人IL-1RⅡ基因腺病毒载体的构建及在子宫内膜异位症细胞中的表达

目的:利用AdEasy XL系统,构建并鉴定IL-1RII基因重组腺病毒载体,并在子宫内膜异位症(EM)细胞中表达。方法:PCR扩增含有IL-1RII全长cDNA的片段,亚克隆到pShuttle-CMV穿梭质粒,经酶切和测序验证无误后,再经电转化与pAdEasy-1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生腺病毒载体质粒。经过抗性筛选、酶切鉴定以及再次测序验证无误后得到阳性的重组质粒,经PacI酶切线性化再在293细胞中进行包装扩增,用ELISA检测IL-1RII蛋白的表达。利用Adeasy XL系统的对照载体pShuttle-CMV-LacZ同上操作作为对照。收集的重组腺病毒感染原代培养的EM基质细胞,并以免疫组化法鉴定IL-1RII表达。结果:测序证实连接后IL-1RII序列完全正确;抗性筛选及酶切鉴定均表明重组腺病毒载体构建成功;pShuttle-CMV-LacZ转染293细胞3d后X-gal染色阳性,回收病毒可以重复感染293细胞,ELISA鉴定表达IL-1RII可溶性蛋白,证明病毒包装成功。重组的腺病毒感染EM基质细胞后,免疫组化法证实IL-1RII表达。结论:成功地构建了IL-1RII基因重组腺病毒载体,并且在EM基质细胞中表达,为进一步研究IL-1RII基因在EM中的作用乃至生物治疗都奠定了基础。

急性中枢神经系统感染患儿血清及脑脊液MMP-9、IGF-Ⅱ、IL-1β水平联合检测的临床意义

目的探讨联合检测中急性枢神经系统感染患儿血清及脑脊液中基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、胰岛素样生长因子-Ⅱ(insulin-like growth factor-Ⅱ,IGF-Ⅱ)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的临床意义。方法选取本院2011年6月至2015年6月收治的急性中枢神经系统感染患儿60例为研究对象,其中化脓性脑膜炎(组)30例,病毒性脑炎(组)30例,另选取30例非中枢神经系统感染患儿作为对照组。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测并比较三组患儿血清和脑脊液中MMP-9、IGF-Ⅱ及IL-1β水平变化。结果化脓性脑膜炎组、病毒性脑炎组患儿血清和脑脊液中MMP-9水平均显著高于对照组(P<0.05),且化脓性脑膜炎组上述指标水平明显高于病毒性脑炎组(P<0.05);化脓性脑膜炎组患儿脑脊液中IGF-Ⅱ水平显著高于病毒性脑炎组及对照组(P<0.05),但血清中IGF-Ⅱ水平明显低于病毒性脑炎组及对照组(P<0.05);化脓性脑膜炎组、病毒性脑炎组患儿血清和脑脊液中IL-1β水平均显著高于对照组(P<0.05),但化脓性脑膜炎组患儿血清中IL-1β水平与病毒性脑炎组比较差异无显著性(P>0.05)。结论急性中枢神经系统感染患儿血清和脑脊液中MMP-9、IGF-Ⅱ及IL-1β参与了血-脑脊液屏障损伤的病理生理及神经保护过程,对患儿病情的评估和预测具有重要的提示意义。

心力衰竭患者血红蛋白水平变化与血清TNF-α、IL-1β、IL-6和AngⅡ的关系及其对心室重构影响的研究

目的:检测充血性心力衰竭(CHF)患者血红蛋白(Hb)水平、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的变化,并探讨CHF时Hb水平变化与炎症细胞因子和肾素-血管紧张素系统对心室重构的影响。方法:对入选的121例CHF患者测定了Hb、血清TNF-α、IL-1βI、L-6和AngⅡ水平,超声心动图测量左室射血分数(LVEF),评价心功能;计算左室质量指数(LVMI)和平均室壁应力(MWS);按Hb水平分为CHF贫血组和非贫血组,同时选择27例正常人作为对照组。结果:CHF患者Hb水平低于对照组,而血清TNF-α、IL-1β、IL-6和AngⅡ水平以及MWS和LVMI高于对照组(P<0.01);随着心功能恶化,Hb水平逐渐降低,而血清TNF-α、IL-1β、IL-6、AngⅡ水平以及MWS和LVMI逐渐升高;贫血组CHF患者血清TNF-αI、L-1β、IL-6和AngⅡ水平以及MWS和LVMI明显高于非贫血组CHF患者(P<0.01);随着Hb水平的降低,CHF患者血清TNF-α、IL-1β、IL-6、AngⅡ水平以及MWS和LVMI进一步升高(P<0.01);CHF患者MWS和LVMI与Hb水平呈负相关,与TNF-α、IL-1β、IL-6和AngⅡ水平呈正相关(P<0.01)。多因素逐步回归分析,TNF-α、IL-1β、IL-6和AngⅡ水平变化为CHF患者贫血发生的独立影响因素。结论:CHF患者TNF-αI、L-1β、IL-6和AngⅡ水平的升高参与了CHF贫血和心室重构发生发展的病理生理过程,而贫血的出现使CHF患者心室重构加重化。

