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ANTITUMOR EFFECTS OF HUMAN IL-15 GENE MODIFIED LUNG CANCER CELL LINE 被引量:2
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作者 沈永泉 崔莲仙 +2 位作者 何维 薛莉 巴德年 《Chinese Journal of Cancer Research》 SCIE CAS CSCD 1997年第4期8-12,共5页
Human IL15 cDNA fragment, which contains all codons encoding the human IL15 mature protein and signal peptide was transducted into the human lung squmouse cancer cells(PG cells) and murine lung adenocarcinoma cells(LA... Human IL15 cDNA fragment, which contains all codons encoding the human IL15 mature protein and signal peptide was transducted into the human lung squmouse cancer cells(PG cells) and murine lung adenocarcinoma cells(LA795 cell lines). Two IL15 highly expressed cell clones PG1 and LA795A were used to inoculate the nude mice and the T739 syngeneic mice respectively. PG1 cell express higher level of class ⅠMHC molecule on their surface than PG cells. It was shown that the modified LA795A tumor cells grew slowly in T739 mice and induced high levels of CTL/NK/LAK activity in vivo as well, compared with the case of inoculation with LA795 or LA795neo. No significant difference in the tumor growth was observed in groups of the nude mice inoculated by PG1, PG and PGneo cells respectively, except the gene modified cells could not show the lung metastasis of tumors. The supernatants derived from the LA795A cell culture could promote CTL/NK/LAK activity from the whole splenocytes and the CD4/CD8deleted splenic cells in vitro. The results indicated that the IL15 gene transfected tumor cells play important roles in the process of antitumor or antitumor metastasis. 展开更多
关键词 INTERLEUKIN-15 gene therapy TUMOR gene transduction CYTOTOXICITY
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IL-15的免疫调节功能及其相关疾病研究进展
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作者 聂亚丹 贺毅 +4 位作者 孙作厘 杨健 罗燕婷 刘明霞 王海霞 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2024年第3期240-247,共8页
IL-15作为免疫调控的关键分子,主要由髓系细胞分泌产生。IL-15在T细胞、自然杀伤细胞和记忆CD8+T细胞稳态和功能方面发挥重要作用,因其具有广泛表达、严格分泌的特性在多种免疫相关疾病中体现出良好的治疗潜能。IL-15与IL-15受体特异性... IL-15作为免疫调控的关键分子,主要由髓系细胞分泌产生。IL-15在T细胞、自然杀伤细胞和记忆CD8+T细胞稳态和功能方面发挥重要作用,因其具有广泛表达、严格分泌的特性在多种免疫相关疾病中体现出良好的治疗潜能。IL-15与IL-15受体特异性结合后,激活下游JAK/STAT、Ras/Raf/MAPK及PI3K/AKT等多种信号通路,通过诱导细胞增殖、分化和凋亡,从而发挥抗肿瘤、抗感染等生物学效应。本文主要综述了IL-15在肿瘤、自身免疫疾病和神经精神疾病等中的作用与相关机制,并总结了以IL-15为潜在治疗靶点的小分子激动剂和抑制剂,以期为深入探究IL-15在免疫系统疾病中的发病机制和药物研究提供科学依据。 展开更多
关键词 il-15 il-15受体 肿瘤 自身免疫疾病 神经精神疾病 激动剂 抑制剂
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IL-12、IL-15在急性髓系白血病患者骨髓来源CD34+白血病细胞转化为NK细胞中的作用机制研究
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作者 薛春娥 赵娟娟 张义亮 《每周文摘·养老周刊》 2024年第4期41-43,共3页
