被动运动对KOA大鼠关节软骨IL-1β、MMP-13表达的影响

目的 研究被动运动对膝关节炎(KOA)大鼠关节软骨白细胞介素(IL)-1β、基质金属蛋白酶(MMP)-13表达的影响,探讨被动运动促进KOA大鼠关节软骨损伤修复的机制。方法 随机选取2~3月龄雌性SD大鼠10只作为正常组,20只大鼠采用关节腔内注射木瓜蛋白酶法制备KOA大鼠模型,并于造模完成后随机选取10只作为被动运动组,给予被动运动干预,剩余10只为模型组。干预完成后取大鼠右膝关节软骨组织,分别进行苏木素-伊红(HE)染色、甲苯胺蓝染色和番红O-固绿染色,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测关节液中IL-1β含量,免疫组织化学染色检测MMP-13表达水平。结果 与正常组相比,模型组HE染色软骨细胞排列紊乱,数量减少,甲苯胺蓝染色和番红O-固绿染色软骨层变薄,基质染色变浅,潮线紊乱;被动运动组HE染色软骨细胞排列整齐,数量增加,甲苯胺蓝染色和番红O-固绿染色软骨层增厚,基质染色加深,潮线清楚。被动运动组Mankin评分、软骨细胞中MMP-13表达和IL-1β含量均明显低于模型组,且3组间比较差异显著(P<0.05)。结论 被动运动可通过降低KOA大鼠关节液中IL-1β含量,减轻炎症反应;抑制软骨细胞中MMP-13表达,可减少软骨基质的降解,促进关节软骨损伤的修复。

消饮化瘀方对慢性心力衰竭模型大鼠心功能及IL-1β水平的影响

目的观察消饮化瘀方对慢性心力衰竭模型大鼠心功能及炎性细胞因子的影响。方法将72只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、美托洛尔组和消饮化瘀低、中、高剂量组,各组12只,其中模型组、美托洛尔组和消饮化瘀低、中、高剂量组腹腔注射阿霉素(DOX)制备心力衰竭模型,而空白组未做任何处理。造模成功后,模型组给予生理盐水灌胃,美托洛尔组给予美托洛尔药液灌胃,消饮化瘀组给予消饮化瘀药液(高、中、低浓度)灌胃。给药4 w后利用超声心动仪检测各组大鼠左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、室间隔厚度(IVSD)和短轴缩短率(FS),利用酶联免疫吸附试验检测各组血清中白细胞介素(IL)-1β的含量。结果与空白组比较,模型组、美托洛尔组和消饮化瘀组LVEF、FS显著降低,而LVEDD、LVESD、IVSD和血清IL-1β含量显著增高(P<0.01);与模型组比较,消饮化瘀方组LVEF、FS显著增高,而LVEDD、LVESD、IVSD和IL-1β含量显著降低(P<0.05)。结论消饮化瘀方可改善慢性心力衰竭大鼠的心脏功能及减轻炎症反应。

苗药吉祥草含药血清对气道平滑肌细胞增殖及IL-1β/COX-2信号通路的作用机制

目的 探究苗药吉祥草血清对气道平滑肌细胞增殖及白细胞介素(IL)-1β/环氧合酶(COX)-2信号通路的作用机制。方法 制备苗药吉祥草含药血清,分离并鉴定气道平滑肌细胞,把细胞分为空白组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。CCK-8检测细胞的增殖能力;流式细胞仪检测细胞的凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-1β和COX-2的含量;Western印迹检测细胞中IL-1β和COX-2蛋白表达。结果 鉴定发现本实验所分离培养的细胞为ASMCs。与空白组相比,低剂量组、中剂量组和高剂量组细胞在48和72 h时ASMCs细胞增殖能力、IL-1β和COX-2明显降低,凋亡率显著增加,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论 苗药吉祥草血清可抑制气道平滑肌细胞增殖,促进其凋亡;对细胞中炎性因子IL-1β和COX-2表达也能进行有效的抑制。

