纳布啡在尿毒症瘙痒小鼠模型中的作用以及对IL-10和IL-31的影响

目的探讨纳布啡在尿毒症瘙痒小鼠模型中的作用以及对IL-10和IL-31的影响。方法将C57BL/6J小鼠分为3组,分别为对照组、模型组和纳布啡组,每组20只。纳布啡组静脉注射纳布啡0.6 mg/kg,对照组和模型组注射同体积0.9%氯化钠溶液。进行小鼠瘙痒行为学观察;HE染色观察小鼠皮肤病理改变;ELISA法检测血清中IL-10和IL-31;Western blot实验检测组织中IL-10、IL-31、FoxP3、CD80、CD163和iNOS的表达;Real-time PCR检测免疫细胞标志物。结果1~21 d,模型组和纳布啡组小鼠搔抓次数明显高于对照组(P<0.05),第14天和第21天,纳布啡组小鼠搔抓次数显著低于模型组(P<0.05);对照组皮肤组织病例尚未出现炎症细胞因子浸润和皮肤的改变。模型组皮肤组织可见大量炎症细胞,主要为嗜酸性粒细胞、淋巴细胞;与模型组对比,纳布啡组炎症细胞的浸润明显减少;与对照组相比,模型组小鼠血清中和组织中IL-10的表达以及蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,纳布啡组小鼠血清中和组织中IL-10的表达以及蛋白表达显著升高(P<0.05);与对照组相比,模型组小鼠血清中和组织中IL-31的表达以及蛋白表达明显升高(P<0.05);与模型组相比,纳布啡组小鼠血清中和组织中IL-31的表达以及蛋白表达显著降低(P<0.05);对照组、模型组、纳布啡组中FoxP3、CD80和CD163蛋白和mRNA表达对比无显著性差异(P>0.05),与对照组相比,模型组小鼠血清中和组织中iNOS蛋白和mRNA的表达升高(P<0.05);与模型组相比,纳布啡组小鼠血清中和组织中iNOS蛋白和mRNA表达显低(P<0.05)。结论纳布啡对小鼠尿毒症瘙痒有明显的抑制作用,能够增加抗炎IL-10水平,降低IL-31,也能够降低少部分免疫细胞标志物的表达。

人IL-31的克隆表达及对表皮角化细胞的影响

目的克隆人IL-31基因,构建真核表达载体,研究人IL-31对表皮角化细胞HaCaT的影响及其作用机制。方法PMA、PHA刺激正常人外周血单个核细胞,提取细胞总RNA,采用RT-PCR克隆人IL-31基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)A,进行PCR和双酶切鉴定,并进行序列测定。将重组质粒转染CHO细胞,用RT-PCR和Western blot分析rhIL-31在CHO细胞中的表达。用Ni2+树脂纯化his融合蛋白,用不同剂量rhIL-31刺激HaCaT细胞,利用Transwell穿孔板检测HaCaT细胞培养上清对外周血单个核细胞的趋化作用,荧光定量PCR检测rhIL-31对HaCaT表达趋化因子的影响,Western blot检测STAT3磷酸化。结果成功获得全长人IL-31基因,测序正确,经双酶切、PCR和序列测定鉴定,真核表达质粒构建正确,可在CHO细胞中表达;该目的蛋白刺激人表皮角化细胞HaCaT,细胞培养上清对外周血单个核细胞有趋化作用,HaCaT细胞表达趋化因子MDC、TARC、I-309;细胞STAT3磷酸化增加。结论IL-31作用于正常人表皮角化细胞,细胞培养上清对外周血单个核细胞有趋化作用,HaCaT细胞趋化因子表达增加,细胞STAT3磷酸化增加,提示IL-31可通过STAT3发挥作用。

