植酸对IkB-α表达及胃癌细胞增殖抑制作用

目的研究植酸对抑制性卡巴蛋白(IkB-α)表达影响与抑制胃癌细胞增殖作用机制。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法观察植酸对人胃癌(SGC)7901细胞增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察植酸对细胞基本生长状态及形态的影响;单细胞凝胶电泳实验观察植酸对SGC-7901细胞的凋亡诱导作用;蛋白印迹法(Western blot)检测凋亡相关基因IkB-α及可能相关的细胞核因子NF-kBP65蛋白表达。结果MTT实验结果显示,植酸对SGC-7901细胞具有生长抑制作用,并呈现剂量-时间效应关系;不同浓度的植酸对人SGC-7901 3 d时抑制率分别为26.35%,53.20%,69.29%,86.65%和93.61%。倒置显微镜下的形态学观察表明,加药组细胞的生长状态不佳,植酸作用组细胞出现典型凋亡的彗星脱尾,且存在剂量效应关系,不同浓度的植酸对人SGC-7901 DNA损伤率分别为5.9%,11.0%,34.6%和63.1%。植酸能够上调IkB-α蛋白的表达,植酸处理组细胞中IkB-α蛋白比对照组表达升高,且均呈现剂量-反应关系;同时,植酸能够下调NF-kBP65的蛋白表达。结论植酸对胃癌SGC-7901细胞具有抑制增殖作用,IkB-α参与了植酸对人胃癌SGC-7901细胞的凋亡诱导作用机制。

艾灸对膝骨性关节炎模型大鼠膝关节软组织中NF-kbp65蛋白和IKB-α蛋白的影响

目的:观察艾灸"膝眼"、"足三里"对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型大鼠膝关节软组织中NFkbp65蛋白和IKB-α蛋白表达的影响,为艾灸的局部抗炎免疫作用机制提供依据。方法:将60只SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组3组,每组20只;以艾灸为主要治疗手段,运用ELISA方法,观察艾灸"膝眼"、"足三里"对模型大鼠膝关节软组织中NF-kbp65蛋白和IKB-α蛋白表达的影响。结果:艾灸对实验性KOA大鼠膝关节软组织中NF-KBp65的蛋白表达有抑制作用,IKB-α的蛋白表达有升高作用。结论:艾灸改善大鼠关节软组织中NF-k B的高调控状态可能是其发挥抗炎免疫作用的有效机制之一。

大黄■丸对气虚血瘀大鼠TNF-α和NF-kB/IkB-α的影响

目的:探究大黄■丸对气虚血瘀大鼠炎性因子TNF-α和NF-kB/IkB-α信号通路的影响。方法:采用游泳力竭联合注射盐酸肾上腺素复合因素致气虚血瘀的动物模型。大黄■丸灌胃干预治疗,造模1周,注射肾上腺素1 h后麻醉,股动脉取血,检测血流变学,并采用放射免疫法测定TNF-α水平,ABC免疫组化法测定NF-kB、IkB-α信号通路的蛋白表达。结果:模型组与空白组比较TNF-α、NF-kB显著升高,IkB-α表达明显降低。大黄■丸高剂量组与模型组比较,TNF-α、NF-kB表达明显降低,IkB-α表达明显增高。结论:大黄■丸能够降低气虚血瘀大鼠炎性因子TNF-α表达,并通过IkB-α抑制NF-kB的表达进一步抑制炎症的发生和发展,发挥祛瘀补虚之功效。

金匮肾气丸联合玉屏风散补肾益气对慢阻肺大鼠IL-8、TNF-α、MMP-9、P-P65和IKB-α的影响

目的:探讨金匮肾气丸联合玉屏风散补肾益气对烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病大鼠IL-8、TNF-α、P-P65、MMP-9和IKB-α表达的影响。方法:采用香烟烟雾暴露法建立大鼠COPD模型,实验随机分为4组:正常对照组、COPD组、COPD+补肾益气组、COPD+地塞米松组,电镜下观察大鼠肺组织的病理变化,WB检测法测定大鼠肺组织P-P65及IKB-α表达变化,ELISA检测IL-8、MMP-9和TNF-α的变化。结果:模型组气道狭窄、肺泡囊状扩张,符合COPD病理改变,补肾益气组和地塞米松组有所改善;WB检测显示模型组IKB-α表达明显降低,补肾益气组和地塞米松组表达低于模型组(P<0.05);模型组P-P65表达明显升高,补肾益气组和地塞米松组表达有所下降(P<0.05);补肾益气组与地塞米松组无统计学差异(P>0.05)。ELISA结果显示模型组IL-8、MMP-9和TNF-α明显升高(P<0.05),补肾益气组和地塞米松组大鼠表达比模型组下降(P<0.05);补肾益气组与地塞米松组无统计学差异(P>0.05)。结论:补肾益气治疗可抑制P-P65蛋白激活,升高IKB-α,减少IL-8、MMP-9、TNF-α等转录产物的生成,从而减轻气道炎症反应。

