IGF1R/PI3K/Akt通路及其调控对非小细胞肺癌血管生成拟态形成影响的研究

目的为非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗探索一个潜在的分子靶标.方法通过qPCR、Western blot、免疫组化检测NSCLC组织和癌旁组织KLF16、IGF1R表达情况;通过抑制IGF1R/PI3K/Akt通路活化,检测相关靶标MMP2和MMP9的表达;通过IGF1R/PI3K/Akt通路抑制剂LY294002干预血管生成拟态(VM)形成.结果与癌旁组织相比,免疫组化、Western blot和qPCR提示,KLF16在NSCLC组织中表达降低,且随着NSCLC级别提高,表达量递减.NSCLC组织中存在明显IGF1R阳性,且IGF1R阳性表达量随着NSCLC级别增高而递增.同时,Western blot和Matrigel三维细胞培养结果表明,随着IGF1R/PI3K/Akt通路抑制剂浓度增加,IGF1R/PI3K/Akt通路相关蛋白质、MMP2、MMP9表达水平也随之降低,肿瘤VM形成随之减少.结论NSCLC VM的形成与IGF1R/PI3K/Akt信号通路有关,KLF16在NSCLC中的表达趋势与IGF1R表达相反,两者之间是否存在调控关系需进一步验证.

鸡IGF1R基因多态性与生长和体组成性状的相关性研究

类胰岛素生长因子1型受体对细胞的生长、分化、增殖有重要调控作用,以东北农业大学肉鸡高、低脂双向选择品系第十世代肉仔鸡为研究对象,采用PCR-RFLP方法,对鸡IGF1R基因外显子4的C→G(919C→G)和外显子13的T→C(2761T→C)两个突变进行多态性检测。结果表明,919C→G对股骨重有极显著影响(P<0.01),对5周龄体重有显著影响(P<0.05),对龙骨长、胫骨长和胫骨重有一定影响(P<0.1)。2761T→C突变位点对跖骨围、胫爪比率有极显著影响(P<0.01),对胫爪重、股骨重有显著影响(P<0.05),对7周龄体重有一定影响(P<0.1)。群体遗传学分析表明,919C→G、2761T→C两个位点的等位基因频率在两系间分布差异极显著(P<0.01)。因此初步推断IGF1R基因可能是控制鸡5周龄体重、骨骼生长发育的主(效)基因或与主(效)基因紧密连锁。

IGF信号通路关键蛋白IGF1、IGF1R和AKT在原发性肺腺癌中的表达及意义

目的检测IGF信号通路关键蛋白IGF 1,IGF 1R和AKT在原发性肺腺癌中的表达,探讨其与临床病理学特征和生存时间的关系。方法采用免疫组化方法和免疫印迹技术检测IGF 1,IGF 1R和AKT在31例原发性肺腺癌及12例良性肺病变组织中的表达。结果IGF 1、IGF 1R和AKT在肺腺癌中的表达率分别为41.9%(13/31)、67.7%(21/31)和51.6%(16/31),显著高于良性肺组织(P值分别为0.0252、0.0016和0.0071)。IGF 1和IGF 1R及IGF 1和AKT在肺腺癌中表达呈显著相关(P值分别为0.0344和0.0179)。晚期肺癌(Ⅲ+Ⅳ)IGF 1和IGF 1R表达显著高于早期(Ⅰ+Ⅱ)(P值分别为0.0109和0.0303)。IGF 1、IGF 1R和AKT在伴有淋巴结转移肺癌中的表达显著高于无淋巴结转移肺癌(P值分别为0.0468、0.0490和0.0443)。低分化肺癌中IGF 1和IGF 1R表达显著高于中或高分化肺癌(P值分别为0.0484和0.0291)。IGF 1和IGF 1R阳性患者的生存时间显著短于阴性者(IGF 1:10比14个月,P=0.0103;IGF 1R:13比26个月,P=0.0056)。IGF 1和IGF 1R是肺腺癌预后的影响因素,AKT无预后意义。结论IGF信号通路关键蛋白IGF 1、IGF 1R和AKT表达在肺腺癌的发生和发展中可能起重要作用,进一步的研究有望展示其在肺癌预后和治疗方面的意义。

