microSPECT/CT显像定量评价肿瘤^(99m)Tc-3P4-RGD_2摄取及整合素α_Vβ_3表达水平的实验研究

目的:探讨99mTc-HYNIC-PEG4-E[PEG4-c(RGDfk)]2(简称99mTc-3P4-RGD2)microSPECT/CT显像定量肿瘤放射性摄取及整合素αvβ3表达水平的可行性研究。方法:对不同99mTc样品进行microSPECT/CT显像,评价样品体积、活度对放射性计数的影响;对荷脑胶质瘤裸鼠行99mTc-3P4-RGD2microSPECT/CT显像,对比基于CT、SPECT及融合图像测定的肿瘤体积与肿瘤实际体积一致性,并评价肿瘤整合素αvβ3表达水平,由病理证实。结果:99mTc样品microSPECT/CT显像放射性计数与其放射性活度呈直线相关(R2=0.999 7),Bland-Altman一致性分析显示,基于microSPECT/CT测定的肿瘤体积与肿瘤实际体积差异(%)为-2.48±8.17,显著低于microCT(15.04±79.53,t=5.60,P=0.005)和microSPECT(17.04±36.27,t=7.17,P=0.002);microSPECT/CT显像肿瘤99mTc-3P-RGD2摄取与整合素αvβ3表达呈正相关。结论:microSPECT/CT显像可定量99mTc放射性活度和成活肿瘤组织体积,有效评估整合素αvβ3受体表达,为肿瘤整合素受体靶向治疗患者筛选及药物剂量个体化提供影像学数据。

整合素α_vβ_3和骨桥蛋白在多囊卵巢综合征患者植入窗期子宫内膜的表达

目的探讨整合素α_vβ_3和骨桥蛋白(OPN)在多囊卵巢综合征(PCOS)患者植入窗期子宫内膜的表达。方法选取15名典型PCOS患者(其中7例为自主排卵,8例为促排卵)为PCOS组,同期选择15例月经周期规律妇女为对照组。阴道超声监测排卵,排卵日测定子宫内膜分型及厚度;免疫组织化学技术测定植入窗期的子宫内膜整合素α_vβ_3和骨桥蛋白的表达;放射免疫法测定内膜活检当天的血清雌二醇(E_2)和孕酮(P)的浓度。结果与对照组比较,PCOS组植入窗期子宫内膜整合素α_vβ_3和OPN表达均显著下调(P<0.01),两者之间不伴有比例的失调;排卵日子宫内膜厚度两组无显著差异(P>0.05);子宫内膜分型有显著性差异(P<0.05);血清E_2水平显著高于对照组(P<0.01),E_2/P比值亦显著高于对照组(P<0.05),而P显著低于对照组(P<0.01)。结论 PCOS患者植入窗期子宫内膜整合素α_vβ_3和OPN表达均下调,子宫内膜容受性降低,影响了胚泡着床。

整合素α_vβ_3和VEGF在前列腺癌的表达及临床意义

目的探讨整合素αvβ3和血管内皮生长因子(VEGF)在前列腺癌(PCa)中的表达及意义。方法应用免疫组织化学链酶抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法(SP法)检测整合素αvβ3和VEGF在41例前列腺癌中的表达,20例正常前列腺组织作对照。结果前列腺癌组织中整合素αvβ3和VEGF的表达上调,与正常组织比较差异具有统计学意义(P<0.01)。整合素αvβ3和VEGF的表达均随着PCa的病理分级、临床分期增加其表达上调(P<0.05),与PCa的病理分化程度呈负相关(P<0.01)。在各术前血清PSA值组中,整合素αvβ3及VEGF表达无统计学差异(P>0.05)。整合素αvβ3与VEGF表达呈正相关(rs=0.220),相关有显著性(P<0.05)。结论整合素αvβ3和VEGF可能在前列腺癌的发生、发展及恶性进展过程中起重要作用。将二者结合分析,有助于判断PCa的恶性程度、转移潜能和预后。