IκK-α/β、IκB-αm RNA在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中核因子(NF)-κB信号通路中IκB激酶(IκK)-α、IκKβ、IκB-α mRNA的定量表达水平,及与SLE病情活动程度的相关性。方法:采集110例SLE患者和50名正常人外周血,抽提总RNA并反转录成cDNA,运用实时定量PCR法在基因测序仪上检测IκK-α、IκK-β、IκB-α mRNA的表达水平。结果:①SLE患者组的IκK-α、IκK-β mRNA定量表达水平显著高于正常对照组(P<0.01);未使用糖皮质激素的初发SLE患者IκK-α、IκK-β mRNA定量表达水平显著高于已使用糖皮质激素的SLE患者(P<0.05);②SLE患者组的IκB-α mRNA定量表达水平显著低于正常对照组(P<0.01);未使用糖皮质激素的初发SLE患者IκB-αmRNA定量表达水平显著低于已使用糖皮质激素的SLE患者(P<0.01);③IκB-α mRNA的表达与IκK-α、IκK-β mRNA表达水平呈负相关(P=0.000);④IκB-α mRNA的表达与SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分呈负相关(P<0.01)。结论:SLE患者体内NF-κB信号通路处于高活性状态,且与疾病活动程度相关,阻抑NF-κB过度活化可能有利于SLE的治疗。

补阳还五汤对Aβ_(1-40)所致老年性痴呆大鼠海马区β淀粉样前体蛋白及相关基因表达的影响

目的探讨补阳还五汤对老年性痴呆(AD)大鼠海马区β淀粉样前体蛋白(β-APP)及相关基因:环氧合酶2(COX-2)、核转录因子抑制蛋白α(IкB-α)、神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的影响及可能的作用机制。方法采用Aβ1-40海马区注射,建立AD大鼠模型,免疫组化法观察中药补阳还五汤对AD大鼠海马区β-APP,COX-2,IкB-α及nNOS的影响。结果补阳还五汤能明显降低AD模型大鼠海马区β-APP,COX-2,IкB-α表达,使nNOS表达升高。结论补阳还五汤可能通过COX-2,NF-кB/IкB-α,增加模型大鼠海马区nNOS表达,影响β-APP生成,延缓神经元细胞的早期损伤和迟发性损伤,从而起到治疗AD的作用。

内毒素、地塞米松对体外培养大鼠肺泡巨噬细胞中NF_(-k)B活化的影响

目的 探讨内毒素（ＬＰＳ）和地塞米松（Ｄｅｘ）对体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞（ＡＭ）中ＮＦ－ＫＢ活化的影响，以及ＡＭ中ＮＦ－ＫＢ活化在急性肺损伤中的可能作用。方法 通过建立大鼠ＡＭ体外培养技术，应用免疫组化染色法，观察ＬＰＳ和Ｄｅｘ寸 ＡＭ中 ＮＫ－ＫＢＰ～（６５），ＩＫＢ－α、ＴＮＦ－α和 ＩＣＡＭ－ｌ蛋白表达的动态变化。结果 ＬＰＳ能使培养的ＡＭ中 ＮＦ－ＫＢＰ～（６５），ＴＮＦ－α和ＩＣＡＭ－ｌ的表达增加，ＩＫＢ－α的表达降低；Ｄｅｘ的作用与 ＬＰＳ恰相反。结论ＬＰＳ促进ＡＭ中的ＮＦ－ＫＢ活化，可能是急性肺损伤肺内炎症损害发生的启动及促进因素；Ｄｅｘ抑制 ＮＦ－ＫＢ的活化，可能是其抗炎作用的重要机制之一。