分析IL-12、IL-15在急性髓系白血病患者骨髓来源CD34+白血病细胞转化为NK细胞中的作用机制。方法:选取本院2021年12月~2022年12月期间收治的30例急性髓系白血病患者,提取患者BM-MNC,构建NK细胞诱导体系,A组加入SCF、IL-7、IL-12、IL-15,... 分析IL-12、IL-15在急性髓系白血病患者骨髓来源CD34+白血病细胞转化为NK细胞中的作用机制。方法:选取本院2021年12月~2022年12月期间收治的30例急性髓系白血病患者,提取患者BM-MNC,构建NK细胞诱导体系,A组加入SCF、IL-7、IL-12、IL-15,B组加SCF、IL-7、IL-2、IL-15。5周诱导分化结束后,对NK细胞活化情况进行检测。对NK细胞相关基因表达水平进行实时定量PCR检测,取K562细胞和患者来源原代白血病细胞分别作为靶细胞,取培养第5周的A、B组的NK细胞作为效应细胞,对NK细胞杀伤活性进行检测。结果:诱导分化前,BM-MNC中NK细胞和CD34+细胞所占比例分别为(0.46±0.11)%、(80.35±5.12)%。诱导分化后,A组NK细胞所占比例明显高于B组(P<0.05);但两组CD34 细胞所占比例组间差异不明显(P>0.05)。A组CD69+、Kp46+、NKG2D+表达比例均明显高于B组(P<0.05)。经组间差异检验,B组GranzymeB、TNF-α和IFN-y基因相对表达水平均显著低于A组(P<0.05)。对两组NK细胞对不同效靶比K562细胞与患者来源细胞的杀伤率进行统计和比较,结果显示,在不同的效靶比下,NK细胞对本组K562细胞以及骨髓血来源白血病细胞的杀伤率均存在一定的差异。其中,均呈现出效靶比越大,相应的杀伤率越高的特点。对两组NK细胞在同一效靶比下对不同细胞的杀伤情况进行比较,可知,对患者来源细胞的杀伤率均明显高于K562细胞(P<0.05)。开展组间比较,结果显示在同一效靶比下,A组细胞组合对K562细胞以及患者来源细胞的杀伤率均显著高于B组(P<0.05)。结论:IL-12、IL-15细胞因子组合可体外诱导分化CD34+白血病细胞为NK细胞,且具有一定的杀伤活性。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 CD34+ NK细胞 il-12 il-15
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鼻咽癌组织SNHG15和LINC00261的表达及其临床意义
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作者 曲莉 尹昕 +2 位作者 张蕊 杨妍 裴明阳 《解剖学杂志》 CAS 2024年第4期333-338,共6页
目的:探讨鼻咽癌中小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)和LINC00261的表达水平及其临床意义。方法:收集2018年1月至2020年2月本院93例行鼻咽癌根治性切除术患者的鼻咽癌组织和癌旁组织样本以及临床资料;培养鼻咽癌CNE-1细胞和正常鼻咽部上皮NP6... 目的:探讨鼻咽癌中小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)和LINC00261的表达水平及其临床意义。方法:收集2018年1月至2020年2月本院93例行鼻咽癌根治性切除术患者的鼻咽癌组织和癌旁组织样本以及临床资料;培养鼻咽癌CNE-1细胞和正常鼻咽部上皮NP69细胞,分为空白对照组、shRNA-NC组(转染SNHG15对照)、SNHG15-shRNA组(转染SNHG15)、pcDNA-NC组(转染LINC00261对照)、LINC00261-pcDNA组(转染LINC00261);采用RT-qPCR检测SNHG15和LINC00261表达水平;采用CCK-8和克隆形成实验检测各组细胞的增殖情况;采用Pearson法分析组织中SNHG15和LINC00261表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier法分析鼻咽癌组织SNHG15和LINC00261表达水平与患者预后的关系;采用多因素Cox回归分析影响鼻咽癌患者预后的相关因素。结果:鼻咽癌组织中SNHG15表达水平高于癌旁组织,LINC00261表达水平则低于癌旁组织;鼻咽癌组织中SNHG15和LINC00261表达水平呈负相关。CNE-1细胞中SNHG15表达水平高于NP69细胞,LINC00261表达水平则低于NP69细胞;SNHG15-shRNA组和LINC00261-pcDNA组CNE-1细胞克隆形成数量均低于空白对照组、shRNA-NC组及pcDNA-NC组,细胞增殖能力降低。不同SNHG15和LINC00261表达水平的鼻咽癌患者年龄、肿瘤直径及组织学类型差异无统计学意义,而SNHG15高表达组及LINC00261低表达组发生淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的患者所占比例显著高于SNHG15低表达组及LINC00261高表达组;SNHG15低表达患者3年生存率(84.78%)显著高于SNHG15高表达患者(65.95%),LINC00261低表达患者3年生存率(63.04%)显著低于LINC00261高表达患者(87.23%)。结论:鼻咽癌组织中SNHG15和LINC00261表达与患者临床病理特征及预后密切相关,淋巴结转移、TNM分期及SNHG15是鼻咽癌患者死亡的危险因素,而LINC00261是鼻咽癌患者死亡的保护因素。 展开更多
关键词 鼻咽癌 长链非编码RNA 小核仁RNA宿主基因15 LINC00261 临床病理特征 预后
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IL-15转染人CIK细胞对HT-29的杀瘤效果探究
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作者 王柏涛 梁宇堃 +2 位作者 王丙萍 杨超旗 高艳伟 《生物医学工程与临床》 CAS 2023年第5期650-655,共6页
目的探讨白细胞介素15(IL-15)基因(IL-15)转染人细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞对HT-29[人结肠癌(CRC)细胞株]的杀瘤效应。方法从血液样本制备CIK细胞后,用含IL-15的慢病毒感染CIK细胞,制备转基因CIK细胞(IL-15-CIK细胞)。将IL-15-CIK细胞、... 目的探讨白细胞介素15(IL-15)基因(IL-15)转染人细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞对HT-29[人结肠癌(CRC)细胞株]的杀瘤效应。方法从血液样本制备CIK细胞后,用含IL-15的慢病毒感染CIK细胞,制备转基因CIK细胞(IL-15-CIK细胞)。将IL-15-CIK细胞、CIK细胞分别与HT-29细胞共培养,按效靶比5︰1、10︰1、20︰1、25∶1培养14 d。分别评估IL-15-CIK细胞、CIK细胞对HT-29细胞的IL-15、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量变化和杀瘤效应。结果成功制备CIK细胞及IL-15-CIK细胞。效靶比25∶1,IL-15-CIK细胞与CIK细胞对CRC细胞的杀伤最高(72.56%±5.66%、52.33%±3.46%),且两种细胞差异有统计学意义(P<0.05)。即IL-15-CIK细胞对HT-29细胞的杀伤能力强于CIK细胞。