慢性盆腔炎性不孕患者子宫内膜整合素α_vβ_3表达及与甾体激素关系的研究

【目的】研究慢性盆腔炎性不孕患者子宫内膜整合素αvβ3的表达,并分析其体内甾体激素与整合素αvβ3表达的相关性。【方法】选取25例慢性盆腔炎性不孕症患者,同时选择15例具有正常生育能力的育龄妇女,分别设为实验组和对照组,采用流式细胞荧光标记测量技术对子宫内膜中整合素αvβ3的表达进行定量检测。在同期内取血清检测实验组及对照组体内雌孕激素水平,分析甾体激素与子宫内膜整合素αvβ3表达在植入窗口期(种植期)的相关性。【结果】(1)两组黄体中期血清雌二醇(E2)水平及雌二醇/孕酮(E2/P)比值比较均无显著性差异(P>0.05),而血清P水平比较有显著性差异(P<0.05)。(2)两组黄体中期(分泌中期)子宫内膜整合素αvβ3表达比较差异有显著性意义(P<0.05)。(3)雌激素与子宫内膜整合素αvβ3无相关性,而孕激素与整合素αvβ3显示正相关性,孕激素的表达水平越高,整合素αvβ3表达水平相应也越高。【结论】整合素αvβ3在正常育龄妇女子宫内膜种植窗期的表达高于慢性盆腔炎性不孕患者;整合素的表达水平与卵巢分泌的甾体激素孕激素的表达呈一致性,孕激素影响着整合素αvβ3表达的水平。

靶向整合素α_Vβ_3的分子影像探针

整合素αVβ3作为整合素家族中的重要成员,介导了细胞和细胞外基质、细胞和细胞之间的相互黏附,具有调控细胞增殖、分化、细胞形态和迁移等多种功能,在肿瘤血管生成的过程中发挥重要的作用。作为靶向肿瘤的受体,利用核素、核磁共振、超声波和光学等影像技术,结合靶向整合素αVβ3分子成像探针非侵入性的检测整合素αVβ3在肿瘤组织和肿瘤新生血管中的表达,具有潜在的临床应用价值,可用于临床肿瘤诊断和抗肿瘤药物的临床治疗后观察。本文主要针对现有靶向整合素αVβ3的分子探针及其影像技术作一简要综述。

α_vβ_3受体显像剂^(99)Tc^m(N)(PNP6)(Cys-RGD)的制备及动物实验

为探讨99Tcm标记的小分子环形Cys-RGD肽用于αvβ3受体阳性肿瘤显像的可行性,以99Tcm(N)核联合协同配体二膦基胺类化合物二[二(乙氧基丙基膦)-乙基]-乙氧基乙基胺(PNP6)对环形Cys-RGD肽(c(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys)-Cys)进行了标记,并考察了标记物的体外稳定性及正常小鼠和荷FWK-1胰腺癌裸鼠模型的体内生物分布和平面显像。标记条件经优化后,标记率大于92%,且具有良好的体外稳定性。生物分布实验表明,99Tcm(N)(PNP6)(Cys-RGD)在血液中清除较快,主要通过肾脏排泄;注药后1h标记物在肿瘤中的摄取值为2.92±0.71%/g,注药后4h肿瘤与血和肿瘤与肌肉的放射性摄取比(T/NT)分别为11.0和3.1;注药后1h,肿瘤显像清晰。以上结果提示,99Tcm(N)(PNP6)(Cys-RGD)有望成为αvβ3受体阳性肿瘤显像剂。

