编码IL-7的溶瘤疱疹病毒通过激活CD8^(+)T细胞增强对肝癌的杀伤活性

目的:探究分泌IL-7的溶瘤疱疹病毒(HSV)是否可以通过激活CD8^(+)T细胞抑制肝癌生长。方法:Western blot检测IL-7表达情况;结晶紫染色法检测溶瘤病毒HSV以及HSV-IL-7对肿瘤细胞的体外裂解情况;皮下移植瘤模型检测HSV以及HSV-IL-7对肿瘤的抑制能力;ELISA法检测血清以及肿瘤组织中IL-7、IFN-γ、TNF-α含量;免疫组化法检测肿瘤组织中CD8^(+)T细胞的浸润情况;流式细胞术检测肿瘤浸润CD8^(+)T细胞Granzyme B的分泌水平。结果:HSV-IL-7感染的肿瘤细胞均高表达IL-7;HSV以及HSV-IL-7在体外均可以有效裂解B16-F10、CT-26以及H22肿瘤细胞系,且具有剂量依赖性;HSV-IL-7可以显著抑制H22肝癌细胞的体内生长(P<0.01),延长荷瘤小鼠的生存期(P<0.001);HSV-IL-7可以显著提高肿瘤部位IL-7的含量(P<0.0001),同时有效增加肿瘤浸润CD8^(+)T细胞的数目(P<0.001);HSV-IL-7可以显著增强肿瘤浸润CD8^(+)T细胞分泌Gran-zyme B的能力以及增加肿瘤组织中IFN-γ和TNF-α含量(P<0.0001)。结论:HSV-IL-7在体内外均具有良好的肿瘤抑制活性,同时其可以通过分泌IL-7,激活体内CD8^(+)T细胞的抗肿瘤性,从而进一步抑制肿瘤生长并延长荷瘤小鼠的生存期。

IL-2、IL-7和IL-15联合对T细胞的体外扩增效应

为了建立一种快速有效的体外T细胞扩增方法,本研究比较了不同培养条件对T细胞增殖及其功能和特性的影响。取外周血T细胞,用自体的树突状细胞(DC)和EB病毒转化的B细胞进行周期性刺激,用细胞增殖试验、PI和AnnexinV双标记流式细胞术、Cr释放测定及ELISPOT试验分别测定不同培养条件下细胞的增殖程度、IFN-γ分泌细胞的频率、抗原特异性T细胞的杀伤活力、细胞的凋亡状态和分化能力。结果显示:T细胞在周期性刺激后,用CD3/28微珠的短期扩增效应最好,但多轮刺激后联合应用IL-2,IL-7和IL-15对细胞的扩增最强。Cr释放试验表明,CD3/28微珠扩增的T细胞不具有杀伤活力,高浓度IL-2诱导的T细胞杀伤活性最强,其次为联合应用IL-2,IL-7和IL-15。ELISPOT显示不同培养条件诱导出的分泌IFN-γ的T细胞频率从高到低依此为高浓度IL-2>联合应用IL-2,IL-7和Il-15>低浓度的IL-2>CD3/28微珠。细胞表型分析显示高浓度IL-2和联合应用IL-2,IL-7和Il-15扩增的细胞含有较高比例的CD3+CD8+T细胞。对细胞的凋亡测定表明联合应用IL-2,IL-7和IL-15获得的T细胞的存活率最高,处于凋亡早期的细胞比例最低。细胞增殖试验显示联合应用IL-2,IL-7和IL-15扩增的细胞分化能力最强。结论:本研究建立了一种快速有效地体外扩增T细胞的方法,其中联合应用IL-2,IL-7和IL-15对T细胞的扩增最显著,获得的T细胞存活率最高,分化能力最强,该细胞同时也含有较高频率的IFN-γ分泌细胞且表现出较强的杀伤活力。