在IL-15-CIK细胞及CIK细胞培养7 d、11 d、14 d中,两种细胞上清液中IL-15、IFN-γ及TNF-α的含量均随着时间的增加而升高,杀瘤后任何两组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);但在IL-15-CIK细胞中观察到,TNF-α含量在11 d与14 d内差异无统计学意义(P>0.05),其余时间相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。IL-15-CIK细胞及CIK细胞以E∶T=25∶1对HT-29细胞株作用后,检测到两种细胞上清液中IL-15、TNF-α、IFN-γ含量较作用前含量增加[IL-15-CIK细胞:IL-15(45.37±2.15)pg/mL vs(35.49±1.09)pg/mL,TNF-α(34.83±1.63)pg/mL vs(28.04±0.41)pg/mL,IFN-γ(42.34±1.50)pg/mL vs(26.08±0.57)pg/mL。CIK细胞:IL-15(21.18±0.76)pg/mL vs(20.34±1.07)pg/mL,TNF-α(20.04±3.03)pg/mL vs(18.04±0.27)pg/mL,IFN-γ(23.90±1.33)pg/mL vs(19.06±0.34)pg/mL]。结论IL-15-CIK细胞对CRC细胞株的杀伤能力较CIK细胞强,应用IL-15转染人CIK细胞可增强CIK细胞杀瘤效应。 展开更多
关键词 白细胞介素15(il-15) 白细胞介素15(il-15)基因 CIK细胞 杀瘤效应
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猪源SIRT5促进O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制
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作者 陈国辉 史喜绢 +11 位作者 别鑫恬 杨行 赵思越 张大俊 赵登率 闫文倩 陈玲玲 赵美玉 何路 郑海学 刘霞 张克山 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期421-429,共9页
目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特... 目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特异性siRNA,通过Western Blotting和RT-qPCR检测SIRT5、FMDV-O蛋白水平、转录水平及病毒拷贝数的变化情况;构建SIRT5真核表达质粒转染至PK-15细胞,运用Western Blotting、RT-qPCR实验方法探究过表达SIRT5对FMDV-O复制的影响,同时利用RT-qPCR检测过表达SIRT5对SeV、FMDV-O诱导的I型干扰素刺激基因mRNA表达水平的影响。结果FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5的表达上调;siRNA干扰SIRT5抑制FMDV-O的复制;过表达SIRT5促进FMDV-O复制;过表达SIRT5降低了SeV、FMDV-O诱导的干扰素刺激基因mRNA的表达水平。结论FMDV-O感染刺激宿主SIRT5表达,而猪源SIRT5通过抑制I型干扰素刺激基因的产生进而促进FMDV-O复制。本研究为进一步探究猪源SIRT5促进FMDV-O复制的机制提供参考依据。 展开更多
关键词 猪源SIRT5 FMDV-O 干扰素刺激基因 PK-15细胞
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干扰素刺激基因ISG15对猪流行性腹泻病毒复制的作用及机制分析
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作者 刘莉莉 边缘 +2 位作者 吴圣龙 包文斌 吴正常 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2545-2555,共11页
【目的】探究干扰素刺激基因ISG15在猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制中所发挥的作用及机制。【方法】利用实时荧光定量PCR检测ISG15基因组织表达谱及肠道组织差异表达情况,同时以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究模型,检测PEDV CV777毒株感染... 【目的】探究干扰素刺激基因ISG15在猪流行性腹泻病毒(PEDV)复制中所发挥的作用及机制。【方法】利用实时荧光定量PCR检测ISG15基因组织表达谱及肠道组织差异表达情况,同时以猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)为研究模型,检测PEDV CV777毒株感染细胞不同时间点PEDV M基因mRNA和N蛋白表达量,并从RNA和蛋白水平检测ISG15表达变化;分别构建猪ISG15基因干扰和过表达细胞,通过实时荧光定量PCR、Western blotting及间接免疫荧光试验检测ISG15基因表达对PEDV复制水平的影响;对ISG15基因过表达前后进行转录组测序分析,筛选其下游调控基因及信号通路。【结果】ISG15基因在仔猪肠道组织中特异性高表达,其中空肠和回肠中表达量极显著高于其他组织(P<0.01);PEDV感染组十二指肠、空肠及回肠中ISG15基因表达量显著或极显著高于健康组(P<0.05;P<0.01);M基因mRNA和N蛋白表达量出现上升趋势,与0 h相比,ISG15基因表达水平在24 h出现极显著上调(P<0.01);ISG15基因过表达后PEDV复制出现显著或极显著下降(P<0.05;P<0.01),而ISG15基因干扰后PEDV复制出现极显著上调(P<0.01);转录组测序发现,过表达ISG15基因前后存在1 532个差异表达基因,且其主要富集在自噬、MAPK、内吞等信号通路中。【结论】本研究揭示了PEDV感染过程中ISG15基因的调控功能及作用机制,发现ISG15基因上调可显著抑制PEDV复制,增进了对PEDV与宿主细胞互作分子机制的认识。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) ISG15基因 病毒复制 转录组
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雷州山羊TBX 15基因多态性及其与体尺性状的关联分析
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作者 周光现 谭嘉泳 +4 位作者 杨健 刘艳芬 甘尚权 赵志辉 康丹菊 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3930-3938,共9页