电磁辐射急性暴露对小鼠IL-12表达的影响及其机制

目的观察电磁辐射对昆明种小鼠白细胞介素-12(IL-12)表达的影响并探讨其机制。方法使用平均功率密度为90 mW/cm2900 MHz电磁辐射对昆明种小鼠及原代培养的小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)进行急性辐照。辐照后,ELISA检测IL-12表达量、RT-PCR检测IL-12p40亚基mRNA表达水平、Western blot检测Mφ细胞质IκB水平以及EMSA检测MφNF-κB转录活性的变化,观察吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidinedithiocarbamate,PDTC)对电磁辐射影响IL-12表达的干预作用。结果急性辐照后第5天,小鼠脾脏组织IL-12p40 mRNA表达水平以及小鼠血清中IL-12p70含量达到峰值,增幅分别为9.32%、259.76%,与正常组相比差异有显著性(P<0.05),辐照后第11天恢复至正常水平。辐照后8 h,小鼠腹腔巨噬细胞(Mφ)细胞质中IκB-α含量降到最低,降幅为27.97%;辐照后12 h,小鼠腹腔巨噬细胞IL-12p40mRNA表达水平及培养上清中IL-12p70含量达到峰值,与正常对照组相比有显著性差异(P<0.01)。急性辐照后,各时相点均出现明显的NF-κB-探针结合带,辐照后8 h最为显著,正常对照组则检测不出明显的结合带。PDTC能够抑制电磁辐射急性暴露导致的IL-12高表达,抑制率为(83.43±7.58)%。结论 900 MHz电磁辐射急性暴露通过增加NF-κB活性,导致IL-12表达量增高。

左旋丁基苯酞抑制氧糖剥夺/复氧所致原代培养小鼠脑胶质细胞内NF-κB和IκB-α蛋白表达

目的观察左旋丁基苯酞(l-NBP)对原代培养小鼠脑胶质细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)后NF-κB、IκB-α蛋白表达的影响。方法体外培养小鼠脑胶质细胞,建立细胞OGD/R损伤模型。将胶质细胞分为5组:正常对照(NC)组、OGD 24h/R 24h组、l-NBP 20、100及500μmol/L组。Western-blot检测各组细胞核蛋白中NF-κB蛋白表达和胞质蛋白中IκB-α蛋白降解情况。结果OGD 24h/R 24h组NF-κB蛋白表达较NC组明显增加(P<0.01);l-NBP 100和500μmol/L组NF-κB蛋白表达较OGD 24h/R 24h组明显下降(P<0.01)。OGD 24h/R 24h组IκB-α蛋白降解比NC组增多(P<0.01);l-NBP 500μmol/L组IκB-α蛋白降解较OGD 24h/R 24h组明显减少(P<0.05)。结论l-NBP能抑制脑胶质细胞OGD/R后炎症反应,表现为减少IκB-α蛋白降解,抑制NF-κB活化。

IκB-α基因的克隆及其真核表达载体的构建

目的：克隆ＩκＢ－α基因，构建ＩκＢ－α的真核表达载体。方法：ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＩκＢ－α的ｃＤＮＡ，然后将其克隆入真核表达载体ｐＳｈｕｔｔｌｅ，并转入大肠杆菌ＪＭ１０９。结果：通过ＰＣＲ和重组质粒酶切分析等方法，筛选出重组阳性克隆。结论：此重组质粒可用于真核表达等进一步研究。

大鼠抑郁障碍与心血管组织炎性标记物的相关性研究

目的探讨强迫游泳抑郁模型大鼠抑郁障碍与炎性标记物的相关性。方法健康SD大鼠随机抽签分为对照组和模型组,应用21 d强迫游泳试验建立大鼠抑郁模型,模型组大鼠包括SS组(9只,应激+生理盐水腹腔注射)、SF组(8只,应激+氟西汀腹腔注射)和SI组(8只,应激+丙咪嗪腹腔注射)。对照组大鼠包括CS组(10只,生理盐水腹腔注射),CI组(7只,丙咪嗪腹腔注射)。应用透射免疫比浊法和酶联免疫法检测外周血炎性标记物高敏C反应蛋白(hsCRP)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)水平,应用免疫组织化学染色法和蛋白印迹法检测血管组织核因子-κB(NF-κB)p65、抑制蛋白κB(IκB)-α、MCP-1表达水平。结果应激后模型组外周血hsCRP和MCP-1含量明显高于CS、CI组,SS组与CS组hsCRP水平分别为(0.26±0.07)mg/L和(0.15±0.06)mg/L(P<0.01),SS组与CS组MCP-1水平分别为(52.02±18.83)ng/L和(22.52±8.45)ng/L(P<0.01)。血管组织中MCP-1、NF-κB p65表达显著增强,SS组与CS组MCP-1水平分别为(1.78±0.36)mg/L和(0.85±0.15)mg/L,SS组与CS组NF-κB p65水平分别为(0.88±0.16)和(0.12±0.04)(P<0.01),胞浆中IκB-α表达显著减少,SS组与CS组IκB-α水平分别为(0.48±0.07)和(2.07±0.48)(P<0.01)。结论抑郁障碍通过NF-κB表达增强来启动炎症反应。