CXCL13、IL-31在原发性肝癌患者血清中的表达及临床意义

目的:检测原发性肝癌(Primary hepatic carcinoma,PHC)患者血清CXCL13、IL-31的表达情况,探讨其对原发性肝癌诊断治疗和预后评估的临床价值。方法:收集78例PHC患者和36例健康体检者血清标本,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CXCL13、IL-31的表达水平,统计软件分析与临床病理特征和实验室指标的关系,Spearman相关分析检验与肝功能预后指标的相关性,ROC曲线分析CXCL13、IL-31、AFP对PHC的诊断价值。结果:PHC患者血清CXCL13表达明显高于对照组(P<0.001),与肿瘤大小、转移、TNM分期密切相关(P<0.05),与Child-pugh评分(Child pugh score)呈正相关;CXCL13联合AFP的ROC曲线下面积为0.938(P<0.05),灵敏度和特异性分别为82.8%、100%,较两种指标单独诊断时明显增高。然而,PHC患者血清IL-31的表达与对照组无显著差异,与临床各项指标均不相关。结论:CXCL13在PHC患者血清中高表达,其表达水平与肿瘤大小、转移、TNM分期密切相关,并未发现IL-31在PHC患者血清中存在表达增高的现象。因此,CXCL13可作为原发性肝癌诊断治疗及预后评估的血清学标志物。

人IL-31基因克隆、表达及在皮肤炎症中的作用

目的克隆人IL-31基因,构建原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达,研究hIL-31蛋白与皮肤炎症的关系。方法采用RT-PCR克隆人IL-31基因,将其克隆到原核表达载体pET28a(+),并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达,用该目的蛋白刺激人表皮角质细胞HaCaT,RT-PCR检测趋化因子MIP-3β、TARC及TCA-3(I-309)mRNA的表达;小鼠皮内注射该目的蛋白,观察局部炎症表现,皮肤标本HE染色观察皮肤炎性特征,采血进行白细胞计数及分类,ELISA法检测血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平,流式细胞仪分析胸腺及脾脏T细胞亚群。结果成功获得495bp的人IL-31基因,原核表达质粒构建正确,IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中大量表达;该目的蛋白可刺激HaCaT表达趋化因子MIP-3β、TARCI、-309;小鼠皮肤注射部位有脱毛,HE染色可见炎性细胞浸润,外周血白细胞总数增加,中性粒细胞比例增高,血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平增高,脾脏CD4+T细胞百分比增高,CD8+T细胞百分比减少。结论人IL-31基因克隆及原核表达已获成功,hIL-31蛋白可刺激HaCaT细胞表达MIP-3β、TARC、I-309,诱导小鼠皮肤炎症反应。

IL-31单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

目的:制备抗人IL-31单克隆抗体,建立ELISA检测体系。方法:采用合成免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗IL-31单克隆抗体,用HRP标记单克隆抗体,ELISA和Western blot法检测抗体的亚类、滴度和特异性;采用ELISA技术制备IL-31检测试剂盒,并对自制试剂盒进行评价。结果:获得了两株稳定产生抗IL-31单克隆抗体的杂交瘤细胞,抗体亚类均为IgG3,抗体特异性好,杂交瘤细胞诱生的腹水抗体效价达106。试剂盒检测灵敏度为5.726 pg/ml,检测IL-1、IL-6、TNF-α、RF的P/N值均小于2.1,为阴性,靶抗原IL-31的检测结果为阳性(P/N值=13.76);自制试剂盒检测特应性皮炎血清IL-31水平为(532.83±90.39)pg/ml,对照组血清IL-31水平为(103.31±19.17)pg/ml,皮炎组明显高于对照组,有显著性差异(P<0.001)。结论:成功制备了抗IL-31单克隆抗体,建立的ELISA试剂盒可用于临床检测IL-31。

变应性鼻炎患者血清IL-12及IL-31水平测定及其临床意义

目的探讨变应性鼻炎患者血清IL-12及IL-31水平及其临床意义。方法变应性鼻炎患者按照体外检测血清中抗体常规加入吸入性过敏原特异性抗体Ig E(s Ig E)抗体检测结果分为阳性组和阴性组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测164例变应性鼻炎患者和82例健康对照组血清中IL-12及IL-31水平。特异性Ig E测定采用德国欧盟优敏系列(EUROALLER)检测系统。结果变应性鼻炎特异性Ig E阳性组、阴性组的血清IL-12及IL-31检测结果分别为:23.8±9.1、19.1±7.9和27.9±9.4;22.8±6.7;对照组的血清IL-12及IL-31检测结果分别为:11.3±4.8、14.9±7.5;与对照组相比IL-12、IL-31均有统计学意义(P<0.05)。变应性鼻炎特异性Ig E阳性组亚组中,螨虫过敏组的血清Il-12水平最高,其次为蟑螂过敏组等;与对照组相比,螨虫过敏组与蟑螂过敏组均有显著性差异(P<0.05);变应性鼻炎特异性Ig E阳性组的血清IL-31水平与对照组相比均有显著性差异(P<0.05)。结论免疫因子IL-12及IL-31可能参与变应性鼻炎的发病过程,环境中的螨虫与蟑螂是变应性鼻炎的主要诱因。

妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇血清及胎盘中IL-8、IL-31水平及其临床意义

目的:研究妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepatic cholestasis of pregnancy,ICP)孕妇血清及胎盘中白介素-8(IL-8)、白介素-31(IL-31)表达水平及其临床意义。方法:选择妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇22例作为ICP组,健康孕妇20例作为对照组,采用酶联免疫吸附法检测血清中IL-8、IL-31水平,免疫组织化学法检测胎盘组织中IL-8、IL-31的表达。结果:ICP组血清中IL-8和IL-31水平分别为1404.81±278.53 pg/mL和619.75±20.13 pg/mL,显著高于对照组的648.68±91.44 pg/mL和515.21±10.66 pg/mL,差异均有统计学意义(P<0.05)。ICP组胎盘组织中IL-8、IL-31表达强度明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:ICP组患者血清和胎盘组织中IL-8和IL-31表达明显升高,提示炎症参与ICP的发生,IL-31可能与ICP瘙痒症状的发生有关。

IL-31重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建并鉴定人白细胞介素31(IL-31)重组腺病毒Ad-IL-31,为下一步IL-31功能研究奠定基础。方法以pGEM-T-IL-31为模板扩增IL-31基因,将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,PmeⅠ线性化后与腺病毒骨架质粒共转化BJ5183细菌,获得重组腺病毒质粒pAd-IL-31,经PacⅠ线性化后转染QBI-293A细胞,荧光显微镜下观察细胞内荧光,测定病毒效价,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(westernblot)分析细胞内IL-31信使核糖核酸(mRNA)和蛋白质的表达。结果经双酶切及基因扩增仪鉴定,重组穿梭质粒和重组腺病毒质粒均见500bp插入片段,测序结果和基因库中的基因序列一致;重组病毒效价为2.6×108pfu/ml;重组病毒感染后,QBI-293A细胞中有IL-31mRNA和蛋白质表达。结论成功构建IL-31重组腺病毒载体,并在QBI-293A细胞中表达,为进一步研究IL-31的功能奠定了基础。

寻常型银屑病患者血清IL-21及IL-31的表达及临床意义

目的观察寻常型银屑病患者中血清IL-21及IL-31的表达及其临床意义。方法选取40例寻常型银屑病患者作为观察组(其中进展组21例,稳定组19例)及40例健康体检者作为对照组,观察对比2组血清中IL-21及IL-31的表达水平及变化趋向,观察组中IL-21及IL-31与银屑病PASI评分的相关性。结果观察组中寻常型银屑病患者血清IL-21、IL-31表达水平明显高于正常对照组;且观察组中的进展组IL-21、IL-31明显比稳定组高(P均<0.05)。寻常型银屑病患者中IL-21、IL-31表达水平与患者PASI评分值呈正相关。结论寻常性银屑病患者血清IL-21及IL-31水平上升且进展组明显高于比稳定组,说明IL-21、IL-31可能参与了寻常型银屑病的发病,且在炎症反应显著时表达增高。患者IL-21、IL-31表达水平与PASI评分呈正相关,可将其作为反映评价寻常型银屑病严重程度的指标。

IL-31在哮喘患者的表达水平及其与疾病严重程度的相关性研究

目的探讨IL-31在哮喘患者血清、支气管肺泡灌洗液以及支气管组织的表达水平及其与哮喘严重程度的相关性。方法应用荧光酶联免疫法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定支气管哮喘患者和健康者血清、支气管肺泡灌洗液以及支气管组织IL-5、IL-13、IL-31以及总IgE的表达水平。结果 (1)支气管哮喘患者血清及支气管肺泡灌洗液IL-31的表达水平明显高于健康者,差异具有显著性(P<0.05);(2)重度哮喘患者支气管组织IL-31的表达水平明显高于中度和轻度患者,差异具有显著性(P<0.05);(3)哮喘血清IL-31的表达水平与IL-5、IL-13、总IgE具有显著正相关,相关系数分别为0.457、0.659、0.783;与第一秒用力呼吸容量(FEV_1)具有显著负相关(r=-0.983,P=0.012);与外周血嗜酸性粒细胞百分比无显著相关性(r=0.756,P=0.087)。结论哮喘患者不同组织的IL-31表达水平能够反映疾病的严重程度,可作为临床监测哮喘的生物指标。