养心通脉颗粒Ⅱ方对气虚血瘀型心衰大鼠血清AngⅡ,IL-6,TNF-α水平的影响

[目的]观察养心脉颗粒Ⅱ方对心力衰竭(HF)模型大鼠血清AngⅡ,TNF-α,IL-6的影响。[方法]通过多因素诱导复制中医气虚血瘀大鼠模型,通过阿霉素诱导复制心衰大鼠模型。60只SD雌性大鼠,随机分为养心通脉颗粒Ⅱ方组、依那普利组、模型组及空白对照组,各15只。造模后养心通脉颗粒Ⅱ方组、依那普利组分别予养心通脉颗粒Ⅱ方、依那普利灌胃治疗,模型组、空白对照组予生理盐水灌胃。造模7周后四组均灌胃治疗4周,治疗4周事用酶联免疫法测定各组大鼠血浆AngⅡ,TNF-α,IL-6的浓度。[结果]养心通脉颗粒Ⅱ方及依那普利组与模型组相比均可有效降低心衰大鼠血清AngⅡ,TNF-α,IL-6水平(P<0.05),而养心通脉颗粒Ⅱ方组与依那普利组相比无显著性差异(P>0.05)。[结论]养心通脉颗粒Ⅱ方改善气虚血瘀型心衰大鼠的心功能可能是通过抑制血清AngⅡ,TNF-α,IL-6的水平而达到的。

鹿瓜多肽注射液对CⅡ诱导的免疫性关节炎大鼠血清TNF-α、IL-6以及CⅡ抗体活性的影响

目的 :观察鹿瓜多肽注射液对类风湿性关节炎 (RA)的治疗作用 ,并探讨其作用机理。方法 :以Ⅱ型胶原 (CⅡ )诱导的免疫性关节炎 (CIA)大鼠为RA动物模型 ,通过测量其关节肿胀程度及制作病理切片并在光镜下计分 ,观察鹿瓜多肽注射液对其的治疗效果 ;采用ELISA法测定大鼠血清中TNF α、IL 6以及CⅡ抗体活性 ,以探讨其作用机理。结果 :与模型组比较 ,鹿瓜多肽组大鼠踝关节肿胀程度和病理损伤计分均明显减轻。鹿瓜多肽组血清TNF α、IL 6的活性明显降低。结论 :鹿瓜多肽注射液对CⅡ诱导的免疫性关节炎有治疗作用 ,其机理可能与抑制血清TNF α、IL 6的活性有关。

sIL-1RⅡ对IL-1α诱导子宫内膜异位症在位内膜基质细胞表达IL-8的影响

目的:探讨可溶性IL-1Ⅱ型受体(sIL-1RⅡ)对人白细胞介素1α(IL-1α)诱导子宫内膜异位症(EMs)在位内膜基质细胞(ESC)表达白细胞介素8(IL-8)的影响。方法:体外培养EMs在位内膜基质细胞,分别以含不同浓度IL-1α(0、0.1、1.0、10、100ng/ml)的DMEM/F12培养基孵育24h,利用RT-PCR和ELISA法从转录和蛋白翻译水平分别检测IL-8的表达情况。选取能显著刺激IL-8升高的IL-1α浓度,作用于EMs在位内膜基质细胞不同时间,RT-PCR和ELISA法检测IL-8的表达情况。并检测1.0μg/ml的sIL-1RⅡ对不同浓度IL-1α诱导EMs在位内膜基质细胞表达IL-8的影响。结果:未刺激时,EMs在位内膜基质细胞能表达低水平IL-8,经IL-1α刺激后IL-8mRNA及蛋白表达均升高,并呈剂量和时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.01)。1.0μg/mlsIL-1RⅡ能拮抗低浓度IL-1α的刺激效应。结论:IL-1α能以时间剂量依赖方式刺激EMs在位内膜基质细胞表达IL-8,促进EMs的发生发展,sIL-1RⅡ能一定程度拮抗此作用,为EMs的生物治疗提供了理论基础。