整合素α_vβ_3对MDA-MB-231BO乳腺癌细胞AKT信号通路的调控

旨在探究整合素αvβ3的单克隆抗体LM609在BSP不同表达水平的乳腺癌细胞中对AKT(蛋白激酶B)信号通路的影响。利用免疫细胞化学法检测BSP不同表达水平的乳腺癌细胞中整合素αvβ3的表达量。BSP基因沉默乳腺癌MDA-MB-231BO细胞,Western blotting在蛋白水平检测磷酸化AKT的表达,MTT试验和细胞划痕试验分别检测细胞增殖、迁移能力的变化。结果显示,与231BO-Scrambled细胞相比,231BO-BSP27细胞中BSP蛋白水平明显降低,抑制率达到(59.43±1.71)%;LM609分别处理两株细胞后,与对照组231BO-Scrambled细胞相比,BSP基因沉默组21BO-BSP27细胞中AKT磷酸化水平下调明显,为(33.78±1.51)%(P<0.01);231BO-BSP27细胞和对照组231BO-Scrambled中细胞的增殖和迁移能力均有不同程度的下降(P<0.05)。LM609能够抑制胞内整合素αvβ3功能的表达,进而对AKT信号通路进行调控,并影响细胞增殖和迁移的发生。

骨唾液酸蛋白通过整合素α_vβ_3调控ILK信号通路

旨在探究骨唾液酸蛋白(BSP)是否通过整合素αvβ3对整合素连接激酶(ILK)信号通路进行调控。BSP基因沉默乳腺癌MDA-MB-231细胞,流式细胞仪在细胞水平检测BSP不同水平的细胞株中整合素αvβ3的表达量。Western blotting检测磷酸化ILK水平的变化,MTT法检测细胞增殖能力。与对照组231BO-Scrambled细胞相比,BSP基因沉默组231BO-BSP27细胞中整合素αvβ3的表达水平明显下调(61.32±1.94)%(P<0.01)。整合素αvβ3鼠抗单克隆抗体(LM609)处理前的BSP基因沉默组231BO-BSP27细胞与21BO-Scrambled细胞相比,ILK磷酸化水平下调明显(39.38±1.38)%(P<0.01);LM609处理后的231BO-BSP27细胞与21BO-Scrambled细胞相比,ILK磷酸化水平下调明显(33.78±1.51)%(P<0.01)。向乳腺癌细胞231BO-scrambled和231BO-BSP27中添加LM609,MTT试验结果显示两株乳腺癌细胞的增殖能力均有降低(P<0.05)。BSP通过整合素αvβ3对乳腺癌MDA-MB-231细胞ILK信号通路进行调控,并影响细胞增殖。

^(125)I-RGD-4CY肿瘤α_vβ_3受体显像的实验研究

目的 探讨放射性核素标记小分子环形多肽RGD 4CY实现肿瘤αvβ3 受体显像的可行性。方法 采用Iodogen法标记、SEP PAKC18柱分离纯化制备12 5I RGD 4CY。测定12 5I RGD 4CY在正常小鼠与荷人QBC93 9胆管癌裸鼠体内的放射性分布 ,计算肿瘤(T)与非肿瘤组织 (TN)放射性比值。进行12 5I RGD 4CY荷瘤动物全身放射自显影。结果 正常小鼠血液放射性清除和肝脏放射性下降迅速 ,肠道无明显增加 ,主要通过肾脏排泄 ,肌肉和肺的放射性 12 0min时分别仅为肝脏的 3 2 %与 44 % (P <0 0 5 )。荷瘤裸鼠各时相肿瘤的放射性均高于肌肉、肠道与肺 (P <0 0 5 ) ,2 40min时T/NT值分别为 2 6.0、8 7与 2 6.0。放射自显影示肿瘤放射性浓聚影最强 ,肺、颈部及其它软组织呈低水平分布。结论 放射性标记RGD 4CY可望成为一有效的肿瘤αvβ3