IL-31及其受体研究进展

IL-31是一种最近被发现的细胞因子,主要由活化的Th2细胞产生。其功能受体是由IL-31R和OSMR两个亚基组成的异源二聚体复合物。上皮细胞和角质化细胞能组成性地表达这两种受体亚基,而单核细胞只有在活化状态下才能表达。IL-31通过其受体可以激活JAK-STAT、MAPK和P13K/Akt三条信号通路,在皮炎等疾病中发挥作用,同时还具有调节抗原递呈、造血作用、细胞增殖及迁移,诱导趋化因子表达等生物学活性。

Hebra痒疹患儿血清IL-31水平检测及临床意义

目的探讨IL-31在Hebra痒疹发病中所起的作用及其与瘙痒程度的关系。方法选取2011年9月至2014年9月在宜宾市第二人民医院皮肤科就诊的42例Hebra痒疹患儿为实验组,同期儿保体检的38例健康儿童为对照组,运用酶联免疫吸附法(ELASA)对两组受检者的血清IL-31水平进行检测,并对实验组进行s Ig E检测及皮肤瘙痒程度的视觉模拟评分(VAS评分)。结果 Hebra痒疹患儿血清IL-31水平为(28.21±10.46)pg/m L,明显高于正常对照组的(16.75±9.53)pg/m L,差异有统计学意义(P<0.05);Hebra痒疹患儿中s Ig E(+)组和s Ig E(-)组的血清IL-31水平分别为(29.43±8.65)pg/m L、(26.79±9.14)pg/m L,s Ig E(+)组血清IL-31水平虽高于s Ig E(-)组,但差异无统计学意义(P>0.05)。此外,Hebra痒疹患儿血清IL-31水平与瘙痒评分呈正相关关系(r=0.515,r=0.327,P<0.05)。结论 Hebra痒疹患儿血清IL-31水平增高,可能参与发病过程,并与瘙痒程度相关。

重组人IL-31蛋白纯化方法的比较研究

目的比较两种方法纯化rhIL-31的效果。方法将含pET32a/rhIL-31的重组菌E.coli.BL21(DE3)经IPTG诱导表达,通过超声波破碎,包涵体的提取溶解,分别经G75凝胶层析和镍琼脂糖凝胶FF层析进行蛋白纯化,通过SDS-PAGE对纯化结果进行比较分析。结果镍琼脂糖凝胶FF层析法的杂蛋白去除率高于凝胶层析法,所得蛋白纯度略高。结论比较重组人IL-31蛋白的纯化效果,镍琼脂糖凝胶FF层析的效果比G75凝胶层析的效果好。

IL-31与儿童支气管哮喘的关系研究

支气管哮喘是多种细胞和细胞成分共同参与的慢性气道炎症性疾病,也是儿童期最常见的慢性呼吸系统疾病。细胞因子特别是白细胞介素在哮喘气道炎症中发挥重要的作用,同时研究发现特应质与哮喘密切相关;IL-31是2004年发现的细胞因子,由CD4+Th2细胞产生,通过与IL-31RA与OSMR(Oncostatin M receptorβ)形成的异二聚体结合,参与多种炎症反应和过敏性疾病的发生发展。前期研究显示,IL-31受体在支气管哮喘小鼠肺组织和支气管的脱落细胞上表达明显增高,表明IL-31在支气管哮喘发病中可能发挥重要的作用;IL-31的发现对支气管哮喘气道炎症发生、发展机制的完善作用大,为哮喘病的免疫治疗提供新的靶点。