慢性牙周炎患者治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和β-防御素-3检测的临床意义

目的:探讨了慢性牙周炎患者治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和β-防御素-3检测的临床意义。方法:应用放射免疫分析和酶联法对33例慢性牙周炎患者进行了治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和β-防御素-3的检测,并与35名正常健康人作比较。结果:慢性牙周炎患者在治疗前IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),但是血清β-防御素-3水平显著低于正常人组(P<0.01),经综合治疗3个月后四项指标检测则与正常人组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和β-防御素-3以不同方式参与了患者的发病,其水平的检测对了解病情和指导治疗具有重要的临床价值。

子宫颈癌患者血清IGF-Ⅱ、IL-8和Hcy检测的临床意义

目的:探讨子宫颈癌患者手术治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-8和Hcy检测的临床意义。方法:应用放射免疫分析和免疫化学法对33例子宫颈癌患者进行了手术治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-8和Hcy检测,并与35名正常健康人作比较。结果:子宫颈癌患者在手术治疗前血清IGF-Ⅱ、IL-8和Hcy水平均非常显著地高于正常人组(P<0.01)。手术治疗3个月后则与正常人组比较无显著性差异(P>0.05)。血清IGF-Ⅱ水平与IL-8和Hcy呈显著正相关(r=0.5786、0.6084,P<0.01)。结论:检测子宫颈癌患者手术治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-8和Hcy水平的变化对了解病情、观察疗效和预后判断均具有重要的临床价值。

补肾活血方对人胚肺成纤维细胞IL-17A、LC3-Ⅱ影响的实验研究

目的 探讨补肾活血方对人胚肺成纤维细胞的作用机制。方法 首先,观察不同浓度的含药血清对人胚肺成纤维细胞的抑制情况及细胞内的胶原蛋白的含量,确定出实验用含药血清的最佳血药浓度;其次,应用TGF-β1诱导人胚肺成纤维细胞,将实验细胞分为空白对照组,TGF-β1处理组,TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h组(含药血清组),TGF-β1处理+基因敲除阴性对照组(sh-NC组),TGF-β1处理+IL-7A基因敲减组(sh-IL-17A组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+过表达质粒阴性对照组(Vector组),TGF-β1处理+最佳浓度含药血清干预1 h+IL-17A过表达质粒组(IL-17AOE组),进行相应药物培养后,检测各组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A表达量的变化。结果 TGF-β1处理组中人胚肺成纤维细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较空白对照组明显增多(P<0.05);含药血清组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较TGF-β1处理组明显较少,而自噬小体的数量较TGF-β1处理组明显增多;sh-IL-17A组细胞的增值率、胶原蛋白、IL-17A蛋白含量及IL-17A mRNA表达量较sh-NC组明显较少,而自噬小体的数量较sh-NC组明显增多;IL-17AOE组细胞的增值率、胶原蛋白及IL-17A mRNA等各项指标较Vector组明显增多,而自噬小体的数量较Vector组明显减少。结论 补肾活血方可以对MRC-5细胞中的胶原显著降解。这一作用与抑制IL-17A介导的通路,激活细胞自噬,进一步降解胶原蛋白有关。

可摘局部义齿对Ⅱ型糖尿病患者龈沟液中IL-1β的影响

目的研究可摘局部义齿对Ⅱ型糖尿病患者龈沟液中白细胞介素-1β(IL-1β)表达水平的影响。方法选取口腔门诊就诊的Ⅱ型糖尿病患者36例,牙周非手术治疗后进行可摘局部义齿修复,检测基牙与其对侧同名牙于义齿修复前、修复后2周、3个月、6个月、12个月牙周指标和龈沟液中IL-1β的表达水平。结果 1Ⅱ型糖尿病患者戴用可摘局部义齿后基牙的IL-1β的表达水平高于对照牙(P<0.01);2Ⅱ型糖尿病患者戴用可摘局部义齿后的6个月内,基牙IL-1β的表达水平均明显升高(P<0.01);12个月时基牙IL-1β的表达水平与6个月时无明显变化。结论戴用可摘局部义齿可引起Ⅱ型糖尿病患者基牙龈沟液中IL-1β表达水平的升高。