复元胶囊对膝骨关节炎大鼠IL-1β、OPG和OPGL mRNA表达的影响

目的观察复元胶囊对膝骨关节炎(OA)大鼠关节软骨中白细胞介素(IL)1β、骨保护素(OPG)及其配体(OPGL)的影响。方法 60只雄性SD大鼠随机分为6组:①正常组10只,不给予任何处理;②模型组10只,Hulth法造模后用生理盐水10 ml/d灌胃;③抗骨增生胶囊组10只,Hulth法造模后每日给予抗骨增生胶囊灌胃;④复元胶囊高、中、低组各10只,Hulth法造模后用不同浓度复元胶囊灌胃。于给药第12周处死大鼠,取各组大鼠膝关节内踝关节软骨标本,观察大体结构并分级;HE染色,观察其镜下结构;反转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)法检测膝关节软骨中IL-1β、OPG及OPGL mRNA的表达含量。结果动物模型造模成功,HE染色评分中,复元胶囊高、中剂量组及抗骨增生胶囊组软骨退变程度较模型组明显减轻(P<0.01),复元胶囊组高剂量组OPG mRNA的表达量显著高于模型组(P<0.01),IL-1βmRNA及OPGL mRNA的表达显著低于模型组(P<0.05),OPG与OPGL比率显著高于模型组(P<0.01)和正常组(P<0.01)。结论复元胶囊能够上调软骨中OPG mRNA的表达,下调IL-1βmRNA及OPGL mRNA的表达,使OPG与OPGL的比率上升,表明对软骨退变及软骨下骨的破坏有一定的预防作用。

涤痰汤对血管性痴呆大鼠海马TNF-α、NF-κB、IL-1β、IL-10表达的影响

目的观察涤痰汤对血管性痴呆(VD)大鼠海马肿瘤坏死因子(TNF)-α、核因子(NF)-κB、白细胞介素(IL)-1β、IL-10的影响,探讨涤痰汤治疗VD的作用机制。方法40只大鼠随机分为假手术组、模型组、涤痰汤低剂量组、涤痰汤高剂量组,每组10只,采用改良双侧颈总动脉永久阻断法(2-VO)制备VD大鼠模型,涤痰汤低剂量组、涤痰汤高剂量组分别以4.85 g/kg、9.71 g/kg涤痰汤灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水,每日1次,给药4 w后,Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠海马组织病理学变化,分别用免疫组化、Western印迹及生化法检测海马组织TNF-α、NF-κB、IL-1β、IL-10的表达。结果经涤痰汤低剂量、涤痰汤高剂量治疗后,大鼠空间学习记忆能力改善(P<0.05,P<0.01),海马神经元数量增多,TNF-α、NF-κB表达降低(P<0.05,P<0.01),IL-1β含量下降、IL-10含量升高(P<0.05,P<0.01);涤痰汤高剂量组大鼠的各项检测指标均优于低剂量组。结论涤痰汤可以保护VD大鼠海马神经元,改善大鼠认知障碍,其作用机制可能与调控IL-1β、IL-10、TNF-α、NF-κB等炎性因子的表达有关。

IL-1ra-Fcε融合基因的克隆、表达及鉴定

白细胞介素-1与免疫球蛋白E在过敏性哮喘发病中发挥着重要作用。本试验克隆了白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)及IgE分子恒定区cDNA片段,构建了融合基因原核表达载体IL-1ra-Fcε/pBV220。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),实现了融合蛋白的高效表达,Western blotting结果表明表达蛋白为目的融合蛋白,主要以包涵体形式存在;利用分子筛和阳离子交换层析对表达产物经进行了纯化,纯化的包涵体复性后经体外功能试验表明,融合蛋白的活性与IL-1ra没有显著性差异;初步药代动力学分析显示IL-1ra-Fcε半衰期比IL-1ra延长了4.78倍。

高速线阵CCD IL-P1-4096的原理和应用

IL-P1-4096是加拿大DALSA公司生产的双相高速线阵CCD。其单相工作频率可达25MHz甚至更高,因此应用十分广泛。文中介绍了IL-P1-4096的性能和工作原理,并给出了具体的应用电路。

腹针疗法对膝骨性关节炎实验动物模型血清TNF-α及IL-1水平的影响

目的:通过随机对照实验,观察腹针疗法对膝骨性关节炎动物模型血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白细胞介素-1(IL-1)水平的影响。方法:采用Hulth造模法,建立膝骨性关节炎家兔模型,随机分为2组。腹针组予以腹针治疗,对照组予以自由喂养,分别于造模前后,及治疗后在兔耳缘静脉抽取静脉全血,以ELISA定量法测出TNF-α及IL-1的含量,观察其变化情况。结果:造模成功后,血清TNF-α及IL-1含量均升高,与造模前比较,差异有显著性意义(P<0.05);治疗前后血清TNF-α及IL-1含量比较,腹针组治疗后低于治疗前,差异有显著性意义(P<0.05);对照组治疗后高于治疗前,差异有显著性意义(P<0.05)。结论:腹针疗法可以降低膝骨性关节炎模型动物血清TNF-α及IL-1水平,从而保护关节软骨,改善骨性关节炎的症状,这可能是腹针治疗膝骨性关节炎的作用机理或靶点之一。