滋养细胞分泌14-3-3 τ蛋白对子宫内膜基质细胞表达整合素α_vβ_3蛋白的影响

目的探讨滋养细胞分泌14-3-3τ蛋白对子宫内膜基质细胞容受性分子整合素αvβ3表达的影响。方法RNA干扰技术下调人绒癌滋养细胞株Be Wo细胞14-3-3τ蛋白的表达。Western blot法检测Be Wo细胞及培养液中14-3-3τ蛋白的表达。建立14-3-3τ蛋白表达下调的Be Wo细胞与人子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells,ESC)的共培养体系,Western blot法检测共培养体系培养液中14-3-3τ蛋白的表达,以及ESC容受性分子整合素αvβ3的表达变化。结果与si RNA阴性对照组相比,特异性si RNA显著下调Be Wo细胞和培养液中14-3-3τ蛋白的表达(P<0.05)。共培养体系中,与si RNA阴性对照组相比,与14-3-3τ蛋白表达下调的Be Wo细胞共培养的ESC整合素αvβ3的表达显著上调(P<0.05),提示ESC容受性增加。与单独培养的ESC相比,培养液中添加14-3-3τ重组蛋白的ESC培养24 h后整合素αvβ3的表达显著下调(P<0.05),提示ESC容受性降低。结论14-3-3τ蛋白可以被滋养细胞分泌至细胞外,并可能发挥调控ESC容受性的作用,但其作用机制仍需进一步研究。

整合素α_vβ_3在肿瘤血管生成中的作用

整合素是一种重要的黏附分子,整合素αVβ3是整合素家族中的重要成员。作为内皮细胞与细胞外基质的桥梁,整合素αVβ3通过调节内皮细胞的黏附、迁移、增殖、凋亡等功能,在肿瘤血管生成的过程中发挥重要的作用。整合素αVβ3的单克隆抗体和拮抗剂能抑制肿瘤血管的生成,可能是一种治疗肿瘤的新途径。

以整合素α_vβ_3为靶点的RGD配体在抗肿瘤血管新生中的应用

整合素αvβ3是一种能特异性识别RGD序列的膜受体蛋白,其与含RGD(Arg-Gly-Asp)模体的蛋白质结合的特异性在肿瘤细胞的粘附、迁移、浸润及肿瘤血管新生中起重要作用.由于整合素αvβ3在多种肿瘤细胞表面高表达而在正常细胞中低表达或不表达,因此其成为肿瘤治疗的理想靶点.肿瘤新生血管为肿瘤的生长提供营养,因此近年来抑制肿瘤血管新生也成为肿瘤治疗的重要途径.有研究显示,几种RGD毒素蛋白不但以整合素αvβ3为靶点靶向结合到肿瘤部位从而具有直接抗肿瘤细胞增殖、黏附、迁移及浸润功能,而且它们还具有抗肿瘤血管新生的作用,因此RGD毒素蛋白可从上述两方面抑制肿瘤生长与转移.本文就整合素αvβ3为靶向的RGD配体结构特点及其在肿瘤治疗中的靶向治疗和抗血管新生应用及前景加以综述.

大鼠牙齿移动中整合素α_Vβ_3表达的实验研究

目的研究大鼠牙齿移动中整合素αVβ3表达的不同,为研究靶向封闭整合素αVβ3提供时相支持。方法建立大鼠正畸牙齿移动模型,分为成幼鼠两组。拉上颌一侧第一磨牙向近中移动,另一侧为空白对照。分别于0d(未加力时)、加力后3d、1周、3周、4周、6周、8周后将每组5只大鼠处死,行免疫组化技术和计算机图像分析技术比较分析。结果整合素αVβ3两个亚单位的表达峰值在幼鼠出现于第1周,成鼠出现于第3周。3d、1周时幼鼠整合素αVβ3两个亚单位的表达均显著强于成鼠(P<0.05),在3,4,6周和8周时则明显弱于成鼠(P<0.05)。结论成幼鼠整合素αVβ3表达具有不同的时相性变化规律。