不同IL-15转染对NCI-H446HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ表达及NK敏感性的影响

目的探讨不同形式IL15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCIH446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响。方法在本室已构建的3种细胞模型(转染IL15成熟肽基因的NCIH446/IL15mp细胞、转染原型IL15基因的NCIH446/IL15细胞和转染以IL2信号肽替代IL15信号肽的改型IL15基因的NCIH446/IL2spIL15mp细胞)基础上[1],以野生株细胞为对照,流式细胞分析仪(Fluorescenceactivatedcellsorter,FACS)分析这3种细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定它们对NK杀伤的敏感性。结果野生株NCIH446细胞表面阳性表达HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子;转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因后,这两种分子的表达均被抑制为阴性;转染原型IL15基因后,这两种分子的表达均被显著上调。5名不同健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)对野生株NCIH446细胞的平均NK杀伤率最低,对NCIH446/IL15、NCIH446/IL15mp和NCIH446/IL2spIL15mp细胞的平均NK杀伤率依次升高。结论转染不同形式IL15基因对NCIH446细胞的免疫生物学特性影响不同。转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因,抑制NCIH446细胞表面HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达;转染原型IL15基因,上调这两种分子的表达;转染不同形式IL15基因均可增强NCIH446细胞对NK杀伤的敏感性,但程度不同:以改型IL15者最高,IL15成熟肽者次之,原型IL15者最低。

支气管肺炎患儿治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和hs-CRP检测的临床意义

目的:探讨了支气管肺炎患儿治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和hs-CRP水平的变化及意义。方法:应用放射免疫分析和免疫比浊法对36例支气管肺炎患儿进行了血清IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和hs-CRP测定,并与35名正常健康儿作比较。结果:在治疗前,支气管肺炎患儿血清IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和hs-CRP水平非常显著地高于正常儿组(P<0.01),经治疗一周后与正常儿组比较,则无显著性差异(P>0.05)。结论:检测支气管肺炎患儿血清IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和hs-CRP水平的变化对疾病的诊断、治疗和预后判断均有重要的临床价值。

幽门螺杆菌cagⅡ对胃上皮细胞IL-8基因转录的影响机制

[目的]探讨Hp cagⅡ对胃上皮细胞IL-8基因转录的影响及信号传导机制。[方法]构建cagⅡ基因位点缺失Hp突变以及带有IL-8报告基因的人胃癌细胞系L5F11，用液体闪烁计数仪测定荧光素酶(IL-8转录)活性．川ELISA法测定IL-8蛋白浓度。[结果]所有HP突变株诱导荧光素酶活性与IL-8蛋白浓度较亲代菌株26695均降低(0.13±0.01vs 0.59±0.05×10^4epm．P<0.01;0.73=0.13vg 2.22±0.65ng/ml．P<0.05)。PTK抑制berbimycin A不仅抑制Hp诱导的荧光素酶活性（0.71±0.18vs1.51=0.23×10^6epm，P<0.05)．而且抑制IL-8蛋白表达(0．83±0.41vs3.22±0.59ng/ml，P<0.05)，但berbimycinA对TNFa诱导的荧光素酶活性及IL-8蛋白表达均无影响(P均＞0.05)；PKA抑制剂H7抑制NTFa诱导的荧光素酶活性(0．74±0.16vs2.62±0.26×10^6epm．P<0.01)及IL-8蛋白表达(1．45±0.38vs4.12±0．43ng/ml，P<0.01)．而对Hp诱导的荧光素酶活性无影响(P>0.05)。[结论]Hp cag Ⅱ中的多个基因能够调节胃上皮细胞IL-8基因转录，且这一作用主要经蛋白酯氨酸激酶途径。

支气管肺炎患儿治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-2、IL-10和TNF-α检测的临床意义

目的:探讨支气管肺炎患儿治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-2、IL-10和TNF-α含量的变化。方法:分别应用放免法和酶免法对62例支气管肺炎患儿进行了治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-2、IL-10和TNF-α水平检测,并与30例正常健康儿作比较。结果:治疗前血清IGF-Ⅱ、TNF-α水平非常显著高于正常儿组(P<0.01),而IL-2、IL-10则显著低于正常儿组(P<0.01),经治疗后7d,血清IGF-Ⅱ、IL-2、IL-10和TNF-α则与正常儿比较无显著性差异(P>0.05)。结论:检测支气管肺炎患儿血清IGF-Ⅱ、IL-2、IL-10和TNF-α水平的变化对诊断治疗和预后均有一定的临床实用价值。