鸡生长发育早期骨骼肌IGF1R mRNA表达规律研究

以生长速度不同的花山麻鸡和清远麻鸡为试验素材,采用实时荧光定量PCR方法检测鸡9、12、16、21胚龄(E9 d、E12 d、E16 d、E21 d)和出雏后7日龄(7 d)时胸肌和腿肌中IGF1R mRNA表达变化情况,并与肌肉质量进行相关性研究。结果发现,21胚龄时,花山麻鸡和清远麻鸡胸肌质量都出现了显著降低,腿肌质量持续增长。花山麻鸡胸肌IGF1R mRNA表达呈前高后低趋势,9胚龄时表达量最高,之后显著降低并维持在较低的水平,出雏后7日龄时表达量再次下降;清远麻鸡在胸肌中的表达则呈“波浪形”,9胚龄和16胚龄表达量升高,其他日龄表达量显著降低。腿肌中,花山麻鸡IGF1R mRNA表达量在16胚龄之后显著降低;清远麻鸡腿肌IGF1R mRNA表达呈依次递减模式,各时间点之间差异显著(P<0.05)。品种间各个时间点胸肌和腿肌IGF1R mRNA表达量均呈显著差异(P<0.05)。两个品种骨骼肌IGF1R mRNA表达与胸肌、腿肌质量均呈极显著相关(P<0.01)。以上结果初步揭示了生长发育早期不同品种鸡胸肌和腿肌IGF1R基因表达发育变化趋势和品种差异,为深入研究IGF1R基因在鸡肌肉发育中的调控机理提供基础资料。

IGF1R-shRNA重组慢病毒的构建及对肺癌A549细胞增殖的影响

目的构建IGF1R基因的shRNA慢病毒载体,转染A549细胞鉴定沉默效率,观察其对A549细胞增殖能力的影响。方法设计IGF1R干扰序列,与pGC-LV慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,包装shRNA慢病毒颗粒,感染A549细胞,应用RT-PCR和Western blot检测IGF1R干扰效果;细胞生长抑制实验、克隆形成实验及细胞周期检测评价其对A549细胞增殖的影响。结果成功构建了IGF1R-shRNA重组慢病毒并高效感染A549细胞,IGF1R mRNA及蛋白表达量分别下降74.51%,70.53%;细胞群体倍增时间显著延长,克隆形成能力显著降低,细胞周期阻滞于G0/G1期。结论本研究构建的重组慢病毒能显著抑制IGF1R表达,抑制A549细胞增殖。

鸡IGF1R基因遗传多样性分析

采用PCR-RFLP方法,对红色原鸡、杏花鸡、隐性白洛克鸡和丝羽乌骨鸡的IGF1R基因的18个位点的遗传多样性进行研究。结果表明,18个位点的基因频率在这4个群体中的分布差异很大,绝大部分的SNP最小等位基因频率均大于5%;独立χ2分析显示,除了位点G17445596A、T17416994G、A17313488G和C17337042G,其他14个位点的基因型分布在不同鸡品种间存在显著或极显著差异（P〈0.05和P〈0.01）;红色原鸡、杏花鸡、隐性白洛克鸡和丝羽乌骨鸡4个群体之间的平均多样性差异均不显著。单倍型分析发现,在所研究的区域,红色原鸡、杏花鸡、隐性白洛克鸡、丝羽乌骨鸡等在鸡IGF1R基因内分别划分为5、4、4、3个单倍型块;每个块内2~3个单倍型就可以代表整个块90%以上的遗传信息。此外,还发现鸡IGF1R基因中9个SNP位点可能与复杂经济性状有关,这为以后在经济性状上对该基因的进一步研究提供了参考依据。