Integrin α_vβ_3靶向超声微泡的制备及体外寻靶实验

目的制备Integrinαvβ3靶向超声微泡,对其一般理化性质及体外寻靶能力进行检测。方法采用巯基-马来酰亚胺连接法制备携FITC标记iRGD肽的Integrinαvβ3靶向微泡(MBIntegrinαvβ3),并制备空白微泡(MBcontrol)。检测两组微泡的一般理化性质,在荧光显微镜下观察两组微泡荧光显像,流式细胞仪检测两组微泡FITC荧光含量。于光学显微镜及荧光显微镜下观察两组微泡与小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的黏附情况。结果 1MBIntegrinαvβ3粒径为(0.84±0.26)μm,与MBcontrol粒径(0.79±0.19)μm差异无统计学意义(P>0.05);2荧光显微镜下观察,MBcontrol组微泡无荧光显示,MBIntegrinαvβ3组微泡表面显示绿色荧光;3流式细胞仪测得MBIntegrinαvβ3组微泡FITC荧光含量为98.4%,MBcontrol组微泡FITC荧光含量为2.5%;4体外寻靶实验显示,MBIntegrinαvβ3组微泡能聚集结合于bEnd.3细胞表面。结论成功制备了携iRGD肽的Integrinαvβ3靶向微泡,其具有良好的体外寻靶能力。

整合素α_vβ_3放射性配体^(99)Tc^m-TP1326的制备及其正常兔显像研究

目的制备99Tcm-TP1326,鉴定其理化性质,研究其在兔体内的示踪动力学及组织器官分布特点。方法化学合成制备GA(D)GG-Aba-RGD-4CK(TP1326),并以氯化亚锡为还原剂进行99Tcm标记,纸层析法测定标记率;采用体外稳定性实验、血清蛋白结合实验及油/水分配实验鉴定标记物的理化性质;测定标记物经健康大耳兔静脉注射后不同时相血液放射性浓度,利用药代动力学分析软件判断其最佳房室模型,并得出药代动力学参数;经健康兔耳缘静脉注射99Tcm-TP1326,SPECT动态显像,观察主要组织器官的放射性分布变化。结果 99 Tcm-TP1326的标记率为(95.86±0.83)%,比活度为(38.62±0.32)TBq/mmol。室温放置4 h后放化纯度为(91.76±2.75)%;柱层析未见蛋白结合放射峰;油/水分配系数为-(1.76±0.06)。99Tcm-TP1326在健康兔体内动力学符合权重为1/c的二室模型,t1/2α、t1/2β分别为(3.115±0.771)、(76.978±22.460)min。SPECT显像示血池影消退迅速,放射性主要经肾脏清除,肠道、胃区、颈部未见明显放射性浓聚,脑呈低放射性本底。结论 99Tcm-TP1326标记方法简便,标记率高,体内外稳定性好,动力学特性优良,血液清除快,主要通过泌尿系统排泄,是一种具有潜在应用价值的肿瘤αvβ3受体分子显像剂。

输卵管性和内异症性不孕患者黄体中期子宫内膜整合素α_vβ_3表达的差异

目的探讨输卵管性和内异症性不孕患者黄体中期子宫内膜整合素αvβ3表达的差异。方法收集行手术治疗的9例内异症性不孕患者和进行IVF/ICSI-ET的20例输卵管阻塞患者黄体中期子宫内膜,应用免疫组化方法检测整合素αvβ3的表达。结果子宫内膜腔上皮细胞中整合素αvβ3表达H-score平均分内异症组较输卵管组低,差异有显著性(P<0.05),而两组间腺上皮细胞中整合素αvβ3表达H-score平均分比较差异无显著性(P>0.05)。结论内异症不孕患者和输卵管阻塞不孕患者黄体中期子宫内膜整合素αvβ3表达的差异,可能提示内异症对子宫内膜容受性存在不利影响。

α_vβ_3整合素受体靶向性超顺磁性脂质体的建立及体外磁共振观察

目的合成以RGD短肽为亲和成分的靶向性超顺磁性长循环脂质体,并通过体外细胞学实验确定其受体靶向性,探讨其用于肿瘤受体成像的可能性。方法采用薄膜法分别合成表面连接和不连接RGD的靶向性和非靶向性长循环脂质体;以流式细胞分析及共聚焦激光扫描显微镜观察靶向对比剂对HUVEC细胞的特异性标记。结果①合成的超顺磁性脂质体粒径在150nm左右,具有较高的弛豫率;②靶向性对比剂对αvβ3整合素受体具有较高的特异性亲和力;可通过受体介导的内吞作用进入细胞内;③靶向对比剂与细胞结合后,可以明显降低细胞的信号。结论RGD—超顺磁性长循环脂质体具有较高的弛豫率,能与αvβ3整合素受体特异性结合,在靶点特异性浓聚,并能经MR扫描证实。