支气管肺炎患儿治疗前后血清hs-CRP、IGF-Ⅱ和IL-6水平检测的临床意义

目的探讨支气管肺炎患儿治疗前后血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)和白细胞介素6(IL-6)水平检测的临床意义。方法应用放射免疫分析法和免疫比浊法对34例支气管肺炎患儿进行了治疗前后血清hs-CRP、IGF-Ⅱ和IL-6水平检测,并与30例正常健康儿童作比较。结果在治疗前,支气管肺炎患儿血清hs-CRP、IGF-Ⅱ和IL-6水平均非常显著地高于正常人组(P<0.01),经治疗一周后与正常儿童组比较无显著性差异(P>0.05)。对支气管肺炎患儿血清hs-CRP水平、血清IGF-Ⅱ和IL-6水平进行了相关分析,结果呈明显正相关。结论检测支气管肺炎患儿血清中hs-CRP、IGF-Ⅱ和IL-6水平的变化对疾病的诊断、治疗和预后判断均有重要的临床价值。

急性白血病患者化疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-8和VEGF检测的临床意义

目的:探讨急性白血病患者化疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-8和VEGF水平的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析和酶联法对31例急性白血病患者进行了血清IGF-Ⅱ、IL-8和VEGF检测,并与35名正常健康人作比较。结果:急性白血病患者在化疗前血清IGF-Ⅱ、IL-8和VEGF水平均非常显著地高于正常人组(P<0.01),化疗后6个月未复发者28例,明显下降接近正常人组,而复发的3例其数值又回升到化疗前水平(P<0.01)。结论:检测急性白血病患者血清IGF-Ⅱ、IL-8和VEGF水平的变化可作为诊断和疗效观察的参数。

支气管肺炎患儿治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-2和SOD检测的临床意义

目的:探讨支气管肺炎患儿治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-2和SOD水平的变化及临床意义。方法:应用放射免疫分析对33例支气管肺炎患者进行治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-2和SOD检测,并与35名正常儿作比较。结果:在治疗前支气管肺炎患儿血清IGF-Ⅱ水平非常显著地高于正常儿组(P<0.01),而血清IL-2、SOD水平则极显著地低于正常儿组(P<0.01)。经综合治疗2周后即与正常儿组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:检测支气管肺炎患儿治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-2和SOD水平的变化对了解病情、观察预后均具有一定的临床价值。

支气管肺炎患儿治疗前后血清TNF-α、IGF-Ⅱ、IL-6检测的临床意义

目的探讨了血清TNF-α、IGF-Ⅱ、IL-6水平在支气管肺炎患儿治疗前后的变化及意义。方法应用放免法测定36例支气管肺炎患儿治疗前后TNF-α、IGF-Ⅱ、IL-6水平,并与30名正常儿作比较。结果支气管肺炎患儿治疗前均非常显著地高于正常儿组(P<0.01),治疗后2周与正常儿比较无显著差异(P>0.05)。结论检测支气管肺炎患儿血清TNF-α、IGF-Ⅱ、IL-6水平可作为病情预后判断的重要指标。

慢性萎缩性胃炎患者Hp感染与TGF-βRⅡ、IL-6和TNF-α的表达研究

目的:探讨慢性萎缩性胃炎患者幽门螺旋杆菌感染与胃黏膜中转化生长因子β受体Ⅱ、白介素6和肿瘤坏死因子α的表达情况。方法:选取76例慢性萎缩性胃炎(CAG)患者胃黏膜病变组织的胃镜活检标本,采取PCR荧光法检测Hp感染情况,免疫组化法检测TGF-βRⅡ、IL-6和TNF-α在胃小凹上皮和间质炎细胞中的表达。结果:慢性炎症程度在Hp感染阳性组和阴性组中差异有统计学意义(P<0.05);间质炎细胞中IL-6的表达在Hp感染阳性组和阴性组中差异有统计学意义(P<0.05);TGF-βRⅡ、TNF-α的表达在Hp感染阳性组和阴性组中无显著性差异(P>0.05);间质炎细胞中IL-6与慢性炎症程度呈正相关关系(r=0.249,P=0.03);萎缩程度与肠上皮化生严重程度、上皮内瘤变程度呈正相关关系(r=0.697,0.366)。结论:IL-6在间质炎性细胞中的表达与Hp相关性CAG患者的慢性炎症程度有关,慢性萎缩程度促进肠上皮化生和上皮内瘤变的发生。