IL-31通过调控TGF-β1/Smad4信号通路促进骨质疏松的机制研究

目的:探讨IL-31在促进骨质疏松过程中的作用及其机制。方法:选取本院2015年1月至2016年12月收治的100例骨质疏松患者为研究对象,并按性别、年龄匹配100例无骨质疏松的健康体检人群作为对照组,检测两组血清IL-31水平差异。构建C57BL/6J基因背景的IL-31敲除小鼠,将C57BL/6J小鼠(野生型小鼠)、IL-31敲除小鼠分别设置假手术(Sham)组和卵巢切除术(OVX)组各15只。手术8周后,检测小鼠血清中血钙、血磷水平和碱性磷酸酶水平(ALP);同时取小鼠的双侧股骨进行病理切片分析股骨组织形态结构、取脊柱进行骨密度仪检测脊柱骨密度变化。分离培养小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)并检测体外增殖能力和TGF-β1、Smad4和p-Smad4蛋白表达。通过IL-31特异性shRNA转染小鼠成骨细胞MC3T3-E1以敲低IL-31的表达,并检测MC3T3-E1细胞增殖、凋亡和蛋白改变。结果:骨质疏松患者血清中IL-31水平显著高于对照组、重度骨质疏松患者的IL-31水平高于轻度骨质疏松患者(P<0. 05)。接受OVX手术的野生型小鼠、IL-31敲除小鼠血清中血钙和血磷显著高于假手术组,而ALP水平显著低于假手术组(P<0. 05),但接受OVX手术的IL-31敲除小鼠组血钙和血磷则显著低于接受OVX手术的野生型小鼠(P<0. 05)。股骨病理切片及脊柱骨密度结果显示,接受OVX手术的野生型小鼠、IL-31敲除小鼠均出现组织形态结构的破坏和骨密度下降,但IL-31敲除小鼠骨组织结构和骨密度优于野生型小鼠。接受OVX手术的IL-31敲除小鼠BMSCs增殖能力显著高于接受OVX手术的野生型小鼠,而TGF-β1、p-Smad4蛋白水平则显著高于接受OVX手术的野生型小鼠(P<0. 05)。MC3T3-E1细胞转染IL-31 shRNA后能明显反向激活TGF-β1、p-Smad4表达,促进MC3T3-E1细胞的增殖并抑制凋亡。结论:骨质疏松患者血清IL-31水平显著升高,IL-31可能是通过调控TGF-β1/Smad4信号通路抑制BMSCs增殖、促进成骨细胞的凋亡,从而促进骨质疏松的进展。

血清维生素D、IL-31和hs- CRP水平与哮喘严重程度的相关性研究

目的探讨血清维生素D、IL-31和超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平与哮喘病严重程度的相关性研究。方法实验组选取2017年6月至2018年6月来我院就诊的96例哮喘患儿作为本研究实验组,根据美国胸科学会(ATS)指导方针将哮喘患儿分为轻度组(42例)、中度组(29例)和重度组(25例),选取同期健康体检儿童30例为对照组,采用酶联免疫吸附法测定IL-31、化学发光法测定25-(OH)D3和散射比浊法测定hs-CRP水平。结果实验组患儿血清IL-31和hs-CRP水平均明显高于对照组,25-(OH)D3水平明显低于对照组(P<0.05);重度组患儿血清IL-31和hs-CRP水平均明显高于中度组和轻度组,25-(OH)D3水平明显低于中度组和轻度组(P<0.05);中度组患儿血清IL-31和hs-CRP水平均明显高于轻度组,25-(OH)D3水平明显低于轻度组(P<0.05);IL-31水平与哮喘严重程度呈正相关(r=0.775,P<0.05);25-(OH)D3水平与哮喘严重程度呈负相关(r=-0.827,P<0.05);hs-CRP水平与哮喘严重程度呈正相关(r=0.915,P<0.05)。结论哮喘患者血清维生素D、IL-31和hs-CRP水平能够反映哮喘的严重程度,可作为监测哮喘病情的指标。

慢性荨麻疹患者血清IL-31水平测定及其临床意义

目的:探讨慢性荨麻疹(chronic urticaria,CU)患者血清中白介素(IL)-31水平及其临床意义。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测64例CU患者(其中sIgE阳性和阴性各32例)和32例正常人对照组血清中IL-31水平。结果:CU sIgE(+)组血清IL-31水平均值为(18.8±9.1)ng/L,slgE(-)组为(19.1±7.9)ng/L,分别与正常人对照组比较[(12.9±5.8)ng/L],二组间差异均有统计学意义(P<0.01);CU slgE(+)组中,14例螨虫过敏组患者的IL-31水平均值为(21.4±6.3)ng/L,高于正常人对照组(P<0.05)。结论:CU患者体内IL-31水平升高,可能参与CU发病过程。