【目的】本研究旨在筛查雷州山羊T盒子转录因子15(TBX15)基因潜在的单核苷酸多态性(SNP)位点,并分析其与体尺性状的关联性,为雷州山羊分子选育提供理论支撑。【方法】采集78只雷州山羊血样提取基因组DNA,利用PCR扩增和直接测序法检测TBX... 【目的】本研究旨在筛查雷州山羊T盒子转录因子15(TBX15)基因潜在的单核苷酸多态性(SNP)位点,并分析其与体尺性状的关联性,为雷州山羊分子选育提供理论支撑。【方法】采集78只雷州山羊血样提取基因组DNA,利用PCR扩增和直接测序法检测TBX 15基因SNP位点,并分析其遗传多样性;采用SPSS 23.0软件分析TBX 15基因多态性与雷州山羊体高、体长和胸围等体尺性状的关联性;利用HaploView软件进行TBX 15基因SNP位点的连锁不平衡和单倍型分析。【结果】在雷州山羊TBX 15基因内含子上发现3个SNPs位点:g.96346139 A>G、g.96345894 T>C和g.96330058 G>A,均存在3种基因型,优势基因型分别为GG、CC和AA;卡方检验结果表明,其均处于Hardy-Weinberg平衡状态;多态信息含量(PIC)分别为0.309、0.285及0.294,均为中度多态(0.25<PIC<0.50)。关联分析结果发现,雷州山羊TBX 15基因g.96346139 A>G位点GG基因型个体的体高、十字部高和体斜长均显著高于AA基因型(P<0.05);g.96345894 T>C位点CC基因型个体的体高、十字部高、体斜长和胸深均显著高于TT基因型(P<0.05);g.96330058 G>A位点GG基因型个体的胸深显著低于其他2种基因型(P<0.05)。在单倍型和连锁不平衡分析中发现,3个SNPs位点间存在强连锁关系(R 2>0.33),有5种主要单倍型,其中优势单倍型是ACG,其概率为0.716。【结论】雷州山羊TBX 15基因3个SNPs位点对体高、体斜长等体尺指标具有显著影响,且该3个位点间具有强连锁关系,单倍型ACG可作为雷州山羊选育的候选标记。 展开更多
关键词 雷州山羊 TBX 15基因 体尺性状 多态性 关联性
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ISG15蛋白在原发性肝细胞癌中表达及其对预后的影响
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作者 黄丽芳 宋建华 +3 位作者 韦翠容 林子芹 杨达平 粟连秀 《现代医药卫生》 2024年第2期209-212,共4页
目的探讨干扰素刺激基因15(ISG15)蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达水平及其临床预后价值。方法选取2018年1月至2020年10月该院经术后病理确诊的HCC患者100例,根据ISG15蛋白表达水平将其分为低表达组和高表达组。比较不同临床特征患者... 目的探讨干扰素刺激基因15(ISG15)蛋白在原发性肝细胞癌(HCC)中的表达水平及其临床预后价值。方法选取2018年1月至2020年10月该院经术后病理确诊的HCC患者100例,根据ISG15蛋白表达水平将其分为低表达组和高表达组。比较不同临床特征患者ISG15蛋白表达水平,分析不同ISG15蛋白表达水平患者生存情况。结果癌组织及癌旁组织中ISG15蛋白表达水平分别为(5.00±1.69)、(3.78±1.22),二者比较,差异有统计学意义(t=5.766,P<0.001)。不同肿物大小、HBV-DNA拷贝数及分化程度患者ISG15蛋白表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。低表达组中位生存期为40.5个月,生存率为70.83%,高表达组中位生存期为33.0个月,生存率为24.39%,二者比较,差异有统计学意义(χ^(2)=9.980,P=0.0016)。结论ISG15蛋白在HCC癌组织中高表达,其在抑制肿瘤细胞生长、抵抗HBV病毒复制、抑制癌细胞分化过程中具有相关作用。ISG15蛋白表达与临床预后相关,低表达者生存期更长。 展开更多
关键词 原发性肝细胞癌 干扰素刺激基因15 预后
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新西兰白兔BMP 15基因的真核表达载体构建、表达模式及其在卵巢组织的表达
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作者 陈孟娟 刘雨晴 +4 位作者 王智通 温佳乐 许会芬 于光晴 李明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期562-575,共14页
旨在获得新西兰白兔BMP 15基因序列及其组织表达规律,构建其真核表达载体,预测BMP15的生物学功能。本研究选择180日龄性成熟的健康新西兰白兔作为研究对象,采用RT-PCR技术扩增BMP 15基因CDS区序列,利用T4连接方法将目的片段连接至线性化... 旨在获得新西兰白兔BMP 15基因序列及其组织表达规律,构建其真核表达载体,预测BMP15的生物学功能。本研究选择180日龄性成熟的健康新西兰白兔作为研究对象,采用RT-PCR技术扩增BMP 15基因CDS区序列,利用T4连接方法将目的片段连接至线性化的Pmcherry-N1和pCMV-Myc空载体,构建真核表达载体,利用生物信息学分析其编码蛋白的性质及结构。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术与Western blotting技术检测pCMV-Myc-BMP 15过表达情况。接下来,使用qRT-PCR检测BMP 15基因在不同组织中的表达水平。激光共聚焦方法检测BMP 15基因的亚细胞定位。利用免疫荧光技术检测内源BMP15在新西兰白兔卵巢组织定位情况。结果表明:克隆得到新西兰白兔BMP 15基因CDS区序列长1182 bp,PCR及测序结果表明pCMV-Myc-BMP 15和Pmcherry-N1-BMP 15真核表达载体构建成功。生物信息学分析显示,BMP 15基因编码393个氨基酸;BMP15蛋白不稳定系数为55.32,等电点大小为9.69,是一种稳定的碱性蛋白质。BMP15蛋白共有26个磷酸化位点,15个糖基化位点,存在信号肽,不存在跨膜结构域。系统进化树表明,新西兰白兔与猪亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。二级结构和三级结构分析结果表明,BMP15蛋白主要由α-螺旋(38.68%)、无规则卷曲(37.4%)、延伸链(15.52%)、β-转角(8.40%)组成,为混合型蛋白。蛋白互作关系预测发现,BMP15蛋白与FSHR、FIGLA、BMPR1B、AMHR2、NOBOX等卵巢生长发育的相关蛋白之间存在相互作用。不同组织表达分析显示,BMP 15基因在卵巢组织中特异性表达;激光共聚焦结果显示,BMP15主要存在于在细胞质中。将pCMV-Myc-BMP 15转染至HEK293T细胞内,BMP15的mRNA水平和蛋白水平均显著上调。卵巢组织免疫荧光检测结果显示,BMP15主要定位在卵巢颗粒细胞的细胞质中。本研究成功构建了BMP15的真核表达载体,对BMP 15基因及其编码的蛋白的理化性质和生物学特性进行了预测分析,在HEK293T细胞内成功过表达,并得到了该基因的亚细胞定位情况、组织表达情况及在卵巢组织的分布情况。为后续开展BMP 15基因在卵巢生长发育中的功能及机制研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 新西兰白兔 BMP 15基因 克隆 组织表达 细胞定位
