伪狂犬病病毒立即早期180基因的克隆及序列分析

为了研究伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）立即早期180基因（immediate early 180，IE180）及其功能，试验采用设计的特异性引物通过PCR法对IE180基因进行扩增，并成功构建了IE180克隆载体，经序列测定后，用DNAStar软件对该序列和已发表的7个PRV参考株的IE180基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比对分析。结果表明，HB-98株IE180基因编码区大小为4425 bp，编码1474个氨基酸，与GenBank中登录的参考株的IE180基因核苷酸同源性为98.4%～99.1%,氨基酸同源性为97.8%～98.4%。系统进化树分析结果表明，该毒株与毒株TNL（登录号：AF352564.2）的亲缘关系较近。

伪狂犬病病毒IE180基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

提取伪狂犬病病毒国内地方分离株 Ea株基因组 DNA,Bam H 酶切后回收 4 .8kb左右的片段 ,克隆到 p UC1 8中 ,酶切分析和部分序列测定筛选到含 IE1 80基因的重组质粒 p UCIE。进一步将长约 1 .8kb的 IE1 80基因 5′端部分编码区亚片段克隆到原核表达载体 p ET- 2 8a中 ,使其置于 p ET- 2 8a的 T7启动子下游并同 6× His(多聚组氨酸标签 ) -Tag融合 ,重组表达质粒 p ET1 .8转化 BL2 1 (DE3) ,在 IPTG诱导下获得高效表达 ,表达产物以包涵体形式存在 ,相对分子质量为 6 2 0 0 0 ,同预期大小相当 ,并能同抗 6×