鸡IGF1R、IGFBP-3基因SNP位点之间互作效应分析

以IGF1R、IGFBP-3基因作为影响鸡生产性能的候选基因,采用DNA测序和PCR-SSCP技术分析了单核苷酸多态性(SNP),并对两基因SNP位点之间的互作效应进行相关分析。结果表明,在IGF1R和IGFBP-3基因中分别发现2个SNP位点(IGF1R基因的G26333A和G26336A,IGFBP-3基因的T160G和C1087T),其中IGF1R基因G26336A位点对鸡的生长性状具有显著的影响(P<0.05);G26336A位点DD基因型个体8周龄体质量显著高于CC基因型(P<0.05),DD基因型个体12周龄体质量显著高于CC和CD基因型(P<0.05);IGFBP-3基因C1087T位点GH基因型个体的开产日龄显著低于HH基因型(P<0.05)。IGF1R基因G26336A位点与IGFBP-3基因C1087T位点之间对12周龄体质量有互作效应。可见,IGF1R和IGFBP-3基因可能是影响鸡生产性状的主效基因。

FGFR1和IGF1R在肺鳞癌中的表达及其临床意义

目的探讨成纤维生长因子受体1(FGFR1)、胰岛素样生长因子受体1(IGF1R)在肺鳞癌组织中的表达及两者的临床意义。方法采用免疫组化法检测260例肺鳞癌术后患者的癌组织及40例癌旁正常组织中FGFR1、IGF1R的表达,分析两者表达与临床病理特征及预后的关系。采用Kaplan-Meier法进行生存分析,用Cox回归模型分析影响肺鳞癌预后的独立因素。结果 FGFR1、IGF1R在肺鳞癌组织中的阳性表达率分别为51.92%(135/260)、55.4%(144/260),均明显高于癌旁正常组织的32.5%(13/40)、30.0%(12/40),差异均有统计学意义(P<0.05)。FGFR1在肺鳞癌组织中的表达与吸烟、淋巴结转移有关,IGF1R表达仅与淋巴结转移有关(P<0.005)。FGFR1、IGF1R蛋白阳性表达者的中位OS分别为38.21个月、38.48个月,均低于阴性表达者的42.55个月、42.51个月(P>0.05)。Cox多因素分析显示,FGFR1、IGF1R表达及淋巴结转移为肺鳞癌患者术后的独立预后因子。结论 FGFR1、IGF1R均参与了肺鳞癌的发生、发展,并且二者均为肺鳞癌的不良预后指标,并有望成为分子靶向治疗的新靶点。

纯血马和百色马IGF1R基因蛋白编码区序列的多态性分析

[目的]研究纯血马和百色马IGF1R基因成熟蛋白编码区序列的多态性,为揭示马矮小性状的分子机理和马的分子育种提供理论参考。[方法]采集纯血马和百色马的血样各57份,按常规酚仿法抽提DNA。利用DNA混合池和PCR产物直接测序的方法检测IGF1R基因的多态位点,利用PCR-RFLP技术分析这些多态位点在纯血马和百色马中的基因型及其频率分布。[结果]在马IGF1R基因的第2、第5和第16外显子上存在4个多态位点,其中突变179627 T→C为纯血马和百色马共有,且两者在基因型频率上差异不显著;突变212077 G→A为纯血马所独有;突变406 T→C和212 110 G→A为百色马所独有。[结论]马IGF1R基因的多态位点可能与百色马的矮小和纯血马的高大有关。

CD90和IGF1R蛋白在原发性胆囊癌中的表达及意义

目的：探讨CD90、IGF1R蛋白产物在原发性胆囊癌中的表达特点及关系。方法：应用免疫组化S-P法检测36例原发性胆囊癌中CD90、IGF1R的阳性表达率,并以同期20例慢性胆囊炎作对照（对照组）。结果：（1）原发性胆囊癌CD90蛋白阳性表达率63.89%、IGF1R蛋白阳性率47.22%,均显著高于对照组的0%、10%：（2）CD90蛋白在有淋巴结远处转移、NevinⅣ-Ⅴ期患者中阳性率（79.17%）高于无转移、NevinⅠ-Ⅲ期的患者（33.33%）：IGF1R在低分化、有淋巴结远处转移阳性率（84.62%、62.50%）高于高中分化、无转移（26.09%、16.67%）：（3）IGF1R与CD90两者呈正相关（P〈0.05）：（4）CD90阳性（IGF1R阳性）患者生存率明显低于CD90阴性（IGF1R阴性）患者。结论：联合检测CD90、IGF1R蛋白在原发性胆囊癌中表达有助于反映原发性胆囊癌生物学特性、为预后判断提供参考指标。