IL-31在结核性胸腔积液中的表达情况及其诊断价值

目的观察IL-31在结核性胸腔积液中的表达情况以及诊断价值进行探讨。方法选择在我科进行胸腔积液检查治疗且病例完整的患者共计89例进行研究,对患者使用标准胸腔穿刺术抽取胸水,进行IL-31测定,观察结核性胸腔积液和非结核性胸腔积液中IL-31、低密度脂蛋白(LDH)、腺苷脱氢酶(ADA)的浓度比较,观察结核性胸腔积液和类肺性胸腔积液、恶性胸腔积液、心源性胸腔积液患者之间的IL-31、LDH、ADA浓度差异。使用ROC曲线分析方法判断IL-31在结核性胸腔积液中的诊断价值。结果检查发现结核性胸腔积液的IL-31、LDH、ADA浓度均明显高于非结核性胸腔积液(P<0.05)。分别于类肺性胸腔积液、恶性胸腔积液、心源性胸腔积液患者之间的IL-31、LDH、ADA浓度进行比较后发现结核性胸腔积液的各项数值均明显增高(P<0.05)。结核性胸腔积液诊断的敏感度为82.5%,特异度为100.0%。IL-31对胸腔积液的表达准确性为89.2%。结论 IL-31在结核性胸腔积液中的表达明显升高,具有显著的诊断价值。

IL-31对小鼠肺泡上皮细胞趋化因子表达的影响

目的体外分离培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,探讨IL-31对肺泡上皮细胞表达趋化因子的影响。方法酶消化法分离及免疫吸附法纯化小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,透射电子显微镜观察细胞形态及结构,免疫荧光技术检测细胞SP-A的表达。用100 ng/ml IL-31作用小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞24 h后提取细胞RNA,PCR芯片检测小鼠肺泡上皮细胞趋化因子及其受体的表达。结果透射电镜观察发现细胞内存在板层小体,呈同心圆状或平行排列;激光共聚焦显微镜观察可见细胞内有黄绿色荧光;小鼠肺泡上皮细胞经100 ng/ml IL-31作用24 h后,基因芯片检测细胞中表达上调的趋化因子和细胞因子基因11个、受体基因8个。结论成功分离培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,IL-31可诱导肺泡上皮细胞表达趋化因子,表明IL-31可通过诱导趋化因子参与气道炎症反应。

重组hIL-31抗体制备及其拮抗皮肤炎症的研究

目的:高效表达重组hIL-31制备IL-31抗体,探讨IL-31抗体拮抗皮肤炎症的作用,为研发IL-31抗体治疗性新药奠定基础。方法:①培养工程菌、IPTG诱导、菌体、超声破碎,用镍NTA柱纯化重组蛋白。②重组hIL-31蛋白溶液加佐剂免疫家兔,制备兔抗IL-31多克隆抗体。③将IL-31抗体分为3个剂量,经皮下注射和皮肤直接涂抹的途径,对已经致皮肤炎症的BALB/c小鼠治疗7d,治疗后3d取治疗部位皮肤作石蜡切片进行HE染色观察组织学变化,并检测血清中IL-6、IL-8、L选择素和MIP-3β等细胞因子的变化。结果:①SDS-PAGE电泳证实获得了高纯度的纯化人IL-31蛋白。②用重组hIL-31蛋白疫苗免疫家兔,在免疫后4周抗体滴度达到高峰,经ELISA法测血清抗体滴度为1∶15000～1∶20000,双扩滴度为1∶16。Western blot结果重组IL-31蛋白能与抗IL-31抗体特异性结合。③小鼠皮肤组织切片HE染色显示,治疗组皮下和皮内均有炎症细胞浸润,呈现剂量依赖性趋势。④血清中炎性因子ELISA检测,涂抹组和注射组小鼠血清中IL-6、IL-8、MIP-3β均明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:①获得稳定表达的重组人IL-31蛋白,以此作为免疫原免疫家兔,诱导分泌高滴度的IL-31抗体。②IL-31抗体使皮肤炎症中炎性细胞减少,血清中炎症相关细胞因子明显降低。