妊娠对孕妇外周血IGH-CDR3免疫组库的影响

目的:探讨妊娠期女性外周血中IGH-CDR3序列的多样性与免疫学特性。方法:分离9例正常妊娠末期和7例非妊娠期女性外周血淋巴细胞,逆转录为cDNA ARM-PCR扩增H链CDR3区序列,高通量测序后通过与IMGT数据库对比,揭示妊娠期IGH-CDR3免疫组库的多样性及免疫学特征。结果:妊娠期女性外周血IGH-CDR3的数目和种类均小于非妊娠女性;妊娠期女性有独特的免疫学特性,包括IGH-CDR3长度、N末端碱基的添加数、V区域使用偏好基因及末端去除的碱基数;一些CDR3肽段在妊娠期女性中特有表达。结论:妊娠会降低孕妇外周血循环中B细胞的数量和种类并使IGH-CDR3区的免疫学特性发生变化。

子痫前期患者外周血IGH-CDR3免疫组库的变化

目的:探讨子痫前期患者外周血中IGH-CDR3序列的多样性与免疫学特性。方法:分离子痫前期患者外周血中的B淋巴细胞,逆转录为cDNA后用ARM-PCR扩增H链CDR3区序列,利用高通量测序并与IMGT数据库对比揭示子痫前期患者IGH-CDR3受体库的多样性及免疫学特征。结果:5例子痫前期患者外周血IGH-CDR3的数目和种类差别较大,从1127条read到47385read;子痫前期患者有独有的免疫学特性,包括IGH-CDR3长度、N末端碱基的添加数、V、J区域使用偏好基因及末端去除的碱基数;子痫前期患者外周血中存在某些寡克隆异常增殖的情况。结论:子痫前期患者外周血IGH-CDR3免疫组库有其独有的特点。

视神经脊髓炎谱系疾病外周血IgH-CDR3免疫组库多样性及其与疾病的相关性

目的初步建立视神经脊髓炎谱系病患者外周血B淋巴细胞受体的重链互补决定区3(IgH-CDR3)的免疫组库,研究其免疫组库多样性和IgH-CDR3优势取用序列与疾病的相关性。方法收集6例NMOSD患者及6例健康志愿者,并根据治疗情况将NMOSD组分为治疗早期组及稳定期组。运用多重PCR技术对研究对象外周血B细胞IgH-CDR3区域的核苷酸序列进行扩增,扩增后的产物采用第二代高通量测序技术进行免疫组库测序,结合临床资料进行分析。采用非参数检验进行统计学分析。结果NMOSD患者组外周血B细胞IgH-CDR3总数、种类及多样性较正常对照组均有所下降(P>0.05);治疗早期IgH-CDR3序列库的多样性较稳定期高(P>0.05);特征性序列“CASSICLGSGCGGYYYGMDVW”在NMOSD治疗早期患者组中的克隆频次明显高于稳定期NMOSD患者及健康志愿者(P<0.05)。结论免疫组库多样性及疾病特征性优势取用序列的克隆扩增情况可有效反映NMOSD患者的疾病状态,并可评估其治疗效果,或可为临床免疫治疗提供相应的分子靶点和重要的理论基础。

高通量测序对原发性胆汁性胆管炎患者个体水平外周血B细胞受体免疫球蛋白重链互补决定区3免疫组库特征的初步研究

目的分析原发性胆汁性胆管炎（PBC）患者个体水平外周血B细胞受体免疫球蛋白重链互补决定区3（IGH-CDR3）免疫组库特征，了解其免疫系统多样性的特点。方法采用扩增子救援多重PCR（arm-PCR）技术特异性扩增一例PBC患者外周血B细胞受体，即膜表面免疫球蛋白重链IGH-CDR3区核苷酸序列，通过第二代高通量测序技术进行测序，结合生物信息学分析其免疫组库特征。结果共测得序列数329219个，总CDR3序列为325540个，独特CDR3序列为72774个，D50为7．7；IGH-CDR3区长度主要为45个核苷酸（nt）（9．6％），N区添加的核苷酸数量频率最高的为13-14nt（5．25％），J基因片段末端去除的核昔酸数主要是0（12．7％）；V基因使用频率最高的前3个等位基因是V4-59（9．5％），其次为V3-23（8．1％）和V1-69（6．4％）。结论该PBC患者IGH-CDR3免疫组库多样性程度较低，存在个别克隆异常增殖情况，该特异性有待扩大样本量进一步验证。