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水牛KLF 15基因克隆、分子特征和组织差异表达分析
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作者 周芳廷 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期3715-3725,共11页
【目的】试验旨在获取水牛Krüppel样因子15(Krüppel-like factor 15,KLF15)基因,分析其分子特征和组织差异表达,初步揭示该基因的结构和功能。【方法】克隆水牛KLF 15基因编码区,对该基因的结构、氨基酸序列一致性、理化特性... 【目的】试验旨在获取水牛Krüppel样因子15(Krüppel-like factor 15,KLF15)基因,分析其分子特征和组织差异表达,初步揭示该基因的结构和功能。【方法】克隆水牛KLF 15基因编码区,对该基因的结构、氨基酸序列一致性、理化特性、基序、保守结构域、生物学功能等进行比较分析,并采用实时荧光定量PCR法检测KLF 15基因在水牛各组织中的表达水平。【结果】克隆得到水牛KLF 15基因编码区长为1212 bp,编码403个氨基酸。生物信息学分析显示,水牛KLF15与其他牛科物种氨基酸序列的一致性较高,是核内的亲水性蛋白,无信号肽序列及跨膜结构,包含KLF15_N、COG5048和zf-C2H2锌指结构等保守结构域。水牛KLF15的主要功能是调控DNA转录、结合DNA、结合锌指结构等。KLF 15基因在泌乳期水牛的脂肪中表达量最高,在非泌乳期水牛的肌肉中表达量最高,但在2个时期的水牛中均为在乳腺、心脏、肝脏、脾脏等组织中中度表达,在肺脏、肾脏、瘤胃和小肠等组织中低表达或几乎不表达。【结论】水牛KLF15是细胞核内的蛋白,可结合锌指结构调控DNA的转录,在脂合成旺盛的组织中发挥功能。 展开更多
关键词 水牛 KLF 15基因 分子特征 组织表达 生物信息学
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Myod1通过调节lncRNA SNHG15和miR-24-3p对氧糖剥夺SH-SY5Y细胞增殖及凋亡的影响
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作者 冀方超 张晨昕 +3 位作者 任占军 潘云志 逯琦 孙兴元 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期989-999,共11页
目的:探讨肌源性分化蛋白1(Myod1)对氧糖剥夺(OGD)诱导的SH-SY5Y细胞增殖抑制和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常对照组研究对象和缺血性脑梗死组患者外周血及正常培养的SH-SY5Y细胞(对照组)... 目的:探讨肌源性分化蛋白1(Myod1)对氧糖剥夺(OGD)诱导的SH-SY5Y细胞增殖抑制和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测正常对照组研究对象和缺血性脑梗死组患者外周血及正常培养的SH-SY5Y细胞(对照组)和OGD细胞模型(OGD组)细胞中Myod1和长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因15(SNHG15)mRNA表达水平。分别采用si-Myod1、pcDNA3.0-Myod1、si-SNHG15、pcDNA3.0-SNHG15、si-NC、空载质粒(Vector)、miR-NC和miR-24-3p模拟物(miR-mimics)质粒转染SH-SY5Y细胞后,进行OGD处理,将SH-SY5Y细胞分为对照组、OGD组、OGD+Vector组、OGD+Myod1组、OGD+si-NC组、OGD+si-Myod1组、OGD+si-SNHG15组、OGD+si-SNHG15+Vector组、OGD+si-SNHG15+Myod1组、OGD+miR-NC组、OGD+miR-mimics组、OGD+miR-mimics+Vector组和OGD+miR-mimics+SNHG15组。采用CCK-8法检测各组细胞活性,采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)染色法检测各组EdU阳性细胞率,采用原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组TUNEL阳性细胞率,采用Western blotting法检测各组细胞中裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、裂解的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(cleaved caspase-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。染色质免疫共沉淀(CHIP)法评估Myod1和SNHG15之间的关联。双荧光素酶报告基因实验评估Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p的靶向关系。结果:与正常对照组比较,缺血性脑梗死组患者外周血中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均升高(P<0.05)。与对照组比较,OGD组细胞中Myod1和SNHG15 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05)。与OGD组比较,48和72 h时OGD+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均降低(P<0.01),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.01);OGD+si-Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01)。Myod1可与SNHG15的启动子序列结合。SNHG15可吸附miR-24-3p,Myod1与SNHG15及SNHG15与miR-24-3p存在靶关系。