IFNα-2b治疗323例HBeAg阳性慢性乙型肝炎的效果

目的 探讨IFNα-2b抗病毒治疗乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者的效果。方法回顾性分析2010年1月至2014年1月就诊于南昌大学第二附属医院并接受IFNα-2b治疗的323例HBeAg阳性CHB患者的临床资料,按丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平将其分为3组:ALT<2×ULN(A1组,n=111)、2×ULN≤ALT≤5×ULN(A2组,n=111)以及ALT>5×ULN(A3组,n=101)。观察临床疗效及不良反应,并比较3组间的抗病毒效果。结果 在停药时及停药后第12、24、48、72、96、144、192、240周,323例患者的HBV-DNA阴转率分别为39.9%、40.2%、39.0%、36.2%、34.1%、33.4%、31.3%、30.7%、30.7%;HBsAg阴转率分别为6.2%、6.2%、6.2%、5.9%、5.9%、5.9%、5.6%、5.6%、5.6%;HBeAg血清学转换率分别为28.2%、31.0%、32.8%、34.4%、33.7%、33.1%、32.8%、32.5%、31.6%。在各随访时间点,3组患者的HBV-DNA阴转率和HBeAg血清学转换率比较,A3组显著高于A2组,A2组显著高于A1组(P<0.05);3组患者的HBsAg阴转率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。323例患者均出现发热及类流感样症状,238例(73.7%)出现白细胞及中性粒细胞降低,35例(10.8%)甲状腺功能异常,5例(1.5%)斑秃,1例(0.3%)睡眠障碍,经过密切观察和对症处理后,患者均顺利完成疗程,各指标均基本正常。结论 IFNα-2b治疗HBeAg阳性CHB患者在停药时及停药后随访期间均表现出较好的效果,大多数患者可耐受IFNα-2b的不良反应。IFNα-2b的抗病毒效果可能与ALT水平有关。

PEG-IFNα-2b联合替诺福韦治疗慢性乙型肝炎的疗效及对HBeAg转阴率、免疫功能的影响

目的:分析聚乙二醇干扰素α-2b(PEG-IFNα-2b)联合替诺福韦治疗慢性乙型肝炎的效果及对HBeAg转阴率、免疫功能的影响。方法:选取某院2019年3月—2022年3月收治的慢性乙型肝炎患者88例作为研究对象,依据随机抽签法分成研究组与对照组,每组44例。对照组接受替诺福韦治疗,研究组接受PEG-IFNα-2b联合替诺福韦治疗,比较2组HBeAg转阴率、HBsAg转阴率、治疗前后肝功能指标[谷氨酰转肽酶(GGT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)]、免疫功能指标(CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、C3、C4)及血清炎性因子[视黄酸受体相关孤核受体(RORγt)、白细胞介素-17(IL-17)、IL-4]水平。结果:研究组HBeAg转阴率、HBsAg转阴率分别为45.45%、13.64%,高于对照组的11.36%、0,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,研究组GGT、AST、ALT、IL-4、IL-17、RORγt分别为(30.42±5.39)U/L、(31.08±6.64)U/L、(29.37±4.68)U/L、(1.32±0.42)pg/mL、(0.64±0.19)pg/mL、(0.80±0.30),均低于对照组的(56.93±8.75)U/L、(38.72±5.83)U/L、(49.61±6.42)U/L、(3.91±1.14)pg/ml、(3.01±0.87)pg/ml、(1.61±0.36),差异有统计学意义(P<0.05)。研究组CD3^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)、C3、C4分别为(66.81±8.55)%、(1.53±0.16)、(1.22±0.01)g/L、(0.42±0.07)g/L,均高于对照组的(61.03±8.49)%、(1.26±0.2)、(0.73±0.09)g/L、(0.22±0.06)g/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PEG-IFNα-2b联合替诺福韦治疗慢性乙型肝炎效果明显,可提高HBeAg、HBsAg转阴率,改善肝功能,增强免疫功能,抑制炎性反应。