靶向整合素α_vβ_3受体的新型RGDyC-PEG-PAMAM纳米探针的设计制备、^(131)I标记及其质量控制

本研究以具有优良生物学性能的聚酰胺-胺树状大分子(PAMAM)为纳米载体,将具有肿瘤靶向性的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)与纳米载体相连,并通过放射性核素^(131)I进行标记,对标记物的体内外药效学性质进行评价,探讨将其应用于肿瘤特异显像和靶向治疗的可能性。从多肽化学修饰法角度设计精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-酪氨酸-半胱氨酸(RGDyC),利用点击化学法引入双功能基团PEG(NHS-PEG-MAL),采用"一锅两步"法制备RGDyC-PEG-PAMAM纳米复合物,通过核磁共振和紫外光谱进行表征确定产物,并检测纳米粒径分布和电位,用透射电镜(TEM)观察其形态大小及分布;进一步采用氯胺T法进行^(131)I标记,并测定标记率、标记物的稳定性及脂水分配系数。所设计的RGDyC-PEG-PAMAM纳米复合物制备产率为62.09%,^(131)I对其标记率为94.68%~98.87%,标记物在体外72h后放化纯大于80%,脂水分配系数lg P(正辛醇/水)为-1.59±0.09。所设计的RGDyC-PEG-PAMAM可采用氯胺T法成功完成^(131)I标记,制备与标记过程高效、简捷,标记物^(131)I-RGDyC-PEG-PAMAM具有良好稳定性和较高亲水性,成药性良好,为后期进一步考察体外肿瘤细胞摄取与生长抑制、评估人癌裸鼠异种移植瘤模型治疗及肿瘤显像等体内外药效学研究奠定了基础,^(131)I-RGDyC-PEG-PAMAM有可能作为一个新型SPECT探针应用于肿瘤特异显像与靶向治疗。

肿瘤整合素α_vβ_3受体显像的研究现状

整合素αvβ3受体在多种恶性肿瘤细胞表面有高水平的表达,尤其在恶性肿瘤组织新生血管内皮细胞膜,成熟血管内皮细胞和绝大多数正常器官系统则无表达或几乎不能被探及。含有RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)序列的小分子多肽是整合素αvβ3受体拮抗剂,对整合素αvβ3受体具有高度的选择性与亲和力,是一类具有潜在临床应用价值的肿瘤受体显像剂。

靶向血栓蛋白(RGD)_3-tTF与肿瘤血管标志物α_vβ_3特异性结合能力的研究

背景与目的:研究靶向血栓蛋白(RGD)3-tTF融合蛋白结合肿瘤血管标志物整合素αvβ3的能力,旨在探讨融合蛋白的RGD多肽数量和化学结构与其结合整合素αvβ3能力的关系及其意义。材料与方法:用3个串联的RGD多肽与截短组织因子(truncated tissue factor,tTF)合成融合基因(RGD)3-tTF,表达于大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),用镍柱纯化融合蛋白。通过凝血实验检测融合蛋白tTF组分的活性,运用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)分析其特异性结合整合素αvβ3的能力,并与RGD-tTF融合蛋白的活性进行比较。结果:(RGD)3-tTF与RGD-tTF融合蛋白凝血活性相似(F=0.019,P>0.05),但(RGD)3-tTF融合蛋白特异性结合整合素αvβ3的能力明显升高(F=140.17,P<0.01)。当融合蛋白浓度为0.24μmol/L时,(RGD)3-tTF融合蛋白的OD405nm值是RGD-tTF融合蛋白的1.32倍(1.25/0.95)。结论:(RGD)3-tTF融合蛋白带有两个二硫键和3个RGD多肽,保留了组织因子凝血活性的同时,提高了与整合素αvβ3特异性结合的能力,为开展选择性肿瘤血管血栓靶向治疗的动物实验奠定了基础。