敲低SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率均升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+si-SNHG15组比较,48和72 h时OGD+si-SNHG15+Myod1组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2的蛋白表达水平降低(P<0.05)。过表达miR-24-3p和SNHG15后,与OGD组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics组细胞活性和EdU阳性细胞率升高(P<0.01),TUNEL阳性细胞率降低(P<0.01),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平升高(P<0.01);与OGD+miR-mimics组比较,48和72 h时OGD+miR-mimics+SNHG15组细胞活性和EdU阳性细胞率降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞率升高(P<0.05),细胞中Bax、cleaved caspase-3和cleaved caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:Myod1可通过与SNHG15启动子区结合进而吸附miRNA-24,促进OGD诱导的SH-SY5Y细胞的增殖抑制和细胞凋亡。 展开更多
关键词 肌源性分化蛋白1 小核仁RNA宿主基因15 微小RNA-24-3p SH-SY5Y细胞 脑梗死
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长链非编码RNA CASC15对肝细胞癌增殖、侵袭和迁移的影响及作用机制
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作者 吴东洋 蔡青山 +4 位作者 刘东 左刚刚 李树栋 刘立友 郑建兴 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2024年第1期18-29,共12页
目的探究长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性基因15(Cancer susceptibility candidate 15,CASC15)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的分子调控机制。方法通过生物信息学方法预测目的基因表达,并分析目的基因表达与患者生存时... 目的探究长链非编码RNA(lncRNA)癌症易感性基因15(Cancer susceptibility candidate 15,CASC15)在肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中的分子调控机制。方法通过生物信息学方法预测目的基因表达,并分析目的基因表达与患者生存时间的关系;收集临床HCC患者肝癌组织和癌旁组织;CCK-8、Transwell和流式细胞术实验检测HCC细胞SMMC7721和Huh-7的增殖、侵袭、迁移以及凋亡;双荧光素酶实验检测miR-144-3p与CASC15和富含亮氨酸的重复序列蛋白1(Leucine rich repeat containing protein 1,LRRC1)的靶向关系;qRT-PCR和Western blot检测mRNA和蛋白表达情况;免疫荧光实验用于蛋白定位研究;回复实验验证CASC15/miR-144-3p/LRRC1对HCC进展的影响。体内实验验证CASC15对HCC进展的影响。结果TCGA数据库与qRT-PCR检测显示HCC组织和细胞中CASC15高表达、miR-144-3p低表达、LRRC1高表达(P<0.05)。增殖、侵袭、迁移的细胞功能实验结果表明在肿瘤发展中CASC15和LRRC1起到促进作用,miR-144-3p则是抑制作用,与凋亡实验结果一致(P<0.05)。细胞功能实验表明CASC15抑制miR-144-3p功能,miR-144-3p抑制LRRC1,CASC15与miR-144-3p结合,并导致LRRC1上调。回复实验结果表明CASC15通过抑制miR-144-3p促进LRRC1的表达从而促进HCC细胞增殖、侵袭和迁移并抑制细胞凋亡。结论CASC15可能通过调节miR-144-3p/LRRC1轴,从而促进HCC进展。 展开更多
关键词 癌症易感性基因15 miR-144-3p 富含亮氨酸的重复序列蛋白1 肝癌细胞 细胞生物学功能
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lncRNASNHG15调控miR-95-3p对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响
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作者 孙凯廷 池益利 《中国现代医生》 2024年第21期55-61,共7页
目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小RNA宿主基因15(small nucleolar RNAhost gene 15,SNHG 15)调控微RNA95-3p(microRNA95-3p,miR-95-3p)对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法将乳腺癌细胞分为对照组、敲减组、干... 目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)核仁小RNA宿主基因15(small nucleolar RNAhost gene 15,SNHG 15)调控微RNA95-3p(microRNA95-3p,miR-95-3p)对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响。方法将乳腺癌细胞分为对照组、敲减组、干扰组、共转染组,体外培养人乳腺癌细胞系MDA-MB-231。测定SNHG 15 mRNA、miR-95-3p mRNA相对表达量;使用噻唑兰(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测乳腺癌细胞增殖能力;流式细胞仪检测乳腺癌细胞凋亡情况;划痕试验检测乳腺癌细胞迁移能力;Transwell侵袭实验测定乳腺癌细胞侵袭个数;采用Western blot法测定半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)相对表达量。结果与对照组比较,敲减组SNHG 15 mRNA、miR-95-3p mRNA相对表达量及增殖能力、增殖率、迁移能力、侵袭个数、Bcl-2蛋白表达下降;凋亡情况、凋亡率、caspase-3、Bax表达升高(P<0.05)。与敲减组、干扰组比较,共转染组SNHG 15 mRNA、miR-95-3p mRNA相对表达量及增殖能力、增殖率、迁移能力、侵袭个数、Bcl-2蛋白表达升高;凋亡情况、凋亡率、caspase-3、Bax表达降低(P<0.05)。与干扰组比较,共转染组SNHG 15 mRNA、miR-95-3p mRNA相对表达量及增殖能力、增殖率、迁移能力、侵袭个数、Bcl-2表达升高,凋亡情况、凋亡率、caspase-3、Bax蛋白表达降低(P<0.05)。结论lncRNA SNHG 15可通过调控miR-95-3p表达影响乳腺癌细胞的增殖与凋亡,与乳腺癌细胞的发生、发展呈正相关。 展开更多