伊马替尼联合重组人干扰素α-2b治疗加速期慢性髓性白血病患者的疗效及对血清MMP-2、SALL4 mRNA和AGP水平的影响

目的探讨伊马替尼联合重组人干扰素α-2b(IFNα-2b)治疗加速期慢性髓性白血病(CML)患者的疗效及对血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、婆罗双树样基因4(SALL4)mRNA和α1-酸性糖蛋白(AGP)水平的影响。方法招募2017年1月至2021年1月陕西省人民医院收治的加速期CML住院患者90例。采用随机数字表法将其分为观察组(采用伊马替尼联合IFNα-2b治疗,45例)和对照组(采用伊马替尼治疗,45例)。比较两组临床疗效和血清MMP-2、SALL4 mRNA和AGP水平以及不良反应发生情况。结果观察组治疗后获完全血液学缓解(CHR)的人数比例较对照组更高,整体疗效更优,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前血清白细胞介素-6(IL-6)、前列腺素E 2(PGE 2)、碱性磷酸酶(ALP)、MMP-2、SALL4 mRNA、AGP水平比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后IL-6、PGE 2、ALP、MMP-2、SALL4 mRNA、AGP水平均较治疗前显著降低(P<0.05),且观察组治疗后水平较对照组更低,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组血液学不良反应发生率高于对照组[22.22%(10/45)vs 6.67%(3/45);χ2=4.406,P=0.039],两组非血液学不良反应发生率比较差异无统计学意义[6.67%(3/45)vs 4.44%(2/45);χ2=0.000,P=1.000],总不良反应发生率比较差异有统计学意义[28.89%(13/45)vs 11.11%(5/45);χ2=4.444,P=0.035]。结论伊马替尼联合IFNα-2b较单用伊马替尼治疗加速期CML疗效更佳,可降低患者血清MMP-2、SALL4 mRNA和AGP水平,但可能会增加患者血液学不良反应的发生风险。

Peg-IFNα-2b联合利巴韦林治疗基因1/6型慢性丙型肝炎患者临床研究

目的探讨应用聚乙二醇化干扰素α(Peg-ⅠFNα)联合利巴韦林(RBV)治疗基因1/6型慢性丙型肝炎(CHC)患者的临床疗效。方法随机将246例慢性丙型肝炎(CHC)患者分为观察组123例和对照组123例,分别接受Peg-ⅠFNα-2b 80μg或Peg-ⅠFNα-2a 180μg皮下注射,1次/w,两组均同时口服利巴韦林,治疗48 w,随访24 w。采用罗氏公司COBAS Taqman HCV实时定量PCR试剂检测血清HCV RNA,采用Abbott Real Time HCV Genotype Ⅱ试剂检测HCV基因型。结果观察组和对照组基线基因1型感染者分别为104例(84.6%)和108例(87.8%),基因6型感染者分别为19例(15.4%)和15例(12.2%,P>0.05),血清HCV RNA水平分别为(7.17±0.89) lg copies/ml和(7.19±0.88) lg copies/ml,白细胞计数分别为(6.6±1.3)×10~9/L和(6.6±1.5)×10~9/L,血小板计数分别为(154.1±21.1)×10~9/L和(157.2±19.2)×10~9/L,血清ALT水平分别为(83.4±26.3) U/L和(80.3±29.4)U/L,均无显著性相差(P>0.05);观察组快速病毒学应答率(RVR)、早期病毒学应答率(EVR)、治疗结束时病毒学应答率(ETVR)和持续病毒学应答率(SVR)分别为45.5%、82.1%、83.7%和85.4%,与对照组的43.1%、78.9%、79.7%和78.0%比,无显著性差异(P>0.05),两组停药后复发率分别为14.6%和22.0%,也无显著性相差(P>0.05);在治疗过程中,观察组与对照组发热(58.5%对61.0%)、肌肉酸痛(48.8%对51.2%)、乏力(41.5%对44.7%)、头痛(30.9%对34.1%)、厌食(25.2%对30.1%)、脱发(26.8%对30.9%)、失眠(20.3%对25.2%)、白细胞下降(27.6%对31.7%)、红细胞下降(23.6%对28.5%)、血小板下降(13.8%对17.9%)和血清T3/T4/TSH异常(8.9%对10.6%)等不良反应发生率比较,均无显著性差异(P>0.05)。结论应用Peg-ⅠFNα-2b或Peg-ⅠFNα-2a治疗基因1/6型CHC患者,疗效较好,且两种干扰素治疗效果相当,安全性较好,值得临床应用。