GABA对热应激雏鸡小肠黏膜中IL-IL-7和sIgA含量的影响

为探究Y-氨基丁酸（GABA）对热应激雏鸡小肠黏膜中IL-7和slgA含量的影响，选择体重相近的1日龄文昌雏公鸡，随机分为对照（CK）组、热应激（HS）组、50mg／kgGABA（G50＋HS）组和100mg／kgGABA（G100＋HS）组，每组36只，每天13：00～15：00将HS组、（G50＋HS）组和（G100＋HS）组置于（40＋0．5）℃人工气候箱中进行热处理，利用ELISA法测定不同周龄雏鸡小肠黏膜液中IL-7和sIgA含量。结果：HS组的十二指肠、空肠及回肠中1L-7和sIn含量显著低于CK组（P〈0．05）；（G50＋HS）组和（G100＋HS）组十二指肠、空肠及回肠中IL-7和sIgA含量显著高于HS组（P〈0．05）；（G100＋HS）组部分肠段中的IL-7和slgA含量与（G50＋HS）组比较有显著差异（P〈0．05）。研究结果表明GABA对热应激造成的肠道损伤具有一定修复作用，能够有效提高热应激状态下雏鸡小肠黏膜的免疫功能，但其保护作用并不与浓度呈正比。

鲑鱼鱼白DNA对老龄小鼠胸腺细胞IL-7 mRNA和CD127表达的影响

目的 探讨外源性核酸对自然衰老小鼠胸腺细胞IL 7mRNA和CD12 7(IL 7受体 )表达的影响。方法 10月龄雌性Balb c小鼠按体质量随机分为高剂量组 (每日灌胃 333.33mg·kg- 1 ·d- 1 鲑鱼鱼白DNA)、低剂量组 (每日灌胃 16 6 .6 7mg·kg- 1 ·d- 1 鲑鱼鱼白DNA)和对照组 ( 0 .1mol L的柠檬酸钠 )。 5周后测定胸腺脏器指数 ;原位杂交法检测胸腺内IL 7mRNA的表达 ,并用Image proPlus专业图像分析系统 ( 4 .0版 )对其表达面积百分比进行分析 ;间接免疫荧光流式细胞术检测老龄小鼠胸腺细胞CD12 7的表达。结果 鲑鱼鱼白DNA提取物对小鼠的体质量、胸腺质量和胸腺指数均没有影响 ,但高剂量SMD补充组可显著增加胸腺细胞IL 7mRNA表达和CD12 7淋巴细胞的数量 (分别P <0 .0 5 )。结论 补充鲑鱼鱼白DNA可能促进IL 7的产生及其受体的表达 ,从而延缓Balb

血管生成抑制素和IL-7联合治疗的肿瘤抑制效应

目的 探讨采用裸质粒DNA肿瘤内直接注射入方法 ,以观察血管生成抑制素 (Angiostatin) ,和IL 7联合治疗肿瘤的可行性 ,及其可能机制。方法 将构建的血管生成抑制素、IL 7基因真核表达质粒 (每次 10 0 μg/只 ) ,分别或联合注射到接种U14肿瘤细胞 5天后的荷瘤鼠体内 ,以后每隔 7天注射一次 ,共三次。观察荷瘤鼠的存活率、肿块生长情况、以及小鼠整体免疫功能 ,并对肿瘤对照组与联合基因治疗组的肿瘤组织进行病理学及细胞凋亡分析。结果 血管生成抑制素、IL 7、以及两者联合治疗均可不同程度地增加荷瘤鼠的存活率、抑制肿瘤生长和转移、调节免疫功能 ,以联合基因治疗组更显著。病理分析表明联合治疗组肿瘤血管形成显著减少 ,基底部有大量的淋巴细胞浸润 ,肿瘤细胞的凋亡率明显升高。结论 直接裸质粒DNA注射血管生成抑制素和IL 7基因可能成为一种方便、有效的肿瘤治疗方法。

