2种方法在图像空间和笛卡尔空间的空间运动特性,试验结果证实了方法的可行性和有效性。

基于图像伺服的接触网绝缘子自动水冲洗车

目前铁路绝缘子维护领域内还没有自动水冲洗设备,提出了捕获跟踪与瞄准系统对绝缘子进行自动冲洗维护;在绝缘子识别的基础上,进一步设计出基于图像的视觉伺服系统(IBVS,image-based visual servoing)控制方法,调整冲洗水炮炮管及摄像机姿态对绝缘子进行瞄准,来完成绝缘子冲洗工作;该方法主要思路为写出特征函数的差并使其最小,特征函数是通过两个雅可比矩阵及其伪逆矩阵建立起图像与冲洗装置控制量之间的关系,最后达到控制目的。使用Matlab对IBVS控制方法进行验证,该方法控制双自由度冲洗装置精确性达到要求,可实现绝缘子冲洗瞄准。

猪甲型流感病毒当前和未来的控制策略

流感病毒有一个多样而复杂的生态系统,可分为A型流感病毒(IAV)、B型流感病毒(IBV)、C型流感病毒(ICV)和D型流感病毒(IDV)。IAV和IBV可在人群中发生季节性流行,而只有IAV可在猪中引起流行,IBV和IDV也曾在家猪中出现过发病情况。猪感染IAV会引起呼吸道疾病,临床表现为发烧、食欲不振和咳嗽,体重减轻,严重影响生长猪的生产力和繁殖母猪的繁殖性能。