PRP联合金天格胶囊对人膝骨关节炎关节液IL-1β、IL-6及TNF-α水平的影响

目的观察富血小板血浆(PRP)联合金天格胶囊对膝骨关节炎(KOA)关节液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6及肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响,探讨其治疗KOA的作用机制。方法将64例KOA患者随机分为治疗组和对照组,治疗组(33例)予膝关节腔注射PRP联合口服金天格胶囊,对照组(31例)予关节腔注射玻璃酸钠治疗,8 w后观察两组视觉模拟评分(VAS)、国际膝关节文献委员会(IKDC)膝关节评分及美国西部Ontario和McMaster大学骨关节炎指数(WOMAC)评分。治疗前后均行膝关节穿刺取关节液,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测关节液中IL-1β、IL-6及TNF-α的水平,对两组进行比较分析。结果与治疗前相比,两组治疗后VAS及WOMAC评分均明显降低(P<0.05),IKDC评分显著增高(P<0.05);组间比较,治疗组VAS评分明显低于对照组(P<0.05),但WOMAC及IKDC评分差异无统计学意义(P>0.05)。治疗8 w后,两组关节液中IL-1β、IL-6及TNF-α的水平明显下降,且其组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论PRP联合金天格胶囊可减轻KOA患者疼痛,改善膝关节功能,并降低关节液中IL-1β、IL-6及TNF-α的水平,抑制炎症反应,这可能是PRP联合金天格胶囊治疗KOA的效应机制之一。

乌司他丁对心肺复苏大鼠脑组织IL-1β、TNF-α水平及心功能的影响

目的探讨乌司他丁(UTI)对大鼠心肺复苏(CPR)后脑组织白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平以及心功能的影响。方法随机将30只SD大鼠分为空白对照组、CPR组以及UTI组各10只。应用窒息法建立大鼠心脏骤停模型,进行CPR,自主循环恢复(ROSC)后6 h,检测各组左室收缩压(LVSP)、左心室舒张末期压(LVEDP)水平及左心室压力上升(+dp/dtmax)、下降最大速率(-dp/dtmax)。ROSC后24 h处死大鼠后取出心、脑组织,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑组织中IL-1β、TNF-α的含量,并采用投射电镜观察心肌细胞超微结构的变化。结果 ROSC后6 h CPR组、UTI组LVSP及±dp/dtmax明显降低(P<0.05),LVEDP明显升高(P<0.05)。与空白对照组相比,ROSC后6 h CPR组、UTI组LVSP、+dp/dtmax及-dp/dtmax均显著下降(P<0.05),而LVEDP显著上升(P<0.05);与CPR组相比,ROSC后6 h UTI组LVSP上升,LVEDP下降(P<0.05)。CPR组、UTI组IL-1β、TNF-α含量均显著高于空白对照组(P<0.05),而UTI组IL-1β、TNF-α含量均显著低于CPR组(P<0.05)。结论 UTI可以抑制体内IL-1β和TNF-α的表达,同时减轻心肌组织的损伤,改善CPR后心功能。

依托咪脂对LPS诱导的神经胶质细胞中(IL)-1β表达的影响

目的探讨分析依托咪酯对LPS诱导的神经胶质细胞中(IL)-1β表达的影响。方法该次实验探究将选取该院自2016年3—11月之间培养好的原代大鼠皮层中的神经胶质细胞作为研究对象,实验研究对象为60只并将研究对象随机平均分成两组。其中一组为研究组,另一组为对照组。研究组将对研究对象采取使用依托咪脂进行处理的方案;对照组将对研究对象采取使用甲氨蝶呤进行处理的方案。然后对研究对象使用应用免疫法来测定两组的(IL)-1β的含量。结果实验后研究组大鼠各项数据均显著高于对照组(t=12.943,15.086,12.193,16.843,P<0.05);该研究中两组大鼠IL-1β水平方面,对照组治疗前后分别为(18.4±3.9)mg/L、(15.6±3.1)mg/L,研究组治疗前后分别为(18.6±3.3)mg/L、(9.8±3)mg/L(t=15.943,P<0.05);6研究组大鼠不良反应显著低于对照组(χ~2=5.643,P<0.05)。结论与采取使用甲氨蝶呤进行处理的方案相比采取使用依托咪酯进行处理的方案对LPS诱导的神经胶质细胞中(IL)-1β表达的影响效果较好,有着更加显效的抑制效果。值得在临床上进一步推广使用。