HIV感染者血清IL-1α、IL-7、IL-12和IL-15水平的变化及意义

目的:观察HIV感染者血清IL-1α、IL-7、IL-12和IL-15水平的变化。方法:采用ELISA法检测20例HIV感染者及20例健康体检者血清IL-1α、IL-7、IL-12和IL-15水平。结果:HIV感染者血清IL-1α、IL-7、IL-15水平显著高于正常对照组(P均<0.01),IL-12水平显著低于正常对照组(P<0.01)。结论:HIV感染者血清IL-1α、IL-7、IL-12和IL-15水平发生明显变化,可用于HIV感染者病情的评估和预后判断。

细胞因子IL-7与IL-15联合优化胃癌EBV特异性CTL细胞培养体系

目的:探讨细胞因子白细胞介素-7(IL-7)和IL-15在胃癌EB病毒(EBV)抗原特异性细胞毒性T细胞(CTLs)培养中较IL-2的优势。方法:提取胃癌患者外周血单个核细胞贴壁培养2 h,贴壁细胞加IL-4和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导树突状细胞(DC),成熟的DC负载EBV抗原肽与T细胞混合培养,诱导EBV-CTLs,比较在细胞因子IL-2或IL-7/15培养条件下诱导的EBV-CTLs的扩增能力、表型、免疫应答及体外杀伤能力的差别。结果:与细胞因子IL-2相比较,IL-7联合IL-15培养的EBV-CTLs细胞中含有较高比例的CD3^+T细胞[(91. 2±1. 5)%vs (80. 8±1. 6)%,P=0. 008 4]以及较高比例的CD3^+CD8^+T细胞[(66. 8±2. 3)%vs (30. 17±6. 9)%,P=0. 007 6];在维持中央记忆性T细胞扩增方面,IL-7联合IL-15扩增的EBV-CTLs细胞中含有较高比例的CD8^+CD62L^+T细胞[(26. 4±2. 3)%vs(9. 6±1. 4)%,P=0. 003 6]及CD8^+CD27^+T细胞[(38. 5±3. 7)%vs (16. 7±2. 9)%,P=0. 01];在免疫应答能力方面,接触DC负载抗原肽24 h后,IL-7联合IL-15培养的EBV-CTLs能分泌更多的γ干扰素(IFN-γ),且CD137上调明显高于IL-2组;在体外杀伤实验中,IL-7联合IL-15诱导的EBV-CTLs对表达EBV抗原的靶细胞表现出更强的杀伤作用。结论:IL-7联合IL-15在扩增胃癌抗原特异性EBV-CTLs方面具有优势,扩增的细胞中含有较高比例的CD3^+CD8^+T细胞,且能维持中央记忆性T细胞的扩增,表现出有更强的免疫应答和体外抗肿瘤效果,为其进一步临床个体化治疗EBV阳性胃癌提供客观实验依据。

bcr-abl融合基因片段和m IL-7基因双表达载体的构建与表达

利用重组DNA技术构建bcr-ab l融合基因片段和m IL-7基因双表达载体pV bcr-ab l/m IL 7,转染CHO细胞,通过IFA检测bcr-ab l融合基因片段和RT-PCR检测m IL-7基因,以探讨基因的双表达情况。结果表明:成功构建了双表达载体pV bcr-ab l/m IL 7,并检测到bcr-ab l和m IL-7在真核细胞的暂态表达,这为慢性粒细胞白血病bcr-ab l融合基因疫苗的研究提供了新的工具。