IGF1R在卵巢子宫内膜异位囊肿中的表达及意义

目的:检测IGF1R在正常子宫内膜及卵巢子宫内膜异位囊肿(EMs)患者异位内膜中的表达,并探讨其与疾病发生的关系。方法:免疫组化SP染色及Western blot法检测IGF1R在50例正常子宫内膜及55例卵巢EMs异位内膜中的表达情况,并根据月经周期对样本进行分期分析。构建IGF1R的反义寡核苷酸,转染至正常内膜的原代细胞,运用Ed U技术研究IGF1R对细胞增殖的影响。结果:免疫组化检测显示,IGF1R表达于正常内膜及EMs组织的腺上皮细胞质及胞膜,异位内膜中表达量较高(P=0.014)。增生期正常内膜及异位内膜中IGF1R的表达差异无统计学意义;分泌期异位内膜中IGF1R的表达量高于分泌期正常子宫内膜(P=0.036)。分泌期子宫内膜中IGF1R表达显著高于增生期子宫内膜,差异有统计学意义(P<0.001)。Western blot检测结果显示,异位内膜中IGF1R表达量较正常内膜高(P<0.05);增生期正常内膜和异位内膜中IGF1R表达量差异无统计学意义;分泌期正常子宫内膜和异位内膜中IGF1R表达量分别为(0.26±0.13)和(0.65±0.16),差异有统计学意义(P=0.023)。正常内膜的原代细胞中沉默IGF1R表达后,细胞增殖能力明显下降(P=0.014)。结论:IGF1R在异位内膜中的表达量较正常内膜高,并且参与异位内膜的细胞增殖,提示IGF1R可能通过促进异位内膜细胞的增殖参与EMs的发生发展。

Iodogen法^(131)I标记抗IGF1R单克隆抗体1H7及产物性质鉴定

目的探讨放射性碘标记抗IGF1R单克隆抗体1H7的实验条件及其性质。方法131I-1H7采用Iodogen法标记,Sephadex G-50层析柱分离纯化;纸层析测标记物放射化学纯度(RCP),分别置于室温、4℃、-20℃,于第8 d、16 d、24 d测定各自RCP,评价其体外稳定性,以竞争结合法鉴定其生物学性质。结果131I标记率为64.6%,131I-1H7放射性比活度5.48 MBq/μg,RCP 96.42%,即使在室温放置24 d后RCP仍达91.8%;131I-1H7与HepG2细胞结合的亲和常数K值为1.81×1011L/mol。结论Iodogen法131I标记1H7,所得产物放射化学纯度及放射性比活度高,体外稳定,生物活性保持完好,为进一步研究奠定了基础。

靶向IGF1R基因的shRNA对人肺腺癌细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的探讨靶向沉默肺腺癌A549细胞IGF1R基因表达对裸鼠移植瘤生长抑制作用及其机制。方法利用IGF1RshRNA重组慢病毒、IGF1R重组慢病毒分别感染的A549细胞及未处理的A549细胞,分别构建裸鼠移植瘤模型,并命名为:实验组、阴性对照组、空白对照组。监测各组肿瘤生长情况;HE染色法观察各组移植瘤组织形态学变化,免疫组化法检测微血管密度;Western blot法检测移植瘤组织IGF1R蛋白表达水平,荧光实时定量PCR法检测HIF-1α和VEGF基因表达水平。结果实验组体积抑瘤率达(50.14±2.58)%,质量抑瘤率(55.53±3.11)%,肿瘤生长显著抑制;IGF1R蛋白相对表达水平较阴性对照组下降70.66%(P<0.05);实验组HIF-1αmRNA和VEGF mRNA相对表达量(0.34±0.02、0.46±0.04)较空白对照组(0.72±0.03、1.08±0.06)及阴性对照组(0.68±0.04、1.00±0.07)显著降低(P<0.05);与空白对照组、阴性对照组比较,实验组肿瘤细胞稀疏,MVD明显下降。结论慢病毒载体介导的IGF1R shNRA能有效抑制肺腺癌细胞裸鼠移植瘤的生长。

