小鼠白细胞介素-3的制备及其检测条件的分析

从小鼠白细胞介素-3(IL-3)分泌细胞株WEHI-3获取了IL-3,同时用小鼠IL-3依赖细胞株32-D检测IL-3和滴定标本中IL-3的活性单位,并对检测条件进行了探索。结果表明,WEHI上清中含高活性IL-3,不含IL-2,其最佳收集条件是5×10~5/ml细胞浓度培养48h。32-D细胞生长依赖于IL-3。检测细胞的浓度、培养时间及同位素加入时间直接影响检测结果,最佳检测条件是(5～10)×10~5/ml细胞浓度、培养36h、终止前12h加~3H-TdR。

鸭RIG-Ⅰ蛋白C端helicase结构域和RD结构域的原核表达及其单克隆抗体的制备

利用PCR技术将鸭维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到p ET30a原核表达载体,构建了重组原核表达质粒p ET30a-c和p ET30a-d,通过转化BL21(DE3)感受态菌、IPTG诱导、镍柱纯化表达蛋白,将纯化的c、d蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体(m Ab),采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验对单克隆抗体进行鉴定分析。获得鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体有14株与原核分段表达的c、d蛋白有良好的反应性,其中3株与真核表达的RIG-Ⅰ蛋白有良好的反应性。制备的鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体为RIG-Ⅰ在抗病毒天然免疫信号转导途径的研究奠定了基础。