NF-κB在中医药抗动脉粥样硬化中的实验研究进展

动脉粥样硬化是一种具有慢性炎症反应的病理过程,NF-κB可以在转录水平上激活多种与炎症有关的细胞因子、粘附分子的表达,成为动脉粥样硬化的发病机制之一,本文就NF-κB的研究概况及中医药抗动脉粥样硬化在调节NF-κB信号传导通道的实验研究进展做一综述。

脂多糖诱导大鼠心肌细胞NF-κB、IκB-α的表达及意义

目的研究脂多糖(LPS)诱导大鼠心肌细胞NF-κB,IκB-α的表达及意义。方法100ng/mlLPS刺激心肌细胞0、0.5、1、2、4、6、8h和0、10、50、100ng/mlLPS刺激1h,免疫细胞化学检测NF-κBp65的表达,Westernblot检测IκB-α表达。结果LPS的刺激迅速激活心肌细胞NF-κBp65的表达,于1h时达高峰;IκB-α的表达先降低,后升高。结论LPS可诱导大鼠心肌细胞NF-κB的激活,并通过激活心肌细胞核因子-κB途径从而促进细胞损伤。

不同针刺干预膝骨关节炎模型大鼠对NF-κB信号通路的调控影响

目的:探讨不同针刺治疗KOA的作用机制及对NF-κB信号通路的调控状态。方法:木瓜蛋白酶法建立KOA模型,将40只大鼠随机分为正常组、造模组、针刀组、圆利针组,每组10只。正常组正常饲养,不做任何干预;造模组造模后不做任何干预;针刀组采用针刀干预;圆利针组采用与针刀相同直径的圆利针干预,两种干预均每周1次,共治4周。治疗前后对各组大鼠进行行为学评价。治疗结束后,取出右后膝滑膜组织,用于PCR检测,另取软骨,评价软骨破坏情况。结果:干预前各组间行为学评分造模组、针刀组、圆利针组均显著高于正常组(P<0.01);干预后针刀组、圆利针组均显著低于造模组(P<0.01)。软骨组织学评分针刀组与圆利针组差异无统计学意义(P>0.05),造模组、针刀组、圆利针组均显著高于正常组(P<0.01),针刀组、圆利针组均显著低于造模组(P<0.01)。PCR表达水平:NF-κBp65 mRNA表达在针刀组、圆利针组和造模组均显著高于正常组(P<0.01),IKB-αmRNA表达在针刀组、圆利针组均高于造模组(P<0.05),针刀组高于圆利针组和造模组(P<0.05)。结论:针刀干预可改善滑膜组织NF-κB信号通路的高调控状态,从而抑制滑膜炎性因子和介质的合成与分泌,这有可能是针刀实现其治疗KOA的作用机制之一。