关键词 长链非编码核仁小RNA宿主基因15 长链非编码RNA 微小RNA95-3p 乳腺癌 增殖 凋亡
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斯氏艾美耳球虫MIC-5与兔IL-15基因在真核细胞中的共表达 被引量:7
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作者 孟庆玲 乔军 +3 位作者 才学鹏 田广孚 闫鸿斌 骆学农 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第19期4096-4101,共6页
【目的】构建能在真核细胞中共表达斯氏艾美耳球虫微线蛋白5(MIC-5)和兔IL-15重组载体,为进一步研究抗斯氏艾美耳球虫的免疫调节性DNA疫苗奠定基础。【方法】将斯氏艾美耳球虫MIC-5和兔IL-15基因,克隆到真核双表达载体pBudce4.1中,应用... 【目的】构建能在真核细胞中共表达斯氏艾美耳球虫微线蛋白5(MIC-5)和兔IL-15重组载体,为进一步研究抗斯氏艾美耳球虫的免疫调节性DNA疫苗奠定基础。【方法】将斯氏艾美耳球虫MIC-5和兔IL-15基因,克隆到真核双表达载体pBudce4.1中,应用脂质体介导法将构建的重组质粒pB-MIC-5-IL-15转染BHK-21细胞。在转染后,用RT-PCR法和间接免疫荧光试验(IFA)分别检测MIC-5和IL-15基因在BHK-21细胞中的转录和表达情况。【结果】在重组质粒pB-MIC-5-IL-15转染BHK-21细胞24 h后即可检测到MIC-5、IL-15基因进行了转录;在转染36、48、72h后,MIC-5和IL-15基因可同时在BHK-21细胞中表达。【结论】成功构建了含有斯氏艾美耳球虫MIC-5和兔IL-15基因的重组载体,实现了两种基因在真核细胞中的共表达,为抗斯氏艾美耳球虫的免疫调节性DNA疫苗研制奠定了基础。 展开更多
关键词 斯氏艾美耳球虫 MIC-5 il-15 共表达
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猪IL-15与PRRS病毒GP5基因核酸疫苗免疫效力 被引量:16
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作者 石娜 尹杰超 +2 位作者 Dante Zarlenga 李广兴 任晓峰 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期97-102,共6页
通过分子克隆技术构建了表达猪白细胞介素(IL)-15及猪繁殖呼吸综合症(PRRSV)病毒GP5基因重组核酸疫苗。以小鼠为试验模型,利用猪IL-15作为分子佐剂并检测其对表达PRRS病毒GP5基因核酸疫苗的免疫增强作用。结果表明,猪IL-15与GP5试验组... 通过分子克隆技术构建了表达猪白细胞介素(IL)-15及猪繁殖呼吸综合症(PRRSV)病毒GP5基因重组核酸疫苗。以小鼠为试验模型,利用猪IL-15作为分子佐剂并检测其对表达PRRS病毒GP5基因核酸疫苗的免疫增强作用。结果表明,猪IL-15与GP5试验组小鼠抗体水平和T淋巴细胞亚群数量均高于PBS对照组及GP5基因单独免疫组,表明猪IL-15对核酸疫苗可有效增强PRRS病毒GP5基因的免疫效果,证实了其佐剂效应。 展开更多
关键词 il-15 PRRSV GP5基因 疫苗
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猪霍乱沙门菌SC500运载TGEVS与猪IL-15融合基因疫苗的稳定性及免疫安全性 被引量:4
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作者 韩国全 郭万柱 +3 位作者 孙志勇 王印 王小玉 林华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期871-877,共7页
为研究猪霍乱沙门菌SC500作为TGEV S与IL-15融合基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15运载体的稳定性与免疫安全性,将外源表达质粒pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15及空载体质粒pCC-neo、pCI-neo转化SC500,采用体外增殖试验研究不同质粒在SC500中... 为研究猪霍乱沙门菌SC500作为TGEV S与IL-15融合基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15运载体的稳定性与免疫安全性,将外源表达质粒pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15及空载体质粒pCC-neo、pCI-neo转化SC500,采用体外增殖试验研究不同质粒在SC500中的稳定性,携带质粒的SC500对ST细胞的黏附率、侵袭力和增殖能力的影响;采用BALB/c小鼠口服免疫试验研究表达质粒在体内的稳定性及SC500对小鼠的安全性。结果显示:外源目的基因影响表达载体在运载体内的稳定性,就载体类型而言,对pCI-neo的影响大于对pCC-neo的影响;携带目的基因的外源质粒影响SC500对ST细胞的黏附率和侵袭率,pCC-neo影响大于pCI-neo;外源质粒影响SC500在小鼠体内的增殖能力,pCC-neo影响大于pCI-neo;SC500在体内的增殖中,其所运载的质粒具有一定的稳定性。结果表明,利用SC500运载基因疫苗pCC-S-IL-15、pCI-S-IL-15免疫小鼠具有相对的稳定性和免疫安全性。 展开更多
关键词 猪霍乱沙门菌 TGEV—S基因 猪白细胞介素15基因 稳定性 免疫安全性
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鸡IL-15基因的分子克隆及其有关特性的研究 被引量:5
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作者 刘胜旺 孔宪刚 +1 位作者 马云燕 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期255-258,共4页