HIV-lenv,gag与IFNα-2b融合蛋白的细胞免疫

目的 将编码艾滋病病毒 (HIV -1)外膜蛋白env、核心蛋白gag与编码干扰素 (IFNα -2b)基因分别插入pSFJ16与pSFJ3 8真核表达载体 ,观察表达产物诱导机体产生细胞免疫的变化规律。方法 利用分子克隆技术构建重组质粒 ,经脂质体转染与野生型痘病毒在Cos -7细胞内同源重组 ,筛选、纯化、获得重组痘苗病毒vJ16env/IFNα -2b和vJ3 8gag/IFNα -2b。免疫小鼠后 ,检测小鼠外周血与脾淋巴细胞对ConA及Lps的反应性 ,用流式细胞仪测定小鼠脾细胞CD4+ ,CD8+ 细胞计数。结果 外周血与脾淋巴细胞对ConA ,Lps的反应性 ,实验组与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。CD4+ 及T淋巴细胞与对照组比较差异有显著性 (P <0 0 5 )。CD8+ T淋巴细胞与对照组比较差异无显著性 ,但呈增高趋势。结论 重组痘苗病毒能诱导小鼠产生较强的细胞免疫。重组痘苗病毒能在体外与HIV -1env和HIV -1gag阳性血清发生特异性反应 ,具有免疫原性和免疫反应性。

猕猴体内白蛋白融合干扰素α-2b(HSA-IFNα-2b)的药代动力学研究

目的研究白蛋白融合干扰素α-2b(HSA-IFNα-2b)在猕猴体内的药代动力学。方法按照50μg.kg-1iv、50μg.kg-1sc和300μg.kg-1sc3种剂量组给猕猴注射HSA-IFNα-2b,分别在14个时间点采血,用ELISA方法测定血药浓度,计算药代动力学参数。结果3组受试猕猴均能在336h以前的各时间点测到HSA-IFNα-2b药物。一房室模型(weight=1/C2)分析药物浓度-时间曲线显示:50μg.kg-1iv、50μg.kg-1sc和300μg.kg-1sc3个剂量组的分布容积分别为67、71和63ml.kg-1。HSA-IFNα-2b皮下注射吸收相对缓慢,单剂量50μg.kg-1sc的吸收半衰期约为19h,消除半衰期为53h,清除率为0.92ml.h-1.kg-1,生物利用度达73%。结论HSA-IFNα-2b猕猴体内研究表明其药代动力学优于非融合干扰素,提示使用HSA-IFNα-2b可以减少用药次数,并有可能提高疗效。

HIV-1gag/IFNα-2b表达产物免疫小鼠的实验研究

为了将艾滋病病毒核心蛋白(gag)与干扰素(IFNα-2b)融合基因表达的融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,观察小鼠的体液免疫和细胞免疫应答。将IFNα-2b基因片段插入到gag基因的nt531位点,经脂质体转染与血凝素阴性蚀斑筛选出重组痘苗病毒。经SDS-PAGE和Westexn blot鉴定表达产物。用重组病毒vJ38gag/IFNα-2b免疫小鼠,用ELISA方法检测血清IgG抗体含量,用流式细胞仪测定小鼠脾CD4^+、CD8^+T淋巴细胞计数。结果表明,血清IgG抗体含量逐渐增高,实验组与对照组比较差异有显著意义(P<0.05)。CD4^+、T淋巴细胞计数与对照组比较差异有显著意义(P<0.05)。结论:重组痘苗病毒vJ38gag/IFNct-2b能增强小鼠的体液免疫和诱导细胞免疫。