柯里拉京对胶质瘤U251细胞及胶质瘤干细胞NF-κBP65、IKB-α表达的影响

目的探讨柯里拉京对胶质瘤U251细胞及胶质瘤干细胞增殖及核因子-κB（NF-κB）P65、NF-κB抑制蛋白（IκB-α）表达的影响。方法采用免疫磁珠法从胶质瘤U251细胞中分选、培养胶质瘤干细胞。使用不同浓度（0、25、50、100肛勘nL）柯里拉京处理胶质瘤U251细胞及胶质瘤干细胞48h。显微镜下观察其形态变化，采用CCK-8法检测细胞存活率，采用双荧光素酶报告法检测细胞中P65基因启动子表达情况，采用Westernblotting检测细胞浆中IKB-α蛋白及细胞核中NF-κBP65蛋白表达情况。结果（1）镜下观察显示：柯里拉京干预胶质瘤U251细胞及胶质瘤干细胞后，细胞出现皱缩，细胞密度降低，结构不完整，并可见较多散在的细胞碎片。（2）CCK-8法检测显示：随着柯里拉京浓度f0、25、50、100μg／mL）的增加，胶质瘤U251细胞及胶质瘤干细胞的存活率逐渐降低，各浓度间差异均有统计学意义（P〈0．05）；在相同浓度条件下，胶质瘤干细胞存活率明显低于胶质瘤U251细胞，差异均有统计学意义（P〈0．05）。（3）双荧光素酶报告法检测显示：与0μg／mL柯里拉京组相比，25μg／mL柯里拉京干预后胶质瘤U251细胞及胶质瘤干细胞P65基因启动子表达明显增多，差异均有统计学意义（P〈0．05）；但50、100μg／mL柯里拉京组P65基因启动子表达逐渐减少。各浓度间差异均有统计学意义（P〈0．05）。（4）Westernblotting检测显示：随着柯里拉京浓度（0、25、50、100μg/mL）的增加，胶质瘤U25l细胞及胶质瘤干细胞细胞浆中IKB-α蛋白表达逐渐降低，而细胞核中NF-κBP65蛋白表达逐渐增多，各浓度间差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论柯里拉京能抑制1965基因启动子表达，诱导IKB-α蛋白表达，减少活化的NF—κBP65蛋白进入细胞核内，进而产生抑制NF-κB信号通路的作用，这可能是其抑制胶质瘤细胞及胶质瘤干细胞增殖的重要机制之一。

食管癌与螺杆菌感染及炎性信号通路关系

目的研究食管癌中是否存在螺杆菌感染及其与炎性信号通路的关系，探讨螺杆菌感染以及所产生的慢性炎症在人食管癌发生发展中的作用。方法随机收集食管癌标本37例和正常食管标本10例，采用聚合酶链反应（PCR）扩增螺杆菌16S rDNA，并进行基因测序及与幽门螺杆菌（Hp）同源性比较。阳性者再扩增Hp特异性毒力基因（cagA，babA2，vacA）。随后将Hp标准株NCTC11639和NCTC11637分别与食管鳞癌细胞株EC109共培养不同的时间，蛋白印迹（Westem blot）检测炎性信号通路中P—IκB—α蛋白表达的变化。结果食管癌组织中螺杆菌16S rRNA基因的检出率为31．6％（12／37），正常人食管组织均元阳性表达。对阳性标本16S rRNA基因测序及同源性比较，食管癌组织中螺杆菌序列与Hp的16S rDNA序列同源性达99％～100％。12例阳性标本中分别有cagA阳性4例，babA2阳性8例，vacA阳性3例，阳性率分别为33％，67％，25％。EC109与Hp标准株共培养不同时间后，P—IκB-α显著升高。结论食管癌组织中存在螺杆菌感染，该螺杆菌可能为Hp或者其他亚种。螺杆菌感染导致食管粘膜慢性炎症在食管癌的发生发展中可能发挥重要的作用，其中P—IκB-α炎性信号通路的持续作用可能为分子机制之一。

肿瘤坏死因子诱导U937细胞凋亡过程中IκB-α蛋白表达的研究

目的 了解肿瘤坏死因子 (TNF α)诱导U937细胞凋亡过程中IκB α蛋白的表达、降解及亚细胞定位 ,并探讨其降解机制。方法 用荧光显微镜观察TNF α诱导细胞凋亡过程中U937细胞内IκB α蛋白的表达及亚细胞定位 ,用流式细胞术分析IκB α蛋白的变化及降解情况 ,并行蛋白酶抑制剂———对甲苯磺酰 L 苯丙氨酸氯甲基甲酮 (TPCK)阻断实验 ,探讨细胞内IκB α蛋白变化的可能机制 ;用流式细胞术分析U937细胞凋亡。结果 ①IκB α分子多呈环状分布于整个胞浆 ,胞核内则无。②TNF α刺激后 ,胞浆中仅见少许IκB α分子 ,胞核内无 ;流式细胞术证实TNF α刺激后一定时间内IκB α蛋白表达水平逐渐降低。③TPCK阻断后 ,IκB α分子仍呈环状分布于整个胞浆 ,胞核内则无。流式细胞术证实在对应时间内其表达明显高于TNF α组。④TNF α诱导的U937细胞凋亡率为 (6 0 .73± 1.6 1) %。结论 ①在TNF α诱导的U937细胞凋亡过程中 ,存在IκB α蛋白降解 ,提示核因子 κB的激活。②IκB α蛋白降解需TPCK敏感的蛋白酶参与。③TPCK敏感的蛋白酶也参与了TNF α诱导U937细胞凋亡。