实验应用聚合酶链式反应技术从鸡脾淋巴细胞中克隆得到了白细胞介素_15基因 ,序列分析表明与已发表的鸡白细胞介素_15基因完全一致。核苷酸序列和推导的氨基酸序列与牛的最接近 ,同源性分别为 46 %和 31%。与哺乳动物白细胞介素_15序列... 实验应用聚合酶链式反应技术从鸡脾淋巴细胞中克隆得到了白细胞介素_15基因 ,序列分析表明与已发表的鸡白细胞介素_15基因完全一致。核苷酸序列和推导的氨基酸序列与牛的最接近 ,同源性分别为 46 %和 31%。与哺乳动物白细胞介素_15序列类似 ,有 4个高度保守的半胱氨酸残基。同时本研究也用此方法对鸡脾脏、法氏囊、胸腺、哈德氏腺和盲肠扁桃体等淋巴器官的淋巴细胞中鸡白细胞介素_15mRNA的表达进行了研究 ,结果表明这些器官的淋巴细胞均表达mRNA。本实验还用有丝分裂原ConA对鸡脾淋巴细胞进行活化 ,观察活化的淋巴细胞表达白细胞介素_15mRNA的情况 。 展开更多
关键词 白细胞介素-15 基因克隆 生物学活性
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不同IL-15转染对NCI-H446HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ表达及NK敏感性的影响 被引量:3
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作者 丁军颖 王润田 +5 位作者 张征峥 杨志强 韩志鹏 李铁民 邓郁青 王平 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期468-470,共3页
目的探讨不同形式IL15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCIH446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响。方法在本室已构建的3种细胞模型(转染IL15成熟肽基因的NCIH446/IL15mp细胞、转染原型IL15基因的NCIH446/IL15细胞和转染以... 目的探讨不同形式IL15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCIH446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响。方法在本室已构建的3种细胞模型(转染IL15成熟肽基因的NCIH446/IL15mp细胞、转染原型IL15基因的NCIH446/IL15细胞和转染以IL2信号肽替代IL15信号肽的改型IL15基因的NCIH446/IL2spIL15mp细胞)基础上[1],以野生株细胞为对照,流式细胞分析仪(Fluorescenceactivatedcellsorter,FACS)分析这3种细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定它们对NK杀伤的敏感性。结果野生株NCIH446细胞表面阳性表达HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子;转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因后,这两种分子的表达均被抑制为阴性;转染原型IL15基因后,这两种分子的表达均被显著上调。5名不同健康志愿者的外周血单个核细胞(PBMC)对野生株NCIH446细胞的平均NK杀伤率最低,对NCIH446/IL15、NCIH446/IL15mp和NCIH446/IL2spIL15mp细胞的平均NK杀伤率依次升高。结论转染不同形式IL15基因对NCIH446细胞的免疫生物学特性影响不同。转染IL15成熟肽基因或改型IL15基因,抑制NCIH446细胞表面HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达;转染原型IL15基因,上调这两种分子的表达;转染不同形式IL15基因均可增强NCIH446细胞对NK杀伤的敏感性,但程度不同:以改型IL15者最高,IL15成熟肽者次之,原型IL15者最低。 展开更多
关键词 il-15 基因转染 NCI-H446 HLA-Ⅰ HLA-Ⅱ NK杀伤敏感性
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不同IL-15基因转染对NCI-H446肿瘤细胞增殖的影响 被引量:2
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作者 王智华 王润田 +3 位作者 丁军颖 张征峥 邓郁青 王平 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期639-641,共3页
目的探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖的影响。方法用本室已构建的3种转染不同IL-15基因(原型、成熟肽及以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因)的NCI-H446细胞模型:CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp-IL-... 目的探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖的影响。方法用本室已构建的3种转染不同IL-15基因(原型、成熟肽及以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因)的NCI-H446细胞模型:CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp-IL-15mp,以野生株NCI-H446细胞(CW)为对照,台盼蓝拒染计数法测定细胞生长曲线、MTT法检测细胞增殖、流式细胞术分析细胞周期的变化、RT-PCR法检测cyclinD1和cyclinE的表达。结果与CW相比,CIL-15、CIL-15mp和CIL-2sp-IL-15mp增殖速率依次减慢、G0/G1期细胞比例依次增加、S期细胞和细胞周期蛋白cyclinE表达依次减少、cyclinD1表达无变化。结论3种IL-15基因转染均有使NCI-H446细胞增殖明显减慢的作用,强度依次为改型>成熟肽>原型;这种作用与降低NCI-H446细胞cyclinE的表达有关(r=0.953,P<0.05),与cyclinD1的表达无关(r=0.155,P>0.05)。 展开更多
关键词 il-15 基因转染 NCI-H446 细胞增殖 细胞周期
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