中国HIV感染长期不进展者T细胞表面IL-7受体表达研究

目的:了解中国HIV感染长期不进展者(Long-Term Non-Progressor,LTNP)T细胞表面IL-7(Interleukin-7,IL-7)受体的表达,分析其与疾病进展的关系。方法:收集LTNP组、HIV组、AIDS组及健康对照组(每组各20例)的抗凝全血,用流式细胞仪检测IL-7受体的表达,并分析IL-7受体表达与血浆中IL-7水平的相关性。结果:LTNP组CD4+T、CD8+T、中枢记忆T细胞(Central memory T cells,Tcm)、效应记忆性T细胞(Effector memory T cells,Tem)表面IL-7受体表达水平明显高于无症状HIV感染组(HIV组)、AIDS病人组(AIDS组)(P<0.05),LTNP组初始T细胞(Na ve T cells,Na ve)、终末分化效应记忆型T细胞(Terminallydifferentiated effector memory T cells,Tem/td)表面IL-7受体表达水平与HIV组、AIDS组间差异无统计学意义。HIV/AIDS患者IL-7受体在CD4+T和CD8+T细胞上表达的百分率与血浆IL-7水平呈明显负相关(P<0.05),与CD4+T细胞数量呈明显的正相关(P<0.05),与病毒载量呈明显负相关(P<0.05)。结论:外周血T细胞表面IL-7受体表达与HIV疾病进展密切相关,LTNP组T细胞保持较高水平的IL-7受体表达,可能是保护因素之一。

慢性HBV感染者外周血T细胞CD127的表达与IL-7及HBV载量的相关性

目的通过检测HBV感染者外周血T淋巴细胞表面CD127(IL-7受体)的表达,探讨其与HBV载量及疾病进程的相关性。方法选取125名HBV感染者及40名健康人对照,用流式细胞术检测外周血T细胞表面CD127的表达,ELISA法检测血浆IL-7浓度,实时荧光定量PCR法检测HBV DNA并进行分析。结果HBV感染者外周血CD4+、CD8+T淋巴细胞表面CD127的表达分别为(84.59±5.69)%和(38.45±3.03)%,其中CD8+T淋巴细胞表面CD127的表达明显低于健康对照组(P<0.01);慢性乙肝组外周血CD8+T淋巴细胞表面CD127的表达明显高于慢性重型乙肝组(P<0.05);HBV感染者血浆中IL-7水平明显高于健康对照组,且与CD8+T淋巴细胞表面CD127的表达呈负相关(r=-0.341,P<0.05);HBV病毒载量的对数值与外周血T淋巴细胞表面CD127的表达之间存在负相关(r=-0.432,P<0.01)。结论HBV感染者外周血T淋巴细胞表面CD127的表达水平与疾病进展明显相关。

IL-7对胸腺T细胞及树突状细胞体外分化发育的影响

目的:探讨IL-7对胸腺T细胞及胸腺树突状细胞分化的影响。方法:摘取15～16日龄胎鼠胸腺进行体外器官培养(胚胎胸腺器官培养-FTOC),分别将细胞因子IL-7和培养基滴加在胸腺小叶上,12天后收集不同条件下经FTOC培养获得的胸腺细胞,流式细胞仪检测细胞表面分子CD4、CD8、CD11c、B220、Ia等的表达,通过光学显微镜观察细胞形态,通过细胞计数检测细胞数目的变化。再将经FTOC培养获得的胸腺细胞和异源的T细胞进行混合淋巴细胞反应,通过MTT法检测T细胞的增殖情况。结果:细胞计数结果表明添加外源性IL-7组的胸腺细胞数目明显减少,流式细胞仪检测结果显示其中胸腺CD4-CD8-双阴性细胞及CD8+单阳性细胞比例有所增加,而CD4+CD8+双阳性细胞比例显著下降,CD4+单阳性细胞比例没有明显变化;此外,B细胞和树突状细胞、NK细胞数量均有不同程度的增加。结论:IL-7在胸腺T细胞及胸腺树突状细胞的分化发育中发挥重要的调节作用。

联合应用IL-2和IL-7对T细胞体外增殖及功能的增强效应

本文研究了联合应用IL-2和IL-7在体外T细胞培养系统中对小鼠T细胞生长及功能的调节作用。结果表明:单独使用IL-2或IL-7均能增强T细胞对ConA或特异性抗原刺激诱导的增殖反应,但联合使用IL-2和IL-7具有更加显著的协同刺激作用。C57BL/6小鼠抗FBL-3肿瘤特异性T细胞系在IL-2与IL-7联合培养系统中,不但T细胞数量明显增加,且能在保持特异性功能的同时,延长T细胞体外抗原刺激周期。此外,这一细胞因子的组合方案,可大大降低IL-2的应用剂量,避免大剂量IL-2临床应用时所产生的副作用。