苏禽黄鸡IGF1R基因第16外显子多态性及其与生长性状的关联研究

本研究以IGF1R基因作为影响苏禽黄鸡生长性状的候选基因,基因第16外显子单核苷酸多态性采用DNA测序和PCR-SSCP技术进行分析,并与鸡的生产性能进行关联分析。结果表明,共发现2个SNPs位点(C143082G和A143135G),在初生重方面,CC基因型个体的体重显著高于AA、AB、AC、BB和BC基因型个体的体重(P<0.05)。推测IGF1R基因可能是影响鸡体重的主(效)基因或与影响体重主(效)基因紧密连锁。

纳米载体PEI介导IGF1R-siRNA对A549肺癌细胞增殖活性影响的初步研究

目的 以纳米载体聚乙烯亚胺（polyethylenimine,PEI）介导人胰岛素样生长因子1受体（insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R）小干扰（small interfering RNA,siRNA）质粒转染A549肺癌细胞,并初步观察沉默IGF1R基因对A549肺癌细胞体外增殖活性的影响.方法 设计IGF1R小干扰序列,构建PSUPER-IGF1R-siRNA质粒,PEI介导转染A549肺癌细胞,台盼蓝染色法和MTT法测定细胞存活率.结果 测序结果显示构建质粒与基因库IGF1R基因序列一致.PEI介导PSUPER-IGF1R-siRNA质粒转染A549肺癌细胞后,台盼蓝染色法和MTT 法检测结果显示细胞存活率降低,与生理盐水组和pSUPER-EGFR质粒对照组间的差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 pSUPER-IGF1R-siRNA质粒构建成功,PEI介导其转染A549肺癌细胞后对细胞有生长抑制作用.

miR-145通过IGF1R与IRS1逆转胃癌SGC7901/DDP细胞对顺铂的耐药性

目的 :研究miR-145对胃癌耐顺铂细胞株SGC7901/DDP顺铂耐药的影响。方法 :应用QRT-PCR检测miR-145在胃癌组织、细胞中的表达水平;MTT法和细胞克隆形成实验检测细胞活性与增殖能力;荧光素酶实验验证miR-145的靶基因;Western blot、免疫组化和免疫荧光实验检测相关蛋白表达;流式细胞术检测耐药细胞对顺铂诱导凋亡的影响。结果 :miR-145在胃癌组织、各种胃癌细胞株中呈低表达;在胃癌耐顺铂细胞株SGC7901/DDP中,miR-145呈低表达,IGF1R与IRS1呈高表达;上调miR-145增强SGC7901/DDP细胞对顺铂的敏感性;荧光素酶报告实验证实IGF1R与IRS1为miR-145的靶基因;上调miR-145显著降低靶蛋白表达,抑制SGC7901/DDP细胞增殖,促进顺铂诱导的凋亡。结论 :上调miR-145通过靶向IGF1R与IRS1逆转胃癌细胞对顺铂的耐药性。

IGF1R和IGFBP3在肺鳞癌中的表达及其临床意义

目的:检测IGF1R、IGFBP3在肺鳞癌组织中的表达,并探讨其在肺鳞癌发生发展中的作用及其临床意义。方法:用免疫组化二步法检测246例肺鳞癌术后组织与40例癌旁正常组织中IGF1R、IGFBP3的表达情况,并分析二者的相关性及与临床病理特征和预后的关系。结果:IGF1R在肺鳞癌组织中的阳性表达明显高于癌旁正常组织,其表达率分别为54.07%、32.5%,IGFBP3在肺鳞癌组织中的阳性表达明显低于癌旁正常组织,其表达率分别为61.79%、87.5%,差异具有统计学意义(P<0.05)。IGF1R的表达与淋巴结转移正相关(P<0.05),IGFBP3的表达与肺癌的TNM分期、淋巴结转移负相关(P<0.01),而与其他临床病理参数无关(P>0.05)。IGF1R阳性表达组患者生存期明显短于IGF1R阴性表达组患者,IGFBP3阳性表达组患者生存期明显长于IGFBP3阴性表达组患者,差异有统计学意义(P分别为<0.001和=0.001)。Cox单因素分析显示TNM分期、淋巴结转移、IGF1R及IGFBP3的表达均与预后相关,将TNM分期、淋巴结转移、IGF1R及IGFBP3的表达进行Cox回归多因素分析,结果显示TNM分期、IGF1R及IGFBP3的表达均为肺鳞癌患者的独立预后因子。IGF1R、IGFBP3在肺鳞癌组织中表达呈负相关(r=-0.204,P<0.001)。结论:IGF1R、IGFBP3参与了肺鳞癌的发生、发展,并且二者均为肺鳞癌的独立预后因子。有望成为分子靶向治疗的新靶点。