人乳头瘤病毒11型E6基因与人IFN-α2b融合基因原核表达质粒的构建与鉴定

目的构建HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体,为进一步原核表达奠定基础。方法在IFNα2b的起始密码子之前加入ccatggct,同时以编码(GGSGS)3的45个碱基序列取代其终止密码子,将改造后的人IFNα2b基因人工合成,然后将其装入质粒pET32a的NcoⅠ和BamHⅠ酶切位点之间;PCR扩增HPV11E6基因片段。将含有IFNα2b基因片段的质粒pET32a和含有BamHⅠ,EcoRⅠ酶切位点的HPV11E6同时用BamHⅠ,EcoRⅠ酶切,将酶切产物纯化回收后做连接反应,连接产物常规转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定,同时将挑选的阳性克隆菌液送公司测序。结果测序结果表明成功的将HPV11E6和人IFNα2b通过连接肽(GGSGS)3连接并装入pET32a的NcoⅠ和EcoRⅠ酶切位点之间,且基因序列与设计完全一致。结论HPV11E6与人IFNα2b融合基因表达载体的成功构建,为进一步原核表达奠定了基础。

Gag/IFNα-2b融合基因在痘苗病毒中共表达研究

目的 本实验将编码AIDS病毒 (HIV -1)核心蛋白gag与编码干扰素 (IFNα -2b)基因插入以痘苗病毒复制非必需区血凝素 (HA)基因为侧翼 ,牛痘病毒包涵体 (ATI)启动子和串联的p7 5突变型早期启动子为基本构件的痘苗病毒表达载体 (pJ3 8) ,经与野生型痘苗病毒在细胞内同源重组 ,获得具有生物活性的重组痘苗病毒vJ3 8gag/IFNα -2b。方法 经免疫荧光、Dot -ELISA、SDS -PAGE、Western -blot等方法检测表达产物 ,分析免疫小鼠后血清抗体IgGOD4 90 值与T淋巴细胞的变化。结果 vJ3 8gag/IFNα -2b能表达Gag/IFNα -2b融合蛋白 ,分子量约 60kDa。免疫小鼠实验表明血清抗体IgGOD4 90 值、CD+ 4、CD+ 8T淋巴细胞计数的组间比较 (P <0 0 0 1) ,含IFNα -2b与单纯vJ3 8gag组相比 (P >0 0 5) ,但呈渐进性增高的趋势。 结论 重组痘苗病毒表达的gag/IFNα

改造IFNα-2b基因3′端提高其在大肠杆菌中表达水平

目的 :对人IFNα_2b基因的 5′端进行改造 ,从翻译水平上调控IFNα_2b基因在大肠杆菌中的表达。方法 :采用PCR方法 ,人工合成寡核苷酸引物 ,对人IFNα_2b基因进行了改造 :去除3′端非编码区 ,并增加原核系统强终止密码子。将改造后的基因片段分别克隆入原核表达载体pBV32 1,在大肠杆菌中进行表达。对表达产物进行活性效价测定。结果 :3′端删除非编码区 ,表达水平比删除前提高 4倍。结论 :IFNα_2b基因的 3′端非编码区对其在原核系统的表达具有抑制作用 ,删除该区可提高表达水平。

人干扰素IFNα-2b在果蝇细胞中的稳定表达

以人干扰素IFNα-2b全长基因的质粒为模板,PCR扩增,PCR产物克隆到表达载体获得重组质粒,经转染和筛选,得到稳定表达的果蝇S2细胞株.经CuSO4诱导表达并对表达产物进行检测,结果显示,在果蝇S2细胞中成功地进行了人干扰素IFNα-2b的蛋白表达,表达产物的大小约为26kD.并且,通过体外的抗病毒活性测定,证明所表达蛋白具有抗病毒活性.该研究为进一步利用该系统表达真核细胞蛋白,研究其结构和功能提供了重要的基础.