大黄素抗大鼠肺纤维化实验及对IL-7的影响

目的:研究大黄素抗肺纤维化的效果及可能的作用机制。方法:选用健康Wistar大鼠60只,随机分为空白组、模型组、强的松组、大黄素高、中、低剂量组,采用博莱霉素气管内吹入法,制备肺纤维化模型,于实验第29天抽取血清后,处死大鼠,留取肺组织,进行肺湿重、羟脯氨酸(HYP)、病理切片及白介素-7(IL-7)等相关指标检测。结果:从肺系数、肺组织HYP含量I、L-7及病理检查等方面显示,大黄素的中、低剂量组能够减轻大鼠肺纤维化程度(P<0.05)。结论:大黄素对大鼠肺纤维化有治疗作用,其作用机制可能与IL-7相关。

RA患者IL-7检测及其临床意义的初步探讨

目的探索血清IL-7对RA诊断、病情活动性评估和预后判断的意义。方法用ELISA法检测42例RA患者以及20例健康体检者血清IL-7浓度,比较各组间差异;并与临床资料及实验室检查进行相关性分析。结果重度活动期RA患者血清IL-7浓度明显高于低-中度活动期RA患者(P=0.013)和健康对照组(P=0.001),而低-中度活动期RA患者组对比健康对照组差异无统计学意义(P=0.352);且与ESR、CRP呈正相关。结论 IL-7以≥1.72 pg/ml为阳性,对判断RA活动性有较高的特异性及敏感性,有可能成为RA病情活动度的指标。

IL-7介导的JAK/STAT信号通路在白藜芦醇抗急性T淋巴细胞白血病中的作用研究

目的:观察T-ALL细胞株和小鼠模型中IL-7及JAK/STAT通路中信号分子的变化,探讨白藜芦醇抗T-ALL的作用机制。方法:将T-ALL细胞株Molt4分成对照、DMSO处理和白藜芦醇处理(Res)共3组,其中对照组不做任何处理,DMSO组用0.05%DMSO处理48 h,Res组用200μmol/L白藜芦醇处理48 h。将15只6-8周龄健康雌性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照、T-ALL模型(T-ALL)和白藜芦醇处理(Res)共3组,其中对照和T-ALL组均以0.05%DMSO灌胃处理,Res组以10 mg/ml白藜芦醇灌胃处理。采用RT-qPCR法检测各组细胞和小鼠脾脏组织中IL-7、IL-7R及靶基因Pim1 mRNA的表达,CCK-8法检测细胞的增殖情况,Western blot检测各组细胞和小鼠脾脏组织JAK1、JAK3、STAT5、Pim1及磷酸化JAK1(p-JAK1)、磷酸化JAK3(p-JAK3)、磷酸化STAT5(p-STAT5)的蛋白表达,ELISA法检测各组细胞和小鼠血清中IL-7、IL-7R水平。结果:Res抑制Molt4细胞增殖,下调Molt4细胞及T-ALL小鼠脾脏中p-JAK1、p-JAK3、p-STAT5、Pim1蛋白相对表达量以及Pim1、IL-7、IL-7R mRNA的表达水平,降低Molt4细胞及T-ALL小鼠血清中IL-7、IL-7R的水平(P<0.05)。结论:白藜芦醇可能通过下调IL-7和IL-7R的表达水平,抑制其介导的JAK/STAT信号通路,进而降低靶蛋白Pim1表达发挥抗T-ALL的作用。