穴位埋线对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及血清白介素-1β、肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察穴位埋线对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力和血清白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α含量的影响。方法将大鼠随机分成假手术组、VD模型组、穴位埋线组、尼莫地平组,采用改良Pulsinelli四血管闭塞法(4-VO)建立VD大鼠模型,两个治疗组分别施行穴位埋线和尼莫地平治疗,连续15 d。Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,酶联免疫吸附法测定血清IL-1β、TNF-α含量,制作海马组织病理切片并进行HE染色,观察并比较各组大鼠学习能力、血清IL-1β、TNF-α含量及海马神经元损伤的变化。结果模型组表现出明显的学习记忆障碍,定位航行试验、空间探索试验与假手术组相比有显著差异(P<0.01);与VD模型组比较,穴位埋线治疗后VD大鼠学习记忆能力显著提高(P<0.05,P<0.01),血清IL-1β、TNF-α含量降低(P<0.05)。结论穴位埋线可改善VD大鼠学习记忆能力,其机制可能与埋线后降低血清IL-1β、TNF-α含量,缓解脑缺血后炎症反应,减轻神经元的损伤有关。

急性缺血性脑卒中后抑郁患者相关症状与血清白细胞介素-1水平的关系

目的探讨血清白细胞介素(IL)-1水平与急性缺血性脑卒中(ACI)后抑郁(PSD)的相关性。方法选取ACI患者108例,发病第14天根据汉密尔顿抑郁(HAMD-17)量表分为PSD组和非PSD组,采用美国《精神障碍诊断与统计手册》第4版(DSM-Ⅳ)临床患者访谈版(SCID-P)进行抑郁相关症状的评估。用酶联免疫吸附法测定血清IL-1水平。比较各组血清IL-1水平;分析血清IL-1水平与HAMD总分、心理因子分、躯体因子分是否有相关性;评估血清IL-1水平与抑郁相关临床症状的关系。结果 108例患者中PSD患者45例,其中轻度17例,中度19例,重度9例;PSD组血清IL-1水平明显高于非PSD组(P<0.01);不同程度抑郁患者血清IL-1水平的比较,随着抑郁程度加重,血清IL-1水平亦随之增加(P<0.05);ACI患者血清IL-1水平与HAMD总分、HAMD心理子分数、HAMD躯体子分数呈正相关(r分别为0.869、0872、0.769);ACI患者抑郁相关症状中体重或食欲变化、睡眠障碍、失去兴趣或愉悦感比无这些症状的患者的IL-1水平更高(P<0.01)。结论血清IL-1水平与PSD存在明显的相关性,且随着患者抑郁程度的增加,其水平也增加;有体重或食欲的变化、睡眠障碍、失去兴趣或愉悦感的患者比没有这些症状的患者有更高的IL-1水平,给予必要的临床干预可能会降低这些症状的发生。

三七总皂苷注射液对脑出血模型大鼠抗氧化及白细胞介素-1、肿瘤细胞坏死因子-α的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对脑出血(ICH)大鼠脑水肿、脑损伤的影响及机制。方法采用胶原酶法制备脑出血动物模型,将48只大鼠随机分为假手术组、模型组、三七总皂苷低、高剂量组,每组12只;造模后6 h腹腔注射药物,每12 h 1次,于造模后12、72 h测各组大鼠脑组织含水量,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量,脑组织白细胞介素(IL)-1;肿瘤坏死因子(TNF)-α水平。结果与模型组比较,72 h高剂量PNS组脑组织含水量减少,12 h时PNS两组GSH-Px、SOD活性增高(P<0.05),MDA含量变化不明显,72 h时PNS组GSH-Px活性增高,与剂量变化呈线性关系,SOD活性增高,MDA含量下降,差异显著(P<0.05);12 h时PNS组TNF-α有下降(P<0.05);72 h时高剂量组IL-1、TNF-α水平下降(P<0.05)。结论三七总皂苷明显降低IL-1、TNF-α含量,增加脑组织抗氧化功能,从而减轻出血性脑损伤,对受损脑组织发挥保护作用。