C-MET、HER-2和IGF1R在涎腺腺样囊性癌中的表达和意义

目的:研究C-MET、HER-2和IGF1R在涎腺腺样囊性癌血清中的表达。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测C-MET、HER-2和IGF1R在涎腺腺样囊性癌血清中的含量。结果:腺样囊性癌患者血清中C-MET浓度明显高于正常人,C-MET浓度与腺样囊性癌的转移和侵润关系密切。腺样囊性癌血清中HER-2的浓度明显高于正常人,且HER-2的浓度肿瘤的转移和侵润密切相关。腺样囊性癌患者血清中IGF1R浓度均明显高于正常人,但其血清浓度含量与转移和侵润无相关。结论:C-MET、HER-2和IGF1R的联合检测为涎腺腺样囊性癌的预后以前病程进展有着重要的意义。

IGF1和IGF1R在小鼠第一个毛囊生长周期皮肤的表达

毛囊生长周期中,真皮乳头和毛基质间的基质-上皮信号调控细胞的增殖和分化。多功能细胞调控因子胰岛素样生长因子1(IGF1)是该信号路径的成员之一。第1个毛囊生长周期决定着毛囊的正常生长和发育,但IGF1在此期的作用未见报道。实时荧光定量PCR结果显示,IGF1在生长期皮肤中的相对表达量最低,在退化期表达量最高,在静止期表达量又降低。与生长初期相比,IGF1在退化期和静止期的表达量呈差异极显著(P<0.01);胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)在生长期皮肤中的相对表达量最高,在退化期表达量最低,而在静止期表达量又升高。与生长初期相比,IGF1R在退化期和静止期的表达量呈差异极显著(P<0.01)。Western印迹结果显示,IGF1和IGF1R蛋白在小鼠皮肤第1个毛囊生长周期各阶段的表达趋势分别与其mRNA的表达趋势一致;免疫组织化学结果表明,IGF1主要分布在小鼠表皮,而IGF1R免疫阳性在小鼠毛囊毛球部、内外根鞘和毛乳头均有分布。以上实验结果揭示,IGF1和IGF1R在小鼠皮肤第1个毛囊生长周期的各阶段的差异性表达,可能在毛囊生长周期各阶段的转化过程中参与了黑色素的形成。然而,IGF1和IGF1R表达趋势不一致,提示IGF1在小鼠皮肤中发挥作用时,并非只与IGF1R结合才能发挥作用。

IGF1R抑制剂对慢性粒细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)在慢性粒细胞白血病细胞(chronic myeloid leukemia,CML)增殖和凋亡中的作用。方法 MTS法检测IGF1R抑制剂(AG-1024和OSI-906)对K562和Ku812细胞增殖的影响。流式细胞术检测AG-1024和OSI-906对K562和Ku812细胞凋亡与周期的影响,以及对CML干(CD34+CD38-)/祖(CD34+CD38+)细胞凋亡的影响。Western blotting检测AG-1024和OSI-906对IGF1R和AKT总蛋白及磷酸化蛋白水平的影响。利用RNAi方法抑制K562细胞IGF1R的表达,流式细胞术检测抑制IGF1R表达对K562细胞凋亡的影响。结果 AG-1024和OSI-906呈时间及剂量依赖性关系抑制K562和Ku812细胞增殖并能诱导细胞凋亡,而且能够不同程度地抑制IGF1R和AKT蛋白磷酸化。IGF1R siRNA同样能够显著诱导K562细胞凋亡。AG-1024和OSI-906也能诱导CML干(CD34+CD38-)/祖(CD34+CD38+)细胞凋亡。结论 IGF1R抑制剂能够抑制CML细胞增殖和诱导细胞凋亡。