小鼠促进骨髓抑制恢复相关因子IL-7基因的识别与克隆

目的寻找促进骨髓抑制恢复的相关细胞因子,进行骨髓抑制时基因表达差异分析,并对表达上调较大的细胞因子进行克隆验证。方法尾静脉注射5-Fu构建小鼠骨髓抑制模型,运用基因芯片方法分析正常小鼠与骨髓抑制模型第0,3,7,11,14天的基因表达差异,针对表达上调较大的鼠IL-7基因设计引物,以RT-PCR克隆其编码序列,并构建phCMV/IL-7真核表达载体。结果得到一组符合促进骨髓抑制恢复细胞因子特点的基因,其中细胞因子IL-7表达量升高30倍。结论IL-7符合促进骨髓抑制恢复细胞因子的特点,为研究骨髓抑制恢复的新方案奠定了基础。

卵巢上皮癌IL-7mRNA表达的研究

目的 :研究卵巢上皮癌组织及细胞株中IL 7mRNA的表达 ,探讨IL 7是否参与了卵巢癌的局部免疫调节 ,为IL 7用于卵巢癌基因治疗提供实验基础。方法 :以 6例正常卵巢组织为对照 ,采用RT PCR方法测定 4 2例卵巢上皮癌组织及 2株卵巢癌细胞株SKOV3和 3AOIL 7mRNA的表达。结果 :6例正常卵巢组织未能检测到IL 7mRNA的表达 ,4 2例卵巢上皮癌组织只有 2例表达IL 7mRNA ,表达率为 4 .8% ,SKOV3和 3AO均不表达IL 7mRNA。结论 :卵巢上皮癌组织IL 7mRNA表达率低 ,推测IL 7未能在卵巢癌癌灶和腹腔局部发挥重要抗肿瘤作用。

复发性视神经脊髓炎患者外周血记忆T细胞与IL-7水平的变化

目的:观察复发与未复发视神经脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)患者外周血记忆T细胞(CD4^+CD45RA^-T细胞)和IL-7水平的变化,探讨记忆T细胞在NMO复发机制中的作用。方法:利用流式细胞仪检测复发组(15例)、未复发组(17例)NMO患者及健康对照组(15例)CD4^+CD45RA^-细胞的比例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测3组血浆白细胞介素7(IL-7)的浓度。分析32例患者的CD4^+CD45RA^-细胞比例与IL-7水平的相关性。结果:复发组CD4^+CD45RA^-细胞比例(32.86±5.53)%高于未复发组(19.98±5.72)%及健康对照组(19.59±4.49)%,差异均有统计学意义(P<0.01);未复发组CD4^+CD45RA^-细胞比例高于健康对照组,但差异无统计学意义。复发组IL-7水平[(418.73±78.96)pg/mL]高于未复发组[(313.33±57.65)pg/mL]及健康对照组[(303.43±40.48)pg/mL],差异均有统计学意义(P<0.01);未复发组IL-7水平高于健康对照组,但差异无统计学意义。NMO患者CD4^+CD45RA^-细胞比例与IL-7的水平显著相关(r=0.817,P=0.000)。结论:记忆T细胞参与NMO的复发过程。

银屑病患者骨髓基质细胞分泌IL-3与IL-7水平的检测

目的:检测银屑病患者与对照组骨髓基质细胞分泌IL-3与IL-7的水平。方法:采用密度梯度离心法分离患者与对照组骨髓单一核细胞,通过贴壁法培养骨髓基质细胞,传代后流式细胞仪检测细胞表面标志并用ELISA法检测上清液中IL-3和IL-7的水平。结果:患者组骨髓基质细胞分泌IL-3显著低于对照组(P<0.05),而IL-7的分泌水平两组间无统计学差异(P>0.05)。结论:银屑病骨髓造血微环境可能存在异常。

联合应用IL-2和IL-7对增强T细胞体外增殖及功能的作用

应用体外诱导扩增的抗原特异性T细胞治疗恶性肿瘤及某些病毒性疾病已成为一种有效的临床免疫治疗方法，这一方法常规需要用特异性抗原(灭活的肿瘤细胞或提纯抗原)以及抗原递呈细胞作周期性刺激诱导，并在含特定细胞因子，如IL-2的培养系统中扩增以获得具有足够治疗剂量的功能性T细胞。