七氟烷对老年患者腹腔镜手术患者血清和肺灌洗液白细胞介素-1β水平的影响

腹腔镜手术是妇科手术中一种常见的手术方式，术中麻醉除了要求达到一定深度外，还要保证血流动力学稳定，术后苏醒迅速等，老年患者由于生理功能退化，当手术难度大、时间过长时，术中患者可能出现缺氧等临床表现，导致患者情绪不稳，增加手术风险。七氟烷是一种高效的全身麻醉药，具有良好的血流动力学稳定性，术中维持平稳，苏醒快速等优点。本文观测七氟烷对老年行腹腔镜手术患者临床症状、体征及血清和肺灌洗液中IL－1β的影响。

肿瘤坏死因子－α（TNF－α）及白细胞介素1β（IL1－β）对胶质增生的影响及机理

本文利用小鼠大脑机械损伤模型及体外培养的胶质细胞，采用同位素渗入法观察了细胞介素及其抗体对胶质细胞增生的影响。结果表明：体外培养时ＴＮＦ－α在浓度为１０～２００ｕ／ｍｌ培养液时均能促进胶质细胞增生（Ｐ＜０．０５），ＩＬ１－β在浓度为５～２００ｕ／ｍｌ培养液时能促进胶质细胞增生，ＴＮＦ－α＋ＩＬ１－β其促进胶质细胞增生作用更强烈，ＴＮＦ－α抗体能完全阻断ＴＮＦ－α的促增生作用，部分阻断ＴＮＦ－α＋ＩＬ１－β的促增生作用。在体实验时，ＩＬ１－β及ＴＮＦ－α的作用与离体时相似，ＩＬ１－β及ＴＮＦ－α亦能促进胶质细胞增生，二者共同作用时促细胞增生作用更强。以上结果提示，外源性ＴＮＦ－α及ＩＬ１－β能促进中枢神经损伤后胶质细胞增生且具有协同作用。

归肾丸对免疫性卵巢早衰小鼠白细胞介素-17和白细胞介素-1β水平的影响

目的 探讨归肾丸对免疫性卵巢早衰（POF）小鼠血清白细胞介素-17（IL-17）和白介素-1p（IL-1β）水平的影响.方法 采用小鼠透明带多肽抗原免疫小鼠,建立免疫性（POF）小鼠模型.归肾丸灌胃干预4周,取小鼠血清用EHSA法检测IL-17;取卵巢组织,行HE染色,观察卵泡形态;用免疫组织化学方法检测卵巢IL-1β.结果 与模型组比较,正常对照组、戊酸雌二醇组（阳性对照）、归肾丸高、中和低剂量组小鼠卵母细胞内卵泡液IL-1β平均吸光度值均有显著减少（P＜0.01）;正常对照组和戊酸雌二醇组血清IL-17有显著减少（P＜0.01）,高、中和低剂量组血清IL-17有显著减少（P＜0.05）.与正常对照组比较,模型组卵母细胞内卵泡液IL-1β平均吸光度值呈显著增加（P＜0.01）,其他各组均无显著差异（P＞0.05）;模型组、戊酸雌二醇组、高剂量组、中剂量组和低剂量组颗粒细胞内卵泡液IL-1p平均光密度值均无显著性差异（P＞0.05）;模型组、戊酸雌二醇组、高剂量组、中剂量组和低剂量组血清IL-17均呈显著性增加（P＜0.01）.结论 归肾丸可能通过调节IL-1β和IL-17改善小鼠自身免疫紊乱,从而改善卵巢卵泡功能.

白细胞介素1β对气道成纤维细胞PGE2EP2及15-PGDH表达的影响

目的研究白细胞介素-1β（IL-1β）对小鼠气道成纤维细胞前列腺素E2（PGE2）、前列腺素E2受体（EP2）及15-羟基前列腺素脱氢酶（15-PGDH）表达的影响，以探讨其在吸人性损伤修复中的作用。方法分离雄性昆明种小鼠的气道成纤维细胞并体外培养，分别收集IL-1p作用后不同时间点和不同浓度的培养上清液及细胞；采用ELISA法测定PGE2水平，western blot测定EP2及15-PGDH蛋白表达。结果①经IL-1β 1ng／mL处理后气道成纤维细胞培养上清液PGE2水平在8、16、24、48h均高于对照组（P〈0．01），其中16h水平最高；而EP2及15-PGDH蛋白表达在8、16、24、48h与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。②不同浓度IL-113处理气道成纤维细胞后，气道成纤维细胞培养上清液PGE，水平在IL-180．1ng／mL组、1ng／mL组和10ng／mL组均高于对照组（P〈0．01），并且三组比较差异有统计学意义（P〈0．01）；而EP2及15-PGDH蛋白表达在IL-1β 0．1ng／mL组、1ng／mL组和10ng／mL组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论炎症介质IL-18可上调气道成纤维细胞PGE2水平，而对EP2、15-PGDH的表达无影响。表明IL-1B并不是通过EP2及15-PGDH蛋白表达来影响PGE2的合成，参与气道吸入性损伤修复过程。