Env/IFNα-2b融合基因在痘苗病毒中共表达研究

目的 本实验选择的真核表达载体 pJ16 ,是以痘苗病毒复制非必需区血凝素 (HA)基因为侧翼 ,以牛痘病毒包涵体 (ATI)启动子和串联的 p7 5突变型早期启动子为基本构件的痘苗病毒表达载体。插入编码AIDS病毒 (HIV -1)外膜蛋白env与编码干扰素IFNα - 2b基因。方法 经与野生型痘苗病毒在细胞内同源重组 ,挑选HA-斑。获得重组痘苗病毒vJ16env/IFNα - 2b。经免疫荧光、Dotblot、SDS -PAGE、Westernblot和免疫小鼠后血清抗体IgGOD值检测。结果 vJ16en/IFNα - 2b能表达Env -IFNα - 2b融合蛋白 ,分子量约 10 0kDa。免疫小鼠实验 ,血清抗体IgGOD值组间均数比较 (P <0 0 0 1) ,含IFNα- 2b与vJ6env组比较 (P >0 0 5 ) ,但有增高趋势。结论 重组病毒表达的Env -IFN融合蛋白具有良好的反应原性和免疫原性。

静脉联合应用低剂量IL-2和中等剂量IFN_(α-2b)治疗肾透明细胞癌的初步探讨

目的:探讨经静脉应用低剂量IL-2联合中等剂量的IFNα-2b在肾透明细胞癌中的应用价值及安全性。方法:IFNα-2b小剂量递增至1000万U/m2·d～2000万U/m2·d,静脉滴注7～10d,随后IFNα-2b300万U～600万U/m2,皮下注射,每周2次;静滴IFNα-2b期间IL-260～100万U/d,分次静脉推注或滴注,连续5天;以上每1月为一疗程。结果:3例肿瘤完全切除术后应用者生存4月、53月和65月迄今无复发转移;余7例带瘤生存2年以上1例,3年以上5例,5年以上1例,其中完全缓解2例,死亡1例(生存26月);副作用主要有发热、肌肉关节酸痛、食欲减退、轻度WBC下降等。结论:静脉联合应用低剂量IL-2和中等剂量IFNα-2b治疗肾透明细胞癌有效、安全,值得临床进一步研究。

白蛋白融合α-2b干扰素在毕赤酵母中的表达

α2b干扰素的重组表达质粒pPIC9KHSAIFNα2b经限制性内切酶SalI酶切线性化后电转化巴斯德毕赤酵母菌(P.Pastoris)SMD1168,将阳性转化子进行PCR鉴定和Mut表型鉴定并用甲醇诱导表达,WesternBlot结果表明白蛋白融合IFNα蛋白与IFNα抗体具有结合能力,Wish细胞VSV病毒系统鉴定表达蛋白具有抗病毒生物活性。在摇瓶培养条件下,甲醇在0.5%～4.0%的范围,随着浓度的升高蛋白表达量也升高,在其他因素固定时,菌体起始OD值在5～80的范围内,随着OD值的升高表达量反而下降。成功表达出具有高生物学活性的白蛋白融合干扰素蛋白(HSAIFNα2b),为进一步应用打下基础。

干扰素α-2b联合苦参素穴位注射治疗慢性乙型肝炎的临床观察

目的探讨干扰素α-2b(IFNα-2b)联合苦参素穴位注射治疗慢性乙型肝炎(CHB)患者的临床疗效。方法将150例CHB患者随机分为治疗组和对照组。在常规保肝治疗的基础上,对照组加用IFNα-2b500万IU肌注每日1次,连续用药3个月。治疗组在进行上述治疗的同时,给予苦参素400mg,肝俞、脾俞、期门、足三里穴交替穴位注射,每穴注射100mg,每日1次,左右交替,联合用药3个月。结果治疗组对CHB一般症状、体征和肝功能的改善情况明显优于对照组,疗效与对照组比较有极显著性差异,不良反应也较对照组明显减少。结论IFNα-2b联合苦参素穴位注射治疗CHB疗效肯定。