老年2型糖尿病周围神经病变患者血清白细胞介素-1β、同型半胱氨酸、可溶性血管细胞黏附分子-1的水平变化及意义

目的研究老年2型糖尿病(T2DM)周围神经病变患者血清白细胞介素(IL)-1β、同型半胱氨酸(HCY)、可溶性血管细胞黏附分子(s VCAM)-1水平。方法老年T2DM周围神经病变患者36例为观察组,健康志愿者36例为对照组。观察两组血清IL-1β、HCY、s VCAM-1水平、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6、C反应蛋白(CRP)水平及空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 h PG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)水平变化。结果观察组s VCAM-1、IL-1β、HCY、TNF-α、IL-6、CRP、空腹胰岛素(FNS)、餐后胰岛素(PNS)、空腹C肽(FCP)、餐后C肽(PCP)、胰岛素抗体(INS-Ab)、Ab、FPG、2 h PG、Hb A1c明显高于对照组(P<0.05),观察组胰高血糖素样肽(GLP)-1水平显著低于对照组(P<0.05)。结论血清IL-1β、HCY、s VCAM-1水平变化可随着老年T2DM患者周围神经的变化发生改变。

磷酸甘油酸变位酶5调控细胞焦亡在肝脏缺血-再灌注损伤中的作用

目的研究磷酸甘油酸变位酶5(PGAM5)调控细胞焦亡在肝脏缺血-再灌注损伤(IRI)中的作用及分子机制。方法建立C57小鼠肝脏IRI模型,随机分别予再灌注6 h(6 h组)与12 h(12 h组),并设立假手术组(Sham组),每组10只。分析IRI对小鼠肝组织及血清学指标的影响;分析小鼠肝脏IRI过程中PGAM5、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1的表达情况。建立肝细胞IRI模型(IRI组),采用Caspase-1抑制剂Z-YVAD-FMK预处理后再建立肝细胞IRI模型(抑制剂组),将未处理的AML12细胞作为对照组,分析抑制Caspase-1活性对细胞焦亡的影响。采用脂质体3000将PGAM5小干扰核糖核酸(siRNA)(siRNA组)和siRNA阴性对照(siRNA-NC)(siRNA-NC组)转染至AML12细胞,再建立肝细胞IRI模型,将未处理的AML12细胞作为对照组,分析PGAM5调控细胞焦亡对肝细胞IRI的影响。结果 6 h组和12 h组小鼠肝组织中部分肝细胞水肿,肝窦区变窄,中央静脉充血,偶见点灶状坏死等,且12 h组较6 h组病变加重。与Sham组小鼠比较,6 h组和12 h组小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平升高,且12 h组高于6 h组;6 h组和12 h组肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平升高,12 h组低于6 h组;6 h组和12 h组小鼠肝组织IL-1β信使核糖核酸(mRNA)相对表达量升高,12 h组低于6 h组;6 h组和12 h组肝组织细胞凋亡率升高,12 h组低于6 h组(P<0.01~0.05)。与Sham组小鼠比较,6 h组和12 h组小鼠肝组织PGAM5 mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均升高,且12 h组高于6 h组(P<0.01~0.05);6 h组和12 h组肝组织PGAM5、Caspase-1蛋白表达增多。IRI组细胞NOD样受体蛋白3(NLRP3)、裂解Caspase(cleaved Caspase)-1及Gasdermin D(GSDMD)蛋白相对表达量较对照组升高,GSDMD荧光强度较对照组增强;抑制剂组NLRP3、cleaved Caspase-1及GSDMD蛋白相对表达量较IRI组下降,GSDMD荧光强度较IRI组减弱(P<0.01~0.05)。与对照组比较,siRNA-NC组细胞存活率下降,PGAM5、NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量升高(P<0.01~0.05);与siRNA-NC组比较,siRNA组细胞存活率升高,PGAM5、NLRP3、cleaved Caspase-1、GSDMD蛋白相对表达量下降(P<0.01~0.05)。结论 PGAM5可加重小鼠肝脏IRI,其机制可能为通过PGAM5/Caspase-1/GSDMD信号通路调控细胞焦亡,加速肝细胞损伤。